Name: 높은 처리량 Antifungal 약물 검사를위한 칸디다 albicans Biofilm 칩 (CA BChip) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-18T11:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: 배우세요 Candida albicans 3D 나노바이오필름을 활용한 고밀도 마이크로어레이 플랫폼 Ca BChip을 이용한 항진균제 고처리량 약물 선별 기법을. 이 방법은 기존 방식과 비교 가능한 약물 감수성 프로파일을 제공하여 신속한 항진균제 발견에 활용됩니다.

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이 작품은 남부 텍사스 기술 관리 (POCrr 2009.041), 연구 자원을위한 국립 센터 (UL 1RR025767)에서 의학 및 과학의 통합을위한 연구소에서 교부금에 의해 및 치과와 Craniofacial 연구 진흥원 (에서 부분적으로 추진하는 사업 5R21DE017294).

1. 기능화 슬라이드의 작성 <ol><li> 이동식 슬라이드 랙에 현미경 슬라이드를 삽입하고, 99 % 에탄올 (histological 학년)를 포함하는 염색법 항아리에 immersing로 두 번 씻는다. 슬라이드가 압축된 질소 가스의 제트를 사용하여 종이 타올 (종이 먼지를 생성하지 않도록 보장) 및 건조를 사용하여 깨끗하게 닦아주십시오. </li></ol> 참고 : 고급 종이 먼지를 생성하는 것처럼 슬라이드를 없애기 위해 김 - 잎사귀를 사용하지 마십시오. <ol start="2"><li> 하룻밤 실온에서 농축 황산과 부화로 가득 염색법 항아리에 슬라이드가 포함된 슬라이드 선반 젖어. </li></ol> 참고 : 집중 지방산과 독성과 부식성 화학 물질과 함께 작업하는 동안 피부와의 접촉을 피하려면, 화학 방지 장갑과 안전 고글을 사용합니다. <ol start="3"><li> 30 분 용 밀리 Q로 30 분 및 세차 (MΩ 18) 물 공급을 위해 슬라이드를 Sonicate, 다른 세척 따르5 분 대한 cetone. 이 치료는 유리 표면의 silanol 그룹을 제공합니다. </li><li> 코트 30 분 동안 APTES의 슬라이드 선반을 immersing 각 세차 15 분 동안 밀리 Q 워터에서 3 번 세척하고, 제빵에 의한 3-aminopropyltriethoxysilane (APTES) 솔루션의 2.5 %와 깨끗한 슬라이드 (물에 권 / 권) 110의 용광로에서 슬라이드 ° C ~ 15 분입니다. 제빵은 표면의-NH2-작용화 그 결과 APTES의 가교 있습니다. </li></ol> 참고 : 우선적 유리 용기의 벽에 APTES 예금 이후 플라스틱 용기에 APTES 솔루션을 확인하십시오. <ol start="5"><li> 소수성 코팅 6 모노 레이어를 달성하는 데 1 % (톨루엔의 wt / 권) 폴리스티렌 - 공동 Maleic 무수물 (PS-MA) (시그마)로 스핀 coater, 코트에게 슬라이드를 사용합니다. 30의 3,000 rpm으로 스핀 coater와 코트에 장착된 깨끗한 유리 슬라이드에 PS-MA 2.0 ML을 추가합니다. 이러한 조건은 같은 코팅과 같은 스핀 코팅 매개 변수에 따라 다를 수 있으므로lution, 기판, 코팅의 두께는 다음 방정식 7에 의거하여 </li></ol><img alt="등식 1" src="/files/ftp_upload/3845/3845eq1.jpg" /> H 필름 코팅의 두께이고, E는 증발의 비율이고, η, C와 ρ는 각각 코팅 용액의 점도, 농도 및 밀도이고, ω는 각속도이다. 참고 : 퓸 후드의 긴 시간과 사용을 위해 흡입시 톨루엔이 해로운 것을 권장합니다. <ol start="6"><li> 8 ° C. - 슬라이드는 2 시에 건조하고 먼지가없는 조건에서 1 개월 최대 슬라이드 선반에 저장할 수 있습니다 </li></ol> 2. 효모 Inocula과 콜라겐 캡슐화의 작성 <ol><li> C의 야간 문화를 준비 효모 펩톤 덱스 트로 오스의 albicans 변형 SC5314, [YPD, 10 G / L 효모 추출물, 20 G / L 펩톤 및 20 G / L 덱스 트로 오스] C.