Name: Orthotopic 방광 종양 모델 및 Intravesical saRNA 트리 트먼트의 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: 배우세요 면역결핍 마우스에서 정위 방광 종양 모델을 수립하고, 초음파 및 생체 발광 영상으로 종양을 모니터링하며, saRNA를 방광 내 투여하여 항종양 효과를 평가하는 방법을. 이 기법은 방광암 치료 연구에 활용됩니다.

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이 연구는 AACR 헨리 쉐퍼 방광 암 연구 그랜트 (09-60-30-LI)에 의해 자금 지원을하고 있습니다.

동물 과목과 관련된 절차는 캘리포니아 샌프란 시스코 대학의 기관 동물 케어 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다. 1. 셀 준비 <ol><li> 인간의 방광 암 세포주 구-7-luc2-GFP는 (캘리퍼스 생명 과학, Hopkinton, MA) 10 % 태아 소 혈청 및 50 μg / ML gentamicin과 보완 RPMI-1640 미디어에서 재배된다. </li><li> 문화는 37에서 유지됩니다 ° C, 매체와 CO 2는 모든 2-3일 변화 5 %. </li><li> 세포는 트립신의 소화에 의해 수확과 hemocytometer를 사용하여 계산되었다. 50 μl 2 X 10 6 세포의 단일 세포 현탁액은 인산염으로 준비되었다 염분 버퍼 얼음에 보관. </li></ol> 2. Orthotopic 방광 종양 모델 <ol><li> 8~10주 옛 여자 누드 (뉴 / 뉴) 생쥐 (시몬 슨 연구소, Gilory, CA)을 사용 하였다. </li><li> 를 제공하기 위해 가열 패드를 통해 무균 드레이프를 배치SA 외과 플랫폼입니다. 멸균 윤활 젤리, 탐침의 바늘, 실버 질산 용액 및 멸균 물 24 게이지 카테터는 준비가되어 있습니다. </li><li> 일반 마취가 흡입된 isoflurane (유도 3 %, 유지 보수 1~2%)과 nosecone 통해 유지와 생쥐에 시달릴 수 있습니다. 멸균 안과 연고는 동물의 시선에 적용되며, 열 패드는 체온을 유지하는 데 사용됩니다. </li><li> 위로 향한 자세로 마우스를 놓으십시오. </li><li> 부드럽게 안정화를위한 집게로 동물의 외음부를 파악. </li><li> 제거 주사 탐침으로 24 게이지 정맥 카테터를 사용하여 마우스 요도가 catheterized됩니다. 충분한 윤활를 사용해야합니다. 마우스 부정사로 요도가 vulvar 주름과 음부의 앞부분에 즉시 후부에 위치하고 있습니다. 45도 각도는 처음에는 치골 아래에 요도를 cannulate하고 전달하기 위해 가져옵니다. 보다 얕은 각도는 다음 방광으로 요도를 통과하기 위해 가져옵니다. 젠틀 골반을 대표해서요도가 자주 도울 수 펴주십시오. 케어는이 요도 또는 방광 천공을 초래할 수 있으므로, 저항에 대해 너무 심하게 밀어 피하기 위해 이동해야합니다. 카테터 내에서 본 소변이 방광 루멘 내에서 위치를 확인합니다. </li><li> 탐침 바늘을 사용하여 카테터와 방광 루멘에서 소변을 기음. 탐침 바늘이 장소에서 카테터를 떠나, 이후의 모든 열망과 주사에 사용됩니다. 이것은 카테터 내에 사망하는 공간을 제거하여 정확한 볼륨의 주입은 가능하며 반복 catheterizations가 필요합니다. </li><li> 방광 urothelium의 glycosaminoglycan 계층에 악영향을하려면, 0.5 M 실버 질산 중 10 μL을 주입하고 10 초 동안 머물러 허용됩니다. 이것은 남아있는 소변과 흰색 침전물을 형성 있습니다. </li><li> 기음과 탐침 바늘을 사용하여 침전물과 방광 내용물을 버리고. </li><li> 100 μL 멸균 물을 주입하여 방광 씻으십시오. 물을 대기음 및 폐기. Repe4 세차장의 총 멸균 물로 세척 장에서 3 회. </li><li> 카테터 제거를위한 준비 요도를 윗니와 아랫니가 맞물리다하는 요도 meatus 주변 4-0 실크 넥타이를 놓으십시오. </li><li> 주사 이전 탐침 바늘을 이용하여 50 μL에 2 × 10 6 구-7-luc2-GFP 세포를 준비 하였다. </li><li> 동시에 실크 넥타이에 의해 occluded 요도를 떠나는, 카테터와 탐침 바늘을 제거합니다. </li><li> 실크 넥타이가 제거되고 동물이 잠에서되기 전에 마우스는 12 시간 동안 일반적인 마취하에 유지됩니다. </li></ol> 3. 초음파 <ol><li> 일반 마취가 증발 isoflurane과 코 콘을 통해 유지로 유도된다. </li><li> VIVO에서 VisualSonics Vevo 770는 고해상도의 마이크로 이미징 시스템은 (VisualSonics INC, 토론토, 온타리오, 캐나다) RMV-704 40 MHz의 탐침으로 사용되었다. </li><li> 초음파 플랫폼에서 위로 향한 자세로 마우스를 놓으십시오. </li><li> 동물의 뒷다리를 확보테이프로 초음파 프로브의 조작 중에 초과 움직임을 피할 수 있습니다. </li><li> 마우스 골반에 초음파 젤을 적용합니다. </li><li> 가로 또는 세로 이미지를 얻기 위해 마우스 골반에 RMV-704 (40 MHz의) 초음파 프로브를 낮춥니다. </li><li> 종양이 발견되면 이미지는 종양 크기 측정을 위해 저장할 수 있습니다. </li></ol> 4. 