Name: 마우스의 재발 포진 성 각막염 Stromal, 인간 HSK 유학을위한 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 27 s
Description: 학습하세요 마우스 재발 포진성 각막염 모델을 통해 HSV 감염 메커니즘과 질병 진행 과정을 연구하는 방법을. UVB 광 노출로 바이러스 재활성화를 유도하고 각막 혼탁도를 평가하여 인간 질병을 모방합니다.

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저자는 우리에게 모델을 가르치고 돕기 위해 박사 제이 Pepose 감사드립니다. 이 작품은 건강 보조금 EY11885 (PMS), EY21247 (PMS) 및 안과 부서에 실명을 방지하기 위해 연구에서 제한 교부금의 국립 연구소에 의해 지원되었다.

동물 케어 참고 :이 항 염증이며 따라서 모델을 무효화하는 것처럼 진통제는이 모델에 사용되지 않습니다. 1. 바이러스의 작성 <ol><li> 3-4일에 감염 0.01 다중성의 시작 희석을 (T-150 술병에 약 5 × 10 5 상패 형성 단위)를 사용하여 Vero 세포 (80 % 합류)에 HSV-1을 성장하는 것은 세포의 모든 때까지 반올림 업 쉽게 플라스크를 클릭하여 dislodged 수 있습니다. </li><li> 4에 멸균 원심 분리기 튜브 및 Sorvall 전설 RT에서 원심 분리기로 미디어를 제거 ° C와 15 분에 3,500 RPM. 미디어 총 5 ML 각 50 ML 튜브의 표면에 뜨는 (1.3 참조), resuspend 큰 펠릿을 제거 후. 이 30 초 폭발에서 1 분에 Sonicate. </li><li> 4 Beckman에서 ° C J2-21 원심 분리기에서 1 시간 동안 표면에 뜨는 및 9,000 rpm으로 50 ML 멸균 오크 릿지 튜브와 원심 분리기에 넣어 제거합니다. 이 작은 바이러스 펠릿을 생산하는 것입니다. 표면에 뜨는 폐기하십시오. </li><li> 1.2 지혜에서 sonicate 결합H 1.3에서 펠렛 45 초에 다시 sonicate. 4에 5 분에 1,500 rpm으로 Sorvall 전설 RT의 원심 분리기 ° C. 표면에 뜨는를 저장합니다. 이 -70에서 aliquoted와 저장되어있는 바이러스 재고 ° C.를 구성 </li><li> Vero 세포에 Titer 바이러스. 에서 10 -8 희석 (각각 10 배 희석되는) 2 개의 희석 세트에서 2 배까지 나는 보통 판 10 0. 바이러스의 적정은 12도 무균 접시에 수행됩니다. </li></ol> 2. 마우스 감염 <ol><li> 마취 cocktail/20 g 마우스 몸무게의 0.1 ML 각 마우스를 주사 (케타민, 60 밀리그램 / kg + Xylazine 5 MG / HBSS에 희석되어 kg). 이 적절한 복용량를 사용하고이 약의 효과가 매우 일시적인 있습니다 마취의 가장 안전한 방법 중 하나이기 때문에 칵테일이 사용됩니다. </li><li> 쥐가 anesthetized 때하면 각막이 천공하지 않도록 해부 현미경을 사용하여 30 게이지 바늘로 오른쪽 눈의 각막을 긁어. </li><li> 각 마우스 rece주요 감염 동안 손상 각막을 보호하기 위해, 풀링 된 인간의 혈청 (1:800의 50 % 바이러스 중화위한 효과적인 복용량과 안티 - HSV의 반응성 시그마, Temecula, 캘리포니아) 1 ML의 intraperitoneal 주사를 ived. </li><li> 귀 클립 넣거나 귀를 펀치로 번호 쥐를. </li><li> 마우스의 모든 번호를 한 후, 20 μl pipettor를 사용하여, 우리는 10 6 PFU (5 μl)와 각 눈을 감염. 우리는 한쪽 눈을 일반적으로 오른쪽 눈을 감염. 우리는 또한 그들이 anesthetized있는 동안은 촉촉한 유지하기 위해 다른 눈 HBSS의 5 μl를 놓습니다. 5 UL은 절차 미만 10 분에서 수행되며, 동물 따라 마취와 함께 복용되어 있기 때문에 눈의 보습을 유지하기에 충분한 것입니다. 감염은 Vero 미디어 1 ML에 수화했다 멸균면 작은 주걱으로 마우스에게 삼일 후 감염을 보라고하여 확인합니다. 그런 다음 100 μl를 48 잘 접시에서 자란 Vero 세포에 추가됩니다. 이 번호판은 cytopathic 효과를 매일 모니터링<html> (CPE). </li></ol> 3. 지연에서 마우스의 재 활성화 <ol><li> 마우스는 기본 감염 후 적어도 오주 anesthetized 있습니다. 그것은 우리가 일년 다음과 같은 주요 감염에 마우스를 재 활성화하고 응답에 큰 차이를 관찰하지 않은 것을인지해야합니다. </li><li> 일단 anesthetized 그들은 단지 하나의 눈이 UV-B 빛에 노출되는 등 302 nm의 피크 파장에서 UV-B 방출 TM20 Chromato-VU의 transilluminator를 배치하고 있습니다. 