Name: 마우스의 제어 자궁 경부 열상 상해 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: 배우세요 마우스 척수 절단 손상 모델을 정확하게 만드는 방법을. 진동 블레이드와 척추 고정 장치를 사용하여 재현성 높은 손상을 생성하고, 축삭 재생 및 척수 손상 치료 연구에 활용할 수 있습니다.

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이 장치의 개발은 LISA (주), 루이스 빌, 켄터키에 의해 지원되었다. 우리는 또한 노턴 의료, 루이스 빌, CBS에 KY, 그리고 NIH NS050243, NS052290 및 XMX에 NS059622의 지속적인 지원을 인정합니다.

1. 척추 안정제 동물 준비 및 신청 마우스 자궁 경부 척추 ventrally 같은 측면보기에서 볼 오목이다. C3에서 T1의 극돌기 과정은 작고 부서지기 쉬운이며, 일반적으로 3,4 설명 된대로 따라서 척추 안정화에 적합하지 않습니다. 우리는 척추 안정화 측면면 고정을 수행하는 것이 좋습니다. 고정 장치는 측면 각면에 고정 마우스와 두 개의 조정 가능한 스테인리스 스틸 팔을 지원하는 U-모양의 금속 채널로 구성되어 있습니다. 이 대상 척추의 우수한 고정을 제공합니다. 척추 고정 후, 척추가 약간 척수의 더 나은 노출을 제공하기 위해 경추의 곡선을 평평하게 상승합니다. <ol><li> 집게, microscissors 2 쌍, 30 G 바늘, 봉합 바늘 홀더, 피부 클립, 그리고 클립 도포 2-3 페어가 다음과 같은 수술 도구를 소독. 척추 고정 장치를 소독. 마취케타민을 / Xylazine (100 ㎎ / 10 ㎎ / ㎏)의 복강 칵테일을 사용하여 마우스를 thetize. 마우스의 목에서 머리를 면도. </li><li> 포비돈 - 요오드 용액과 70 % 알코올로 피부 클렌징 후, 가열 패드로 따뜻하게 운영 테이블 위에 마우스를 이동합니다. 각막 건조를 방지하기 위해 안과 연고와 동물의 눈을 커버. </li><li> 마취 (마우스 꼬리 핀치에 응답하지 않을 때 도달)을 유도 한 후, 아래 경추의 피하 지방 패드에 후두부에서 경부 정중선의 피부 절개를합니다. 배율에서, C2에서 승모근 근육 사이의 중간 선 절개를 수행하고 semispinalis의 capitis 근육을 분할합니다. submuscular 지방 패드의 신분을 올바른 레이어의 박리를 용이하게합니다. </li><li> 신뢰할 수있는 랜드 마크 역할을하는 T2 극돌기에 꼬리 쪽 정중선 근육 절개를 확장합니다. T2의 척추에 붙어있는 근육을 잘라 T2의 연골 부분을 제거극돌기. </li><li> 마이크로 가위를 사용하여 T2 엽층을 통해 C2에서 paraspinal 근육을 해부하다. 근육의 해부는 가시가 프로세스에 인접한 시작 패싯 관절 양측 확장합니다. 출혈을 최소화하기 위해 가시가 프로세스와 엽층 (골막 층)에서 바로 옆 근육을 분리합니다. 측면 측면이 노출 된 후, LISA 단계의 U 형 채널에 마우스를 놓습니다. </li><li> 양측 노출면 아래의 스테인레스 스틸 팔을 연결합니다. 팔 장소에 일단 척추를 고정화하는 강철 팔 나사를 조입니다. 