의 단일 식민지를 inoculating하여 액체 배지 알10로 bicans - YPD 8 20 ML. 30 ° C 하룻밤 사이에서 - 궤도 흔드는 (200 RPM이 약 150)에서 문화를 품다. 10 밀리미터 인산 버퍼, 2.7 MM 염화칼륨; 수확 한 ML 칸디다 albicans 효모 하룻밤 YPD 문화 (5-10 분 동안 5,000 rpm으로 원심 분리에 의해)의 세포 및 멸균 인산 1 ML 10 분 동안 두 번 씻어도 (PBS 염분 버퍼 137 밀리미터 나트륨 염화물, 세차 당 산도 7.4) (시그마). 수확은 10 분 동안 1,900 rpm으로 원심 분리하여 또한 세포를 씻어. 한 ML 재구성 버퍼 (2.2 % (wt / 권) 나트륨 중탄산염 및 4.8 % (wt / 권) HEPES, pH는 7.2와 0.2 N NaOH 용액)에 입힌 세포를 Resuspend. </li></ol> 참고 : C. albicans는 위험 그룹 1/BSL1 미생물이다. 항상이 미생물과 함께 작업에 좋은 무균 / 무균 기술을 사용하고 biohazardous 재료의 적절한 처분을위한 제도적 절차를 따르도록 기억 해요. <ol start="2"><li> hemocyt를 사용하여 세포를 세어명시야 현미경에 ometer 5의 세포 밀도 × 10 7 세포 / ML로 조정합니다. </li><li> 또한 10 이외에 의해 정지를 열 번은 희석 × RPMI-1640은 L-글루타민과 함께 보완하고 morpholinepropanesulfonic (대걸레) 산성 (산도 7.2)와 버퍼. </li><li> 콜라겐 (1.8 밀리그램 / ML)와 RPMI-1640에 세포 현탁액을 혼합하여 콜라겐의 효모 세포를 캡슐 (쥐의 꼬리에서 타입 1, BD Biosciences, 베드 포드, MA)은 / 4의 최종 농도 × 10 6 세포를 얻는 방법 ML. 인쇄하기 전에 콜라겐의 겔화 방지를 위해 얼음 콜라겐 - 세포 현탁액을 유지. </li></ol> 3. 칼슘 BChip의 작성 <ol><li> 청소 및 70% 이소프로판올으로 닦는하여 소스 판 역 세척 및 진공 역, 진공 슬라이드 플래터 및 인쇄 챔버를 포함 microarrayer의 모든 표면, 소독. </li><li> 마이크의 슬라이드 갑판에 PS-MA-코팅 유리 슬라이드의 원하는 숫자를 놓고 진공에 의해 개최roarrayer. </li><li> 와동 셀 적극적으로 콜라겐의 서스펜션과 바로 인쇄하기 전에 96 - 웰 플레이트의 우물로 잘 혼합 정학 100 μL를 기음. 로딩 스테이션에서이 소스 접시를 놓습니다. </li><li> 인쇄 과정에서 microarray 챔버 100 %의 상대 습도를 유지하기 위해 가습기를 전환합니다. </li><li> conically 테이퍼 190 μm의 오리피스 세라믹 팁을 사용하여 비 접촉 증착하여 microarray 망보고 (Omnigrid 마이크로, Digilab 주식 Holliston, MA)를 사용하여 1.2 mm 간격 잊어버리고 명소로 48 행 16 열의 배열의 세포 현탁액의 50 NL 인쇄 (Digilab). </li><li> 프라임 인쇄의 각 라운드마다 조언 두 번 씻어 진공 건조. </li><li> 즉시 인쇄 후, 공기 꽉 humidified 챔버 (하이브 리다이 제이션 카세트, ArrayIt 공사, 서니 베일, 캘리포니아)에 슬라이드를 넣고 37 ° C biofilm 형성을 할 수 있도록 24 시간 동안 알을 품다. </li></ol> 4. 저얼의 자화율 시험Antifungal 에이전트 반대 칼슘 BChip의 eformed의 Biofilms <ol><li> antifungal 약물 주식 솔루션이나 분말에서 RPMI-1640 배지에서 작업 솔루션을 준비합니다. 작업 솔루션의 일반적인 최대 농도는 1,024 μg / fluconazole에 대한 ML 및 amphotericin B 5 16 μg / ML 있습니다. 다른 농도는 여러 에이전트에 사용할 수 있습니다. </li><li> 가운데에있는 화합물의 예상 IC에서 50까지의 범위를 두 배 dilutions에서 재고 솔루션을 diluting하여 화합물의 8 개의 농도를 준비합니다. </li><li> biofilm 성장 24 시간 후, 최소한으로 (20 분 나트륨 차아 염소 산염 대우) 긍정 (단 미디어없이 약물 즉 세포)와 부정과 함께 컨트롤을 약물의 8 개의 농도의 50 NL를 인쇄하는 microarrayer를 사용하여 여섯 biofilms 위에 복제합니다. </li></ol> 참고 : 추가하면서 반점의 건조 방지를 위해 100 % 상대 습도를 유지마약을 접근한. <ol start="4"><li> 곧 마약을 추가한 후, 24 시간 동안 37 ° C에서 humidified 챔버에서 마약 칩을 알을 품다. </li><li> CaBChip에게 2 분 3-5 