발광 생물 이미징 <ol><li> 200 μL (150 밀리그램 / ㎏) luciferin 기판의 intraperitoneal 주사를 수행합니다. </li><li> isoflurane 증발과 함께 일반적인 마취를 유도하고 코 콘을 통해 유지합니다. </li><li> bioluminescence의 영상기 이내에 위로 향한 자세로 마우스를 놓습니다. </li><li> 5 분 luciferin 주입 후 초당 광자의 동물에서 bioluminescence를 측정. </li></ol> 5. saRNA 준비 <ol><li> 50-100 μmol의 규모 oligonucleotides를 RNA 합성. </li><li> 보완 단일 좌초된 oligonucleotides를 어닐링 전아 니 디럭스 saRNAs. </li><li> [1,3]-dioxolane (DLinKC2-DMA), disteroylphosphatidyl 콜린, 콜레스테롤, 그리고 PEG-DMG - 지질 nanoparticle (LNP) saRNA은 ionizable 지질 1,2-dilinoleyl-4-(- dimethylaminoethyl 2)과 함께 준비하고 있습니다 이전에 설명한대로 자발적인 소포 형성 제제 절차를 사용 1. </li></ol> 6. 공식화 saRNA의 Intravesical 관리 <ol><li> orthotopic 방광 종양 모델을 맺은 후, 마우스는 지질 nanoparticles (LNPs) (표 1)에서 공식화 intravesical 작은 활성 RNA (saRNA)로 처리됩니다. </li><li> 일반 마취를 설립, 유지 isoflurane 증발과 함께, 그리고 무균 안과 윤활유가 적용되어 있습니다. </li><li> 부정사 위치에 동물을 배치합니다. </li><li> 이전에 설명한대로 요도 catheterization을 수행합니다. </li><li> 요도 카테터와 주변 4-0 실크 넥타이를 놓으십시오. </li><li> 카테터에서 모든 소변을 기음과빈 주사기 및 탐침 바늘을 사용하여 방광. </li><li> 50 μL (3 밀리그램 / ㎏)의 총 복용량을 위해 intravesically LNP-saRNA을 주사. 동시에 실크 넥타이에 의해 occluded 요도를 떠나는, 카테터와 탐침 바늘을 제거합니다. </li><li> 마우스는 2 시간 동안 occluded 요도와 anesthetized 유지됩니다. </li><li> intravesical LNP-saRNA과 치료는 종양 이식 후 4 일에 시작되었다. 쥐은 14 트리 트먼트 총, 매 3 일간 순차적으로 처리되었다. </li></ol> 7. 대표 결과 구-7-luc2-GFP 세포에서 형태소 분석 방광 종양은 루시페라제 발광 생물 이미징 (그림 1A와 C)과 방광 초음파 (그림 1B와 D)에 의해 모니터할 수 있습니다. 종양 세포 접종 후 3~5일 이내 자주 감지 있습니다. 우리는 생쥐의 90 % 이상의 성공적인 방광 종양 주입을 발견. intravesical dsRNA와 치료 ensues으로 종양의 진행은 WI를 모니터링할 수 있습니다이러한 modalities 일. 동물 희생 후 종양의 성장 또한 GFP 형광을 사용하여 확인할 수 있습니다. 일반적으로, bioluminescence는 같은 인물 1C 및 1D에 시각적으로 볼, 방광 종양에 대한 평균 초음파 차원과 상호 의미. 동물들이 희생되었으며 종양이 GFP가 확정되자 그러나, 우리는 그 bioluminescence은 초음파 측정했던 것보다 가능한 종양의 존재와보다 밀접하게 상호 발견. 처리 생쥐에서의 잔류 반흔 조직은 종종 초음파에 의해 시각했지만 라이브 종양으로부터 구분하지 못했기 때문에이 saRNA (같은 컨트롤의 반대 의미)로 치료 생쥐 중에서 특히 겉보기했습니다. <img src="/files/ftp_upload/4207/4207fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 방광 종양의 종양 성장 속도론. () Bioluminescence 이미징 자신의 위치와 성장을 확인하는 방광 종양 내에 루시페라제 활동을 측정합니다. (B)의 생체내 방광 ultrasoun에서D 40MHz 프로브를 사용하는 것은 누구의 치수를 정확하게 측정할 수있는 종양 이미지를 생성합니다. (C) 그래프 bioluminescence 및 초음파 차원에서 종양의 진보적인 증가를 설명. 6 동물의 측정 - 값 (표준 편차 + / -) 의미를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4207/4207fig1large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 누르십시오</a> .

