Name: 마우스 Estrous 사이클 스테이징 확인을 위해 질 세척, 크리스탈 바이올렛의 착색 및 질 Cytological 평가를 수행 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: 학습하세요 마우스 질 세척 및 크리스탈 바이올렛 염색을 이용한 비침습적 생식 주기 단계 확인 방법. 이 프로토콜은 호르몬 변화와 생식 건강 연구에 필수적인 도구를 제공합니다.

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우리는 시각적 모델 지원 비디오 제작 및 편집과 칼튼에서 박사 마틴 버트 란드 몰입 미디어 스튜디오 / 신경 재생 연구실에서 전문가 기술 지원 칼튼 몰입 미디어 스튜디오에서 마크 레너드 감사드립니다. 저자는 굉장히 박사 매릴린 Keaney와 오타와 동물 관리 및 수의학 서비스의 대학에서 그녀의 헌신적 인 직원의 모든 전문가의 조언을 인정합니다. 이 작품은 SALB, 노화의 CIHR 연구소 SALB와 SF, 캐나다 재단에 Neurodegenerative Lipidomics의 건강 연구 / CIHR 교육 프로그램 (TGF 96,121)의 전략적 교육 사업에 건강 연구의 캐나다 연구소 (CIHR, 걸레 62826)에 의해 재정 지원되었다 SF, SF에 온타리오 혁신 믿어, 그리고 SF에 대한 오토 데스크 연구에 혁신. ACM은 CIHR의 들소와 베스트 박사 상을 받게됩니다. NV는 노화와 Neurodegenerative Lipidomics의 CIHR 교육 프로그램의 연구소에서 포스트 - 전문 교제를받습니다.

