Name: 내피 Keratoplasty을위한 각막 기증자 조직 준비 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: 배우세요 내피 각막 이식을 위한 기증자 조직 준비 방법을 마이크로커라토미를 이용해 얇고 균일한 각막 편을 제작하는 기술입니다. 이 방법은 수술 결과를 개선하고 환자의 회복을 촉진합니다.

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1. 설정 : 무균 기법 11 <ol><li> 층류 후드 (LFH)를 켭니다. </li><li> 질소 가스 제어 장치를 켭니다. 그 호스를 본체 유닛과 질소 탱크 사이에 연결되어 있는지 확인합니다. 에 가스를 켭니다. 기체 설정을 조절 탱크에서 50-60 PSI로 설정되어야합니다. 장치의 터빈 압력은 3.3-3.4 바 읽어야 할 것 같아. </li><li> 테스트 버튼을 누릅니다. 대기 압력 아래에 200이어야합니다 700s와 펌프 1과 2에서 읽을 수 있습니다. 테스트가 완료되면 단위 삐됩니다. 눈 보호, 등 적용, 그리고 모자와 돈 마스크. 손과 돈 비 멸균 장갑을 씻으십시오. 멸균 필드를 설정하는 LFH 및 오픈 랩 내부 살균 키트를 놓습니다. </li><li> 한 무균 의약품 컵과 안정적인 살균 필드 옆에 멸균 거즈 한 멸균 플라스틱 대야를 놓습니다. 의학 컵에 멸균 이소 프로필 알코올을 부어. 의학 컵로, 아래 팁을 알코올 면봉 / 패드 및 장소 프로브와 pachymetry 프로브를 닦아주십시오. 프로브 팁은 ​​10m 위해 이소 프로필 알코올에 담그다합니다inutes. pachymetry 프로브는 10 분 동안 배어 후에는 플라스틱 분지 알코올과 장소 프로브를 제거하는 prefilled 주사기의 멸균 물을 프로브 팁을 린스. </li><li> 무균 기술을 사용하여 미리 만든 팩을 이미 일부 않는 멸균 분야에 무균 항목 (블레이드, 멸균 장갑, 그리고 각막보기 회의소) 열어 놓습니다. </li><li> 보존 매체와 LFH 내부의 장소 (그림 2)에서 각막 조직을 얻습니다. </li><li> 유리병 (들)을 열고 적절한 보호복 콘센트에 뚜껑 (들) 처분. 비 멸균 장갑을 폐기하십시오. </li><li> 멸균 장갑을 &#39;돈&#39;이라. pachymeter가있는 필드의 측면에 미리 포장 플라스틱 대야를 놓습니다. 후드로 재입 및 멸균 필드를 만져서 후드 밖에서 라인을 방지하는 등의 방법으로 라인을 확보 후드 밖 꼭지 및 주입 라인 대신 스파이크 엔드에 주입 라인을 연결합니다. </li><li> 각막 조직 전송을 수행합니다. 부드럽게 씨에서, 조직 및 매체를 따르다기존 유리병에서 멸균보기 챔버에 ngle 운동. 내피 측면을 깨어있게해야합니다. 챔버의 뚜껑을 놓습니다. 멸균 분야에 조직 및 미디어가 들어있는 챔버 보관하십시오. LFH에서 유리병 (들)을 제거합니다. 제거하고 멸균 장갑을 버리고. </li><li> 스파이크 균형 소금 용액 (BSS) 주입 라인 병. 작업 영역 표면에서 멸균 BSS 약 4 피트 병을 잡아. </li><li> 멸균 장갑과 수건과 멸균 가운의 두 쌍을 엽니다. </li><li> 육분 외과 스크럽과 건조한 손을를 수행합니다. </li><li> 두 쌍 멸균 장갑 후, 무균 가운 입어. </li><li> 멸균 분야에 기기 상자와 장소 내용을 엽니다. </li><li> 금속 그릇이나 의학 컵에 BSS 솔루션의 10-20 CC 하는걸. BSS 솔루션 멸균 피펫을 채웁니다. 꼭지와 앞쪽에 챔버 주입 포트에 주입 라인을 연결하고 작은 금액은 피스톤의 꼭대기에서 볼 수 있도록 BSS을 잔뜩. </li><li> 에 LFH의 위치 인조 챔버거즈 위에. 그라 프트 타이트닝 반지 반시계 회전에 의한 낮은 피스톤. </li></ol> 2. 절차 <ol><li> 포셉 사용하여 부드럽게 scleral 림에 의해 각막을 탄다. 조심스럽게 다운 내피 측면과 함께 피스톤 위에 홍채를 중심으로하면서 BSS와 시스템을 내리려고 꼭지를 엽니다. 거품이 각​​막 아래에 볼 수있는 경우 BSS와 기적과 약간 그들을 제거하는 각막을 이동 계속 진행합니다. 공기 거품이 제거되고 나면 주입을 중단. 각막이 피스톤 (그림 3A)를 중심으로되었는지 확인하십시오. </li><li> 기본 잠금 링에 위치 앞쪽에 챔버 커버하므로베이스의 열린 공간으로 커버 끼워 맞춤 탭니다. 커버는 15 °를 시계 방향으로 회전하여 기지로 커버 조준. 피스톤을 올리고 (그림 3B)를 완전히 조입니다. </li><li> 멸균 장갑 낀 손가락으로 절차를 수행하는 데 충분한 압력이있다는 것을 보장하기 위해 각막 위에 만지지. </li><li> 표면 O에 프로브를 배치하여 pachymetry를 확인두께 독서를 얻을 수있는 F 각막 (그림 4). 표준 편차는 10 미만이어야합니다. 