각 마우스는 250 UV-B의 MJ 빛 cm 2로 노출되어있다. </li><li> 재가입 먼저 1-7 후 UV-B 조사 일에 다음 날 0에 Vero 미디어 1 ML에 위치 (자연 shedders에 대해 제어 할 수 UV-B 노출 전)되고 멸균면 작은 주걱으로 눈을 보라고에 의해 결정됩니다. 2.5에 설명 된대로 면봉 소재)가 평가됩니다. 전염성 바이러스를 가진 면봉을 위해 바이러스의 양이 12도 접시를 사용하여 표준 상패 분석​​에 의해 tittered 있습니다. </li></ol>ove_title &quot;&gt; 4. 임상 평가 <ol><li> 마우스는 쌍안 해부 현미경을 사용하여 가면 관찰자에 의해 임상 안과 질환에 대한 평가입니다. </li><li> 각막 불투명도가 0 명확한 기질을 나타냅니다 0-4의 규모에 평가되며, 1 가벼운 stromal opacification을 나타냅니다, 2 알아볼 수 창포 기능과 함께 적당한 투명도를 나타냅니다, 3 나타냅니다 학생 여백, 4를 제외하고 정의 아이리스 세부의 손실과 밀도 투명도를 나타냅니다 더 뒤쪽 전경을 조망할 수있는 총 불투명도. </li><li> Neovascularization은 4 동일한 당장 자리로 각막을 나누어 이러한 당장 자리의 각 vascularization의 범위를 결정하여 8-1의 규모에 평가하고 있습니다. </li><li> Blepharitis은 다음과 같이 측정되지 않습니다 : 0, 더 병변, 1, 최소한의 눈꺼풀이 붓기, 2, 적당한 붓기와 피 각질의 안구 방전, 3, 심각한 부종, 중간 periocular 머리 손실, 피부 병변, 그리고 4, 눈을 겉 껍질이있는 다물고있는 심각한 부종, 심각한 periocular 헤어 손실 및 피부 병변. </li><li> 뇌염 inclu의 증거ded가 다시 뻗치고 머리, 그리고 명백한 neurologic 이상을 hunched. 그들은 뇌염의 중요한 징후를 표시 할 때 마우스는 euthanized 있습니다. </li></ol> 5. 대표 결과 위에서 설명한 된 재발 모델이 처음 Shimeld, 외 발행되었습니다. 1-3. 그들은 테스트 및 실험실 년 4-15을 통해 많은 원고를 게시하는이 모델의 수정 된 버전을 사용하고 있습니다. 모델은 역할을 정의하는 데 사용 된이 재발 HSV-1 병 10 시토 킨은 인터페론-γ 재생. 로 그림 3에 도시 된 바와 같이,보다 IFNγ 표시 악화 각막 질환을 부족한 마우스는 야생 형 생쥐에게 14 했어요. 또한 여러 가지 백신 6,10,11을 구성의 치료 가치를 정의하는 데 성공적으로 사용되었다. 하나의 사건에서 테스트 백신 prophylactically 잘 작동하지만, 6 therapeutically 효과가 증명하지 않은 있습니다. 그러나,복제 - 무능 바이러스 백신을 테스트했을 때이 prophylactically 만 효과가 아니라, therapeutically도 10,11 매우 효과적이었고, 참조 10 그림 5를 참조하십시오. 최근 우리는 성별 차이가 재발 HSK를 겪고 생쥐에서 감지 된 여부를 결정하는이 모델을 사용했습니다. 그림 1은 설명으로 남성 C57BL / 6 마우스는 여성 C57BL / 6 쥐를보다 훨씬 적은 각막 투명도를 표시합니다. 마찬가지로, 각막 neovascularization이 평가되었을 때, 남성은 여성 마우스 마우스 (그림 2)보다 각막에 훨씬 적은 새로운 혈관의 성장을 보여 주었다. 우리는 현재이 표현형 쥐의 다른 변종 유사한 분석을 수행하여 특정 변형 여부를 테스트하고 있습니다. 우리는 또한 차이가 남성 호르몬의 부족이나 에스트로겐의 존재로 인해 여부를 결정합니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4276/4276fig1.jpg" /> 그림 1. UV-B 유발 재 활성화에 따라 남성과 여성의 C57BL / 6 마우스 종자의 각막 질병. Latently 감염 마우스는 UV-B 조사 및 마우스 35일에 대한 각막 투명도에 대한 모니터링 된을 다시 활성화 할 수 있도록 유도했다. 다음과 같이이 연구에 사용 마우스의 번호는 있었다 : 남성, N = 15, 여성, N = 15. 결과는 평균 ± SEM을 나타냅니다. * 상당히 큰 바이러스 유발 질환은 일 14-35 (P = 0.001-0.01)에 대한 여성의 C57BL / 6 마우스에서 발생했습니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/4276/4276fig2.jpg" /> 그림 2. UV-B 유발 재 활성화에 따라 남성과 여성의 C57BL / 6 마우스 종자의 각막 질병. Latently 감염 마우스는 UV-B 조사 및 마우스 35일에 대한 각막 neovascularization에 대한 모니터링 된을 다시 활성화 할 수 있도록 유도했다. 남성, N : 이러한 연구에 사용 마우스의 번호는 다음과 같이있었습니다= 15, 여성, N = 15. 결과는 평균 ± SEM을 나타냅니다. * 상당히 큰 바이러스 유발 질환은 일 14-28 (P = 0.001-0.01)에 대한 여성의 C57BL / 6 마우스에서 발생했습니다.