번 PBS의 모든 시간을 그런 일은하여 약물 씻어 37에서 0.5 μm의 FUN1와 30에 대한 ° C 분 9 칼슘 BChip을 잠복기로 얼룩. </li><li> 워시 모든 덩크 1-3 분 동안 PBS에서 칼슘 BChip에게 3-5 번 그런 일은으로 꺼져 얼룩 및 질소 스트림을 사용하여 CA BChip을 건조. 380의 PMT 게인과 532 nm의 파장의에서 microarray 스캐너 (GenePix 4100A, 축삭 인 스트 루먼트, CA)를 사용하여 형광 강도를 읽어보십시오. </li><li> 긍정적인 컨트롤 (노 약물) 및 100 %와 0 %에서 사망 (표백-대우) biofilm 명소의 형광 강도 각각 설정합니다. </li><li> 다음 방정식을 사용하여 제어 장소의 평균에 대한 상대 형광 강도 (F)의 감소에 의해 비율 억제를 결정 </li></ol><img alt="등식이" src="/files/ftp_upload/3845/3845eq2.jpg" /> F, F 맥스와 F O는 원시 형광 약물 치료의 농도, 노 - 약물 제어 및 표백제 - 대우 명소, 각각 어디에 있는지. 스캐너 설정이 각각 F 맥스와 30000 및 4000 RFU의 F O를 얻기 위해 조정되었다. <ol start="9"><li> GraphPad 프리즘 소프트웨어 (라 Jolla, CA)를 사용하여 변수 경사의 언덕 방정식을 맞추하여 50 % 억제 농도 또는 IC에서 50 계산합니다. </li></ol> 5. 대표 결과 48으로 구성된 대표적인 칼슘 BChip, × C의 나노 biofilms 16 배열 albicans은 그림 2에 표시됩니다. 명시야 현미경은 나노 biofilm의 전반적인 건축 기능을 보여줍니다. 곰팡이 균사가의 매트릭스 내에 내장되는 biofilm 쇼의 스캐닝 전자 현미경 이미지직경이 약 2 μm의 100 nm의 위치 콜라겐 섬유, 각각. FUN1 묻은 microarray 스캐너 이미지는 곰팡이 biofilms의 특성이지만 효모와 hyphal 형태를 보여줍니다. FUN1 묻은 biofilms의 2D 및 3D-공촛점 형광 이미지는 세포외 기질 (가 아니라 생산 exopolymeric 재료의 캡슐 재료와 가능성이 높습로 콜라겐으로 구성되어 내에 interspersed metabolically 활성 세포 지역으로 공간적 이질을 가지고 볼 수 있습니다 신진 대사 염색으로 물들일되지 biofilm 세포). biofilm의 두께는 약 50 μm의 것으로 추정되었다. 칼슘 BChip 두 약물, fluconazole과 amphotericin B의 antifungal 자화율을 추정하는 데 사용되었고, 그 결과는 그림 3에 표시됩니다. 업계 표준 96 - 웰 플레이트 assays에 게시된 보고서와 일치, biofilms는 fluconazole 10 계산 IC에서 50에 대한 저항력이 있습니다<html> amphotericin B는 0.3 μg / ML 11. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3845/3845fig1.jpg" /> 칼슘 BChip의 제조를위한 그림 1. 플로우 차트. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3845/3845fig2.jpg" /> 그림 2. 인쇄 높은 thoughput 칼슘 BChip의 사진이 로봇 microarrayer을 사용하고 PS-MA-코팅 슬라이드에 768 명소를 포함. 각 반구형 스폿 지름이 대략 700 μm의, 그리고 관광 명소 사이에 1.2 밀리미터 분리와, 볼륨 년 50 NL이다. 또한 (시계 방향) 표시 가벼운 현미경, microarray 스캐너, 2D 및 3D-형광 현미경, 그리고 칼슘 BChip에 대한 개별 biofilms의 전자 현미경 이미지를 스캔할 수 있습니다. 25,000 X의 높은 배율에서 SEM의 그림은 폭이 2 μm의의 hyphal 필라멘트를 보여줍니다. 그림 3은 &quot;SRC =&quot;/ files/ftp_upload/3845/3845fig3.jpg &quot;/&gt; 그림 3. 칼슘 BChip를 사용하여 () fluconazole 및 (B) amphotericin B에 대한 IC 50 값 antifungal 자화율 테스트 및 결정의 결과. amphotericin B-대우 biofilms의 형광 현미경 이미지 (C)에 표시됩니다. 결과는 평균 ± 표준 오차는 10를 포함하는 두 개의 개별 칩을위한 의미있는 것은 각각의 컨디션에 복제합니다.