그렇지 않을 경우 측정을 재시험. pachymetry을 수행하는 데 사용되지 멸균 장갑 낀 손으로 pachymetry을 수행 손에 터빈 호스를 전달하고 제어 장치에 터빈 호스를 나사. 지원 기술자 기록 pachymetry 읽기 되세요. </li><li> 오염된 장갑을 제거합니다. </li><li> 멸균 마킹 펜 사용하여 각막의 중심 (또는 외과 의사가 더 표시를 선호하지 않는다면 표시하지 않음)쪽으로 limbus에서 4mm 라인을 그립니다. 각막 위에 BSS 다섯 방울을 배치 피펫을 사용합니다. </li><li> 특정 지침은 외과 의사에 의해 제공되지 않는 한 사전 컷 pachymetry 측정 미만 600 μm의 경우 300 μm의 절단 헤드가 사용됩니다. 600 μm의 이상, 350 μm의 절단 헤드가 사용됩니다 바랍니다. </li><li> 스레드가 당신과만은 번호 향해 마주보고를 통해, microkeratome 머리의 오른쪽에 날개를로드 1 단부를 지적, 연락처 WI을 피하고블레이드 일. </li><li> 양쪽에서 머리를 개최하는 것은 터빈에 머리를 망치. 인공 챔버 손가락을 조여. </li><li> 터빈 호스로 터빈을 보자. </li><li> 5 초 동안 살균 물과 펄스 엔진에 절단 머리를 잠수함이 잠수 한 번 진공 페달을 눌러 블레이드 진동을 테스트합니다. </li><li> 피스톤 Retighten. </li><li> 5시에 장착 게시물과 자세와 기지쪽으로 장소 microkeratome. 눌러 블레이드 (그림 5A)를 진동하는 터빈 페달을 누르고 있습니다. </li><li> 엄지와 검지를 사용하여베이스 및 터빈의 상단 사이에 microkeratome의 한가운데를 누르고 있습니다. 부드러운, 심지어 통해 그리고 각막을 가로질러 만들어 손목을 돌립니다. 릴리스 터빈은 페달과 직선 단위 해제 microkeratome 리프트. 진공 (그림 5B)을 해제하기 위해 진공 페달을 누르십시오. </li><li> 멸균 장갑과 각막 뚜껑 후에 다시 확인 pachymetry 읽기를 &#39;돈&#39;이라하는 것은되는 초 두께 독서를 얻기 위해 각막 표면에 프로브를 삽입하여 제거된다조직은 매우 얇고 쉽게 손상될 것이 늘. 오염된 장갑을 제거합니다. 기술자 레코드 초 pachymetry 읽기를 지원합니다. </li><li> 요청하신 경우에는 멸균 마킹 펜 사용, 인공 챔버의 잔류 stromal 침대 중반 주변 가장자리에, 외과의에 의해 마크를 넣습니다. 잔여 stromal 침대에 살균 BSS 몇 방울을 넣으십시오. </li><li> microkeratome에서 앞쪽에 각막 뚜껑 (그림 6)을 제거하고 인공 앞쪽에 챔버로부터 각막을 제거하기 전에 각막에 그것을 대체합니다. 모자가 제대로 해당되는 경우 뚜껑을 정렬하는 데 마킹 주변 장치를 사용하여 각막 중심으로해야합니다. 부드럽게 각막에 뚜껑을 재배치 면봉의 창을 사용합니다. 앞쪽에 뚜껑 아래에있는 BSS를 흡수하기 위해 새로운 창을 사용합니다. </li><li> 오픈 꼭지는 거꾸로 챔버를 켜고 낮은 피스톤은 deforming로부터 각막을 막기 위해 충분히 느리게. 베이스의 잠금을 해제하고 기지에서 인공 챔버 컵 밀어하기 BSS 흐름의 압력을 허용합니다. 집게로 부드럽게 당겨t 9시 각막 가장자리, 컵에서 풀어야 12 3시 위치. 일단 느슨하게, 각막을 제거하려면 12시 위치에 집게를 사용합니다. 보기 챔버, 내피 사이드까지 (그림 7)에서 각막를 놓습니다. 보기 챔버에 뚜껑을 놓습니다. 멸균 장갑을 제거합니다. </li><li> 챔버 덮개를 보는 조이십시오. </li><li> 포스트 컷 슬릿 램프 평가 및 각막 및 레코드 결과의 반사 현미경을 수행합니다. </li><li> 냉장고의 적절한 섹션에 장소 챔버 (들). </li><li> 외과로 이송하기위한 패키지 (그림 8). </li></ol> 3. 대표 결과 부드럽고 균일한 층상 각막 기증자 조직의 기증자 각막 결과의 적절한 기계적 microkeratome의 해부. 이것은 크로스 섹션의 각막의 광학 일관성 tomography (-10 월) 이미지 (그림 9)에 의해 표시됩니다. pachymet에 의해 측정된대로 최종 후부 각막 조직은 충분한 두께이어야합니다공예. 미시간 아이 뱅크에서 지난 6 개월 동안 평균 미리 처리 각막 두께는 558 미크론었고, 사후 각막 조직의 후처리 두께는 158 미크론했습니다. 87 살이 100-200 미크론, 10.9 % 측정한&gt; 200 미크론 및 2.1 % 측정 &lt;100 미크론 사이에 측정된 microkeratome - 해부하는 기증자 조직의 퍼센트. 사후 각막 조직은 이식받는 사람에게 향상된 내피 기능을 제공하는 높은 내피 세포 밀도 (ECD)를 유지합니다. 반사 현미경은 ECD를 측정하는 데 사용됩니다. 