<ol><li>Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, B., Easty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+model+of+recurrent+herpetic+eye+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">An improved model of recurrent herpetic eye disease in mice.</a> Curr. Eye Res. 8, 1193-1205 (1989).</li>
<li>Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactivation+of+latent+infection+and+induction+of+recurrent+herpetic+eye+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Reactivation of latent infection and induction of recurrent herpetic eye disease in mice.</a> J. Gen. Virol. 71, 397-404 (1990).</li>
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<li>Keadle, T. L., Laycock, K. A., Morris, J. L., Leib, D. A., Morrison, L. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+vaccination+with+vhs%28-%29+herpes+simplex+virus+reduces+the+severity+of+recurrent+herpetic+stromal+keratitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic vaccination with vhs(-) herpes simplex virus reduces the severity of recurrent herpetic stromal keratitis in mice.</a> J. Gen. Virol. 83, 2361-2365 (2002).</li>
<li>Keadle, T. L., Morris, J. L., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+aminoguanidine+on+primary+and+recurrent+ocular+herpes+simplex+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">The effects of aminoguanidine on primary and recurrent ocular herpes simplex virus infection.</a> Nitric Oxide. 13, 247-253 (2005).</li>
<li>Stuart, P. M., Morris, J. E., Sidhu, M., Keadle, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCL3+protects+mice+from+corneal+pathology+during+recurrent+HSV-1+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Biosci%22%5BJournal%5D)">CCL3 protects mice from corneal pathology during recurrent HSV-1 infection.</a> Front. Biosci. 13, 4407-4415 (2008).</li>
<li>Keadle, T. L., Alexander, D. E., Leib, D. A., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon+gamma+is+not+required+for+recurrent+herpetic+stromal+keratitis%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Interferon gamma is not required for recurrent herpetic stromal keratitis.</a> Virology. 380, 46-51 (2008).</li>
<li>Carr, D. J., Austin, B. A., Halford, W. P., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+Interferon-gamma+by+an+adenovirus+vector+blocks+herpes+simplex+virus+Type+1+reactivation+in+vitro+and+in+vivo+independent+of+RNase+L+and+double-stranded+RNA-dependent+protein+kinase+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Delivery of Interferon-gamma by an adenovirus vector blocks herpes simplex virus Type 1 reactivation in vitro and in vivo independent of RNase L and double-stranded RNA-dependent protein kinase pathways.</a> J. Neuroimmunol. 206, 39-43 (2009).</li>
</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