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</ol>

호세 L. 로페스 - Ribot과 antifungal 요원을 개발하고 MicrobeHTS 테크놀로지 주식 회사에서 아난드 K. Ramasubramanian 자신의 자본. MicrobeHTS 테크놀로지 주식 회사는 이러한 연구에 대한 재정적 지원을 제공 않습니다.

우리는 칸디다 albicans biofilms의 nanoliter 볼륨으로 구성된 셀 기반의 고밀도 microarray, CA BChip을 개발했습니다. microarray는 비 확산, 반구형 3D 젤 필요한 소수성을 제공함과 동시에 콜라겐 겔 명소 강력한 첨부 파일에 허용되는 수정일 유리 기판에 인쇄되었다. 하나 카 BChip은 약 팔 96 - 웰 플레이트를 대체할 수 있으며, 여러 칩은 동시에 인쇄 및 처리할 수 있습니다. 칩, 나노 스케일 문화를 활용하여 쉽고 빠르게 취급을 허용, 자동화에 대한 의무이며, 육체 노동과 비용을 최소화하고 표준 microarray 기술 및 장비와 완벽하게 호환됩니다. 또한, 기술은 유연하고 쉽게 다른 미생물에 적응하실 수 있습니다. 소형화에도 불구하고, 나노 biofilms는 C.의 특성이지만 칼슘 BChip 디스플레이 등록 정보에서 형성 3D architectur 포함한 albicans biof...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 3 aminopropyltriethoxysilane (APTES) </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> 440,140 </td></tr><tr><td> 폴리스티렌 - 공동 Maleic 무수물 (PS-MA) </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> 426,946 </td></tr><tr><td> 유리 현미경 슬라이드 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 12-549-3 </td></tr><tr><td> 쥐의 꼬리 콜라겐 유형 I </td><td> BD Biosciences </td><td> 354,236 </td></tr><tr><td> 로봇 Microarrayer </td><td> Omnigrid 마이크로 </td><td> MICROSYS4000/4100A </td></tr><tr><td> Microarray 스캐너 </td><td> Genepix 개인 4100A </td><td> GENEPIX4100A </td></tr><tr><td> 하이브리드화 카세트 </td><td> ArrayIt 주식 회사 </td><td> AHCXD </td></tr><tr><td> FUN1 [2 - 동생아RO-4-(2,3-dihydro-3 - 메틸 (benzo -1,3-thiazol-2-yl)-methylidene)-1-페닐 quinoliniumiodide] </td><td> Invitrogen 사 </td><td> F-7030 </td></tr><tr><td> Fluconazole </td><td> Sicor 제약 주식 회사 </td><td> J02AC01 </td></tr><tr><td> Amphotericin B </td><td> 시그마 </td><td> A2411 </td></tr><tr><td> RPMI-1640 </td><td> Mediatech 주식 회사 </td><td> 50-020-PC </td></tr><tr><td> 세라믹 팁 190 μm의 오리피스 </td><td> Digilab </td><td> 60020441-00 </td></tr><tr><td> GraphPad 프리즘 소프트웨어 </td><td> GraphPad 소프트웨어 주식 회사 </td><td></td></tr><tr><td> Genepix 프로 V4.1 </td><td> 분자 장치 </td><td></td></tr></tbody></table>

