Name: 질병 Pathogenesis를 공부하는 도구로 뉴런에 항체 Transfection (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 56 s
Description: 배우세요 신경세포에 형광 표지 항체를 트랜스펙션하여 신경면역학 질병 발병기전을 연구하는 방법을. 면역형광 현미경으로 시각화하고 이미징 소프트웨어로 효율을 정량화할 수 있습니다.

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이 작품은 연구 개발의 사무실, 의료 연구 서비스, 보훈학과에서 지원됩니다. 이 연구는 VA 공훈 검토 상 (MCL에)와 테네시 건강 과학 센터 다발성 경화증 연구 기금의 대학 재정 지원되었다.

1. 항체 라벨 (그림 1) <ol><li> 0.1 M NaHCO 3 버퍼를 만들기 : <ul type="circle"><li> 8.4 g NaHCO 3 </li><li> 29.2 g NaCl </li><li> 1리터 H 2 O </li></ul></li><li> 이 솔루션 (10.6 g 오세영 2 CO 3, 29.2 g NaCl, 1리터 H 2 0)과 8.4의 산도에 버퍼를 가져와. </li><li> 70 μl 방지 hnRNPA1 500 μl NaHCO 3 버퍼 35 μl Atto550 NHS를 추가하고 실온에서 1 시간에 회전 할 수 있습니다. 1 시간 긴 회전 후, dialyzer로 혼합물을 주입하고 하루 아침에 PBS 2 리터에 dialyze. </li><li> 다음 날, 스핀 컬럼 (Amicon 울트라 0.5)를 사용하여 안티 - hnRNPA1 dialyzed Atto550 NHS을 집중. </li><li> Atto550 NHS는 반 hnRNPA1 항체가 집중되어 표시 한 후, 나노 드롭 샘플 농도를 결정합니다. </li></ol> 2. 항체 Transfection (그림 2) <ol><li> Dulbecc의 씨 10 5 세포 /도 500에 μl이전 transfection로 8도 슬라이드 24 시간의 오의 수정 된 이글 매체 (DMEM/F12 10% FBS 1% 항생제). 셀 confluency는 최소 70 %의합니다. </li><li> 배란 후 24 시간 시딩 후 Eppendorf 튜브에 AB-DeliverIN 시약 2 μl를 추가합니다. </li><li> 다음, 같은 Eppendorf 튜브에 방지 hnRNPA1 항체 분류 Atto550 NHS 2 μg을 (0.5 μg / μl)을 추가하고 RT로 10-15 분 알을 품다. </li><li> 부화하는 동안 미디어를 기음과 세포에 신선한 DMEM 매체 394 μl를 추가합니다. </li></ol> 참고 : 컨트롤 역할을 손길이 닿지 않은 셀 중 하나 챔버에 500 μl DMEM을 추가합니다. <ol start="5"><li> 부화 후, 항체 혼합물에 DMEM 100 μl를 추가 아래로 pipetting과에 의해 혼합, 500 μl의 총 볼륨 DMEM에있는 셀에 추가 할 수 있습니다. </li><li> 항체 전달의 48 시간 후 미디어를 변경합니다. </li></ol> 참고 : 프로토콜은 FITC 긍정적 인 제어로 rIgG 표시를 반복했다. 3. 효율성을 결정하기 위해 라이브 및 고정 이미징 <ol><li> 이미지 셀 이미지 transfected Atto550 NHS이라는 항체를 할 수있는 형광 현미경에 Cy3 필터를 사용하여 48 시간에 살고 있습니다. </li><li> 라이브 영상이 완료되면, 미디어 및 수정 전지를 대기음. </li><li> aspirating 미디어 후, 실온에서 15 분에 0.4 %의 Paraformaldehyde과 세포를 취급합니다. 세포에게 4 X 5 분마다 PBS로 씻는다. 그런 다음 DAPI 시약 및 수정 coverslip을 포함 장착 미디어와 세포를 탑재합니다. Axiovision 소프트웨어와 고정 세포의 transfection 효율을 측정합니다. Axiovision 소프트웨어가 손에 없으면, 단순히 3.7에서 계산에 손 플러그 결과하여 이미지에서 이벤트를 계산합니다. 또한, ImageJ 소프트웨어는이 계산에 사용할 수 있습니다. </li><li> 첫째, 20x 확대에 원하는 이미지에 세포의 총 수를 계산하려면 &quot;이벤트&quot;측정을 사용합니다. </li><li> 다음 아니었다 세포 수를 계산하려면 &quot;이벤트&quot;측정을 사용하여성공적으로 동일한 20x 배율 이미지의 항체와 transfected. </li><li> 엑셀 스타일의 형식으로 측정 된 &quot;이벤트&quot;에 액세스하려면 &quot;속성&quot;을 클릭 &quot;측정&quot;탭을 클릭하고 확인을 클릭합니다 &quot;테이블.&quot; </li><li> 마지막으로, 두 이전에 측정 이벤트를 비교하여 transfection 효율을 결정하기 위해 다음과 같은 계산을 사용합니다 ((총 세포 - Untransfected 셀) / 총 전지) × 100 = Transfection 효율. </li></ol> 4. 대표 결과 untransfected의 라이브 이미지 (그림 3A)이 transfected (그림 3B) 뉴런에 비해 것은 항체의 라벨이 (각 그림에서 빨간색 또는 녹색) 명확하게 세포 (그림 3B, C, D)에서 관찰되는 알 수있다. 흡인에 따라 사이 항체 또는 세포의 표면에 점착성의를 제거하는 미디어와 세탁기, 표시된 항체는 여전히 뉴런 (그림 3C, D)에 존재한다.<html> transfection 효율을 계산하기 위해 성공적으로 transfected되지 않은 세포에 비해 총 셀을 계산 Axi​​ovision 소프트웨어를 사용합니다. 이 값은 전체 세포의 비율 (그림 4)로 transfection 효율을 확보 할 수있는 transfection 효율 공식을 체결했다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4154/4154fig1.jpg" /> 그림 1. 아토 550 NHS 에스테르와 라벨 항체에 사용되는 절차의 흐름 다이어그램 라벨 항체을 집중하는 데 필요한 단계 다음은. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4154/4154fig1large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/4154/4154fig2.jpg" /> 그림 2. 문화의 라이브 셀에 표시된 항체를 transfect하는 데 사용되는 절차의 흐름 다이어그램.arge.jpg &quot;대상 =&quot;_blank &quot;&gt; 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/4154/4154fig3.jpg" /> 그림 3. transfected 뉴런 48 시간 다음 transfection의 이미지를 살고 있습니다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/4154/4154fig4.jpg" /> 그림 4. transfection 효율을 결정하기 위해 계산 이벤트와 이미지를 수정하고 헹구어.