1. 준비 시약 <ol><li> 필요한 때까지 무균 질 세척을, 실온에서 단단하게 밀봉 된 용기에 두 번 증류수 (ddH 2 O)와 상점을 압력솥. </li><li> cytological 평가를 들어, ddH 2 O. 100 ML에 크리스탈 바이올렛 가루 0.1 g을 추가 잘 섞는다. 필요한 때까지 크리스탈 바이올렛 얼룩 (0.1 %)는 실온에서 단단하게 밀봉 된 용기에 저장할 수 있습니다. </li></ol> 2. 수집 질 세포 (질 세척) <ol><li> 멸균 200 μl 팁의 끝 부분에 라텍스 전구를 놓고 멸균 ddH 2 O는 볼륨 지침으로 끝에서 순서를 사용하는 약 100 μl를 그린다. </li><li> 그녀 케이지의 마우스를 올려 당신에 대한 그녀의 엉덩이 / 후방 단부와 케이지 호퍼 (뚜껑)에 그녀를 놓습니다. </li><li> 단단히 꼬리를 파악하고 뒤쪽 끝을 향상. 마우스는 이제 호퍼을 쥐었고 만 그녀 앞에서 손을 갖게됩니다. 이 시점에서 마우스가 소변을 할 수 있습니다. 그렇다면, 배뇨 멈출 때까지 기다리십시오. 거기에 질 운하의 입구에서 왼쪽으로 소변을 할 경우, 당신은 별도의 팁 (즉,하지 샘플 수집 팁)를 사용하여 초과 ddH 2 O로 시작을 씻어 할 수 있습니다. </li><li> 질 (및 경부) 자극이 쥐 1,2에 pseudopregnancy을 일으킬 수로 구멍을 통과하지 돌봐 질 운하의 개통에 ddH 2 O 가득한 팁의 끝을 놓으십시오. 최근 보고서는 쥐가 그럼에도 불구하고 치료가 반복 분석 3 invasiveness의 정도를 최소화하기 위해주의해야한다이 효과에 덜 민감한 것이 좋습니다. </li><li> 부드럽게 질 운하의 개통에 물 (~ 25-50 μl)의 양의 절반에 분기 추방 전구를 놓으면 되죠. 액체가 저절로 팁 삽입없이 운하에 기음합니다. 천천히 전구에 가해지는 압력을 놓습니다. 유체는 끝으로 다시 인출됩니다. 유체의 흡인을 방지하기 위해 너무 빨리 해제 압력을 피전구에. 필터링 팁이 목적을 위해 유용 할 수 있습니다. </li><li> 하나의 샘플에서 세포의 충분한 숫자를 얻기 위해 같은 팁, ​​전구, 그리고 유체를 사용하여 이전 단계 4-5 번 반복합니다. </li><li> 유리 슬라이드에 유체를 삽입하고, 비방 완전히 실온에서 건조 할 수 있습니다. 일단 건조,이 estrous 얼룩은 즉시 물들거나 저장하고 나중에 물들 일 수 있습니다. </li></ol> 3. 크리스탈 바이올렛을 사용하여 Cytological 착색 * 4 <ol><li> 크리스탈 바이올렛은 1 분에 얼룩을 포함하는 coplin 병 (또는 다른 유사한 착색 용기)에서 건조 슬라이드를 놓습니다. </li><li> ddH 2 O.을 포함하는 두 번째 coplin 병에 제거 1 분에 ddH 2 O로 슬라이드를 씻으십시오. 반복합니다. </li><li> 스테인드 도말 표본과 접촉을 피하고, 가벼운 의무 조직 와이퍼와 슬라이드의 가장자리에서 초과 ddH 2 O를 제거합니다. </li><li> 비방과 커버 상단에 글리세롤의 피펫 약 15 μl나오십시오. 또한, 다른 조직 학적 장착 시약은 더 영구적, 비 diffusing 얼룩을 얻기 위해 이용 될 수있다. </li></ol> 여기에 설명 * 착색 방법은 실험실에서 수행 할 수있는 간단한 절차입니다. 다른 방법은 자세한 내용을 제공 할 수 있습니다. 예를 들어, Papanicolaou의 얼룩 사용하여 nucleated 상피 세포의 성숙이 덜 성숙 세포 스테인드 청록색 더 성숙 세포 핑크 또는 오렌지 스테인드로 구별 할 수 있습니다. 이러한 차이는 일찍 또는 늦게 proestrus를 개최하는 데 사용할 수 있습니다. 4 4. 질 세포학 <ol><li> 세포 유형이 존재 결정하는 빛 현미경 아래에있는 얼룩을 검사합니다. 현미경 검사는 coverslipping에 글리세롤을 사용하면 크리스탈 바이올렛은 시간이 지남에 따라 세포의 확산되므로 얼룩 후 바로 수행해야합니다. Photomicrographs는 세포학을 문서화하는 분석시에주의해야한다. </li><li> entir를 검사하여 시작낮은 배율의 전자 도말 표본. 대표 지역을 선택하고 더 높은 배율로 이동합니다. 귀하는 (대표 결과, 그림 1A-C) 편평 상피 세포, 백혈구 및 / 또는 nucleated 상피 세포를 cornified 볼 수 있습니다. 