<ol><li>Semple, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+design+of+cationic+lipids+for+siRNA+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Rational design of cationic lipids for siRNA delivery.</a> Nature. 28, 172-176 (2010).</li>
<li>Li, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+dsRNAs+induce+transcriptional+activation+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 17337-17342 (2006).</li>
<li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+effect+of+dsRNA-induced+p21%28WAF1%2FCIP1%29+gene+activation+in+human+bladder+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+cancer+therapeutics%22%5BJournal%5D)">Antitumor effect of dsRNA-induced p21(WAF1/CIP1) gene activation in human bladder cancer cells.</a> Molecular cancer therapeutics. 7, 698-703 (2008).</li>
<li>Chancellor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+results+of+myoblast+injection+into+the+urethra+and+bladder+wall%3A+a+possible+method+for+the+treatment+of+stress+urinary+incontinence+and+impaired+detrusor+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+urodynamics%22%5BJournal%5D)">Preliminary results of myoblast injection into the urethra and bladder wall: a possible method for the treatment of stress urinary incontinence and impaired detrusor contractility.</a> Neurourology and urodynamics. 19, 279-287 (2000).</li>
<li>Hadaschik, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumour+inoculation+and+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+international%22%5BJournal%5D)">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU international. 100, 1377-1384 (2007).</li>
<li>Fu, C., Apelo, C. A., Torres, B., Thai, K. H., Hsieh, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Bladder+Wall+Injection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse Bladder Wall Injection.</a> J. Vis. Exp. (53), e2523(2011).</li>
<li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Orthotopic+Model+of+Murine+Bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer.+J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An Orthotopic Model of Murine Bladder.</a> Cancer. J. Vis. Exp. (48), 2535(2011).</li>
<li>Dinney, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+metastatic+variants+from+human+transitional+cell+carcinoma+passaged+by+orthotopic+implantation+in+athymic+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+urology%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice.</a> The Journal of urology. 154, 1532-1538 (1995).</li>
</ol>

LCL은 캘리포니아 샌프란 시스코 대학에서 제기한 및 Alnylam 제약 회사에 허가되었습니다 saRNA에 관련된 특허 출원이 보류에 관한라는 발명가이다.