이 대상 척추의 확고한 고정을 유지하고 우수한 노출을 제공합니다. 팔은 척추의 정확한 수평 방향을 제공하기 위해 조정할 수 있습니다. </li><li> 경질의 기초가 노출 C5와 C6 사이의 인대 flavum을 절개. 층간 공간 사이 microscissors가에 배치되는을 통해 작은 durotomy을 만드는 30 G 바늘을 사용durotomy을 확장합니다. 척수는 이제 통제 열상 병변을받을 준비가되어 있습니다. </li></ol> 2. LISA 장치를 사용하여 자궁 경부 척수 열상 <ol><li> 자궁 경부 척수 확대의 폭은 서로 다른 수준에서 다릅니다. 2.3 mm 플랫 블레이드를 사용하여 C5-6에서 지느러미 hemisection 병변을 확인하고 척수의 전체 폭을 커버하는 진동의 진폭을 설정합니다. 블레이드 파인 과학 도구 주식 회사 (포스터 시티, CA)에서 얻은 척수 열상 수정됩니다. 낮은 진폭 레벨이 코드 열상의 용이성을 감소하므로, ≥ 0.5 mm의 블레이드 진동의 진폭을 유지합니다. </li><li> LISA 무대에서 척추 안정화와 마우스를 놓습니다. 잎은 운동의 세 가지 범위의 수 마이크로 드라이버에 의해 제어의 위치와 LISA에 부착되어 있습니다. LISA과 기능의 구성 요소는 그림 1에 설명되어 있습니다. </li><li> 전원 블레이드 진동 스위치. magnif 이하노출 된 척수 진동 블레이드 바로 아래에 오도록 가스화, 마우스를 이동합니다. </li><li> 진동 블레이드쪽으로 마우스를 지원하는 단계 상승. 날이 거의 척수의 등쪽 정맥 닿을 때 &quot;0&quot;위치가 기록됩니다. &quot;0&quot;위치를 기준으로 척수 열상의 깊이를 측정합니다. </li><li> 마이크로 드라이버 컨트롤 무대 위치를 상승 : 마이크로 드라이버 손잡이의 360 ° 회전 0.25 mm로 무대에 올린다. 따라서, 0.75 mm 등의 hemisection 병변은 마이크로 드라이버 노브를 3 번​​을 돌려 만들어집니다. 병변의 정확도는 ± 0.01 mm입니다. 블레이드 척수를 괴롭히다하기 시작, 염분 관개와 수술 부위에 기름칠을. 척수의 절단 깊이는 수직 마이크로 드라이버에 의해 제어하고 시각적 인지도를 독립적입니다. </li><li> 소정의 깊이에 도달하면 진동 스위치를 끄십시오. 이상적으로, 진동 블레이드 L에 위치조직 변형의 증거가없는 esion 격차. 절단 날의 무대를 낮추고면 Q - 팁을 사용하여 수술 부위의 혈액과 염분을 제거합니다. 지혈은 &lt;1 분에서 자발적으로 발생합니다. </li><li> 척추 고정 장치에서 마우스를 놓습니다. 6-0 실크 봉합사 및 피부를 닫를 사용하여 paraspinal 근육 대략적인 스테인리스 미셸 클립을 사용하여 상처. </li></ol> 3. 동물 관리 <ol><li> 피하 의식을 회복하면서 적절한 수분을 유지하고 가열 패드에 복구 케이지에 마우스를 배치 식염수 1-2 ML의 총을 주입. </li><li> 물과 부드러운 음식 애드립을 제공하는 48 시간 후 수술을 위해 진통제를 관리 할 수​​ 있습니다. 척수의 등쪽 hemisection 다음 방광 치료에 대한 필요가 없습니다. </li></ol>