포진 성 각막염 stromal의 재발 모델 (HSK)는 여기서 설명하는 것은 연구자가 인간의 질병 중에 관찰되는 그와 더 일관성있는 모델이 인간의 HSK 공부를 할 수 있습니다. 따라서, 모델의 장점은 질병 주요 질병 중에 자극에 의​​해 이미 면역 체계의 맥락에서 발생한다는 점입니다. 이 마우스가 이미 HSV-1에 면역 반응이 있기 때문에, 그 면역 반응을 활성화하는 요인은 원래를 생성 한 것과 가능성이 다릅니다. 따라서, 기본 HSK을 방지하기 위해 치료 개입은 항상 기본 및 재발 HSK 6,8,10-13,15 사이의 차이를 평가할 때 우리는 다양한 출판물에 게재되는, 재발 HSK의 개량으로 이어질하지 않습니다. 이전에 표시된 바와 같이 인간의 HSK을 방지하기 위해 백신을 개발할 때,이 경우 특정입니다. 대부분의 백신은 기본 HSK의 개발을 방지 할 수 있지만, 거의가 recu을 감소에 효과 표시되었습니다HSK 6,10,11 rrent. <p class="jove_conten...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Sigma</td><td>D5796</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>인간 혈청</td><td>Sigma</td><td>S7023</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Cellgro</td><td>25-005-C1</td><td></td></tr><tr><td>Pen/ Strep</td><td>Sigma</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Fungizone</td><td>Invitrogen</td><td>15290018</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Sorvall</td><td>Legend RT</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Beckman</td><td>52-21</td><td></td></tr><tr><td>트랜스일루미네이터</td><td>UVP</td><td>95-0452-02</td><td></td></tr><tr><td>초음파 파쇄기</td><td>Branson</td><td>Sonifier 450</td><td></td></tr><tr><td>Oak Ridge 튜브</td><td>Nalgene</td><td>Z 720410</td><td></td></tr><tr><td>플라스크- 7150</td><td>Corning</td><td>430823</td><td></td></tr><tr><td>플레이트- 12웰</td><td>Corning</td><td>CLS 3513</td><td></td></tr><tr><td>플레이트- 48웰</td><td>Corning</td><td>CLS 3548</td><td></td></tr><tr><td>멸균 원추형 튜브- 30 ml</td><td>Corning</td><td>CLS 430828</td><td></td></tr><tr><td>멸균 면봉</td><td>Fisher</td><td>23-400-125</td><td></td></tr><tr><td>30G 바늘</td><td>Becton-Dickinson</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>25G 바늘</td><td>BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>10 ml 주사기</td><td>BD</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>10 ml 주사기</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스의 재발 포진 성 각막염 stromal, 인간 hsk 유학을위한 모델

Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK

포진 성 안구 질환, 포진 성이라고한다 stromal 각막염 (HSK)는 각막의 가능성이 눈부신 감염입니다 치료를위한 300,000 이상 임상 방문 각 연도에 발생합니다. 임상 질환을 가진 환자의 1 ~ 2 %에 감염된 각막의 비전 손실을 경험하게 될 것입니다. 이러한 경우의 대부분은 헤르페스에 의한 잠재 감염의 재 활성화의 결과는 급성 질환으로 인해 않는다고에게 바이러스를 입력하고 단순. 흥미롭게도, 급성 감염 대부분이 질병을 연구하는 데 사용되는 모델입니다. 그러나, HSK의 재발 모델은 임상 적 질환 중 발생하는 일이 더 반영 될 것이라고 생각했다. HSK에 대한 재발 동물 모델은 토끼와 쥐를 모두 고용했다. 토끼의 장점들은 지연의 재 활성화는 알려진 자극을 결석 경험한다는 것입니다. 그것은 토끼 모델이 immun가 없습니다 때문에 많은 면역 요인이 재발 HSK에서 재생하는 역할을 탐험하기가 어렵습니다, 말마우스가 있다고 ological 및 유전 자원. 재 활성화는 UV-B 빛에 노출에 의해 유도되기 때문에 우리는 거기에 많은 자원을 사용할 수있는 그런 이점을 가지고 있으며 또한 재 활성화가 발생합니다 때 알고 있기 때문에 재발 HSK의 마우스 모델을 사용하기로 결정했습니다. 지금까지이 모델이 질병에 중요한 여러 가지 면역 요소를 정의하는 데 사용하는 실험실 수있었습니다. 또한 우리는 치료 및 백신 효능을 모두 테스트 할 수 있습니다.

포진 성 각막 질환의 대부분의 연구는 주요 감염 모델을 사용합니다. 그러나, HSV-1 기본 감염은 일반적으로 인간의 질병으로 이어질하지 않습니다. 여기보다 밀접하게 인간의 질병을 모방 포진 성 각막 질환의 재발 모델을 설명합니다.

마우스의 재발 포진 성 각막염 Stromal, 인간 HSK 유학을위한 모델

헤르페스성 각막 기질염(HSK)이라 불리는 헤르페스성 안질환은 각막에 발생하는 감염성 질환으로 실명을 초래할 수 있으며, 30만 건 이상의 임상...