세포 존재의 비율은 샘플 수집 시간 (대표 결과, 그림 1D-G)와 즉각적인 호르몬 상태 (토론, 그림 2)에서 마우스의 estrous 단계를 결정 할 수 있습니다. </li></ol> 5. 대표 결과 세포학 : 세 가지 기본 세포 유형은 질을 뛰어 넘는 샘플에서 감지 할 수 있습니다 : (1) nucleated 상피 세포 (그림 1A)는, (2) 편평 상피 세포 (그림 1B) 및 (3) 백혈구 (그림 1C)을 cornified. Nucleated 상피 세포는 가볍게 스테인드 세포질, 어두운 스테인드 플라즈마 막, 그리고 타원형 핵이 ( <str긴 사연&gt; 그림 1A). Cornified 편평 상피 세포는 nucleated 상피 이전보다 모양에 더 많은 다각형, 균일 스테인드 있으며, 핵 (그림 1B)를 부족합니다. Polymorphonuclear 백혈구들은 불규칙한 모양, 어둡게 스테인드 다형성 핵, 그리고 작은 크기 (그림 1C, 검은 색 화살표)로 상피 세포로부터 구별 할 수 있습니다. 소변 오염 비방에 존재해야합니다, 요산의 결정이 쉽게 어떤 예상 세포 유형 (그림 3)에 이종의 결정 구조에 의해 감지됩니다. 이 문제가 발생할 있으며, 주된 세포 유형의 모호한 감지 경우, 비방은 삭제와 목적을 교대 사용하지해야합니다. 준비 : 얼룩에서 관찰 세포 유형의 상대적 비율은 샘플 수집의 날 (그림 1D-G)에 마우스의 estrous주기의 단계를 식별하는 데 사용할 수 있습니다. proestrus 동안, 세포는 거의 대부분 아르원형의 클러스터는 상피 세포를 (그림 1D, 흰색 화살표로 표시 대표 셀) nucleated 잘 형성 될 수있다. 발정 동안, 세포는 주로 밀도가 높은 포장 클러스터에 존재하는 편평 상피 세포 (그림 1E, 화살촉으로 표시 대표 셀) cornified 있습니다. metestrus 동안, 작은 모호하게 스테인드 백혈구는 (그림 1 층 검은 색 화살표로 표시 대표 셀) predominate. Cornified 편평 상피 세포는 종종 조각, (그림 1 층, 검은 화살촉으로 표시 대표 셀)에서 관찰 될 수 있습니다. diestrus 동안, 희귀 cornified 편평 상피 세포가 계속 (그림 1G, 검은 화살촉으로 표시 대표 세포)가 될 수 있습니다, 그러나 백혈구는 여전히 (그림 1G, 검은 색 화살표로 표시 대표 셀) predominate. Metestrus는 diestrus의 nucleated 상피 세포의 모양 (가 diestrus 구별 할 수 있습니다 <stron<html> g&gt; 그림 1G는 대표 셀은) 흰색 화살표로 표시. <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig1.jpg" alt="그림 1" /> 1 그림. 질 얼룩의 Cytological 평가는 estrous 단계를 식별하는 데 사용할 수있는 세 가지 기본 세포 유형의 질을 뛰어 넘는 샘플에서 발견됩니다. (A) nucleated 상피 세포, (B) cornified 편평 상피 세포, 그리고 (C) 백혈구. 비방에 존재하는 이러한 세포 유형의 비율 (D) proestrus이 (E) 발정은 (F) metestrus, 또는 (G) diestrus대로 대표 결과에 설명의 생쥐를 식별하는 데 사용할 수 있습니다. 대표 cornified 편평 상피 세포에 E, F 및 G 포인트의 블랙 화살촉. 대표 leykocytes에 C, F 및 G 포인트의 검은 색 화살표. D와 G 강조 담당자에 흰색 화살표는 상피 세포를 nucleated. . JPG &quot;대체 =&quot;그림 2 &quot;/&gt; 그림 2. 질 비방 세포학은 기본 내분비 이벤트를 반영합니다. 세부 사항도 토론에 제공됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4389/4389fig2large.jpg" target="_blank">더 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. 요산의 결정이 소변 오염 된 시료의 현재 다음 크리스탈 바이올렛 염색 할 수 있습니다. (A) 크리스털 투명하고 다양한 크기 ((B)에 확대 화살표와 박스 지역) 될 수 있습니다. 어떤 세포는이 분야에서 존재하지 않습니다. cytological 착색에 사용되는 필드 내에서 요산의 결정 오염이 존재해야, 그것은 정확하게 세포 유형이 현재와 비방을 폐기해야합니다 식별하기 어려울 수 있습니다. 스케일 바 = 50 μm.

