Name: 트립신과 Passaging 색채 인간의 배아 줄기 세포 - 라인 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-10-12T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: 배우세요 트립신을 이용한 HuES 인간 배아 줄기 세포 패싱 기법으로 건강하고 미분화된 세포 배양을 유지하는 방법. 이 프로토콜은 핵형 이상 위험을 최소화하여 유전적 안정성을 보장합니다.

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일반 우리는 쉽게 처리하기 위해 주어진 시간에 더 이상보다 샘플을 해동하는 것이 좋습니다. 핸들러는 오랜 기간 동안 실내 온도와 낮은 CO2의 문화를 떠나지 않도록주의를 기울여야한다. 라이브 세포의 모든 원심 분리는 상온에서 5 분 500-600 XG에서 이루어집니다. MEFs (마우스 배아 피더 세포) <ol><li> 37 사전 따뜻한 MEF 미디어 ° C. -80에서 MEF의 약병을 제거 ° C 즉시 잠수함 37 ° C 물 욕조에서 튜브의 아랫부분. 세포는 80 % (왼쪽 작은 부분 냉동) 해동되기 전에는 30~45초 정도 걸릴 것입니다. </li><li> 신속 튜브는 층류 후드에 가지고 70 %의 알코올로 아래로 스프레이하고, 사전 예열 미디어 세포를 전송할 수 있습니다. </li><li> 이전 준비 접시에서 젤라틴 솔루션을 대기음. </li><li> 여섯 우물의 각에 드롭 현명한 방식으로 MEF 솔루션의 나누어지는 2 ML. 잘 대해 균일하게 MEFs를 배포해야합니다. MEFs가 번호판에 첨부할 수 있도록 밤새 MEF 판, 그리고 37 ° C 배양기에서 개최 날짜입니다. </li><li> 6 시간 만에 MEFs는 접시에 첨부됩니다. MEF 접시 도금 후 24~48시간를 사용하는 것이 좋습니다. 사일 넘어 섭니다 MEF 접시를 사용하지 마십시오. </li><li> 사전 따뜻한 색채의 미디어와 0.05 % 37 트립신 / EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) ° C 후드 아래 prelabel 한 무균 50 ML 원뿔 관. </li><li> 조심스럽게 문화의 색상 미디어 분할 수 대기음. 부드럽게 1X 인산 버퍼 용액 (PBS) 당 우물의 2mL와 우물 씻으십시오. PBS를 대기음. 잘하는 0.75 ML 0.05 % 트립신 / EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)을 추가합니다. </li><li> 뚜껑을 교체하고, 4X 배율에서 세포를 관찰합니다. 색상의 식민지를 둘러싼 MEFs은 철회하기 시작한다. MEFs이 충분히 반올림과 색채의 식민지의 경계 힘든 때 보닛에 접시를 반환합니다. 이 과정은 전혀 이상 10 분 또는 세포 다시 성장하지 않습니다보다 약 5 분을 받아도됩니다. </li><li> MEF의 monolayer 완전​​히 (monolayer은 끈적하고 한 조각에 남아있을 수 있습니다) 분리 때까지 부드럽게, 우물의 바닥 세척, 아래로 피펫합니다. </li><li> 추가 색상 미디어를 포함하는 50 ML 원뿔 튜브에 세포 현탁액을 전송합니다. 5 분 대한 500xg 세포의 튜브를 스핀, 세포 펠렛을 방해하지 않도록주의, 미디어를 대기음. </li><li> MEFs의 새 접시에 접시하려면 추가적인 색채 미디어로 세포의 적절한 결정 볼륨을 추가하고 자동 피펫으로 용액에게 5-7 번 피펫. </li><li> MEFs의 새로운 접시에서 MEF 미디어를 제거합니다. </li><li> 나누어지는 잘 대해 균등하게 방울을 배포해야하는 각 잘하는 것이 현명 색상 솔루션 드롭. 접시를 떨지 않고, 신중하게 색채 식민지의 종자 수 있도록 야간 37 ° C 배양기에 세포를 반환합니다. </li><li> 분할 나오는 색채 세포는 해동 나오는 것과 유사하게 동작한다. </li></ol>

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</ol>

이 비디오에서 우리는 우리의 연구실에서 어떻게 정기적으로 통과 색채 인간 배아 줄기 세포 라인을 보여주었다. 효율적이고 정기적으로 분할하고 passaging는 건강한 인간 배아 줄기 세포 라인을 유지하기위한 필수적입니다. 트립신의 중재 통로는 색채 셀 라인의 중요한 장점이다 그러나, 그것은 이상의 문화를 trypsinize하거나 다시 플래팅 동안 단일 세포의 큰 비율을하지 않는 것이 중요합니다.