지난 6 개월 동안 미시간 안구 은행에서 내피 keratoplasty받을 수있는 것으로 간주 각막 조직의 모든 정보&gt; 2,200 세포 / mm 2 ECD했다. precut DSAEK 조직 중 99 %는 후처리 ECD&gt; 2,400 세포 / mm 2, 19 %는 ECD 있었&gt; 3,000 세포 / mm 2를했다. 후처리 ECD 사전으로의 평균 변화는 1.2 % (P = 0.0003, 이점 두 꼬리 T-테스트)에서 무시할했습니다.절차를 수행하는 동안 발생할 수있는 합병증의 압력 손실, 비대칭 절개, 그리고 상당한 조직 들여쓰기를 (각막 내피 세포의 손실을 초래)가 있습니다. 부적 절한 해부도 조직 천공이 발생할 수 있습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig1.jpg" /> 그림 1. 1E에 내피 Keratoplasty 그림 1a를위한 각막 조직의 준비 전반적인 제도 기증 각막 준비 단면의 표현입니다. 1i 대한 수치 층은 DSAEK 수술 중에 이식받는 사람의 각막의 단면 표현입니다. <ol class="lalpha"><li> 공여 각막은 인공 앞쪽에 챔버에 탑재하고 microkeratome 머리를 해부한다. </li><li> 조직 절개 후 두 lamellae 별도지만 앞부분은 얇은 판은 (캡) 외과에 대한 운송을 위해 남아 각막 침대에 다시 배치됩니다. </li><li> 에방을 운영, 외과 앞부분과 뒷부분 모두 얇은 판을 통해 수직으로 중심 각막 조직을 절단하는 trephine을 사용합니다. </li><li> trephine 절단 후 주변 기증자 각막은 현장에서 제거됩니다. </li><li> 후부 얇은 판은 가볍게 주걱으로 앞쪽에 얇은 판에서 제거됩니다. 기증자 사후 얇은 판 (DSAEK 조직)은받는 사람 각막 (1i)의 병에 걸린 부분을 대체합니다. </li><li> 환자는 제거하는 질병 사후 각막 있습니다. </li><li> 병에 걸린 사후 각막은 대구경 원으로 intraocular 악기 (역방향 Sinsky 후크)와 함께 득점있다. </li><li> 병에 걸린 각막 골을 후 사후 각막 멤브레인가 제거됩니다. </li><li> 기증자 사후 얇은 판 (DSAEK 조직)가 수신자의 눈 속에 위치합니다. </li></ol><img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig2.jpg" /> 그림 2. 미디어의 각막 조직이 있습니다. 각막 조직 헥타르 후 보존 매체에기증자로부터 rvesting. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig3.jpg" /> 그림 3. 인공 앞부분은 상공 회의소에 각막 조직. <ol class="lalpha"><li> 각막 조직은 인공 앞쪽에 챔버 이전에 기본 잠금 링이나 조직 해부에 마운트됩니다. </li><li> 각막 조직은 조직을 통해 봉인베이스 잠금 고리와 인공 앞쪽에 챔버에 마운트됩니다. </li></ol><img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig4.jpg" /> 4 그림. 각막 조직 두께가 확인합니다. 각막 두께가 각막의 표면에 초음파 pachymetry 프로브를 사용하여 검사합니다. <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig5.jpg" /> 그림 5. 각막 조직 해부. <ol class="lalpha"><li> Microkeratome 블레이드는시 5 번 장착 게시물 및 위치와 기지에 배치됩니다. </li><li> Microkeratome층상 절개를 만들기 위해 각막을 통해 전달됩니다. </li></ol><img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig6.jpg" /> 6 그림. 절개 후 각막의 앞부분은 모자. 앞쪽에 각막 뚜껑이 microkeratome의 절개 후 무료가 완료된 것입니다. <img alt="그림 7" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig7.jpg" /> 그림 7. 상공 회의소보기에 각막를 해부. 절개가 완료되면 각막은 교통 보는 챔버에 반환됩니다. <img alt="그림 8" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig8.jpg" /> 그림 8. 운송을위한 포장의 각막은.보기 챔버의 각막 그런 다음 안전하게 외과 의사로 수송을위한 포장됩니다. <img alt="그림 9" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig9.jpg" /> 9 그림. 각막의 10월의 외관.의 10월최종 해부 각막이 (단면)을 각막 두 개의 반쪽으로 분할되어 있는지 보여줍니다. 인터페이스는 화살표로 표시대로 주변 조직보다 더 강렬한 반사이다.