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저자는 이익 갈등을 선언하지 않습니다. 동물의 모든 실험은 오타와 동물 관리위원회의 대학과 동물 관리에 캐나다 의회에 의해 명시된 지침과 규정에 엄격한에 따라 수행되었다.

셀 예표 론의 이러한 변화는 기본 내분비 이벤트를 나타내는 수 있습니다. estrous주기의 proestrus 단계는 월경주기 (5)의 인간 follicular 단계에 해당하며 17 β-에스트라 디올 수치에게 6 순환의 사전 ovulatory 증가뿐만 아니라, prolactin 7의 작은 급증 (그림 2에 의해 정의되는 것은, Proestrus, 왼쪽 패널). 17 β-에스트라 디올의 증가는 간접적으로 자극 생식샘 자극 호르몬 - 방출 차례로, 순환 8,9에 luteinizing 호르몬과 소낭 자극 호르몬을 출시 할 앞 뇌하수체에 반응 세포를 활성화, 시상 하부 및 심실 중격 호르몬 뉴런을 (그림 2 , Proestrus, 왼쪽 패널). proestrus의 동물에서 가져온 질 얼룩에서 세포는 거의 대부분 타원형 nucleated 상피 세포 (그림 1D, 그림 2, Proestrus, 오른쪽 패널)입니다. 소낭 자극의 horm의 피크발정 10,11 하나의 레벨 신호의 배란 및 항목. 발정 기간 동안, 17-β-에스트라 디올 수치 감소와 prolactin 수준에게 최대 6,7 (그림 2, 발정, 왼쪽 패널을). 질 얼룩은 clumps에서 종종 불규칙 모양의 cornified 편평 상피 세포 (그림 1E, 그림 2, 발정, 오른쪽 패널)의 거의 독점적 인 검색을 특징으로하고 있습니다. metestrus에 입장 progesterone 호르몬 수준 6 연속 상승과 일치과 인간의 luteal 단계 12 (그림 2, Metestrus, 왼쪽 패널)의 시작 부분에 해당합니다. progesterone 수준은 상승이 시작 코퍼스 luteum 활성화 6,13,14 (그림 2, Metestrus, 왼쪽 패널)에 대한 응답으로 17 β-에스트라 디올 수치의 작은 동요가 있습니다. 이 단계 동안 질 얼룩에 존재하는 세포 유형은 조각, cornified 상피 세포와 작은 어두운 스테인드 백혈구 (Figur 아르전자 층, 그림 2, Metestrus, 오른쪽 패널). 마지막으로, 쥐 diestrus에 항목이 발생하고 progesterone 수준에게 인간의 말 luteal 단계 12에 해당하는 최대 6, 순환. 코퍼스 luteum의 회귀는 progesterone 수준 15,16의 후속 급락 (그림 2, Diestrus, 왼쪽 패널)로 연결됩니다. 백혈구는 diestrus 동안 얼룩에 predominate. cornified 상피 세포의 주파수는 감소 nucleated 상피 세포는 이전에 proestrus (그림 1G, 그림 2, Diestrus, 오른쪽 패널)으로 전환 할 감지하기 시작합니다. 요약하면,이 단순하고, 일상적인 프로토콜은 매일 호르몬 변동을 예측하고 다음주의 사항을 촬영하는 경우 생식 상태를 변경하지 않고 실험 쥐 estrous 단계를 설정하는 데 사용할 수 있습니다. 샘플링은 하루에 한 번씩 비 침습적 프로토콜 내림차순를 사용하는 것보다 더 이상 수행되지 않을 것입니다질 운하, 흡인 및 교반의 반복 침투에 비해 여기 ribed. 이 cytological 평가를 먹이고 있습니다 얼룩에 존재하는 백혈구와 다른 세포 유형의 결과 염증성 응답 17에 결과 질 자극을 일으킬 수 있습니다. 또한, 심지어 식민지-자리 여성은, 그게 잘 anestrous 18 유도하고이 식별 번식이, 성별에 호르몬 영향의 해석에 유용합니다, 질병 연구 등 다양한 마우스에 확장 diestrus와 발정 단계를 볼 정상입니다. 사이클 길이 변화는 나이가 및 여성 7,19-21의 식민지에서 주택의 차이 (개인 또는 그룹 주택)에 의해 소개되어 있습니다. 여성 전용 식민지에 자리 잡고 여자들은 자전거를 중단하고 자전거는 자전거 24,25을 유도하는 남성 소변과 pretreated 케이지에 노출에 의해 다시 instated 할 수 있지만 장시간 diestrus 18,22,23의 상태를 입력 할 수 있습니다. 따라서, individua를 확립하는주어진 마우스 리터 사이클 길이는,이 두개의 완벽한 사이클이 관찰 될 때까지 여기에 설명 된 비 침습적 평가가주의 매일 수행 할 것을 권장합니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 # </td></tr><tr><td> 멸균 200 μl 피펫 팁 </td><td> Diamed </td><td> E340901 </td></tr><tr><td> 라텍스 전구 (1 ML) </td><td> 어부 </td><td> 03-488-21 </td></tr><tr><td> 유리 현미경 슬라이드 </td><td> 어부 </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> 크리스탈 바이올렛 (25 G) 얼룩 </td><td> 어부 </td><td> C581-25 </td></tr><tr><td> 가벼운 의무 조직 와이퍼 </td><td> VWR </td><td> 82003-820 </td></tr><tr><td> 글리세린 </td><td> 어부 </td><td> BP229-1 </td></tr><tr><td> 현미경 커버 유리 (22x30) </td><td> 어부 </td><td> 12 544A </td></tr></tbody></table>