<ol><li>Burkhardt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitope-specific+recognition+of+type+II+collagen+by+rheumatoid+arthritis+antibodies+is+shared+with+recognition+by+antibodies+that+are+arthritogenic+in+collagen-induced+arthritis+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Epitope-specific recognition of type II collagen by rheumatoid arthritis antibodies is shared with recognition by antibodies that are arthritogenic in collagen-induced arthritis in the mouse.</a> Arthritis Rheum. 46, 2339-2348 (2002).</li>
<li>Chester, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lambert-Eaton+syndrome+antibodies%3A+reaction+with+membranes+from+a+small+cell+lung+cancer+xenograft%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Lambert-Eaton syndrome antibodies: reaction with membranes from a small cell lung cancer xenograft.</a> J. Neuroimmunol. 18, 97-104 (1988).</li>
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<li>Magrys, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+anti-alpha-enolase+autoantibodies+in+pathogenicity+of+autoimmune-mediated+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of anti-alpha-enolase autoantibodies in pathogenicity of autoimmune-mediated retinopathy.</a> J. Clin. Immunol. 27, 181-192 (2007).</li>
<li>Geis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stiff+person+syndrome-associated+autoantibodies+to+amphiphysin+mediate+reduced+GABAergic+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Stiff person syndrome-associated autoantibodies to amphiphysin mediate reduced GABAergic inhibition.</a> Brain. 133, 3166-3180 (2010).</li>
</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