우리는 transcriptional 활성화를 위해 p21 CIP1/WAF1 (p21)의 발기인을 대상으로 LNP 책정 saRNA와 종양의 intravesical 치료 다음에 마우스 orthotopic 이종 이식의 방광 종양 모델의 구축을위한 프로토콜을 제시한다. 2, 3 결과 종양이 될 수 있습니다 발광 생물 이미징 및 방광 초음파로 확인 및 모니터링. Orthotopic 모델은 소변과 밀접 내생 방광 암 대략 것을 urothelium의 환경을 제공함으로써 intraperitoneal, 피하 또는 정맥 주사 모델 우수 수 있습니다. orthotopic 마우스 방광 종양의 종류는 모두 직접 방광 벽 주입뿐 아니라 intravesical 떨어뜨림를 사용하여 설립되었습니다. 종양의 4-8 Intravesical 떨어뜨림은 여기를 시연으로, 더 자세히 점막 상피에서 피상적 시작하고 깊은 성장 인간의 방광 종양을 모방한 것이었 그들 진행으로. blad을 수용하기 위해 은을 질산...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 (옵션) </td></tr><tr><td> 구-7 룩-GFP 세포 </td><td> 캘리퍼스 </td><td> 128,091 </td><td></td></tr><tr><td> thymic 누드 마우스 (뉴 / 뉴) </td><td> 시몬 슨 실험실 </td><td> 6~7주 이전 </td><td> 그렇소 : (NCR) 뉴 / 뉴 fisol </td></tr><tr><td> 초음파 장치 </td><td> Visualsonics </td><td> Vevo 770 </td><td> RMV-704 프로브 </td></tr><tr><td> Bioluminescence 단위 </td><td> 캘리퍼스 </td><td> IVIS 스펙트럼 </td><td></td></tr><tr><td> Exel safelet의 카테터 </td><td> 어부 </td><td> 14-841-21 </td><td> 24G X 잡았다 &quot; </td></tr><tr><td> 실버 질산염 </td><td> 시그마 </td><td> S8157 </td><td></td></tr><tr><td> 해밀턴 주사기 </td><td> 해밀턴 공동mpany </td><td> 80,301 </td><td></td></tr><tr><td> LNP-saRNA </td><td> Alnylam 제약 </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 표 1. 특정 시약 및 장비.

orthotopic 방광 종양 모델 및 intravesical sarna 트리 트먼트의 평가

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

우리는 orthotopic 이종 이식 마우스 방광 종양 모델에서 intravesically 배달 작은 활성 RNA (saRNA)로 방광 암 치료를위한 새로운 방법을 제시. 마우스 모델은 흡입된 일반적인 마취하에 요도 catheterization에 의해 설립되었습니다. 화학 화상 그러면 방광 glycosaminoglycan 계층을 혼란 intravesical 실버 질산염 용액을 사용하여 방광 점막을 소개하고 세포 첨부할 수 있습니다. 멸균 물, 인간의 방광 암 구-7-luc2-GFP 세포와 여러 세차장에 이어 2 시간 머물지 방광에 카테터를 통해 얻은됩니다. 방광 종양의 후속 성장 생체내 방광 초음파와 발광 생물 이미징에 의해 확인하고 감시하고 있습니다. 종양 그러면 saRNA은 지질 nanoparticles (LNPs)에 공식화와 intravesically 처리됩니다. 종양 성장 초음파 및 bioluminescence으로 감시하고 있습니다. 이 절차의 모든 단계가 수반 비디오에 증명하고 있습니다.

초음파와 발광 생물 이미징에 의한 intravesically 전달 saRNA 및 모니터링 종양 성장의 antitumor 효과를 평가하는 orthotopic 방광 종양 모델을 수립.