마우스 estrous 사이클 스테이징 확인을 위해 질 세척, 크리스탈 바이올렛의 착색 및 질 cytological 평가를 수행

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

설치류에 생식 상태를 평가의 급속한 수단뿐만 아니라 생식 기능 장애의 연구에 유용합니다뿐만 아니라 병적 인 도전에 따라 조직 변성의 호르몬 조절 (또는 재생)에 새 마우스 질병의 모델과 조사의 생산이 필요합니다. proestrus, 발정, metestrus 및 diestrus : 손쥐 생식 (또는 estrous)주기는 4 단계로 나누어 져 있습니다. 난소 스테로이드 17-β-에스트라 디올과 progesterone의 수준을 순환에 정의 변동, gonadotropins는 luteinizing와 자극 호르몬을 고치,이 생식 단계를 통해 luteotropic 호르몬 prolactin 신호 전환. 손쥐 질 운하 내에서 세포 예표 론의 변화는 이러한 기본 내분비 이벤트를 반영합니다. nucleated 상피 세포, cornified 편평 상피 세포, 그리고 질 얼룩에 존재하는 백혈구의 상대 비율 매일 평가는 손쥐 estrous을 식별하는 데 사용할 수 있습니다단계. invasiveness의 정도 그러나, 이러한 샘플 생식 상태를 변경하고 얼룩의 cytological 평가를 먹이고 수있는 염증 반응을 유도 할 수 있습니다 수집에 채용. 여기, 우리는 그녀의 생식주기를 변경하지 않고 여성 마우스의 estrous주기의 단계를 결정하는 데 사용할 수있는 간단한 비 침습적 프로토콜을 설명합니다. 어떻게 우리가 네 가지 질 얼룩의 주된 세포 예표 론의 수집과 분석에 의한 estrous주기의 단계와 우리가 이러한 변경 사항은 내분비 상태에 대해 해석 할 수있는 방법을 보여 구별하는 방법을 자세히 설명합니다.

여기, 우리는 간단한 비 침습적 수집 및 질을 뛰어 넘는 샘플 cytological 평가하여 손쥐 생식 (proestrus, 발정, metestrus, 또는 diestrus)의 단계를 확인하는 방법에 대해 설명합니다. 우리는 더 질 세포학은 손쥐 생식주기를 통해 전환을 하부 호르몬 수준을 순환 반영 방법에 대해 설명합니다.

마우스 Estrous 사이클 스테이징 확인을 위해 질 세척, 크리스탈 바이올렛의 착색 및 질 Cytological 평가를 수행

설치류의 생식 상태를 신속하게 평가하는 수단은 생식 기능 장애 연구뿐만 아니라 ...을 위해서도 필요합니다.