높은 처리량 antifungal 약물 검사를위한 칸디다 albicans biofilm 칩 (ca bchip)

Candida albicans Biofilm Chip (CaBChip) for High-throughput Antifungal Drug Screening

칸디다 albicans는 현재 미국의 병원 1 번째 가장 일반적인 nosocomial 혈류 감염을 나타내는 칸디다 증의 주요 etiological 대리인, 남아있다. 이러한 기회 감염은 감염된 개인의 증가를위한 성장 위협하고 unacceptably 높은 사망률 속도를 가지고 다니십시오. 이것은 가장 일반적으로 사용되는 antifungal 요원에 대한 저항의 출현에 또 antifungal 약물의 제한 무기고로 인한 부분이지만. 또한 치료를 복잡하게하는 것은 칸디다 증의 발현의 과반수가 biofilms의 형성과 관련있다는 사실이며, 이러한 biofilms 내의 세포는 대부분 임상적으로 사용되는 antifungal 요원 2 ~ 저항의 증가 수준을 보여줍니다. 여기 C. 구성되어 고밀도 microarray의 개발을 설명 우리가 칼슘 BChip 3라는했습니다 albicans 나노 biofilms. 간단히, 로봇 microarrayer이 t를 사용C의 O 인쇄 효모 세포 고체 기판 진입 albicans. 인쇄하는 동안, 효모 세포는 같은 50 NL 같은 낮은 적합한 코팅 유리 기판에 고정화 볼륨을 사용하여 입체 매트릭스로 묶여있다. 초기 인쇄 후 슬라이드는 biofilm 개발을 할 수 있도록 24 시간 동안 37 ° C에서 incubated됩니다. 이 기간 동안 반점이 성숙 C.와 관련된 일반적인 구조와 phenotypic 특성을 표시 그 완벽하게 개발된 &#39;나노 biofilms&#39;로 성장 albicans biofilms (즉 형태학의 복잡성, 입체 아키텍처 및 약제 내성) 4. 전반적으로, 칼슘 BChip는 ~ 750 상당하고 spatially 뚜렷한 biofilms 구성되어있다; 여러 개의 칩을 인쇄와 동시에 처리될 수있는 추가적인 장점과 함께. 세포 생존 능력은 FUN1 신진 대사의 형광 강도 microarray 스캐너를 사용하여 얼룩을 측정하여 추정된다. 이 곰팡이 칩은적으로 U 적합합니다antifungal 약물 발견을위한 진정한 높은 처리량 검사에서 SE. 현재 기준 (즉 biofilm 형성 5 96 - 웰 microtiter 플레이트 모델)에 비해 곰팡이 biofilm 칩의 주요 장점은 자동화, 소형화, 금액 및 시약과 분석 시간의 비용 절감뿐만 아니라 노동의 철폐입니다 집중 단계. 우리는 이러한 칩이 크게 antifungal 약물 발견 과정을 빠르게 것입니다.

우리의 3 차원 나노 biofilms 구성된 고밀도 microarray 플랫폼을 개발했습니다<em&gt; C. albicans</em&gt;라는<em&gt; 칼슘</em&gt; BChip. 약물 자화율 프로필에서 테스트<em&gt; 칼슘</em&gt; BChip는 곰팡이 칩이 이상적으로 antifungal 약물의 진정한 높은 처리량 검사에 적합 것을 제안하고, 기존의 96 - 웰 플레이트 모델과 비교입니다.