Orthotopic 방광 종양 모델 및 Intravesical saRNA 트리 트먼트의 평가

우리는 정위성 제노그라프트(orthotopic xenograft) 마우스 방광 내에 방광 내 투여 방식으로 소형 활성화 RNA(small activating RNA, saRNA)를 전달하여 방광암을 치료하는 새로운 방법을 제시합니다...

면역결핍 마우스에서 정위성 방광 종양 모델을 구축하는 방법을 제시합니다. 혈관 내로 전달된 짧은 이중 가닥 RNA로 이러한 종양을 치료하고, 방광 초음파와 생물 발광 이미징을 통해 종양을 모니터링합니다. 기화된 isoflurane으로 전신 마취를 유도하고 멸균 안연고를 도포합니다.그 후 마우스를 배측으로 눕히고, 노즈 콘(nose cone)을 통해 isof fluorine으로 마취 상태를 유지합니다. 다음으로 마우스에 카테터를 삽입해야 합니다. 바늘 스타일렛을 제거한 24게이지 정맥 카테터를 사용합니다.카테터 삽입은 종종 프로토콜에서 가장 어렵고 예측 불가능한 단계입니다. KY 젤을 이용한 충분한 윤활과 정확한 기술이 성공적인 카테터 삽입의 핵심입니다. 여기에는 마우스 외음부 영역이 표시되어 있습니다.요도는 외음부 주름 바로 아래에 위치합니다. 윤활 처리를 한 후, 카테터 포셉을 사용하여 외음부와 요도를 부드럽게 잡고 고정합니다. 처음에는 요도에 삽입하기 위해 45도의 가파른 각도를 유지하지만, 요도 내로 진입한 후에는 방광까지 원활하게 통과할 수 있도록 각도를 더 낮게 조절합니다.여기에서 이 과정을 보여드리겠습니다. 다시 한번 말씀드리지만, 요도를 펴기 위해 골반에 가벼운 압력을 가하는 것이 도움이 될 수 있으며, 너무 강하게 밀면 요도나 방광 천공으로 이어질 수 있으므로 저항이 느껴질 때는 주의해야 합니다. 카테터 내로 보이는 소변을 통해 방광 내강에 위치했음을 확인할 수 있습니다.카테터 내의 소변을 스타일렛 바늘로 제거한 후 카테터를 그대로 둡니다. 카테터 끝이 방광벽에 닿지 않고 방광강 내에 위치하도록 요도 밖으로 약 5mm의 카테터가 보이게 유지해야 합니다. 카테터를 너무 깊게 삽입하면 카테터 끝이 방광벽에 박혀 주입이 불가능해질 수 있습니다.이후 모든 주입 단계에 적용합니다. 스타일 바늘(stylet needle)이 장착된 주사기를 카테터를 통해 삽입합니다. 이렇게 하면 카테터 내부의 사강(dead space)을 제거하여 정확한 양을 주입할 수 있으며, 방광 벽에 화상을 입히는 손상을 유발할 수 있는 반복적인 카테터 삽입 절차를 생략할 수 있습니다.0.5 molar 질산은 10 µL를 주입하고 10초 동안 유지합니다. 질산은은 방광 내의 잔류 소변과 반응하여 흰색 침전물을 형성할 수 있습니다. 이 침전물과 남아 있는 용액을 카테터로부터 제거합니다.그 다음, 방광을 100 µL의 멸균수로 4회 세척하며, 매회 카테터 루멘에서 액체를 제거합니다. 이 첫 번째 세척 후에는 카테터 내에 흰색 침전물이 여전히 보이지만, 세척을 반복할수록 액체는 점점 더 투명해집니다. 4-0 실크 결찰사(silk tie)를 사용하여 요도를 폐쇄하며, 이제 암세포를 주입할 준비가 되었습니다.세포를 스타일렛 바늘이 연결된 시린지에 넣고 방광에 주입합니다. 카테터를 제거하고, 마우스가 마취된 상태에서 두 시간 동안 요도를 묶어 둡니다. 