본 연구에서 수행된 모든 절차는 오타와 대학교 동물 관리 위원회와 캐나다 동물 관리 위원회에서 정한 가이드라인 및 규정에 따라 수행되었습니다. 설치류의 생식 상태를 신속하게 평가하는 방법은 생식 기능 장애 연구뿐만 아니라, 새로운 질병 마우스 모델의 제작 및 병리적 자극 후 조직 퇴행 또는 재생의 호르몬 조절 연구에도 필수적입니다. 본 논문에서는 질 도말 표본에 나타나는 주요 세포 유형에 대한 간단하고 비침습적인 세포학적 평가를 통해, 특정 날짜의 암컷 마우스 생식 주기의 단계를 확인하는 방법을 설명합니다.반복되는 생식 또는 발정 주기는 4단계로 나뉩니다. Proestrus(발정전기), estrus(발정기), metestrus(발정후기) 및 diestrus(휴지기)는 순환하는 난소 스테로이드인 17 beta estradiol과 progesterone, 그리고 성선자극호르몬인 luteinizing hormone과 follicle stimulating hormone의 농도 변화로 정의되며, luteotropic hormone인 prolactin은 이러한 생식 단계 간의 전환을 알리는 신호 역할을 합니다. 발정 주기의 proestrus 단계는 인간 월경 주기의 follicular phase(여포기)에 해당하며, 배란 전 순환 17 beta estradiol 수치의 증가와 소량의 prolactin 급증으로 정의됩니다.17 beta estradiol의 증가는 혈중 황체 형성 호르몬과 여포 자극 호르몬 수준의 상승으로 이어집니다. 여포 자극 호르몬 수치의 정점은 배란과 발정기(es) 진입을 알립니다. 발정기 스트레스 동안에는 17 beta estradiol 수치가 감소하며 프로락틴 수치가 변동합니다.met estro기로의 진입 정점은 혈중 follicle stimulating hormone 수치의 소폭 상승과 일치하며, 이는 인간의 황체기의 시작에 해당합니다. Progesterone 수치가 상승하기 시작하고 17 beta estradiol 수치에서 두 번째 소폭 상승이 나타납니다. corpus lium 활성화에 반응하여, 혈중 progesterone 수치가 정점에 도달할 때 생쥐는 diastrous기로 진입하며 이는 인간의 상황과 일치합니다.황체기 후기. 황체의 퇴행은 이후 프로게스테론 수치의 급격한 감소와 프로게스테론 저하 상태로의 진입으로 이어진다. 세포 유형의 변화는 상피 세포의 상대적 비율을 통해 이러한 기저 내분비 사건들을 반영한다.질 도말에서 검출된 정량화된 세포와 백혈구는 각각의 발정기 단계를 식별하는 데 사용할 수 있습니다. 안녕하세요, 제 이름은 Ashley McLean입니다. 저는 오타와 대학교의 Stephanie Bennett 박사님 지도 하에 신경 재생 연구소에서 근무하는 연구원입니다.저는 Nicholas Valenzuela입니다. 저는 오타와에 있는 Carlton University의 Carlton Immersive Media Studio에서 Steven Phi 박사님과 함께 연구하고 있습니다. 이 영상에서는 EST 추가 주기 단계(extra cycle stage)를 결정하는 데 사용할 수 있는 간단한 프로토콜에 대해 설명하겠습니다.이 프로토콜에서는 우세한 세포 유형과 질 도말 검사를 평가하여 발정전기, 발정기, 발정후기, 휴지기의 네 가지 생쥐 생식 단계 사이를 구별하는 방법을 자세히 설명하겠습니다. 그럼 시작하겠습니다. 이 프로토콜을 위해 오토클레이브 처리된 2중 증류수와 0.1% crystal violet 용액의 두 가지 항목을 준비해야 합니다.염색액은 필요할 때까지 밀폐 용기에 담아 상온에서 보관할 수 있습니다. 먼저 멸균된 200 µL 팁 끝에 라텍스 벌브를 장착하고, 멸균된 2중 증류수를 약 100 µL 흡입합니다. 이때 팁에 표시된 눈금을 부피 가이드라인으로 사용하십시오.마우스의 뒷부분이 사용자 쪽을 향하도록 호퍼 위에 놓습니다. 