특정 분자와 표현에 대한 가설을 테스트하기 위해, 유전자 및 기타 벡터는 일반적으로 세포로 transfected 수 있습니다. 이 절차의 독특한 측면은 쉽게 대상 세포에 항체를 transfect 할 수있는 능력입니다. 우리는 5 개의 실험을 중복의 각이 방법을 수행했습니다. Transfection 효율 결과는 모든 실험들과 비슷했다. 중요한 방법은 항체의 구조 나 기능을 변경하지 않고 셀에 항체의 항목을 수 있습니다. 또한, 라이브 뉴런의 형광 현미경의 사용과 함께, 우리는 일반적으로 55%을 초과 transfection 효율을 확인할 수 있습니다. 즉, 하나의 관심과 세포 내 표적의 항체 사이의 상호 작용에 직접 관련된 가설을 테스트 할 수 있습니다. 이곳에서 공부되지 않았지만, 팹 조각도 활용 될 수있다. 또한, 실험 등 염증성 크린 시토 킨을 추가로 문화 조건을 변경하는 expressi에 영향을 미치는 경우 검토하는 설계 할 수또는 세포 내 타겟의 현지화. 항체는 세포 ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 형광 현미경 AxioObserver A1 </td><td> Zeiss </td><td></td></tr><tr><td> Axiovision 버전 4.2 </td><td> Zeiss </td><td></td></tr><tr><td> 안티 rhnRNPA1 </td><td> Abcam </td><td> Ab4791 </td></tr><tr><td> FITC 안티 rIgG 표시 </td><td> OZ Biosciences </td><td> AI20100 </td></tr><tr><td> Atto550 NHS 에스테르 </td><td> 시그마 </td><td> 92,835 </td></tr><tr><td> AB-DeliverIN </td><td> OZ Biosciences </td><td> AI20100 </td></tr><tr><td> DMEM/F12 10%는 FBS 1%의 항생제 </td><td> Gibco </td><td> 11320-033 </td></tr><tr><td> 폴리-D-라이신 8도 문화 슬라이드 </td><td> BD </td><td> 354632 </td></tr><tr><td> 다중 목적 회전하는 것 </td><td> 과학 Industri에스 주식회사 </td><td> 모델 151 </td></tr><tr><td> DAPI 장착 미디어 </td><td> Millipore </td><td> S7113 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Ambion </td><td> 9626 </td></tr><tr><td> Dialyzer </td><td> 온도 피셔 과학 </td><td> 66,380 </td></tr><tr><td> Amicon 울트라 - 0.5 </td><td> Millipore </td><td> UFC501096 </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde (4 % 용액) </td><td> 전자 현미경 과학 </td><td></td></tr><tr><td> 나노 드롭 </td><td> 온도 피셔 과학 </td><td></td></tr></tbody></table>