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</ol>

<ol><li> 여러 저자 (YPZ, XMX, CBS) 루이스 빌 임팩터 시스템, 주식 회사에 재무 적 이해 관계를 가질 </li><li> 저자 이순신 핑 장, 리사 방패, 크리스토퍼 B. 방패, 노턴 의료, 루이스 빌, 켄터키의 직원입니다. 다른 저자는 인디애나 대학, 인디애나 폴리스, 인디애나에 의해 고용됩니다. </li><li> 저자는이 문서에서 활용 시약 또는기구를 생산하는 회사로부터 자금 지원을받지 못했다. </li></ol>

척수 열상 부상 이전에 척추 안정화 극돌기 프로세스의 고정에 의해 획득되었다. 마우스 T1을 통해 C3에서 부서지기 쉬운 짧은 자궁 경부 추간판 프로세스 클램프의 경추 전만 곡선과 첨부 파일 모두 효과적인 척추 안정화를 방지합니다. 또한, 수동 제어 병변 6의 깊이에 변화를 만드는 중요한 조직의 변형을 일으키는 원인에 따라 활용 면도날이나 microscissors의 사용. 이 특정 경로의 축삭 재생을 연구, 특히 데이터의 오해로 이어질 수 있습니다. 지느러미 피질 기관이 완전히 lesioning시 그었되지 않은 경우 예를 들어, 절약 등의 피질 축삭이 재생 축삭으로 해석 될 수있다. 이러한 문제는 단일 레벨과 척수의 정확한 lesioning의 측면에 고정으로 척추 안정화 장치를 사용하여 극복 할 수 있습니다. 또한, 아를 사용하여고등학교의 주파수 진동 블레이드 인접한 척수를 분쇄하거나 contusing없이 선명한 열상을 생산하고 있습니다. 이 방법은 마우스 6 흉부 척수 열상을 생산 이후의 변경으로, 쥐 9,12,14에서 척수 열상 부상을 생산하는 데 사용되었습니다. 현재의 통신에서, 우리는 마우스 신뢰할 수있는 자궁 경부 열상 병변을 만드는 방법을 설명합니다. 척수의 전후 직경이 마우스 &lt;2mm입니다 경우에 한해, 열상 병변의 정확한 깊이는 신뢰할 수있는 실험 모델을 만드는 데 중요합니다. 병변의 깊이 최소한의 변화가 크게 축삭의 재생뿐만 아니라 부피 및 행동 연구를 평가하는 실험의 결과를 변경합니다. 우리는 절단 날의 위치를​​ 제어하는​​ 높은 정밀도 마이크로 드라이버를 사용하기 때문에이 방법을 사용하여 병변 깊이의 정확도는 ± 0.01 mm입니다. 이 방법의 불일치를 감소시켰다열상 SCI를 만드는 다른 모델 herent. 이 방법은 피질 기관, rubrospinal 기관, 그리고 지느러미 오름차순 기관으로 척수의 등쪽 반에있는 긴 척수 경로의 축삭 재생을 공부에 특히 유용합니다. 이 방법으로,이 섬유 책자 완전히이고 안정적​​으로 그었 수 있습니다. 이러한 관점에서, 데이터 해석의 오류가함으로써 SCI에 대한 실험 연구의보고의 신뢰성을 향상 최소화됩니다. 요약하면, 우리는 마우스 자궁 경부 척수 열상 손상의 생체 모델의 재현을 만드는 새로운 기술을 설명했습니다. 이 기술은 진동 블레이드를 사용하여 척수의 경부 측면과 열상의 고정으로 척추 안정화를 기반으로합니다. 마우스 6 등의 흉부 척수 열상 모델에서이 방법을 사용하여, 우리는 열상 깊이, 조직학 및 간 긴밀한 상관 관계를 보여행동 복구 할 수 있습니다. 이러한 기술은 다른 여러 실험실 2,12으로 신뢰할 수 발견되었습니다.

유전자 변형 생쥐의 여부는 SCI의 메커니즘의 역할을 특정 유전자의 영향을 식별 할 수있는 강력한 도구입니다. 열상 SCI이 부상 8 다음과 효과적인 치료를 제공 할 수 있습니다 치료제 또는 분자를 검사하는 데 사용되는 중요한 모델입니다. 생쥐의 열상 부상의 작성 중에 극돌기 프로세스의 정착으로 인해 척추 고정하기 5-11 유지 보수와 관련된 얇고 깨지기 쉬운 가시가 프로세스를 파악에 어려움 부정확 할 수 있습니다. 0.2 mm (마우스 척수의 직경의 10 %)의 열상의 깊이의 변화는 데이터의 잘못된 해석됩​​니다. 척수 열상 병변의 성격과 범위는 정확하게 10 정의해야합니다. 이 문제를 해결하기 위해, 우리는 척추 안정화로 구성된 새로운 기술을 개발하고 루이스 상해 시스템 장치에 연결 제조 블레이드를 사용했습니다 (LISA)의 열상 SCI 7,14를 생산. 이 부상은 열상 과정에서 조직의 변형을 피할 날카로운 진동 블레이드를 사용하여 만들어졌습니다. 열상의 깊이는 열상의 깊이를 제어하는​​ 마이크로 드라이버를 사용하여 0.01 mm의 정확도로 정확하게이었다. 절단 블레이드 원하는 열상에게 등고선 9를 만들려면 특정 모양과 폭에 주문품 있습니다. 우리는 1) 경추 노출, 2의 방법) 양측면 고정 장치를 사용하여 척추 안정화 기술, 및 진동 블레이드를 사용하여 자궁 경부 열상 부상 3)의 생성을 보여줍니다.