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</ol>

Drs. 우드워드와 Shtein는 공개 할게 없다. 미스터 Mavin 씨와 딛는 중서부 아이 은행의 직원입니다.

각막의 안쪽 - 대부분의 계층, 내피는 각막 탈수를 유지하여 각막의 광학 선명도를 유지합니다. 많은 질병 상태는 특별히 dystrophies, 감염, 염증 프로세스 및 degenerations 포함하여 각막 내피의 건강과 생존에 영향을 미칩니다. 최근까지 질병 각막 내피를 교체하는 각막 이식은 각막의 전체 두께 이식을 필요합니다. 지난 10 년, 같은 DSAEK 수술과 같은 부분 두께가 각막 이식, 의한 사후 각막의 대상으로 대체 짧은 복구 시간과 같은 목표를 달성할 수있었습니다. 에 관계없이 기술의, 이식된 조직이 이식된 각막의 광학 선명도를 유지하는 건강한 각막 내피를 유지해야하며 그 결과로 모든 조직 처리 기술은 각막 내피를 보호하기위한 추가 단계가 있습니다. 자동 microkeratome의 해부는 현재 일입니다내피 keratoplasty위한 각막 조직 준비를위한 전자 표준입니다. microkeratome 사용은 기증자 조직 천공을 감소 및 수동 해부 5에 비해 시각적인 회복 속도를 표시했다. DSAEK가 처음 도입되었을 때, 일부 외과 의사들은 microkeratome 장비를 구입하여 수술 시작시 수술실에 기증자 층상 절개를 수행했습니다. 조직 준비에 실패하는 경우, 수술은 환자와 의사에게 원인이 불편과 비용을 취소해야만했다. 2006 년 안구 은행은 안구 은행 연구실 이전 수술 12 ~ 하루에 통제된 조건 하에서 &quot;사이트 해제&quot;microkeratome 절개를 수행하기 시작했다. 휴지 준비는이 설정에 실패하면 신선한 조직을 다른 절개를 수행하는 시간이 있습니다. 공여 후부 각막 층상 조직의 Microkeratome 절개는 합병증을 최소화하기 온유하고 정밀한 기술을 필요로합니다. 각막은 gentl 삽입되어야합니다섬세한 내피 세포 손상을 방지하기 위해 인공 앞쪽에 챔버 (AAC)에서 Y. 각막이 탑재하고 AAC에 부합되면, 잠금 고리가 위치하고 챔버 내에서 높은 압력을 유지하고 microkeratome 해부하는 동안 조직 붕괴의 가능성을 줄일 수있는 기밀 시일에 따라 조정되어야한다. 균일한 절개를 보장하기 위해 microkeratome 머리 상수, 부드러운 방식으로 회전한다. 절개 후 조직을 다시 내피 세포 손상을 최소화하기 위해 신중하게 처리되어야합니다. 또한 그것은 층상 절단은 사후 얇은 판 수술 13 사용하기에 적합 될 수 있도록하기 위해서는 중심과 완료되었는지 확인하는 것이 중요합니다. 각막 기증자 천공이 절차의 무시무시한 합병증이며 그것은 경험이 덜 자주됩니다. 반복적으로 구멍이 microkeratome 패스 동안 발생하는 경우, 프로 시저에서 여러 단계를 확인하는 것이 중요합니다. 옥수수EA가 제대로 마운트와 AAC를 정렬해야합니다. 꽉 인감와 높은 압력이 microkeratome 패스 이전에 취득 및 절차에 걸쳐 유지되어야합니다. 행사에서 잔류 결막은 공막엔의 가장자리에 있고 전에 마운트 해제를 해부해야합니다. microkeratome 블레이드는 샤프하고 노치없이 여야합니다. 올바른 microkeratome 헤드의 두께는 약 각막 두께에 따라 선택하여야한다. microkeratome 헤드 패스 이전 적절하게 진동한다. 이 기술을 추가 문제로 모든 장비가 제대로 작동하는지 확인하기 위해 microkeratome 공급 업체에 문의하십시오. 완벽하게 수행할 때도이 기법에 대한 몇 가지 제한이 있습니다. Microkeratome 헤드는 다양한 두께로 각막 조직을 절단하는 데 사용할 수 있지만, 최종 조직의 두께에 microkeratome 머리의 관계는 최종 조직의 다양한 두께를 제공하는 동일한 머리 부정확할입니다7. 또한, 준비에 상당한 학습 곡선의 존재 및 합병증은 새로운 사용자를위한 더 자주 있습니다. 안구 은행 설정에서 층상 절개를 수행하면이 프로 시저에게 하루에 여러 번 수행 훈련된 기술자들이이를 무경험으로 인한 합병증을 최소화하고, 그들의 기술을 최적화할 수 있습니다. 존재하는 내피 keratoplasty위한 microkeratome를 이용한 각막 절개에 대한 기술의 수정 사항. 일부는 각막 내피에 향상된 보호 기능을 제공의 목적으로 인공 앞쪽에 챔버에서 각막 버튼 아래에 점탄성 재료 또는 각막 저장 미디어보다는 균형잡힌 소금 용액을 사용하는 것을 선호합니다. microkeratome 절개이 시작되어야하는 위치를 결정하기위한 방법의 차이도 있습니다. 다른 안구 은행과 다른 각막 외과 의사는 각막이의 식별을위한 표시 방식과 같이 특정 환경 설정을 할 수 있습니다앞부분은 각막 뚜껑이나 사후 층상 방향. 이것은 제조 업체들이이 프로토콜에서 사용되는 것과 유사한 장비를 만들 것을인지해야합니다. 특정 제조 업체의 지침이 사용됩니다 어느것 장비를 따라야한다. DSAEK 수술에 대한 해부하는 각막 조직의 신뢰할 수있는 안구 은행 준비 과정이 비교적 새로운 외과 기술의 광범위한 수용을위한 유익했습니다. 일단 외과 의사는 각막 이식의 &#39;첫 단계&#39;공연 안구 은행에서 자신감되었다 - DSAEK로 즉 조직 준비, 많은 실제적인 제한이 완화되었다. 안구 은행은 안정적으로 기증자 조직의 안전하고 효과적인지, 그리고 적시 공급과 처리 조직에 대한 수요를 유지할 수있었습니다. 고품질 DSAEK 조직은 현재 사전 및 수술실 시간과 조직 준비 합병증은 14-15을 9를 감소 주문할 수 있습니다. 이 프로토콜은 preparati 설명각막 기증자 조직의 안구 은행 처리의 관점에서 DSAEK 이식술의에 있지만,이 기술은 자신의 층상 각막 기증자 조직을 준비뿐 아니라 관심 외과에 직접 적용 층상 각막에 실험실 기반 또는 임상 연구를 수행하기 관심 분들 이식. 각막 층상 준비의 앞으로의 방향은 조직 처리를 위해 femtosecond 레이저를 이용, &quot;울트라 씬&quot;DSAEK 각막 조직, 또는 Descemet의 멤브레인 내피 keratoplasty (DMEK) 수술을위한 각막 내피 스크롤의 준비의 생성을 포함합니다. 내피 keratoplasty은 진화에 수술 분야이며 안구 은행과 각막 외과 의사 사이의 공생 관계는 수술 기법은 최적화로 변경하는 것입니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 장비의 명칭 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> Microkeratome </td><td> 모리아 </td><td> 1,021,174 </td></tr><tr><td> 인공 앞쪽에 상공 회의소 기지 </td><td> 모리아 </td><td> 19161-562 </td></tr><tr><td> 인공 앞쪽에 상공 회의소 캡 </td><td> 모리아 </td><td> 19172-220 </td></tr><tr><td> Microkeratome 헤드 300 </td><td> 모리아 </td><td> O304 </td></tr><tr><td> Microkeratome 헤드 350 </td><td> 모리아 </td><td> N791 </td></tr><tr><td> 콘솔 </td><td> 모리아 </td><td> 19360-3482 </td></tr></tbody></table>

