자기 공명 영상, 체적 계산의 Tomography 및 초음파를 이용한 유방암의 뼈 전이의 누드 쥐 모델에서 Angiogenesis의 멀티 모달 이미징

이 실험은 무료 이미징 기술을 사용하여 유방암의 쥐 모델에서 혈관 신생을 비침습적으로 평가합니다. 뼈 전이는 먼저 인간 유방암 세포를 표재성 상복부 동맥에 주입하여 나체쥐의 뒷다리에서 부위 특이적 골용해성 뼈 전이를 유도합니다. 25일에서 30일 후, 영상 분석을 위해 동물을 준비시키고 자기 공명 영상, 컴퓨터 단층 촬영 및 초음파 스캔을 통해 데이터를 획득합니다.

다음으로, 이러한 이미징 양식의 보완적인 형태학적 및 기능적 데이터를 사용하여 골용해성 병변에서 혈관형성의 다양한 측면을 설명합니다. 얻은 결과에는 거대 혈관 구조, 국소 혈액량, 관류 및 투과성뿐만 아니라 뼈 전이의 혈관 형성에 대한 실시간 영상이 포함됩니다. 이러한 방법은 뼈 전이의 발병기전에서 혈관신생의 역할에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있으며, 이는 악성 골 병변의 이미징 및 치료에 영향을 미칩니다.

여기에 기술된 동물모델의 경우, 종양 점유율이 90% 이상이기 때문에 N-D-A-M-B 2 3 1 뼈 특이적 하위 세포주를 사용할 필요가 없습니다.RPMI 1640에서 인간 유방암 세포의 로그 배양으로 시작합니다. 10% 태아 송아지 혈청이 보충된 미디어. 트립신으로 sub confluent 종양 세포를 채취하고, 중성바우어의 챔버를 사용하여 세포를 열거하고, RPMI 1640에 현탁시킨 후, 모든 실험은 책임 있는 정부 동물 윤리 위원회의 승인을 받았습니다: 수술 절차를 위해 동봉된 텍스트에 나와 있는 대로 6주에서 8주 된 쥐를 마취했습니다.

16배 배율의 적절한 양안 작동 현미경을 사용하십시오. 이원 부위의 피부와 피하 조직을 2-3cm 길이로 자르는 것으로 시작합니다. 이제 대퇴 동맥에서 갈라지는 모든 동맥을 절개하고, S CA의 기원 근위부에 있는 대퇴 동맥과 DGA, PA 및 S SA에 클립을 삽입하여 국소 혈류를 일시적으로 차단합니다.

그런 다음 출혈 없이 이 혈관이 열릴 수 있도록 SEA의 원위 부분을 접합합니다. 결찰부 근위부의 SEA를 절단하고 SEA에 1% pipen 용액을 투여합니다. 이제 가위로 s e 직경의 약 절반을 자르고 집게로 용기의 절단 끝을 잡고 내강에 바늘을 삽입합니다.

가능하면 바늘을 외부 장치에 고정하여 혈관 벽의 천공으로 이어질 수 있는 불규칙한 움직임을 줄이십시오. 그런 다음 주사기를 바늘에 연결합니다. 대퇴 원위 동맥에서 클립을 제거하고 복재 동맥에 놓습니다.

MDA MD 2 31 유방암 세포 O 0.2 ml를 표재성 상복부 동맥에 천천히 주입합니다. 클립 덕분에 셀은 DGA 및 PA로 전달됩니다. 동맥 클립을 제거하기 전에 출혈을 방지하기 위해 바늘을 제거하고 표재성 상복부 동맥을 결찰합니다.

상처를 봉합하고 흡입 마취를 종결한 후 동물에서 25-30일 동안 종양이 자랄 수 있도록 합니다. 전용 실험용 MR 스캐너 또는 무선 주파수 여기 및 감지를 위해 집에서 제작한 코일과 같은 적절한 동물 코일이 있는 인간 MR 시스템을 사용하십시오. 산소와 ISO 불소로 쥐를 마취 한 후 꼬리 정맥에 카테터를 놓고 꼬리에 고정합니다.

테이프를 사용하여 조영제 시약이 들어있는 주사기를 연결합니다. 그런 다음 흡입 마취를 유지하면서 MR 시스템에 쥐를 놓습니다. 뼈 전이를 찾기 위해 형태학적 MR 염기서열로 시작합니다.

다음으로, 직경이 가장 큰 뼈 전이의 일부를 결정하고 약 30초 후에 D-C-E-M-R-I에 대한 염기서열을 시작합니다. 10초에 걸쳐 조영제를 주입하기 시작합니다. 적절한 CT 시스템(인간 스캐너 또는 실험용 스캐너)을 선택하십시오.

여기서 우리는 평면 패널이 장착된 체적 컴퓨터 단층 촬영기의 프로토타입을 사용합니다. 쥐를 산소와 불소로 마취 한 후 꼬리 정맥에 카테터를 놓고 테이프를 사용하여 꼬리에 고정합니다. 그런 다음 조영제가 들어있는 주사기를 연결합니다.

이제 쥐를 스캐너에 올려 흡입하고 마취시킵니다. VCT에 대한 스캔 매개변수를 설정합니다. 이를 위해 여러 가지 실험 및 임상 초음파 시스템을 사용할 수 있습니다.