<table><tbody><tr><td>마우스 척추 안정제 </td><td>Louisville Impactor System</td><td></td><td>경추 안정화 및 노출</td></tr><tr><td>LISA 비브라나이프 </td><td>Louisville Impactor System</td><td></td><td>경추 척수의 열상 손상 생성</td></tr><tr><td>Spring Scissors Fine</td><td>Science Tools (미국)</td> <td>15013-12</td><td>피부 및 승모근 절개</td></tr><tr><td>Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools (미국)</td><td>15023-10</td><td>얇은 판에서 근육 분리</td></tr><tr><td>스프링 가위</td><td>Fine Science Tools (미국)</td><td>15002-08</td><td>경막</td></tr><tr><td>Graefe 집게 </td><td>절개 Fine Science Tools (미국)</td><td>11154-10</td><td>피부 수축</td></tr><tr><td>Dumont # 7 겸자 </td><td>Fine Science Tools (미국)</td><td>11274-20</td><td>근육 수축 (팁 수정) (Fig. A)</td></tr><tr><td>Dumont SS 펜치 </td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>11203-25</td><td>척추 고정 (팁 수정) (Fig.B)</td></tr><tr><td>30G 바늘 </td><td>Becton Dickenson</td><td>305106</td><td>경막 개구부 </td></tr><tr><td>생성 6-0 봉합 </td> 사 <td>Ethicon</td><td>8806H</td><td>근육 및 근막층 </td></tr><tr><td>밀착 상처 클립 </td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>12031-07</td><td>피부 폐쇄</td></tr><tr><td>Tribrom&#8211; thanol (Avertin)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>90710-10G</td><td>마취제</td></tr><tr><td colspan="4">Louisville Impactor System, Inc, 210 E. Gray St., Suite 1102, Louisville, KY 40202, (502) 629-5510, 이메일: <a href="mailto:cbshields1@gmail.com">cbshields1@gmail.com</a> Fine Science Tools (미국), Inc, 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404-1139, (800) 521-2109, E-mail: <a href="mailto:info@finescience.com">info@finescience.com</a> Becton Dickenson, 1 Becton Drive, Franklin Lakes, NJ USA 07417, (201) 847-6800 Ethicon, Route 22 West, Somerville, NJ 08876 1-877-ETHICON Sigma-Aldrich Corp. 세인트루이스, MO, USA, 63178 (314) 771-5765, 이메일: cssorders@sial.com<</td></tr><tr>td colspan="4">그림 A은 수정된 Dumont #7 겸자입니다. B는 개조된 Dumont SS 겸자입니다.</td></tr></tbody></table>

마우스의 제어 자궁 경부 열상 상해

Controlled Cervical Laceration Injury in Mice

유전자 변형 생쥐의 사용은 척수 손상 (SCI) 등 여러 신경 질환을 기본 분자 메커니즘에 대한 우리의 이해를 향상시킵니다. SCI의 열상 모델을 생산하는 데 사용되는 자유형 수동 제어는 종종 호감이나 타박상 구성 요소, 따라서 새로운 기술이 개발과 관련된 일관성 부상을 만듭니다. 자궁 경부 열상 SCI 우리의 모델) 척추면 고정, 2에 의해) 강화 된 척수 노출 자궁 경부 척추 안정화를 1 통합하여 자유 방법으로 고유의 어려움을 해결하고 있으며, 3) 척수의 재생 열상의 생성은 진동 블레이드를 사용하여 관련된 타박상없는 깊이 ± 0.01 mm의 정확도. 이러한 메스 나 가위 손 사용과 같은 SCI 열상을 만드는 표준 방법에 비해, 우리의 방법은 일관된 병변을 생산하고있다. 이 방법은 corticosp의 축삭 재생에 대한 연구에 유용원고 판, rubrospinal, 그리고 지느러미 오름차순 책자.

