Name: 냉동 인간 ES 세포 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-10-12T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: 학습하세요 HuES 인간 배아줄기세포의 냉동 보존 프로토콜을 통해 세포 생존율과 분화 능력을 유지하는 방법을. 이 기술은 재생의학 연구에 필수적인 장기 저장 솔루션을 제공합니다.

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<ol><li> 건강, 기하 급수적으로 팽창 문화 달리 트립신 반응을 끄다 수 잔류 미디어를 제거하는 PBS로 씻어 있습니다. </li><li> 예열 0.05 % 트립신 - EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)은 다음 세포를 표지에 추가하고, 플레이트가 실온에서 5 분 위해 부화 허용됩니다. 이 기간 동안 세포는 반올림을 관찰하고, 식민지 접시 표면을 리프팅 수 있습니다. </li><li> 젠틀 반복 pipetting은 판 표면에서 세포 식민지를 제거합니다. </li><li> Trypsinized 세포가 남아있는 트립신을 담금질하기 위해 미리 예열 hES 세포 미디어를 포함하는 표준 원뿔 관에 배치하고 냈지 있습니다. </li><li> 전지는 매체 중 하나 ML 약 100 만 세포의 농도에서 성장 미디어를 resuspended 있습니다. </li><li> 세포가 적절하게 resuspended 후 얼음 차가운 냉동 미디어는 동일한 볼륨에 추가됩니다. </li><li> 셀 suspensions는 철저하게 혼합 동결 튜브로 aliquoted, 천천히 24시간 이상 투 - 80C 동결로 사용할 수 있습니다. </li><li> 냉동 세포가 장기 저장을 위해 액체 질소의 증기 단계로 이동하거나, 약 6 개월 -80에서 남아있을 수 있습니다. </li></ol><p> 참고 : 106 세포 / ML의 농도에서 같은 냉동 나누어지는가 10cm의 접시에 문화를 부활하기에 충분합니다. </p>

<ol>
	<li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts.">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li></ol>

<p> 우리는 냉동 색채 세포 라인에 대한 설명이 기술을 효율적으로 색채 셀 라인 또한 관심의 포유 동물 세포를 저장하고 부활을 위해 잘 작동합니다. 핵형의 이상이 발생할 수 있으며, 비정상적인 세포가 신속하게 라인을 대신할 수있는, hES 세포 라인 작업을 할 때 각각의 통과에 세포의 작은 비율을 동결하는 것은 중요한 고려 사항이다. 따라서, 냉동하는 것이 특정 구절에 대형 은행 이외의 모든 통로에서 분리는 매우 바람직합니다. </p>

<table><tbody><tr><td>HuES 배지</td><td>배지</td><td></td><td></td><td>총 651.5 mL를 만들기 위해 다음을 첨가한다: 500 mL KO-DMEM + 6.5 mL PenStrep + 6.5 mL L-Glut + 6.5 mL NEAA + 0.6 &amp;micro;L beta-mercapt&amp;#8211;thanol (14.3 M 스톡) + 65 mL Serum Replacement + 65 mL Plasmanate + 0.65 mL bFGF2 (최종 농도 ~10 ng/mL)</td></tr><tr><td>동결 배지</td><td>배지</td><td></td><td></td><td>80% FCS (fetal calf serum) + 20% DMSO (dimethyl sulfoxide). 4 &amp;deg;C에서 보관.</td></tr></tbody></table>

냉동 인간 es 세포

Freezing Human ES Cells

<p class="jove_content">여기 우리 연구소 색채 인간의 배아 줄기 세포 라인을 멈추 방법을 보여줍니다. 건강, 기하 급수적으로 팽창 문화 달리 트립신 반응을 끄다 수 잔류 미디어를 제거하는 PBS로 씻어 있습니다. 예열 0.05 % 트립신 - EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)은 다음 세포를 표지에 추가하고, 플레이트가 실온에서 5 분 위해 부화 허용됩니다. 이 기간 동안 세포는 반올림을 관찰하고, 식민지 접시 표면을 리프팅 수 있습니다. 젠틀 반복 pipetting은 판 표면에서 세포 식민지를 제거합니다. Trypsinized 세포가 남아있는 트립신을 담금질하기 위해 미리 예열 hES 세포 미디어를 포함하는 표준 원뿔 관에 배치하고 냈지 있습니다. 전지는 미디어, 하나 냉동 나누어지는가 10cm의 접시에 문화를 부활 충분합니다 그러한 농도 중 하나 ML 약 100 만 세포의 농도에서 성장 미디어를 resuspended 있습니다. 세포가 적절하게 resuspended 후 얼음 차가운 냉동 미디어는 동일한 볼륨에 추가됩니다. 셀 suspensions는 철저하게 혼합 동결 튜브로 aliquoted, 천천히 24시간 이상 투 - 80C 동결로 사용할 수 있습니다. 냉동 세포가 장기 저장을 위해 액체 질소의 증기 단계로 이동하거나, 약 6 개월 -80에서 남아있을 수 있습니다.</p>

<p class="jove_content">여기 우리 연구소 색채 인간의 배아 줄기 세포 라인을 멈추 방법을 보여줍니다.</p>

냉동 인간 ES 세포

본 영상에서는 본 연구실에서 HuES 인간 배아 줄기세포주를 동결하는 방법을 시연합니다. 지수적으로 증식하는 건강한 배양 세포를 PBS로 세척하여 ...를 제거합니다.