색상 미디어 651.5 ML KO - DMEM 500 ML PenStrep 6.5 ML GlutaMAXTM 6.5 ML NEAA 6.5 ML 2 - 메르 캅 토 에탄올 0.5ul KO 세럼 교체 65 ML Plasmanate 65 ML bFGF2 (10 NG / ML 최종) 0.65 ML

트립신과 passaging 색채 인간의 배아 줄기 세포 - 라인

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

이 비디오에서 우리는 우리의 실험실은 정기적으로 트립신과 색채 인간 배아 줄기 세포 라인을 통로 방법을 보여줍니다. 인간 배아 줄기 세포는 세포 배양의 유물이며, 높은 인구 doublings와 karyotypic 이상을 취득하는 경향이 있습니다. 적절한 passaging은 건강, undifferentiated, karyotypically 정상적인 색채에게 인간의 배아 줄기 세포 배양을 유지하기위한 필수적입니다. 첫째, 확장 문화 잔류 미디어와 세포 부스러기를 제거하기 위해 PBS에 씻어, 그러면 세포는 따뜻한 0.05 % 트립신 - EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)의 최소 볼륨 겹쳐 있습니다. 트립신은 최대 5 분 동안 세포에 남아있다, 그때 전지 부드럽게 2mL serological 피펫과 dislodged 수 있습니다. 세포 현탁액은 색채 미디어의 큰 볼륨과 수집 및 혼합이며, 그 세포는 부드러운 원심 분리에 의해 저장됩니다. inactivated 트립신 미디어 혼합물을 제거하고, 세포 사전 예열 색채 미디어에 resuspended 있습니다. 적절한 분할 비율 (일반적으로 1시 10분에서 1시 20분까지) 계산하고, 조사 마우스 배아 fibroblast 피더 세포 monolayer를 포함 1~2일 된 판에 다시 도금 세포. 새로 씨앗 색채 문화 플레이트가 48 시간에 대해 그대로 남아 있습니다 다음, 미디어 이후 매일 변경됩니다. 이 karyotypic 이상을 도입의 위험을 증가로 그것은 하나의 세포 현탁액로 trpsinize하지 않는 것이 중요합니다.

이 비디오에서 우리는 우리의 실험실은 정기적으로 트립신과 색채 인간 배아 줄기 세포 라인을 통로 방법을 보여줍니다.

트립신과 Passaging 색채 인간의 배아 줄기 세포 - 라인

본 영상에서는 본 연구실에서 trypsin을 사용하여 HuES 인간 배아줄기세포 라인을 일상적으로 계대 배양하는 방법을 시연합니다. 인간 배아줄기세포는...

이것은 어디에서 기술을 실행했습니까? 오, 내가 어디서 가르쳤어? 벨처.네.벨을 처음 가르쳤을 때, 저는 T.Yeah에서 여름을 보냈습니다.그리고 그것은 마치 우리가 그곳에서 연골 같은 것을 좋아했던 것 같았습니다. 그래서 저는 그곳의 사회 문화를 좋아했습니다. 그리고 홉킨스 대학에서 졸업반 때 다른 사람들과 함께 일했기 때문에 엔지니어링과 마찬가지로 시도하는 것이 훨씬 더 중요했고, 우리는 3차원 엔지니어링을 했습니다.

passaging-hues-human-embryonic-stem-cell-lines-with-trypsin

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연구

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생물학

이 동영상은 마우스 배아 fibroblast (MEF) 피더 세포에 인간 배아 줄기 세포 (hESCs)를 성장하는 방법을 보여줍니다. 3 부 1.

MEFs부터를 Matrigel하기 : MEFs의 면전에서 Passaging hESCs를

ESC의 차별은 셀 타입의 특정 구조의 변화와 염색질의 구성과 일치한다. 이러한 변화의 감지는 stemcellness 및 세포 분화를 정의하는 메커니즘에 중요한 통찰력을 제공합니다. 염색질 immunoprecipitation (칩)은 줄기 세포 분화를 기본 분자 메커니즘을 해부하다하는 소중한 방법을 나타냅니다.