대상 척추의 고정은 마우스 척수의 정확한 병변을 생성하는 매우 중요합니다. 우리의 척추 안정화 장치는 짧은 가시가 프로세스와 마우스의 자궁 경부 척추의 복부 전만의 해부학 적 문제를 극복한다. 경추 잘 우리의 경추 안정제 (그림 2)를 사용하여 노출됩니다. 장치를 안정화 우리의 마우스 척추 경추 척수 절차 척추를 준비하는 신뢰할 수있는 기술입니다. LISA를 사용하여 병변의 깊이는 0.01 mm 6,13에 정확합니다. 정확한 열상은 병변 / 조직 인터페이스 (그림 3) 전혀 타박상가 발생하지 않습니다. 지느러미 hemisection 병변의 정밀도는 0.9 mm 깊은 열상 그냥 척수 1의 병적 인 부분에 의해 확인 각 시편의 중앙 운하를 넘어 확장되는 축삭 재생에 대한 연구에서 C57BL / 6 생쥐에서 증명되었다. 이 동물의 모든 운동은 회복이 척수 열상 부상을 다음과 에드. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/50030/50030fig1.jpg" /> 그림 1. (A) LISA 스테이지에 배치 척추 안정에 마우스. 진동 잎은 찢어진되는 척수쪽으로 이동합니다. 마이크로 드라이버 컨트롤은 무대 아래에 위치하며 적절한 위치에 마우스를 위치하도록 설계되어 있습니다. 수직 마이크로 드라이버는 병변의 깊이를 제어하고 틸팅 노브는 열상의 만곡을 방지하기 위해 척수의 수평면을 제어합니다. 온 - 오프 스위치는 진동 모터를 제어하고, 다른 노브는 진폭을 조정합니다. (B) 0.75 mm 등의 hemisection 열상 병변은 그대로 층 아치 아래에 잘라. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/50030/50030fig2.jpg" /> 그림 2. </st룽&gt; (A) U 형 채널과 두 개의 팔과 커넥터로 구성된 마우스 척추 안정. 마우스는 자궁 SCI에 사용되는 C 여물통과 흉부 SCI에 대한 T 저점에 배치됩니다. (B) 자궁 경부 척추는 측면 측면에서 팔을 배치 한 후 나사를 잠금으로써 집착합니다. 두라는 뼈의 제거없이 C5-6의 엽층, C6-7 및 C7-T1 사이 노출됩니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/50030/50030fig3.jpg" /> 그림 3. 0.5의 깊이, 0.8, 1.1 및 시상 뷰 (얼룩 크레 실 바이올렛과 에오신)에서 관찰 1.4 mm 네 개의 지느러미 척수 열상이 기술을 사용하여 정밀도 높은 수준을 묘사.

재현을 만드는 새로운 기술<em&gt; 생체 내</em마우스 자궁 경부 척수 열상 부상&gt; 모델이 설명되어 있습니다. 이 기술은 ± 0.01 mm의 정확도로 전류를 고주파 블레이드를 사용하여 척수의 경부 측면과 열상의 고정으로 척추 안정화를 기반으로합니다.

Use of genetically modified mice enhances our  understanding of molecular mechanisms underlying several neurological disorders  such as a spinal cord ...