높은 처리량 Antifungal 약물 검사를위한 칸디다 albicans Biofilm 칩 (CA BChip)

Candida albicans는 현재 네 번째로 흔한 병원 내 혈류 감염인 칸디다증의 주요 병원체로 남아 있습니다...

본 절차의 전반적인 목표는 항진균제 발굴을 위한 마이크로어레이 기반의 고처리량 바이오필름 스크리닝 방법을 개발하는 것입니다. 이는 먼저 현미경용 유리 슬라이드의 표면을 화학적으로 수식함으로써 수행됩니다. 그 다음으로 효모 세포를 콜라겐 매트릭스 내에 캡슐화합니다.그 다음, 로봇 마이크로어레이를 사용하여 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 바이오필름 칩 또는 CAB 칩을 제작합니다. 마지막으로, CAB 칩을 이용하여 약물 감수성을 측정합니다. 결과적으로, 마이크로어레이 스캐너를 통해 수행한 생존력 분석을 통해 CAB 칩 상에 형성된 나노 바이오필름에 대한 항진균제의 감수성 프로파일을 확인할 수 있습니다.업계 표준인 96웰 플레이트와 같은 기존 방법과 비교했을 때, 이 마이크로어레이 기반 기술의 주요 장점은 진정한 고처리량 방식이라는 점입니다. 또한 작업 부피가 더 작아 신속하고 안정적이며 시간을 절약할 수 있습니다. 기능화된 슬라이드를 준비하려면 먼저 현미경 슬라이드를 탈착식 슬라이드 랙에 넣으십시오. 99% 조직학 등급 Ethanol이 들어 있는 염색 용기에 슬라이드를 담가 두 번 세척하십시오.그 다음, 보안경과 화학 저항성 장갑을 착용한 상태에서 페이퍼 타월로 슬라이드를 닦고 압축 질소 가스로 건조합니다. 슬라이드를 황산에 담가 실온에서 하룻밤 동안 배양한 후, 다음 날 슬라이드를 30분 동안 초음파 처리하고, 이어서 3′ 초순수로 30분, 아세톤으로 5분간 세척합니다. 이 처리는 유리 표면의 Tylenol 그룹을 노출시켜 슬라이드를 코팅합니다.이를 3-aminopropyl triethoxysilane(APTES) 용액에 30분 동안 담급니다. 그 다음 Milli Q water로 15분씩 세 번 세척한 후, 슬라이드를 가열로에서 110 °C로 15분 동안 굽습니다. 소수성 코팅 단층을 형성하기 위해 APTES를 가교결합시키려면, 흄 후드 내에서 스핀 코터에 장착된 깨끗한 유리 슬라이드 위에 polystyrene methacrylate(PSMA)와 toluene 혼합액 2 mL를 피펫으로 분주하고 3000 RPM으로 30초 동안 회전시킵니다.슬라이드는 건조하고 먼지가 없는 환경에서 최대 한 달 동안 보관할 수 있습니다. 보관 온도는 2~8 °C입니다. 단일 콜로니를 10~20 mL의 YPD에 접종하여 C. albicans 균주 SC 5314의 하룻밤 배양액을 준비하십시오.배양물을 궤도 쉐이커(orb

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

이 비디오에서 우리는 우리의 실험실은 정기적으로 트립신과 색채 인간 배아 줄기 세포 라인을 통로 방법을 보여줍니다.

트립신과 Passaging 색채 인간의 배아 줄기 세포 - 라인

우리는 형성을위한 간단하고 신속하고 강력한 방법을...

모니터링 형성과 Antifungal 자화율 테스트를위한 96 자 Microtiter 플레이트 기반 방법 캔디다 albicans Biofilms

이 비디오는 피하 조직에서 칸디다 알비칸스의 생물막 형성을 연구하기 위한 생체 내 마우스 모델의 개발을 보여줍니다. 이 실험은 생물막 발달을 위해 동물의 등 부위에 칸디다균에 감염된 장치를 이식하는 것을 포함합니다.

칸디다 알비칸스 In Vivo 마우스 모델의 생물막 형성

마우스 피하 모델에서 칸디다 알비칸스 생물막 발달의 실험적 절차를 제시합니다. 진균 생물막은 군집 형성 단위의 수를 결정하고 생성되는 빛의 양이 생존 가능한 세포의 수와 일치하는 비침습적 생물 발광 이미징에 의해 정량화되었습니다.