내피 keratoplasty을위한 각막 기증자 조직 준비

Corneal Donor Tissue Preparation for Endothelial Keratoplasty

지난 10 년간 각막 이식 수술 기술은 혁명적인 변화의 1,2를받은. 창설 이래 전통적인 전체 두께의 각막 이식은 각막 질환에 의해 제한 사람의 시력을 회복시킬 수있는 치료되었습니다. 이 방법의 단점은 높은 수술 난시의 정도, 예측 굴절률의 결과의 부족, 그리고 안구 표면에 교란을 포함합니다. 오직 후부 각막 기질, Descemet의 멤브레인 및 내피를 이식 Descemet의 조직 내피 keratoplasty (DSEK)의 개발은 획기적으로 각막 내피 질환의 치료를 변경했습니다. DSEK은 작은 절개를 통해 수행되며,이 기술은 출혈이나 퇴학의 위험과 함께 &#39;오픈 스카이&#39;수술을 피할 수 수술후 상처 dehiscence의 발병률을 감소, 예측 불허의 굴절률 결과를 감소하고, 장기 이식 거부 반응 3-6의 속도를 줄일 수 있습니다. ove_content &quot;&gt; 처음 DSEK을위한 각막 기증자 사후 층상 절개를 수동으로 수행된 한 변수 그래프트 두께 및 조직 처리하는 동안 섬세한 각막 내피 조직에 손상을 발생. 자동 층상 해부 (Descemet의 잎을 자동 내피 keratoplasty, DSAEK)가되었다 이것을 해결하기 위해 개발된 문제를 해결합니다. 자동 절개는 조직 재생에 최소한의 각막 내피 세포의 손실과 함께 DSAEK 수술에 대한 균일하고 얇은 조직 이식을 만드는 데 도움이 기계적 microkeratome 블레이드과 라식 각막 플랩 생성과 같은 기술을 활용합니다. 안구 은행들은 수년간 외과 이식을 위해 전체 두께 각막을 제공하고 있습니다. 2006 년 안구 은행은 내피 keratoplasty 위해 precut 각막 조직에 공급을위한 방법론을 개발하기 시작했다. 각막 외과의 입력으로 안구 은행은 안전하고 효과적으로 사후 층상 조직 f를 준비하는 철저한 프로토콜을 개발했습니다또는 DSAEK 수술. 이것은 안구 은행에 preoperatively 수행할 수 있습니다. 연구는 DSAEK 수술을위한 안구 은행 precut 조직 대 외과 의사가 잘 준비되고 조직을 이용해 조직 7 또는 환자 결과 8,9의 질적 측면에서 더 큰 차이를 보여주지. 대부분의 각막 외과의 경우 precut DSAEK 각막 조직의 여부는 시간과 돈을 10을 저장하고, 수술실에서 기증자 각막 절개를 수행 스트레스를 줄여줍니다. 때문에 적시에 고품질의 사후 층상가 각막 제공하기 위해 안구 은행의 능력의 일부에 DSAEK는 각막 내피 질환의 외과적인 관리를위한 치료의 표준이되었습니다. 우리가 설명하는 절차는 DSAEK 수술에 이식 (그림 1) 안구 은행에서 후부 층상 각막의 준비입니다.