본 실험의 전반적인 목표는 마우스 척수에 재현 가능한 열상 병변을 생성하는 것입니다. 이는 동물을 Louisville 손상 시스템 장치에 위치시킨 후 경추 층판의 후면을 노출시킴으로써 달성됩니다. 두 번째 단계로, 특수 설계된 고정 장치를 사용하여 마우스 척추의 표적 척추뼈를 고정합니다.다음으로, 황색인대를 제거한 후 층판궁 사이의 표적 척수를 확인합니다. 오실레이팅 블레이드와 마이크로 드라이버를 사용하여 0.75mm 깊이의 경추 배측 반절단을 정밀하게 생성합니다. 저희 실험실에서 개발한 이 기술의 주요 장점은 척수 열상 손상을 유도하는 매우 정확한 방법을 구축했다는 점입니다.가위나 메스와 같이 지금까지 사용되어 온 기술들은 척수 손상 모델을 만드는 과정에서 불완전하고 부정확하다는 문제를 야기했기 때문에 이 점이 중요합니다. 이제 우리는 척수 타박상, 절개 장치로부터 척수가 밀려나는 현상, 그리고 척수 손상 시 발생하는 과도한 출혈을 방지할 수 있는 방법들을 보유하고 있습니다. 이 기술을 사용함으로써, 척수 손상 깊이를 육안으로 추정하는 방식을 배제하고 매우 정밀한 방법을 구현할 수 있게 되었습니다.이 기술을 활용함으로써, 우리는 축삭 재생뿐만 아니라 척수 손상 치료법 발견에 있어 본질적으로 중요할 수 있는 열상 모델의 실험적 척수 손상 방법론을 혁신할 수 있을 것이라고 생각합니다. 본 절차의 시연은 저희 실험실의 신경외과 연구 과학자인 신경외과 전문의 Jang이 진행합니다. 먼저 포셉 2~3쌍, 미세 가위 3쌍, 30 gauge 바늘, 미세 URS 봉합사, 니들 홀더, 피부 클립 및 클립 어플리케이터를 포함한 다음의 수술 도구들을 멸균하여 절차를 시작하십시오. 그런 다음 척추 고정 장치를 소독하고, 케타민, 자일라진 또는 트리에탄올 칵테일을 복강 내 투여하여 마우스를 마취하십시오.다음으로, 마우스의 목 부위 털을 깎습니다. 포비돈 요오드 용액과 70% alcohol로 피부를 세척합니다. 그런 다음, 예열된 가열 패드가 있는 수술대로 마우스를 옮깁니다.각막 건조를 방지하기 위해 안구에 안연고를 도포합니다. 마취 유도 후, 후경부 정중선 피부를 절개하여 하부 경추의 피하 지방층까지 도달하게 합니다. 현미경 하에 C2 위치의 승모근 사이 피부 정중선을 절개하고, 반가시근을 외측으로 견인합니다.다음으로, 신뢰할 수 있는 지표가 되는 T2 극돌기까지 정중선 근육 절개를 조심스럽게 확장합니다. T2 극돌기에서 근육을 분리하십시오. 그런 다음 T2 극돌기의 연골 부분을 제거합니다.그 후, 마이크로 가위를 사용하여 C4부터 T2까지 양측 층판궁(laminar arches)에서 척추주위근을 박리합니다. 박리는 극돌기 인접 부위에서 시작하여 양쪽 층판궁을 지나면관절(facet joints)까지 확장됩니다. 외측 면관절이 노출되면, 마우스를 마우스 척추 고정 장치의 U자형 채널에 배치합니다.그런 다음 마우스 고정 장치의 스테인리스 스틸 암을 노출된 면의 양측 아래에 배치합니다. 