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

여기 우리는 우리의 실험실은 냉동 주식에서 색채 인간 배아의 줄기 세포 라인 문화를 시작하는 방법을 보여줍니다.

냉동 세포에서 시작 문화 : 인간 ES 세포

교양 포유 동물 세포는 세포 생물학 연구에서 광범위하게 사용됩니다. 이 동영상은 세포 및 냉동 주식을 복구할을 동결하고 저장하는 데 필요한 기본 기술을 설명합니다.

, 동결 해동 및 운송을위한 포장 셀

ESC의 차별은 셀 타입의 특정 구조의 변화와 염색질의 구성과 일치한다. 이러한 변화의 감지는 stemcellness 및 세포 분화를 정의하는 메커니즘에 중요한 통찰력을 제공합니다. 염색질 immunoprecipitation (칩)은 줄기 세포 분화를 기본 분자 메커니즘을 해부하다하는 소중한 방법을 나타냅니다.

인간 배아 줄기 세포에서 염색질의 Immunoprecipitation

제임스 톰슨 외 문화에 hES을 분리하고 성장 1998 년 기술을 개발 때문에, 나중에 사용하기 위해 및 냉동 주식에서 세포를 해동 및 확대 냉동 세포는 일상 hES 세포 배양에서 수행한 중요한 절차가있다. hES 세포는 동결 융해의 스트레스에 민감하고 있으므로 특별한주의가 있어야합니다. 여기 우리는 신속하게, 액체 질소 주식에서 hES 세포를 해동 마우스 배아 피더 세포를 도금하고, 천천히 장기 저장을 위해 그들을 오해해서 적절한 방법을 보여줍니다.

인간 배아 줄기 세포를 동결 융해

우리는 현행 cGMP(Good Manufacturing Practices) 지침에 따라 동물성 제품이 없는 시약을 사용하여 인간 양막 상피 세포(hAEC)를 분리하고 배양하는 프로토콜을 설명합니다.

분리, 냉동 보존 및 문화 임상 응용 프로그램에 대한 인간 양막 상피 세포

인간 만능 줄기 세포(hPSC)의 게놈 편집을 빠르고 효율적으로 수행할 수 있습니다. 여기에 제시된 것은 EGFP를 발현하고 항생제 내성을 도입하기 위해 AAVS1 세이프 하버 유전자 자리를 편집하여 예시된 바와 같이 hPSC를 유전적으로 조작하는 강력한 실험 절차입니다.

게놈 편집 인간 다 능성 줄기 세포의 설립 : 분리에 타겟팅에서

조건부 재 프로그래밍을 이용하여 인간의 소아 식도 상피 세포의 확장 결함이나 부상을 치료 및 치료 심사 분석을위한 저수지 역할을하는자가 이식을 위해 식도 구조 엔지니어링에 이용 될 수있는 셀의 환자 별 인구와 수사관을 제공합니다.

조직 공학 및 질병 조사에있는 사용을위한 소아 인간의 식도 상피 세포의 조건부 재 프로그래밍

프로토콜은 차별화에 생체 재료의 강성 효과 확산의 조사와 펩타이드, 없이 투입 했다 다양 한 뻣 뻣 함과 폴 리 비닐 알코올-co-itaconic 산 hydrogels를 준비 하 여 줄기 세포입니다. hydrogels 강성 가교에 의해 통제 되었다.

폴 리 비닐 알코올-Co-Itaconic 산 Hydrogels 이종 없는 조건 하에서 다양 한 강성에 인간의 Pluripotent 줄기 세포 문화

이 프로토콜은 인간 유도 만능 줄기 세포를 분화하여 얻은 뇌 미생물 내피 세포를 도출, 확장 및 냉동 보존하고, 전 생체 모델에서 혈액 뇌 장벽 특성을 연구하는 적응된 방법을 자세히 설명합니다.

인간 유도 만능 줄기 세포에서 뇌 미세 혈관 내피 세포의 파생, 확장, 냉동 보존 및 특성화

여기서 우리는 박테리아, 효모, 배양 세포, 분리 된 세포, 동물 및 인간 조직 및 바이러스를 포함한 생물학적 표본의 신속한 동결을 위해 샌드위치 동결 장치를 사용하는 방법을 보여줍니다. 우리는 또한 급속한 동결 후에 초박단면도를 위한 견본을 준비하는 방법을 보여줍니다.

전자 현미경 검사에서 생물학적 표본의 좋은 초구조 보존을 위한 샌드위치 동결 장치를 사용하여 급속한 동결

이 연구는 인간 줄기세포 유래 망막 색소 상피 세포의 효율적인 동결 보존을 위한 자세한 프로토콜을 제공합니다.

인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 최적 단계에서 동결 보존

학습하세요 HuES 인간 배아줄기세포의 냉동 보존 프로토콜을 통해 세포 생존율과 분화 능력을 유지하는 방법을. 이 기술은 재생의학 연구에 필수적인 장기 저장 솔루션을 제공합니다.

냉동 인간 ES 세포

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