이 실험 절차의 전반적인 목적은 재발성 단순 포진 바이러스(herpes simplex virus, HSV) 감염을 연구하는 것입니다. 우선 마우스의 각막 손상 없이 잠복 감염이 되도록 감염시킨 후, 잠복 상태가 완전히 확립되면 다음 단계로 UVB 광선에 노출시켜 바이러스를 재활성화합니다. 마지막 단계에서는 눈물막을 수집하여 바이러스 배출을 검출하고, 이후 최소 5주 동안 마우스를 관찰하며 질병 경과를 모니터링합니다.최종적으로, 마우스에서 발생하는 질병의 정도는 헤르페스성 기질 각막염(Herpetic stromal keratitis)의 질환 점수 평가를 통해 측정할 수 있습니다. 이는 전 세계적으로 많은 사람에게 영향을 미치는 질병입니다. 특히 이 질환은 감염성 실명의 주요 원인 중 하나입니다.저희는 이 특정 질환을 모사하기 위해 마우스 모델을 사용하고 있습니다. 이 질환을 모사할 수 있는 다른 모델들도 존재하지만, 저희는 이 모델이 해당 질환을 가장 잘 나타낸다고 판단합니다. 오늘 잠시 시간을 내어 이 영상에 등장할 분들을 소개해 드리겠습니다.지난 몇 달 동안 저와 함께 일해 온 Chloe입니다. 이쪽은 실험실에서 근무 중인 하계 학생 Nippo입니다. T 150 플라스크에서 Vero 세포에 HSV one을 3~4일 동안 배양하여 80% confluence에 도달하게 하여 실험을 시작하십시오.이 시점이면 세포들이 둥글게 말려 올라와 플라스크를 가볍게 쳐주는 것만으로도 쉽게 떨어져 나올 것입니다. 세포 현탁액을 멸균된 50 milliliter 원추형 튜브로 옮긴 후, 15분 동안 원심분리하여 세포를 침전시킵니다. 벤치탑 원심분리기를 사용하여 4 °C에서 1,510 ×g로 설정하십시오.다음으로, 상층액을 50 milliliter 멸균 oak ridge 튜브로 옮기고, 총 5 milliliter의 배지를 각 원뿔형 튜브에 나누어 넣어 재현탁합니다. 큰 펠렛을 현탁시킨 후, 재현탁된 펠렛을 1/32초 간격의 버스트로 2회, 총 1분 동안 초음파 처리합니다. 고속 바닥 원심분리기로 상층액을 원심분리하면 작은 바이러스 펠렛이 생성됩니다.상층액을 버린 후, 소량의 바이러스 펠릿과 함께 침전물을 혼합하고 45초 동안 다시 초음파 처리합니다. 이제 벤치탑 원심분리기를 사용하여 초음파 처리된 세포 및 바이러스 용액을 280 ×g, 4°C에서 5분 동안 다시 원심분리한 다음, 상층액을 분주하여 -70°C에서 바이러스 스톡으로 보관하거나 타이터 플레이트에 사용합니다.바이러스 스톡 상청액으로부터 10⁰에서 10⁻⁸까지 10배 단계 희석한 바이러스를, 12웰 멸균 플레이트에 담긴 Vero 세포의 두 가지 서로 다른 희석 세트에 각각 두 번씩 처리합니다. 마우스를 마취시켜 감염 절차를 시작합니다. 바이러스가 흡수될 수 있도록 마우스가 깨어나기 전까지 20분에서 30분 동안 완전히 마취된 상태를 유지해야 합니다.그런 다음 해부 현미경 하에서 30게이지 바늘을 사용하여 오른쪽 눈의 각막에 긁힘 상처를 냅니다. 이제 이어펀치로 동물을 식별하여 번호를 매깁니다. 다음으로, 일차 감염 동안 각막 손상을 방지하기 위해 쥐에게 1 mL의 혼합 인체 혈청을 주입합니다.그 다음, 20 µL 피펫을 사용하여 10⁶ PFU의 바이러스를 긁힌 눈에 감염시키고, 동물 마취 상태에서 감염 여부를 확인하는 동안 다른 쪽 눈이 건조해지지 않도록 HBSS 5 µL를 넣어줍니다. 멸균 면봉에 Vero 배지 1 mL를 적십니다. 감염 3일 후, 해당 면봉으로 감염된 눈을 닦아낸 다음, 스왑한 배지 100 µL를 1차 감염 후 최소 5주 동안 48-well 플레이트에서 배양한 Vero 세포에 접종합니다.방금 보여드린 것과 같이 마취된 마우스의 감염된 눈을 면봉으로 닦아냅니다. 자발적인 눈깜박임에 의한 변수를 제어하기 위해 48웰 플레이트 뚜껑에 면봉 채취일을 0일차로 표시합니다. 그런 다음 마우스를 피크 파장이 302 nanometers인 UVB를 방출할 수 있는 트랜스일루미네이터(transluminator)에 배치하여 한쪽 눈만 UVB 광선에 노출되도록 하고, cm²당 250 millijoules의 UVB 광선을 조사합니다.그 후 1일부터 7일까지 매일 눈을 면봉으로 닦아냅니다. 감염성 바이러스가 포함된 면봉의 경우, UVB 조사 후 12-well 플레이트를 이용한 표준 플라크 분석법(plaque assay)으로 바이러스 양을 측정하여 마우스의 임상적 안구 질환 여부를 평가합니다. 마우스를 이안식 해부 현미경 아래에 배치합니다.각막 혼탁도는 0에서 4까지의 척도로 평가하며, 0은 투명한 실질, 1은 경미한 실질 혼탁을 나타냅니다. 2는 홍채가 식별 가능한 수준의 중간 정도의 혼탁을 나타냅니다. 3은 동공 가장자리를 제외하고 정의된 홍채 세부 구조가 소실된 심한 혼탁을 나타내며, 4는 후방 관찰이 불가능한 전체 혼탁을 나타냅니다.신생혈관형성은 각막을 4개의 동일한 사분면으로 나누고 각 사분면의 혈관 형성 정도를 결정하여 1에서 8까지의 척도로 평가합니다. 첫 번째 그림에서, 잠복 감염된 마우스의 바이러스 재활성화를 위해 UVB 조사를 유도한 후 35일 동안 각막 혼탁도를 모니터링하였습니다. 이 데이터는 암컷 C 57 black six 마우스에서 14일에서 35일 사이에 바이러스 유도 질환이 유의하게 더 많이 나타났으며, 이에 따라 수컷 C 57 black six 마우스가 암컷 C 57 black six 마우스보다 각막 혼탁도가 유의하게 낮음을 보여줍니다.마찬가지로, 동일한 실험 조건에서 각막 신생혈관 형성을 평가했을 때 수컷 마우스는 암컷 마우스보다 각막의 신생혈관 성장이 유의하게 적게 나타났으며, 다시 한번 14일에서 28일 사이에 암컷 C 57 black six 마우스에서 바이러스로 유도된 질환이 유의하게 더 심하게 나타났습니다. 이 절차를 수행할 때, 마우스가 20분에서 30분 동안 수면 상태를 유지할 수 있도록 완전히 마취시키는 것을 잊지 마십시오. 이 영상을 통해 이 인간 질환을 연구하기 위한 재발성 기질 각막염 마우스 모델의 사용법을 이해하셨기를 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 동영상 글에서 우리는 새로운의 사용을...