암이 제대로 배치되면, 스틸 암의 엄지 나사를 조여 현미경 하에서 척추를 고정합니다. C5와 C6 층판궁 사이의 황색인대를 제거하여 층간 공간 사이의 하부 경막을 노출시킵니다.30 gauge 바늘을 사용하여 작은 경막 절개술(dur otomy)을 실시하고, 미세 가위로 경막 절개 부위를 넓힙니다. 이제 척수는 제어된 열상 병변(controlled laceration lesion)을 유도할 준비가 되었습니다. 이 과정에서는 척수 고정 장치와 마우스를 Louisville 손상 시스템 장치 스테이지 위에 배치하며, 이 스테이지에는 미세 드라이버로 위치가 제어되는 칼날이 부착되어 있습니다.오실레이터에 장착된 2.3 millimeter 평면 블레이드를 사용하여 C 5-6 추궁판 사이의 배측 HEMI 절단 병변을 수행하기 위해 세 가지 범위의 운동이 가능합니다. 진동 블레이드의 진폭을 0.5 millimeter로 설정하십시오. 진폭이 너무 낮으면 척수를 완전히 절단하는 것이 어려울 수 있기 때문입니다. 그런 다음 현미경 아래에서 블레이드 진동 스위치를 켜고, 마우스의 척수를 진동하는 블레이드 바로 아래에 위치시킵니다.다음으로, 마이크로 드라이버 컨트롤 레코드를 사용하여 스테이지를 진동 칼날 방향으로 올립니다. 칼날이 척수의 등쪽 정맥에 간신히 닿는 지점을 제로 지점으로 설정하며, 척수 절개 깊이는 이 제로 지점을 기준으로 측정합니다. 그런 다음 마이크로 드라이버 컨트롤로 스테이지 위치를 올립니다.마이크로 드라이버 노브를 360도 회전시키면 스테이지가 0.25 mm 상승합니다. 따라서 마이크로 드라이버 노브를 세 번 회전시켜 0.75 mm 깊이의 배측 반절단 손상을 유도하며, 블레이드가 척수를 절개하기 시작할 때 식염수 관류로 수술 부위를 윤활합니다. 미리 설정한 깊이에 도달하면 진동 스위치를 끄고, 마우스와 클램프를 지지하는 스테이지를 절단 블레이드로부터 내립니다.수술 부위에 식염수를 주입하여 혈액을 제거합니다. 보통 1분 이내에 지혈이 이루어지므로 면봉을 사용하여 해당 부위를 건조시킵니다. 마지막으로, 척추 고정 장치에서 마우스를 분리하고 스테인리스 스틸 스테이플로 피부를 봉합합니다.Michelle 클립입니다. 이 그림에 표시된 것처럼 암(arm)을 외측면 관절(lateral facet) 아래에 배치하고 엄지 나사를 잠가 경추를 고정하며, 뼈 제거 없이 C5-6, C6-7, C7-T1의 추궁판(laminae) 사이로 경막을 노출시킵니다. 여기에는 0.5, 0.8, 1.1, 1.4 mm 깊이의 4가지 배측 척수 열상(dorsal spinal cord lacerations)의 시상면 뷰가 표시되어 있습니다.이는 이 기술을 이용했을 때의 높은 정밀도를 나타냅니다. 척수 손상 모델 생성 시 고질적인 문제 중 하나는 경추 안정화의 부족이었습니다. 저희 연구팀이 개발한 척추 안정화 장치를 사용하여, 이제 완전히 고정된 경추 상태를 구현할 수 있게 되었습니다.이를 통해 척수 손상 모델을 이용한 척수 좌상, 척수 내 주입, 그리고 척수 내 세포 이식 등의 모든 척수 연구 방법에서 척수 손상 모델을 고도화할 수 있습니다.