꼬리를 단단히 잡고 뒷부분을 부드럽게 들어 올립니다. 그러면 마우스가 앞발을 사용하여 호퍼를 잡게 됩니다.이 시점에서 마우스가 소변을 볼 수 있습니다. 그런 경우, 별도의 팁을 사용하여 해당 부위를 2중 증류수로 씻어내십시오. 2중 증류수가 채워진 팁의 끝을 질관 입구에 위치시킵니다.벌브를 부드럽게 눌러 질관 내로 물 부피의 1/4에서 1/2 정도를 배출합니다. 그런 다음 벌브에 가한 압력을 천천히 해제하여 액체를 팁 안으로 다시 흡입합니다. 동일한 팁 벌브와 액체를 사용하여 이전 단계를 4~5회 반복합니다.벌브 안으로 액체가 흡입되는 것을 방지하기 위해 압력을 너무 빠르게 해제하지 마십시오. 이 과정에서 필터 팁을 사용하는 것이 유용할 수 있습니다. 마우스를 케이지로 돌려보내고, 채취한 액체를 유리 슬라이드 위에 배출하십시오.슬라이드를 실온에서 완전히 건조시키십시오. 건조가 완료되면, 이 도말 표본들은 즉시 또는 나중에 염색할 수 있습니다. 공기 건조된 슬라이드를 crystal violet 염색액에 1분 동안 담그십시오.슬라이드를 2중 증류수로 1분 동안 세척합니다. 이 과정을 반복한 후, 가벼운 티슈 와이퍼로 슬라이드의 과잉 2중 증류수를 제거합니다. 염색된 도말 부위를 피해 도말층 위에 약 20 µL의 글리세롤을 분주하고 커버슬립을 덮습니다.염색된 도말 표본은 시간이 지남에 따라 글리세롤 마운팅 내의 세포로부터 염색약이 확산되므로, 가능한 한 빨리 광학 현미경으로 관찰해야 합니다. 먼저 저배율로 도말 표본 전체를 관찰하십시오. 그다음 대표적인 영역을 선택하여 고배율로 전환하여 관찰하십시오.Pro Astra 단계 동안 세포는 거의 전적으로 핵이 있는 상피세포로 구성됩니다. Extra 단계에서 관찰되는 세포는 주로 편평각질상피세포이며, 일반적으로 조밀하게 뭉친 군집을 형성합니다. 이 세포들은 모양이 불규칙하며 가시적인 핵이 없습니다.후발정기(met estro stage) 동안에는 각화된 편평상피세포가 드물게 관찰되나, 이제는 더 작고 진하게 염색된 백혈구가 우세하게 나타납니다. 발정휴지기(diastrous stage) 동안에는 각화된 편평상피세포가 거의 없거나 전혀 관찰되지 않습니다. 남아 있는 백혈구는 다량으로 존재합니다.핵이 있는 상피세포가 단일 세포 및 군집 형태로 관찰됩니다. 발생할 수 있는 문제 중 하나는 소변이 도말 표본을 오염시키는 것입니다. 이러한 상황이 발생하면 해당 도말 표본을 폐기하고 병기 결정에 사용하지 말아야 합니다.지금까지 질 세척액 채취 방법을 살펴보았습니다. 분석 시점에서 암컷 생쥐의 에스트러스 주기 단계를 결정하기 위해 샘플을 수집하고, 이를 염색하여 세포 유형을 평가하십시오. 요약하자면, PROE의 배란 전 단계 동안 혈중 17 beta estradiol 수치가 정점에 달하며, 이는 질 도말 샘플에서 핵이 뚜렷한 상피세포가 우세하게 나타나는 것으로 반영됩니다.이후 follicle stimulating hormone 수치의 정점은 배란과 발정기로의 진입을 나타내며, 도말 표본에서는 각질화된 편평 상피세포가 지배적으로 나타납니다. 메투스(metes) 기간 동안에는 progesterone 수치가 상승합니다. 이 시점의 질 도말 표본에 존재하는 세포 유형은 파편화된 각질화 상피세포와 더 작고 더 어둡게 염색된 백혈구입니다.프로게스테론 수치가 정점에 달하는 발정후기(diestrus) 동안, 핵이 있는 상피세포가 나타나기 시작합니다. 백혈구는 여전히 관찰됩니다. 암컷 생쥐의 발정 주기가 규칙적인지 확인하고 발정 주기 길이를 설정하기 위해, 이러한 평가를 매일 수행하고 두 번의 완전한 주기 동안 평가해야 하며, 서로 다른 생쥐에서 발정후기와 발정기가 연장되어 나타나는 것은 정상적입니다.본 영상이 귀하의 성별 및 호르몬 관련 연구에 도움이 되기를 바라며, 실험에서 좋은 결과가 있기를 기원합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