질병 pathogenesis를 공부하는 도구로 뉴런에 항체 transfection

Antibody Transfection into Neurons as a Tool to Study Disease Pathogenesis

항체가 생활 시스템에서 일어나는 다양한 이벤트에 소설 통찰력을 얻을 수있는 기능을 제공합니다. 대상 단백질에 매우 구체적인 항체를 생산하는 능력은 해결 될 매우 정확한 생물학적 질문에 사용할 수 있습니다. 중요한 항체는 전신 홍반 루푸스 (SLE), 류마티스 관절염 (RA), paraneoplastic syndromes, 다발성 경화증 (MS)와 인간 T-lymphotropic 바이러스 타입 1 (HTLV-1)를 포함한 인간의 질병의 숫자의 pathogenesis에 연루되어 myelopathy / 열대 경련 paraparesis (햄 / TSP) 1-9 연결된 상태입니다. 항체는 질병이 진행중인 조사의 영역이며, 데이터 항체와 염증의 다양한 세포 내 분자 결과 사이의 상호 작용은 세포 메시징 및 apoptosis 10 변경하는 것이 좋습니다 원인이 방법. 그것은 MS와 햄 / TSP 환자는 세포 내 RNA 결합 단백질 이기종 ribonuclear 단백질에 autoantibodies을 생산하는 것으로 나타되었습니다1월 5일에서 7일까지 (hnRNP A1) 3, 9, 11. 최근 데이터 간 neuronal 및 표면 항원 모두 항체가 병원성 3, 5-9 11아르을 나타냅니다. 따라서, 세포 내 항체의 연구를 위해 할 수있는 절차 : 단백질 상호 작용은 질병 pathogenesis에 큰 통찰력을 부여합니다. 유전자는 일반적으로 기본 세포와 문화에 세포 라인에 transfected 있으며, 세포에 항체의 그러나 transfection이 항체 구조 또는 낮은 transfection 효율을 12 개조에 의해 방해했습니다. transfection의 다른 방법은 양이온 liposomes (DOTAP / 마약으로 구성)과 polyethylenimines (PEI)을 기반으로 항체 transfection을 포함, 컨트롤 12에 비해 항체 transfection의 열 배나 감소로 이어진 둘 다. 우리의 연구에서 수행 한 방법은 양이온 지질로 인한 방법과 유사하고를 통해 항체와 비 공유 결합 복합체를 형성하기 위해 지질 기반 메커니즘을 사용 정전기 및 hydrophobic 상호 작용 13. 우리는 비 공유 결합 정전기와 소수성 상호 작용을 통해 항체를 캡쳐하고 세포 내부를 제공 할 수있는 지질 제제입니다 AB-DeliverIN 시약을 이용. 따라서 화학 및 유전 커플 링은 생활 세포에 기능 항체의 전달에 필요하지 않습니다. 단백질 상호 작용 9 :이 방법은 우리가 다양한 항체는 단백질 현지화 실험뿐만 아니라, 세포 내 항체의 분자 결과의 분석을 추적하고 수행 할 수있게되었습니다. 이 프로토콜에서는, 우리는 빠르게, reproducibly과 transfection 효율의 높은 수준의 뉴런에 항체를 transfect하는 방법을 보여줍니다. 예를 들어, 우리는 반 hnRNP A1 및 안티 IgG 항체를 사용합니다. transfection 효율을 쉽게 정량화를 들어 우리는 아토-550-NHS와 FITC-라벨 IgG으로 표시 방지 hnRNP A1 항체를 사용했습니다. Atto550 NHS는 고분자 흡수 및 양자 순으로 새 레이블연령. 여기 소스와 Atto550에 대한 형광 필터는 Cy3 (예 556 엠. 578)과 비슷합니다. 또한, Atto550 높은 photostability 있습니다. FITC-라벨 IgG는이 방법에 의존 염색 다목적 및 아니라는 것을 보여주기 위해 제어로 사용되었습니다. 이 방법과 생성 된 데이터는 대상 항원을 세포하기 위해 항체 인간 질병의 pathogenesis에서 재생 할 수있는 역할의 이해에 도움이 될 것입니다.

상호 작용과 세포 내 환경에서 항체의 존재에 관한 분자 메커니즘에 미치는 영향을 조사하기 위해 신속하게 접근 방식이 설명되어 있습니다. 방법은 지질 공식에 따라 비 공유 결합 복잡한 형성을 사용하여 라이브 세포에 항체의 transfection을 포함한다. 기술은 불후의 세포 라인과 기본 셀에 적용 할 수 있습니다.