인간 배아 줄기 세포에서 염색질의 Immunoprecipitation

이 동영상은 피더 세포가없는 조건에서 어떻게 피더에서 연속 통과 hESCs 세포가없는 조건에 인간 배아 줄기 세포 (hESCs)의 성장을 유지하는 방법을 보여줍니다. hESC의 확인은 pluripotency immunofluorescence 현미경으로 피더 셀없는 조건을 재배도 증명됩니다. 3 부 3.

MEFs에서 Matrigel 3 : Matrigel에 Matrigel에서 Passaging hESCs

Karyotyping 널리 유전 변경을 검출에 사용되는 간단하고 유용한 기술입니다. 우리가 문화의 유지 이러한 세포의 염색체 상태를 감시하기위한 인간 배아 줄기 세포의 염색체 보급 준비 단계 프로토콜에 의해 단계를 설명합니다.

Karyotyping를위한 인간 배아 줄기 세포의 염색체 확산 준비

우리는 작은 분자 기반 oligodendrocyte 전구체 세포 (OPCs)에 마우스 배아 줄기 세포의 차별 화를위한 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 차별화 후 30 일에 의해 고효율 Olig2 + NG2 + OPCs를 생성합니다. 우리는 또한 행동 잠재력을 불 수있다 "급상승"OPCs를 생성하는 방법을 설명합니다.

Oligodendrocyte 엽 성의 전구 물질로 배아 줄기 세포의 분화

특정 세포로 hESCs의 감독 차별은 재생 의학에 많은 관심을 생성했다. 우리는 결정을위한 간결하고 단계별 절차를...

기형 종의 형성에 의해 인간 배아 줄기 세포의 운명 매핑

마이크로 해부 explants 기술은 골격 근육 줄기 세포의 원천으로 청소년, 성인이나 배아 근육에서 proliferative 골격근 세포를 분리를위한 강력하고 안정적​​인 방법입니다. 유니 클리,이 세포는 clonally 생체내 이식에 사용되는 골격 근육 줄기 세포 라인을 생산하기 위해 파생되었습니다.

성인 및 배아 골격근의 Microexplant 문화 및 골격 근육 줄기 세포의 분리

이 프로토콜은 추가적인 외인성 보충 또는 hPSC 특이적 합성 하층(hPSC) 없이 젤라틴으로 코팅된 접시에 담긴 인간 태반에서 유래한 조건화된 배지만을 사용하여 인간 만능 줄기세포(hPSC)를 증식시키는 간단하고 효율적인 방법을 제공합니다.

소설 문화 모델은 인간 다 능성에 대한 태반 에어컨 미디어에서 젤라틴에 세포 전파 줄기

이 방법은 형광 태그 sarcomere 단백질을 가진 다능한 줄기 세포 유래 심근세포를 사용하여 sarcomere 단축을 검사하는 것을 이용할 수 있습니다.

형광 태그 사코레 단백질을 사용하여 다능줄기 세포 유래 심근 세포의 Sarcomere 단축.

인간 배아 줄기 세포(hESC) 및 인간 유도 만능 줄기 세포(hiPSC)의 효소적 또는 기계적 패시징과 관련된 한계를 피하기 위해 EDTA 매개 탈유착을 사용하여 인간 포피 섬유아세포의 피더 세포층에 유지되는 hESC 또는 hiPSC 콜로니를 수확하기 위한 빠르고 효과적이며 비용 효율적인 고수율 방법을 확립했습니다.

에틸렌디아민테트라아세트산 매개 탈접착에 의한 공급세포에서 인간 만능 줄기세포의 신속하고 비용 효율적이며 효소 없는 패스페이징

이 프로토콜은 유도만능줄기세포(iPSC)에서 인간 파골세포의 분화를 제시하고 파골세포 및 파골세포 전구체의 특성 분석 방법을 설명합니다.

인간 유도 만능 줄기 세포에서 파골세포의 분화 및 특성화

배우세요 트립신을 이용한 HuES 인간 배아 줄기 세포 패싱 기법으로 건강하고 미분화된 세포 배양을 유지하는 방법. 이 프로토콜은 핵형 이상 위험을 최소화하여 유전적 안정성을 보장합니다.

트립신과 Passaging 색채 인간의 배아 줄기 세포 - 라인

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