급성 상피 헤르페스의 예 VIVO Organotypic 각막 모델은 바이러스 종류 나 감염을 단순

이 비디오는 인간 면역 체계와 간 세포를 가진 이중 인간화 마우스 모델을 생성하는 방법을 보여줍니다. 이는 인간 간 세포와 조혈 줄기 및 전구 세포를 비장 내 주사를 통해 형질전환 면역 결핍 마우스에 이식하여 간 세포의 생착과 인간 면역 세포의 발달을 유도하는 것을 포함합니다.

인간 간 세포와 면역 세포를 이용한 인간화 마우스 모델 개발

만성 안구 고혈압 쥐의 눈 섬유주 레이저 광응고술을 사용하여 유도된다. 안압 (IOP)는 레이저 치료 후 몇 개월 동안 상승합니다. 시력 실험 동물의 대비 감도의 감소는 optomotor 테스트를 사용하여 모니터링 할 수 있습니다.

비주얼 결함의 특성을 만성 안구 고혈압의 레이저 유도 마우스 모델

우리는 동물 모델의 조직 섹션 내의 영속 DNA 바이러스 게놈의 검출을 위해 현장 하이브리드 프로토콜에 형광등을 설치했다. 이 프로토콜은 바이러스 게놈의 codetection, 자사의 RNA 제품, 단일 세포 내에서 바이러스 또는 세포 단백질에 의해 감염 과정을 연구 할 수 있습니다.