내피 각막 이식은 사후 각막 질병 치료를위한 수술 기법입니다. 덜 내피 세포 손실 및 향상된 결과로 더 얇고 더 대칭 이식에서 조직 결과를 준비하는 기계적 microkeratome 해부. 절개는 각막 이식 수술 이전 안구 은행에서 수행할 수 있습니다.

내피 Keratoplasty을위한 각막 기증자 조직 준비

지난 10년 동안 각막 이식 수술 기법은 혁신적인 변화를 겪었습니다1,2. 전통적인 전층 각막 이식술은 도입 이후...

본 절차의 전반적인 목표는 이식에 적합한 층판 각막 이식 조직을 일관되게 제작하는 것입니다. 이를 위해 먼저 층류 후드 내에 무균 구역을 설정합니다. 그다음, 각막을 인공 전방에 고정합니다.그 다음 마이크로케라톰(microkeratome)을 사용하여 각막 전체를 매끄럽게 절개합니다. 마지막 단계는 인공 전방에서 저장 매체로 각막을 조심스럽게 옮기는 것입니다. 최종적으로, 각막의 세극등 현미경 관찰과 내피세포의 반사 현미경 검사를 통해 층판 이식편 준비가 성공적으로 이루어졌는지 확인합니다.관통성 각막 이식술과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 dsec의 경우 각막의 후면부만 교체하므로, 적은 수의 봉합사를 사용하는 소절개 수술이 가능하며 회복이 더 빠르고 굴절 결과가 개선된다는 점입니다. 이 방법의 시각적 시연은 매우 중요합니다. 내피 각막 성형술을 위한 층판 박리 단계는 습득하기 어렵습니다.건강한 각막 조직을 보존하기 위해 조직을 절단할 때 정밀함과 주의가 필요합니다. 먼저 층류 후드 내의 질소 가스를 50에서 60 PSI로 켭니다. 장치의 터빈 압력은 3.3에서 3.4 bars여야 합니다.Moria 콘솔의 1번 및 2번 펌프 압력이 700대인지 확인하십시오. 압력은 200 PSI 미만이어야 합니다. 무균 조작법을 사용하여 멸균 키트를 개봉하고 공여 각막 조직을 배치하여 멸균 구역을 준비하며, 파키미터 프로브가 멸균되었고 이소프로판올로 세척되었는지 확인하십시오.그런 다음 멸균 트레이에서 내용물을 꺼낸 후, 주입 라인을 스톱콕(stop cock)에 연결하고 라인의 스파이크 끝부분을 후드 밖으로 뺍니다. 주입 라인을 내려놓고 멸균 트레이를 제거합니다. 다음으로, 균형염 용액(balanced salt solution) 병에 스파이크를 꽂고 작업 구역에서 약 4피트 떨어진 곳에 걸어둡니다.이제 6분 동안 외과적 세척을 수행하고 멸균 수건으로 건조합니다. 후드 내에서 멸균 가운을 착용하고 멸균 장갑을 두 겹으로 낍니다. 기구 상자를 열고 그 내용물을 멸균 구역 위에 놓습니다.금속 basin이나 약컵에 BSS 10~20 cc를 붓고 멸균 피펫을 채웁니다. 이 BSS를 사용하여 stop cock과 주입 라인을 전방 챔버의 주입 포트에 연결하고 BSS로 플러싱합니다. BSS가 피스톤 상단에 보이면 플러싱을 중단합니다.이제 인공 챔버를 멸균 거즈 위에 배치하고, 포셉을 사용하여 이식 고정 링(graft tightening Ring)을 시계 반대 방향으로 약 5mm 돌려 피스톤을 내립니다. 각막의 내피세포 측이 아래로 향하도록 피스톤 위에 각막을 중앙에 맞추고, 각막 아래에 기포가 없을 때까지 BSS로 플러싱 시스템을 채웁니다. 필요한 경우 각막을 조심스럽게 움직여 조정합니다.이제 전방 커버를 베이스 잠금 링의 빈 공간에 맞춘 후, 시계 방향으로 15도 정도 살짝 돌려 고정합니다. 그런 다음 피스톤을 올리고 멸균 장갑을 낀 손가락으로 챔버를 베이스에 완전히 조여 고정합니다. 각막 상단을 터치하여 시술을 수행하기에 충분한 압력이 가해졌는지 확인합니다.이제 각막 표면에 각막 두께 측정 프로브를 놓고 보조자가 측정값을 기록하도록 합니다. 표준 편차가 10 µm 이상인 경우, 멸균 장갑을 낀 손으로 측정을 다시 수행하십시오. 터빈 호스를 다른 손으로 옮겨 쥐고 터빈 호스를 제어 장치에 나사식으로 결합합니다.