생물 발광 영상에 이어 마우스 피하 모델의 의학 관련 외국 기관에 칸디다 알비 칸스 (Candida albicans)에 바이오 필름 ​​개발

이 프로토콜에서는 호스트 생리 적 조건 하에서 Candida albicans 에 biofilm 형성을 시각화 하는 사용자 지정 가능한 자동화 된 미세 장치를 사용 하 여를 설명 합니다.

Candida albicans 자동 미세 장치를 사용 하 여에서 Biofilm 형성의 시각화

어셈블리, 동작, 설명 그리고 흐름에서 실시간으로에서 이미지 균 biofilm 형성 하도록 설계 흐름 기구의 청소. 우리는 또한 제공 하 고 인수 이미지에 사용할 수 양적 알고리즘 토론.

실시간 이미징 및 2 단계 반복 흐름 시스템을 사용 하 여 곰 팡이 Biofilm 개발의 정량화

여기, 선물이 Candida albicans biofilm의 성장에 레드 빛 응용 프로그램의 결과 평가 하는 프로토콜. 635 nm의 파장 및 87.6 J·cm-2 의 에너지 밀도와 비 코히어런트 레드 라이트 장치 48 h에 대 한 칸디 다 albicans biofilms의 성장에 걸쳐 적용 되었다.

규제 Candida albicans Biofilm 성장에 붉은 빛으로 매일 광선 요법

칸디다 알비칸스 생물막의 내부 특징을 보고 정량화하기 위해 굴절률 매칭을 통해 명확히 된 고정 된 손상되지 않은 표본을 준비합니다. 이어서, 광학 단면 현미경 검사법은 생물막의 전체 두께를 가하지만 3차원 이미지 데이터를 얻기 위하여 이용될 수 있다.

칸디다 알비칸스 바이오필름 의 명확화 및 이미징

이 프로토콜은 칸 디다 알비칸스에 대한 펩타이드 및 소분자 항진균제와 같은 기타 화합물의 항진균 활성에 대한 정량적 데이터를 얻는 방법을 설명합니다. 성장 억제를 정량화하기 위해 집락 형성 단위를 세는 대신 광학 밀도를 사용하면 시간과 자원을 절약할 수 있습니다.

칸디다 알비칸스(Candida albicans)에 대한 펩타이드의 항진균 활성 정량화

C. tropicalis에 의해 형성된 생물막에 대한 항체의 효과를 연구하기 위해 2,3-비스(2-메톡시-4-니트로-5-설포페닐)-5-카르복사닐리드-2H-테트라졸륨(XTT) 환원 분석을 사용하는 96웰 마이크로타이터 플레이트 기반 프로토콜이 본원에 설명되어 있습니다. 이 시험관 내 프로토콜은 생물막에서 칸디다 종 세포의 대사 활성에 대한 잠재적 인 새로운 항진균 화합물의 효과를 확인하는 데 사용할 수 있습니다.

칸디다 트로피칼리스 생물막에 대한 항체의 효과를 평가하기 위한 가용성 테트라졸륨 기반 환원 분석

우리는 카테터에 생물막이 형성되고 C.albicans와 숙주 간의 상호 작용이 임상 CRI와 잘 상관되는 C.albicans 관련 카테터 관련 감염(CRI)의 마우스 모델을 확립합니다. 이 모델은 C.albicans 생물막 관련 CRI에 대한 치료법을 스크리닝하여 임상 혁신을 위한 토대를 마련하는 데 도움이 됩니다.

마우스의 카테터 관련 칸디다 알비칸스 감염 모델

배우세요 Candida albicans 3D 나노바이오필름을 활용한 고밀도 마이크로어레이 플랫폼 Ca BChip을 이용한 항진균제 고처리량 약물 선별 기법을. 이 방법은 기존 방식과 비교 가능한 약물 감수성 프로파일을 제공하여 신속한 항진균제 발견에 활용됩니다.

높은 처리량 Antifungal 약물 검사를위한 칸디다 albicans Biofilm 칩 (CA BChip)

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