미리 설정된 간격으로 종양의 진행 상황을 모니터링합니다.생체 내 생물발광 이미징을 위해, 먼저 마우스의 복강 내로 Lucifer와 기질을 주입합니다. 기화된 isof fluorine으로 전신 마취를 유도한 후, 마우스를 ivus 장비 내에 배와 위를 향하게 눕힙니다. 생물발광은 초당 광자 수(photons per second) 단위로 측정합니다.마우스 방광 내 KU seven 세포의 존재는 쉽게 확인 가능하며, 생물 발광 강도를 통해 시간에 따른 변화를 추적할 수 있습니다. 방광 종양의 존재와 진행 상황 또한 초음파 영상을 통해 모니터링할 수 있습니다. 기화된 isoflurane으로 전신 마취를 유도한 후, 멸균 안연고를 도포합니다.마우스를 초음파 테이블 위에 등으로 누운 자세로 놓습니다. 노즈콘을 통해 isof fluorine을 투여하여 마취 상태를 유지합니다. 초음파 프로브를 조작하는 동안 신체의 과도한 움직임을 방지하기 위해 마우스의 뒷다리를 테이블에 고정할 수 있습니다.이 과정이 완료되면, 동물의 골반 중앙 부분에 초음파 젤을 도포합니다. 젤을 도포한 후, 40 megahertz 프로브를 고정 장치에 고정하고 동물의 신체 위로 천천히 내립니다. 방광은 중앙의 둥근 저에코 구조물로 쉽게 관찰됩니다.마취 전 동물이 심한 자극을 받지 않았다면 일반적으로 방광이 이미 팽창되어 있으며, 방광 팽창을 위해 마우스에 카테터를 삽입할 필요는 없었습니다. 이 상태에서 횡단면과 종단면 영상 모두를 얻을 수 있습니다. 방광 내강 내의 종양을 쉽게 확인할 수 있습니다.종양이 발견되면 종양의 크기를 측정하기 위해 영상을 저장할 수 있습니다. 방광 종양이 형성된 후, 마우스의 방광 내에 지질 나노입자로 제조된 짧은 이중 가닥 RNA를 투여합니다. 전신 마취를 시행하고 안연고를 다시 도포합니다.그 후 마우스를 앙와위로 배치하고 요도 카테터 삽입을 수행합니다. 이전에 설명한 바와 같이, 4-0 실크 봉합사를 사용하여 카테터 주변의 요도를 폐쇄합니다. 일반적으로 여기에서 보여주는 것과 같이 매듭을 두 번 묶습니다.스타일렛 바늘(stylet needle)에 장착한 빈 주사기를 사용하여 방광을 완전히 비웁니다. 총 용량 3 mg/kg이 되도록 50 µL의 짧은 이중 가닥 RNA를 방광 내로 주입합니다. 그런 다음 바늘과 카테터를 제거합니다.마우스는 요도를 폐쇄한 상태로 총 2시간 동안 마취 상태를 유지합니다. 이 영상을 시청하고 나면, 생체 발광 이미징과 초음파를 통해 종양을 모니터링하고 방광 내 투여 방식의 소형 RNA로 종양을 치료하는 정위 마우스 방광 종양 모델 제작 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 이 기술에는 특히 카테터 삽입과 같이 어느 정도 숙련이 필요한 세부적인 사항들이 있으나, 전반적으로 쉽게 재현 가능한 프로토콜입니다.마우스에 방광 종양을 이식하는 과정에서 좋은 성과를 거두었으며, 소형 RNA(small RNA)를 이용한 치료 효과 또한 매우 유망합니다. 하지만 이 프로토콜에서 가장 흥미로운 점은, 본 연구에서는 마우스에 소형 RNA를 투여했지만, 동일한 기술을 사용하여 방광암에 대한 모든 방광 내 치료법을 테스트할 수 있다는 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