오염된 장갑을 폐기한 후, 외과의의 별도 지시가 없는 한 각막 위에 BSS를 몇 방울 떨어뜨립니다. 그다음, 실이 본인을 향하고 숫자가 위를 향하도록 하여 각막 두께에 맞는 절삭 날을 선택합니다. 마이크로케라톰 헤드의 우측에 날의 뾰족한 끝부분이 먼저 들어가도록 장착합니다.양쪽 끝의 헤드를 고정하는 블레이드에 접촉하지 않도록 항상 주의하십시오. 블레이드를 터빈에 나사로 고정하고, 터빈을 터빈 호스에 나사로 고정합니다. 절삭 헤드를 BSS에 담근 상태에서 진공 페달을 한 번 누르고 터빈을 5초 동안 작동시켜 블레이드 진동을 테스트하십시오.이제 피스톤을 손으로 조여 고정하십시오. 다음으로, 마이크로케라토톰을 베이스의 포스트에 장착하고 5시 방향으로 배치합니다. 그런 다음 터빈 페달을 누른 상태로 유지하여 블레이드를 진동시키십시오.검지와 엄지손가락을 사용하여 마이크로케라톰의 터빈 바닥과 상단 중간 부분을 잡습니다. 손목을 돌려 각막을 가로질러 부드럽고 균일하게 절개합니다. 일정한 속도를 유지하여 마이크로케라톰의 통과가 부드럽고 균일하게 이루어지도록 하십시오. 그렇게 하지 않으면 이식편의 두께가 불균일해질 수 있습니다.터빈 페달을 떼고 마이크로케라토메를 장치에서 수직으로 들어 올립니다. 그런 다음 진공 장치를 끕니다. 멸균 장갑을 착용하고 조수의 도움을 받아 각막 두께 측정값을 다시 확인하되, 조직이 매우 얇아 손상되기 쉬우므로 주의하십시오.그 다음, 멸균 BSS 몇 방울을 잔여 각막 기질층에 떨어뜨립니다. 이어서 챔버 내의 각막 위에 전방 캡을 다시 배치합니다. 면봉 구체를 사용하여 표시된 기준점에 맞춰 캡의 중심을 잡고, 전방 캡 아래에 있는 BSS를 흡수합니다.이제 스톱콕(stop cock)을 열고 챔버를 옆으로 돌린 후, 각막이 변형되지 않도록 피스톤을 천천히 내립니다. 베이스의 잠금을 해제하고 BSS 흐름의 압력을 이용해 인공 챔버 컵을 밀어내어 컵에서 각막을 분리합니다. 포셉을 사용하여 9시, 12시, 3시 방향의 가장자리를 부드럽게 당깁니다.느슨해지면 12시 방향의 가장자리를 잡고 각막을 조심스럽게 뷰잉 챔버로 옮기되, 내피세포 층이 위로 향하게 합니다. 그런 다음 뷰잉 챔버를 닫습니다. 캡이 전방에서 천천히 분리되도록 합니다.이렇게 하면 각막이 허탈되는 것을 방지하여 내피세포 손상을 막을 수 있습니다. 마지막으로, 세극등 검사와 각막의 투과형 반사 현미경 검사를 수행하십시오. 그런 다음 전방 챔버를 냉장 보관하고 각막을 포장하여 외과의에게 운송하십시오.기증 각막을 기계적 미세각막절삭기로 적절히 박리하면 매끄럽고 균일한 층판 각막 기증물을 얻을 수 있으며, 6개월간의 기록 분석 결과, 처리 전 평균 각막 두께는 558 microns였고 처리 후 후방 각막 조직의 두께는 158 microns였습니다. 이식 수혜자에게 개선된 내피 기능을 제공하기 위해서는 후방 각막 조직이 높은 내피세포 밀도를 유지해야 합니다. 이는 지난 6개월 동안 각막내피세포 현미경(specular microscopy)을 통해 측정되었습니다.내피 각막 이식에 적합하다고 판단된 모든 각막 조직은 mm²당 내피세포 수가 2,200개 이상이었습니다. 처리 전후의 ECD 평균 변화는 1.2%로 무시할 수 있는 수준이었습니다. 이 영상을 시청하시면 각막 내피 이식 수술을 위한 LAM 조직 준비 방법을 충분히 이해하실 수 있을 것입니다. 숙달된다면, 적절하게 수행했을 때 이 기술은 20분 이내에 완료할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

신문은 인간의 시체 같은 기증자의 안구 세계에서 망막 조직을 내장을 들어낸하는 간단한 소비세 각막에 대한 기술과 설명합니다. 기술은 안구 세계의 다른 조직을 손상시키지 않고 이식, 수술이나 연구 목적을 위해 사용되는 소비세 양질의 조직에 도움이됩니다 여기서 설명했다.