의 실험 마우스 모델에서 질 접종 및 샘플 수집을위한 프로토콜 칸디다 질염

출처: Morrill, SR, et al. 혐기성 성장 박테리아에 의한 쥐 질 집락화 모델. J. Vis. 경험. (2022년)이 비디오는 항생제 내성 혐기성 박테리아를 사용하여 마우스의 질 집락화를 모델링하기 위한 프로토콜을 보여줍니다. 상피 감수성을 증가시키기 위한 호르몬 치료로 시작하여 혐기성 조건에서 질 접종 및 동시 접종이 이어집니다. 이 절차는 박테리아 집락화 및 생물막 형성을 평가하기 위한 접종 후 샘플링 및 배양으로 마무리됩니다.

혐기성 박테리아에 의한 쥐 질 집락화 모델링

이 프로토콜의 목적은 쥐 모델에서 인간의 B 군 연쇄상 구균 (GBS) 질 식민지를 모방하는 것입니다. 이 방법은 숙주의 면역 반응 및 GBS 질 지속성에 기여 박테리아 인자를 조사 할뿐 아니라 치료 전략을 시험하기 위해 사용될 수있다.

그룹 B의 쥐 모델<em&gt; 연쇄상 구균</em&gt; 질 식민

많은 치료 및 유전자 변이 성적 성숙과 다 산의 타이밍에 영향을. 이 프로토콜 pubertal 발병 쥐 및 쥐에 성적으로 성숙한 동물 불 임 연구를 설정 하는 이전에 평가 하는 비-침략 적 방법을 설명 합니다.

Pubertal 발병을 확인 하 고 쥐 및 쥐에 다 산 분석 결과 수행 하 여 생식 능력의 결정

자궁 수축은 여성의 복지에 중요합니다. 그러나 병리학적으로 수축성이 증가하면 월경불순, 특히 젊은 여성에게 발생할 수 있습니다. 여기에서, 우리는 월경경 치료에 사용될 수 있는 평활근 이완제의 효능의 빠른 평가를 허용하는 간단한 생체 내 준비를 기술한다.

마우스 생식 기관 자발적 운동성 및 데이터 분석을 위한 MATLAB 기반 자궁 운동 추적 알고리즘을 평가하기 위한 Ex Vivo 방법

이 연구는 암컷 쥐와 관련된 실험 설계에서 고려해야 할 중요한 요소를 자세히 설명합니다. 더 큰 의미에서 이러한 데이터는 낙인을 줄이고 더 포괄적 인 진단 및 개입 도구의 개발을 돕는 역할을합니다.

질 세척을 활용한 설치류 에스트로우스 사이클 모니터링 : 정상주기와 같은 것은 없습니다.

이 프로토콜은 혐기성 배양 된 인간 질 박테리아를 사용한 질 식민지화의 마우스 모델을 제시합니다. 우리는 Gardnerella vaginalis에 초점을 맞추고 Prevotella bivia 및 Fusobacterium nucleatum에 대한 제안을 포함합니다. 이 프로토콜은 또한 질 접종 및 다른 혐기성 성장 박테리아의 실행 가능한 회복을위한 지침으로 사용될 수 있습니다.

혐기성 박테리아에 의한 쥐 질 집락화 모델

제시된 자궁 경부 조작 방법은 정관 수술을받은 수컷과 암컷을 번식시킬 필요없이 생쥐에서 가임신을 유도 할 수 있습니다. 비수술적 배아 이식과 비수술적 인공수정의 성공을 위해서는 가임신유도가 필요하며, 이 두 가지 모두 제시되어 있다.

비수술적 배아 이식 또는 인공 수정 전에 정관 수술을 받은 수컷 없이 암컷 마우스에서 가임신을 유도하는 행위

이 논문은 1-3분 이내에 95% 에탄올을 마우스 자궁에 주입하여 사망률이 매우 낮고 자궁 내 유착을 최소화하면서 신뢰할 수 있고 재현 가능한 얇은 자궁내막을 생산하기 위한 자세한 프로토콜에 대해 설명합니다.

얇은 자궁내막의 마우스 모델 구축

난소암의 Orthotopic 동물 모델은 더 나은 인간의 질병을 복제하기 때문에 암 진행 및 치료 종양 반응의 우리의 이해를 향상시킬 수 있습니다. 마우스 모델 루시페라제 - 표현 난소 종양 세포의 intrabursal 주사를 받게됩니다. 치료는 경구 gavage를 통해 관리합니다. 종양 성장에 의해...

생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

학습하세요 마우스 질 세척 및 크리스탈 바이올렛 염색을 이용한 비침습적 생식 주기 단계 확인 방법. 이 프로토콜은 호르몬 변화와 생식 건강 연구에 필수적인 도구를 제공합니다.

마우스 Estrous 사이클 스테이징 확인을 위해 질 세척, 크리스탈 바이올렛의 착색 및 질 Cytological 평가를 수행

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