방광 종양은 catheterization, 지역 소작하고, 화상 사이트에 암종 세포의 후속 유착을 통해 법으로서 방식으로 여성의 생쥐에 설립되었습니다.

Murine 방광 암의 Orthotopic 모델

이 비디오에서는 종양 발생에 대한 장기 환경의 역할을 연구하기 위해 배양된 방광 종양 오가노이드를 쥐 방광에 정소성 이식하는 방법을 설명합니다.

방광 종양 오가노이드 모델: 방광 오가노이드를 수용자 쥐 방광에 정소성 이식하는 방법

이 비디오에서는 암세포를 마우스 모델의 방광으로 전달하는 방광 내 절차에 대해 설명합니다. 이 절차는 치료 전략을 개발하는 데 사용할 수 있는 정형소 방광 종양 모델을 생성하는 데 도움이 됩니다.

마우스 모델에서 정소성 방광 종양 모델링: 쥐 방광에 암세포의 방광 내 투여 절차

기원의 장기에 암 세포의 주입은 새로운 치료법을 평가하는 유용한 전임상 모델이 될 수 있습니다. MB49 방광 암 세포가 방광 내 점적 다음 방광 내에서 성장시킬 수있다. 이 프로토콜은 종양 이식 및 아데노 바이러스 전달의 목적을 위해 마우스 방광 카테터를 보여준다.

유전자 전달 연구 동소 방광암 모델

차 침략 동 소성 방광 암 이종 이식을 접종하는 설치 방법은 개복 수술과 방광의 동원을 필요로한다. 이 절차는, 마우스에 상당한 이환율을 입히고 기술적으로 어렵고 시간 소모적이다. 따라서 우리는 경피적 접근 방식은 초음파 안내를 이용하는, 높은 정밀도를 개발했다.

쥐과 동 소성 방광 이종 이식의 최소 침습 설립

여기에서는 박테리아 단백질 HP-NAP의 항종양 효능을 평가하기 위해 정소성 방광 종양의 syngeneic mouse model을 설정하는 방법을 설명합니다.

효능 평가<em&gt; H. 파이로리</em동소 이식 쥐 모델에서 방광암의 치료를위한 치료 도구로&gt; 단백질 HP-NAP

이 프로토콜은 암컷 C57BL / 6J 마우스의 종양 성장을 모니터링 뮤린 동소 방광 종양의 발생을 설명한다.

쥐 동소 이식 방광 종양 모델 및 종양 탐지 시스템

Murine 방광 종양 N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine 발암 물질 (BBN)으로 유발 됩니다. 방광 종양 생성은 이기종; 따라서, 종양 짐의 정확한 평가 랜덤 실험적인 치료를 하기 전에 필요 하다. 여기 우리는 빠르고, 신뢰할 수 있는 MRI 프로토콜 종양 크기 및 단계 평가를 제시.

발암 물질 유발 Murine 방광 종양의 자기 공명 영상 평가

이 프로토콜은 환자 유래 정형외 이종이식 모델의 생성을 중급 요뇨세포 암종 세포 또는 직장 내 대장암 세포를 비만 당뇨병/중증 복합으로 주입하여 생성하는 것을 설명합니다. 면역 결핍 (NOD /SCID) 림프절 기질 세포의 영향하에 1 차적인 종양 성장 및 자발적인 전이를 위한 마우스, 이는 인간 전이성 질병의 진행을 모방합니다.

인간 비뇨기과 세포 암 및 대장암 종양 성장 및 자발적 전이를 위한 환자 유래 직교 이종이식 모델

표시 셀 다중 광자 현미경을 통해 혀를 이내 구강 암 종양 침략의 양적 모니터링 마우스 모델을 생성에 관련된 기술의 포괄적인 개요는 제공됩니다. 이 시스템은 침입 방지 화합물의 분자 평가 및 약물 효능을위한 유용한 플랫폼이 될 수 있습니다.

구강 편평 세포 암종의 Orthotopic 마우스 모델에서 종양 세포 침략의 다중 광자 이미징

배우세요 면역결핍 마우스에서 정위 방광 종양 모델을 수립하고, 초음파 및 생체 발광 영상으로 종양을 모니터링하며, saRNA를 방광 내 투여하여 항종양 효과를 평가하는 방법을. 이 기법은 방광암 치료 연구에 활용됩니다.

Orthotopic 방광 종양 모델 및 Intravesical saRNA 트리 트먼트의 평가

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