형광에 의한 신경 조직의 영구 DNA 바이러스의 게놈 및 성적 증명서의 검출 현장에서 하이브리드 면역 염색과 결합

피부는 인간 병원체인 단순 헤르페스 바이러스 1형(HSV-1)의 표적 조직 중 하나입니다. HSV-1의 조직 침입 경로를 조사하기 위해 피부의 가장 바깥쪽 층을 나타내는 쥐 표피 시트의 생체 외 감염 모델을 구축했습니다.

단순 포진 바이러스 1 형과 쥐 표피의 생체 감염

이 프로토콜 신생아 NSG 쥐 방사선 조절로 인간 조 혈 줄기 세포의 intrahepatic 주입을 통해 humanized 쥐 (hu-NSG)를 설정 하는 방법을 제공 합니다. Hu NSG 마우스 HIV 감염 및 조합 항 레트로 바이러스 치료 (장바구니)에 취약 하 고 HIV 복제 및 대기 시간 조사에 대 한 적합 한 병 태 생리 모델 역할.

HIV 복제 및 대기 연구를 위한 인간 답게 끄 덕/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) 마우스 모델

여기에 기술된 것은 인간화된 마우스에 있는 HIV 감염의 역학을 공부하기 위한 3개의 실험적인 접근입니다. 첫 번째는 만성 감염 사건의 연구를 허용하는 반면, 두 후자는 1 차감염 또는 바이러스 재활성화 후 급성 사건의 연구를 허용합니다.

인간화 면역 결핍 마우스 모델에서 만성, 급성 및 재활성화 HIV 감염

풋패드 접종 모델은 생체 내에서 바이러스 유발 신경 염증 반응을 특성화하는 데 중요한 도구입니다. 특히, 말초 신경계에서 시작된 바이러스 운동 및 관련 면역 병리학 적 과정에 대한 명확한 평가를 제공한다.

바이러스 유발 신경 염증 반응을 연구하는 마우스 풋패드 접종 모델

우리는 실험 약물의 항 바이러스 효능을 테스트하기 위해 돼지 각막의 사용을 설명합니다.

포신 각막 조직 은 포진 심플렉스 바이러스-1 항 바이러스의 효능을 연구하기 위해 퇴치

접촉 과민증 (CHS)은 알레르기 성 접촉 피부염 (ACD)의 뮤린 실험 모델입니다. CHS는 가슴과 복부의 면도 된 피부를 페인팅하여 반응성 합텐으로 감작을 기반으로하며, 희석 된 합텐으로 후속 귀 피부 챌린지를 통해 다양한 방법으로 평가되는 붓기 반응을 일으 킵니다.

알레르기 성 접촉 피부염의 뮤린 모델로서의 접촉 과민증

이 프로토콜은 인간과 같은 흉터를 시뮬레이션하기 위해 기계 전달 신호를 증가시키는 비대성 흉터 쥐 모델을 설정하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 마우스의 치유 절개 부위를 가로질러 기계적 장력을 증가시키고 특수 장치를 사용하여 상세한 조직학 및 생물 정보학 분석을 위해 재현 가능한 과도한 흉터 조직을 만드는 것을 포함합니다.

Mechanotransduction-driven, human-like hypertrophic scarring의 마우스 모델

학습하세요 마우스 재발 포진성 각막염 모델을 통해 HSV 감염 메커니즘과 질병 진행 과정을 연구하는 방법을. UVB 광 노출로 바이러스 재활성화를 유도하고 각막 혼탁도를 평가하여 인간 질병을 모방합니다.

마우스의 재발 포진 성 각막염 Stromal, 인간 HSK 유학을위한 모델

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