산소와 불소로 쥐를 마취 한 후 꼬리 정맥에 카테터를 놓고 테이프를 사용하여 꼬리에 고정합니다. 그런 다음 마이크로 버블 조영제가 들어있는 주사기를 연결합니다. 삼각대를 사용하여 각 뒷다리에 초음파 변환기를 고정하고 변환기와 뒷다리 사이에 초음파 젤을 바릅니다.

다음으로 B 모드 이미징 전송을 수행합니다. 뼈 전이의 가장 큰 직경을 결정하고 트랜스듀서를 이 위치에 고정하려면 조직 관류에 대한 정보를 위해 B 모드 이미지에 도플러 신호를 추가합니다. 피질 뼈를 파괴하는 병변만 초음파에 접근할 수 있다는 점을 명심하십시오.

동적 대비 향상된 초음파의 경우 초음파 장치를 케이던스로 설정하고, 대비 펄스 시퀀싱 모드를 설정하고, 미세 기포를 주입하고, 90초 길이의 루프를 녹음합니다. M-R-I-V-C-T 및 초음파에서 파생된 형태학적 정보를 처리하여 연조직 종양과 뼈 전이의 골격 파괴를 특성화합니다. 그런 다음 혈관 조영술을 위한 DICOM 뷰어를 사용하여 뼈 전이의 위치와 부피를 결정합니다.

eRx DICOM 뷰어를 사용하여 뼈 전이에서 혈관의 분기 패턴을 얻기 위해 VCT 데이터를 고려합니다. 빼기 기법을 사용하거나 사용하지 않고 동맥상 정보를 사용하여 2D 또는 3D 이미지를 재구성합니다. D-C-M-R-I-D-C-E-V-C-T 및 DCE 초음파에서 혈관형성의 기능적 매개변수를 정량화하려면 각 양식에 특정한 소프트웨어 도구를 사용하십시오.

D-C-E-M-R의 경우, Dyna Lab을 사용하여 뼈 전이의 관류 및 혈관 투과성과 관련된 혈액량 및 교환 속도 상수와 관련된 혈관 매개변수를 측정합니다. D-C-E-V-C-T 데이터를 정량화하려면 데이터에 대한 설명 분석을 수행하여 곡선 아래 면적 또는 피크 향상과 같은 파라미터를 계산합니다. 또한 cine loops를 분석하여 정량적 분석 소프트웨어를 사용하여 실시간 DCE 초음파의 정보를 정량화합니다.구현된 bolus injection model place에 따라 뼈 전이에 대한 관심 영역은 곡선 아래 면적과 같은 설명 요소 또는 색상으로 구분된 맵의 정량적 매개변수를 결정합니다.

M-D-A-M-B 2 31 세포를 SEA로 동맥 내 주입하여 누드 쥐의 각 뒷다리에서 부위 특이적 뼈 전이를 발생시키는 데 사용되었습니다. 이 이미지는 표재성 상복부 동맥, 하행 상복부 동맥, 슬와동 동맥 및 복재 동맥을 포함한 대퇴 동맥의 분기 패턴을 보여줍니다. 동맥 클립은 sa, PA 및 근위 fa와 SEA의 결찰에 배치됩니다.

그런 다음 SEA를 결찰 근위부에서 절단하고 파핀을 첨가한 후 겸자를 사용하여 혈관 벽의 근육을 이완합니다. SEA를 절개하고 바늘 용 외부 고정 장치를 사용하여 바늘을 SEA에 삽입합니다. 인간 유방암 종양 세포는 SEA를 통해 주입되어 DGA 및 PA로 전달됩니다.

대퇴골에 국한된 clipse 골용해성 병변 덕분에, 경골 및 비골은 주사 후 약 25-30일 후에 시작하여 몇 주 동안 추적하기 시작하여 M-R-I-V-C-T 및 초음파에 의해 비침습적으로 영상화될 수 있습니다. 세 가지 이미징 방식은 모두 동일한 랫트에서 순차적으로 사용할 수 있습니다. MRI는 처음에는 골수강에 국한되어 있다가 발달 과정에서 피질골을 초과하는 뼈 전이성 연조직의 형태를 보여줍니다.

이러한 축 절편에서, T 2 가중 MR 이미지는 뼈 전이의 연조직 부분을 보여주고, D-C-E-M-R-I 컬러 맵은 병변 뼈 구조 내에서 진폭 A 및 교환 속도 상수에 대한 값을 표시하며, 특히 전이의 골 분해 변화는 MRI 소견에 상응하는 VCT에 의해 고해상도로 평가됩니다. 골용해성 병변은 골수내 종양 성장에 인접해 있습니다. VCT 혈관 조영술은 뼈 전이의 변형된 거대 혈관 구조를 보여주고 D-C-E-V-C-T는 전이성 병변에서 피질 뼈의 국소 파괴로 인한 미세순환의 각 측면을 표시합니다. 초음파는 B 모드 및 도플러 기술을 사용하여 연조직 종양의 형태학적 및 기능적 특징을 평가하는 데 적용할 수 있습니다.

마이크로버블을 적용하면 DCE 초음파를 통해 뼈 전이의 혈관 형성을 실시간으로 촬영할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 종양 세포에 부위 특이적 유방암, 뼈 전이를 접종하여 이러한 병변에서 혈관 신생의 형태학적 및 기능적 측면을 이미지화하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 비침습적으로.