질병 Pathogenesis를 공부하는 도구로 뉴런에 항체 Transfection

항체는 생체 시스템 내에서 일어나는 다양한 사건에 대해 새로운 통찰을 얻을 수 있는 능력을 제공합니다. 매우 특이적인 항체를 생산하는 능력은...

본 절차의 목적은 항체, 뉴런 기능과 관련된 자동 분자 메커니즘 및 신경계 질환의 병태생리를 조사하기 위한 신속하고 재현 가능한 방법을 제공하는 것입니다. 먼저 항체에 ATO five 50 NHS 형광 표지를 부착합니다. 다음으로, 항체를 형질전환 시약과 혼합한 후 뉴런 세포에 형질전환합니다.배양 시, 트랜스펙션 48시간 후 뉴런을 고정하고 DPI 배지로 마운팅하여 면역형광 현미경으로 관찰합니다. 트랜스펙션 효율은 이미징 소프트웨어를 사용하여 계산할 수 있습니다. 이 방법은 자가항체가 뉴런 기능과 관련된 분자적 메커니즘 및 면역 매개 신경질환의 병태생리를 어떻게 변화시키는지와 같은 신경과학 및 신경면역학의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.우리는 뉴런에서 과발현되는 h 및 RPA 1과 RNA 결합 단백질에 대한 항체가 신경 퇴행 메커니즘에 기여한다는 가설을 검증하고자 할 때 처음으로 이 방법을 고안하였습니다. 실험 절차 시연은 대학원생인 Josh Douglas가 진행합니다. 절차를 시작하기 전에, 실험 전날 웰당 100,000개의 세포가 도말되어 있으며 최소 80%의 합류도(confluence)를 갖춘 고품질의 온전한 뉴런 세포가 준비되어 있는지 확인하십시오. 분석 당일에는 세포의 상태가 건강한지 관찰하십시오.먼저 8.4g의 탄산수소나트륨과 29.2g의 염화나트륨을 1L의 물에 혼합하여 0.1M 탄산수소나트륨 완충액을 준비합니다. 그다음 완충액 500µL의 pH를 8.4로 조정합니다. 여기에 형질전환할 항체(본 실험에서는 anti H-N-R-N-P-A1) 70µL와 라벨링 시약인 0.5M NHS 35µL를 첨가합니다.용액을 상온에서 1시간 동안 회전시킨 후, 이를 투석기에 주입하고 4°C의 PBS 2L에서 하룻밤 동안 투석합니다. 다음 날 스핀 컬럼을 사용하여 투석된 표지 항체를 농축합니다. 마지막으로 NanoDrop 분광광도계를 사용하여 항체 농도를 측정합니다.8웰 슬라이드의 각 웰에 500 µL의 완전 DMEM 부피 내에서 10,000개의 세포를 분주합니다. 세포의 합류도가 최소 70%에 도달할 때까지 또는 하룻밤 동안 37 °C에서 배양합니다. 세포의 합류도가 70%가 되면, 이노어(einor)에서 2 µL의 항체, 형질전환 시약, 그리고 0.5 µg/µL 농도로 희석된 2 µg의 표지 항체를 혼합하여 절차를 시작하고, 해당 용액을 실온에서 10분에서 15분 동안 배양합니다.그동안 세포 배양 웰에서 SUP natum을 제거하고, 각 웰에 신선한 배지 394 µL를 정확히 넣어 교체합니다. 트랜스펙션 용액이 준비되면, DMEM 100 µL를 추가하고 피펫팅하여 섞어줍니다. 그런 다음 세포가 들어 있는 각 웰에 트랜스펙션 혼합물 106 µL를 정확히 첨가하여, 웰당 최종 부피가 500 µL가 되도록 합니다.항체 대신 DMEM을 첨가한 UNT TRANSFECTED 음성 대조군 웰을 반드시 포함하십시오. 세포를 37 °C에서 48시간 동안 배양합니다. 배양 후, 배지를 신선한 DMEM으로 교체하고, 라벨링 48시간 후에 형광 현미경을 사용하여 라이브 이미징을 수행하십시오.ATO five 50 NHS 표지 항체를 시각화하려면, 실시간 이미징 후 SI three 필터를 사용하고 배지를 흡입하여 제거한 다음, 4%paraldehyde를 첨가하고 슬라이드를 상온에서 15분 동안 배양하여 세포를 고정합니다. 세포가 고정되면 PBS로 4회 세척하며, 각 세척 단계마다 PBS 내에서 5분간의 배양 시간을 둡니다. 그 후 PBS를 제거하고 DPI가 포함된 마운팅 용액 한 방울을 첨가합니다.형광 현미경을 사용하여 각 웰의 세포 위에 커버슬립을 조심스럽게 덮습니다. 세포 이미징을 시작합니다. 본 실험에서는 ATO five 50 NHS로 표지된 anti H-N-R-N-P-A one 항체를 성공적으로 형질전환시킨 뉴런의 살아있는 형광 세포 이미징을 수행하였습니다.이 이미지는 신경세포의 세포질, 신경 돌기를 포함한 신경세포 내의 항체와 핵 고정 및 핵 염색 상태를 보여줍니다. 여기에 파란색으로 표시된 DPI를 사용하면, 전체 세포 수로 transfection된 세포 수를 나누어 transfection 효율을 결정할 수 있습니다. 이 절차를 따랐을 때, 본 사례의 효율은 50%입니다.세포 소기관 내 항체의 공동 국소화뿐만 아니라, 표적 항원에 대한 항체의 특이성과 관련된 신경 세포 기능 및 무결성의 변화와 같은 추가적인 질문에 답하기 위해 면역 세포 화학, RNA 추출, 마이크로어레이 분석 및 웨스턴 블롯과 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다. 본 영상에서는 항체에 형광 표지를 하는 방법, 형광 표지된 항체와 형질전환 시약의 복합체를 준비하는 방법, 신경 세포에 형질전환을 수행하는 방법 및 형질전환 효율을 계산하는 방법을 보여드렸습니다. 이 방법은 자가항체가 세포 생존력, 세포 사멸, 신경 전달과 같은 세포 기능뿐만 아니라 신경 기능 및 신경계 질환의 병인과 관련된 분자적 기전에 어떻게 영향을 미치는지 평가하는 데 유용합니다.