위한 간편한 기법<em&gt; 현장에서</em인간 안구 글로브에서 각막 및 망막 조직의 내장 적출의&gt; 절단

Mice는 각막 이식을 포함한 다양한 형태의 이식을 연구하기 위한 모델로 사용되었습니다.  이 보고서에서는 급성 및 후기 각막 이식을 위한 쥐 모델을 설명합니다.

쥐의 각막 이식 : 고체 장기 이식의 가장 일반적인 형태를 연구하기위한 모델

내피 세포 전층 각막 이식술은 발전이 각각 승계 한 얇아 이식의 이식을 초래하기 때문에 지속적으로 진화하는 수술 기법이다. 여기에서 우리는 내피 세포 이식이에 대한 기증자의 공막 버튼 데스 메 막을 안전하고 반복적 인 분리를 허용하는 제어 수동 조직 박리하는 기술을 제시한다.

데스 메막 내피 각막 이식을위한 각막 기증자의 조직 준비

내피 이식에서는 모든 레이저 시술이 제안됩니다. 이 수술 기법은 펨토초 레이저를 사용하여 기증자 조직을 준비하는 것을 기반으로 합니다. 그런 다음 레이저 용접 기술을 사용하여 기증자 내피를 올바른 위치에 고정합니다.

&quot;모든 레이저&quot;내피 세포 이식

인간 당뇨병 장기 배양 각막에서 아데노바이러스 유전자 치료의 예는 이러한 각막에서 지연된 상처 치유와 현저히 감소된 상피 줄기 세포 마커 발현의 정상화를 위해 제시됩니다. 또한 줄기세포가 풍부한 윤부 상피 배양에서 이 과정의 최적화를 설명합니다.

당뇨병 각막에 대한 아데노 바이러스 유전자 치료 : 인간 장기 배양 각막 및 윤부 상피 세포에 상처 치유에 효과 및 세포 마커의 발현 줄기

이 프로토콜에는 새로운 3 차원 생체 외에서 모델을, 어디 각 막 실질 세포와 분화 된 신경 세포 교양 함께 시험에는 두 종류의 세포 상호 작용의 이해를 돕기 위해 설명 합니다.

각 막 조직 공학:는 생체 외에서 의 모델 인간 각 막의 실질 신경 상호 작용

우리는 각막 기증자 기질의 고품질 평가를 위한 방법으로 전체 필드 광학 간섭 현미경의 사용을 설명합니다. 이 프로토콜은 건강 또는 질병을 나타내는 특징을 식별하는 데 사용할 수 있으며 기증자 조직의 스크리닝 및 선택, 따라서 각막 성형술의 결과를 개선하는 것을 목표로 합니다.

각막 이식편의 기질 특징에 대한 조직학과 유사한 분석을 위한 전체 필드 광학 간섭 현미경

여기서, 돼지 분할 각막 버튼의 제조 및 재배를 위한 단계별 프로토콜이 제시된다. 이 오르가노-전형적으로 재배된 장기 배양 모델은 인간 기증자 각막에 필적하는 15일 이내에 세포 사망률을 나타내므로, 독성 덱젠을 첨가하지 않고 비인간 각막의 장기 재배를 허용하는 첫 번째 모델을 나타낸다.

분할 각막 단추를 사용하여 돼지 각막 내피 내피 기관 문화 모형

여기에서, 우리는 네오디뮴을 사용하여 Descemet의 막 (DM)에서 각막 내피 세포 (CEC)를 분리하는 프로토콜을 제시합니다:YAG (Nd:YAG) 레이저는 bullous 각화증 (BK)를 위한 전 생체 내병 모형으로.

각막 내피 세포 손실의 비 침습적, 레이저 보조 실험 모델의 개발

이 프로토콜은 인간 또는 양 조직의 이식에서 각막 내피 세포 배양을 확립하고 성장하는 데 필요한 중요한 단계를 설명합니다. 각막 내피 세포를 membranous 생체 재료에 소양성하는 방법도 제시된다.

생체 재료 멤브레인에 인간과 양 각막 내피 세포 층의 성장

Descemet's Stripping Only는 Fuchs 내피 각막 이영양증으로 인한 중앙 각막 굿태를 가진 환자가 말초 세포가 내피층을 재생시키기 위해 Descemet의 막을 벗겨내는 실험 절차입니다. 우리는 eFGF1 (NM141)에 의해 자극된 가속화된 치유와 함께 영양 장애 인간 각막 생체외 에서 DSO를 시뮬레이션하는 새로운 방법론을 제시한다.

조작된 섬유아세포 성장 인자 1에 의해 자극된 가속화된 치유를 통해서만 Descemet의 스트리핑의 인간 각막 배양 모델

배우세요 내피 각막 이식을 위한 기증자 조직 준비 방법을 마이크로커라토미를 이용해 얇고 균일한 각막 편을 제작하는 기술입니다. 이 방법은 수술 결과를 개선하고 환자의 회복을 촉진합니다.

내피 Keratoplasty을위한 각막 기증자 조직 준비

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