controlled-cervical-laceration-injury-in-mice

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

쥐 실험 심근 경색을 유발하는 데 사용되는 외과 수술은 심장과 왼쪽 폐의 앞쪽 표면을 시각화하기 위해 세 번째와 네 번째 갈비뼈 사이의 왼쪽 thoracotomy로 시작합니다. 왼쪽 관상 동맥이 출혈도 잡았되어 가슴이 폐쇄되고 마우스가 저절로 복구 할 수 있습니다.

마우스의 관상 동맥 결합에 대한 수정 기술

출처: Gao, Z., et al. 교차 신경 전달 수술을 위한 척추 전 경로를 통한 직접 문합의 마우스 모델. J. Vis. 경험. (2021).이 비디오는 직접 경추 신경 재연결을 통해 마우스의 앞다리 움직임을 복원하는 방법을 보여줍니다. 그것은 신경근에서 절개된 오른쪽 C7 신경으로 인해 오른쪽 앞다리가 마비된 마우스로 시작됩니다. 왼쪽 C7 신경을 절단하고 척수전 경로를 통해 오른쪽으로 유도하고 오른쪽 C7 신경으로 봉합합니다. 그런 다음 수술 부위를 청소하고 닫습니다.

마우스의 전지 이동성 회복을 위한 경추 신경의 직접 재연결

우리는 재현성을 높이기 위해 좌전 하행 동맥 (LAD)에 결찰의 위치에서 더 명확 수 있습니다 마우스 모델에서 심근 경색 (MI)을 시뮬레이션하기 위해 실험 허혈 / 재관류 (I / R) 손상을 유발하는 수술 방법을 소개합니다 마우스에있는 MI 실험.

왼쪽 앞쪽에 내림차순 동맥의 결찰을 통해 심근 허혈 - 재관류 손상의 생쥐 모델

광혈전증은 척수에 국소 허혈을 유발하는 최소 침습적이고 재현성이 높은 시술이며 생쥐의 척수 손상 모델 역할을 합니다.

쥐의 척수 손상의 모델로 초점 국소 빈혈을 Photothrombosis는 유도

우리는 성인 생쥐에서 일관된 contusive 척수 손상을 일으킬 수있는 조직 변위 기반 논란 척수 손상 모델을 소개합니다.

마우스의 조직 변위에 근거한 척수 손상 모델

이 프로토콜은 척수 손상 연구에 대한 최소한의 부수적 손상과 함께 마우스 모델에서 안정적인 횡부 형 척수 손상을 유도하기위한 정확한 라미네절절제술을 만드는 방법을 설명합니다.

마우스에서 완전한 Transection 형 척수 손상의 유도

뇌타박상을 동반한 뇌골 출혈 및 신경 염증은 심각한 2차 뇌 손상을 유발할 수 있습니다. 이 프로토콜은 쥐 제어 피질 영향(CCI) 모델을 자세히 설명하여 연구원들이 출혈, 타박상 및 외상 후 면역 반응을 연구하고 잠재적인 치료법을 탐색할 수 있도록 합니다.

외상성 출혈 타박상 및 신경염증에 대한 전임상 제어 피질 영향 모델

여기서, 우리는 간단한 봉합사 및 클램프를 사용하여 일시적인 양측 공통 경동맥 폐색에 의한 망막 허혈의 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 심혈관 비정상으로 인한 망막 허혈의 병리학적 메커니즘을 이해하는 데 유용할 수 있습니다.

과도 양측 공통 경동맥 폐색에 의해 유도된 허혈성 망막 손상의 뮤린 모델

최소 침습 기술과 간단한 실험실 장치는 실험 동물에 대한 수술 손상을 줄이고 해부학적 형태 유지를 허용하여 척수 손상 모델의 재현성을 향상시킵니다. 이 방법은 신뢰할 수있는 결과와 재현 가능한 절차가 질병 배상 메커니즘의 조사를 용이하게하기 때문에 가치가 있습니다.

최소 침습 기술을 기반으로 한 마우스 타박상 척수 손상 모델 설정

마우스에서 중심 탯줄 증후군(CCS)을 시뮬레이션하는 본 프로토콜은 반복성을 개선하고 실험 동물에 대한 수술 손상을 최소화하여 해부학적 구조가 과도하게 파괴되는 것을 방지했습니다. 이 연구의 전략은 일관된 결과를 도출하여 부상 메커니즘에 대한 연구를 가능하게 하기 때문에 유리합니다.

C57BL/6J 마우스의 중심삭증후군 모델 확립

이 프로토콜은 마우스 모델에서 자궁 손상을 유도한 후 후속 임신 중에 다운스트림 분석을 수행하는 절차를 설명합니다.

외과적 자궁 손상과 후속 임신 결과에 대한 마우스 모델

배우세요 마우스 척수 절단 손상 모델을 정확하게 만드는 방법을. 진동 블레이드와 척추 고정 장치를 사용하여 재현성 높은 손상을 생성하고, 축삭 재생 및 척수 손상 치료 연구에 활용할 수 있습니다.

마우스의 제어 자궁 경부 열상 상해

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