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연구

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Neuroscience

신경과학

이 비디오는 단백질 응집을 연구하기 위해 노란색 형광 단백질(YFP)로 태그된 돌연변이 인간 타우 단백질을 인코딩하는 렌티바이러스로 인간 신경 세포를 transduction하는 과정을 보여줍니다. 이는 바이러스 진입에서 돌연변이 타우 발현까지의 단계를 간략하게 설명하며, 뉴런에서 눈에 보이는 세포질 타우 응집체의 형성으로 절정에 이릅니다.

타우 단백질 응집 분석을 위한 인간 뉴런의 렌티바이러스 매개 형질도입

여기서 우리는 신생아 마우스 뇌에 아데노 관련 바이러스를 뇌실 내 주입하여 광범위한 신경 세포 전달을 위한 기술을 보여줍니다.  이 방법은 바이러스로 전달된 transgenes의 평생 발현을 달성하는 빠르고 쉬운 방법을 제공합니다.

영구와 광범위한 신경 세포의 형질 도입에 대한 신생아 마우스 뇌의 뇌실 바이러스 감염

단백질 발현을 제어하는 것은 살아있는 모든 유기체에 필수적일 뿐만 아니라 세포 모델에서 단백질 기능을 조사하는 중요한 전략이기도 합니다. 제시된 프로토콜은 1차 해마 뉴런을 포함한 포유류 세포에 대한 항체 간섭의 적용을 보여주고 단백질 기능 연구에서 3차원 재구성의 사용을 보여줍니다.

공부 단백질 기능 및 항체의 간섭과 3 차원 재건에 의해 변경 단백질 발현의 역할

이 원고는 바이러스 벡터 매개 국소 유전자 전달이 어떻게 중추 신경계에서 전이 유전자를 발현하는 매력적인 방법을 제공하는지 설명합니다.  이 프로토콜은 파킨슨병에 대한 바이러스 벡터 기반 동물 모델을 개발하기 위해 쥐의 흑질에 바이러스 벡터 주입을 수행하기 위한 모든 중요한 단계를 설명합니다.

재조합 아데노 - 관련 바이러스 성 벡터의 정위 주사를 통해 파킨슨 병에 대한 알파 - 시누 클레인 기반 쥐 모델 개발

Intraspinal 주입 recombinase 종속 재조합 형 adeno 관련 바이러스 (rAAV)의 척수에서 모든 유전자 이라는 셀 형식을 조작 하 사용할 수 있습니다. 여기 우리가 transduce 요 추 척수의 등 쪽 뿔에 신경 하는 방법을 설명 합니다. 이 기술은 조작된 신경 하위의 기능 심문 수 있습니다.

척수의 유전으로 정의 된 신경에 있는 Adeno 관련 바이러스 중재 Transgene 식

이 프로토콜의 목표는 vivo에서집계 하는 알파 synuclein의 형성을 복제 하는 셀 기반 시스템을 제공 하는입니다. 세포내 알파 synuclein 포함은 국제화에 의해 주 뉴런에 시드는 고 세의 전파 관리 네이티브 microsomes 관련 알파 synuclein 집계 병 알파 synuclein 유전자 변형 쥐에서 분리.

소 대형의 강력한 셀 모델로 기본 신경 하 Microsomes 관련 알파 synuclein 집계의 외 인 관리

이 기법의 목표는 murine 척수에서 기본 motoneurons (MNs)의 매우 풍부한 문화를 준비. 설명만 질병을 일으키는 돌연변이의 결과 평가 하려면 여기 이러한 격리 절연 MNs 및 그들의 transfection magnetofection에 의해.

마우스 기본 Motoneurons Transfecting으로 Charcot Marie이 질병에서 체 외에서 모델링

이 프로토콜은 인간 신경 배양이 돌연변이 인간 타우를 코딩 하는 렌 티 바이러스 컨스트 럭 트와 형질 도입 하는 절차를 자세히 설명 합니다. 형질 도입 배양은 타우 응집 체 및 관련 병 리를 표시 합니다.

인간 뉴런의 렌 티 바이러스 매개 된 형질 도입을 이용한 타우 응집 연구를 위한 시험관 내 모델

자가 면역 뇌염은 중추 신경계의 항체 매개 질환의 새로운 범주입니다. 해마 뉴런은 이러한 항체를 발견하고 특성화하는 데 사용할 수 있습니다. 이 논문은 환자의 혈청 및 뇌척수액에서 자가항체를 결정하기 위한 일차 세포 배양 및 면역염색을 위한 프로토콜을 제공한다.

자가면역뇌염과 관련된 새로운 병원성 항체를 검출하고 연구하기 위한 해마 신경 배양

여기에서는 1차 해마 설치류 뉴런의 transfection과 live-cell confocal imaging을 결합하여 축삭 수송에 대한 병리학적 단백질 유도 효과를 분석하고 이러한 효과를 매개하는 기계론적 경로를 식별하는 방법을 보여줍니다.

일차 해마 뉴런의 축삭 수송에 대한 병리학적 단백질의 효과를 측정하기 위해 Live-Cell Imaging 사용

배우세요 신경세포에 형광 표지 항체를 트랜스펙션하여 신경면역학 질병 발병기전을 연구하는 방법을. 면역형광 현미경으로 시각화하고 이미징 소프트웨어로 효율을 정량화할 수 있습니다.

질병 Pathogenesis를 공부하는 도구로 뉴런에 항체 Transfection

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