2 혈관 폐색 / 저혈압 : 세계적인 두뇌 국소 빈혈의 쥐 모델

전반적인 목표는 뇌에서 일시적인 허혈 사건을 유도하여 심정지 및 소생술로 인한 뇌 손상을 시뮬레이션하는 것입니다. 첫째, 전신 저혈압은 대퇴 동맥에서 혈액이 빠져나감에 의해 유발됩니다. 다음으로, 경동맥을 폐색하여 뇌로 가는 혈류를 제한합니다.

뇌는 전신 혈압의 엄격한 조절에 의해 8분 동안 허혈 상태로 유지됩니다. 마지막으로, 클립을 제거하고 채취한 혈액을 다시 주입합니다. 궁극적으로, 신경세포 손상은 허혈 후 다른 시점에서 정량화할 수 있습니다.

심정지 및 소생술과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 전신 허혈과 관련된 사망률 및 동반 질환 없이 뇌허혈 사건을 시뮬레이션할 수 있다는 것입니다. 이 수술을 시각적으로 시연하면 재현성을 보장하기 위해 특정 절차상의 뉘앙스의 중요성을 강조할 수 있습니다.혈관 카테터를 만드는 것으로 시작합니다. 이렇게하려면 8 인치 길이의 폴리에틸렌 50 튜브를 자르고 한쪽 끝에 무딘 23 게이지 바늘을 삽입하십시오.

이 바늘을 3방향 스톱 콕의 한 포트에 고정하고 놓습니다. 반대쪽 포트에 있는 또 다른 3방향 스톱 콕. 스톱 콕과 카테터를 헤파린 식염수 용액을 전체적으로 실행하여 헤파린화했습니다.

다음으로, 10ml 식염수 주사기를 카테터에 수직 및 원위부의 스톱 콕에 연결합니다. 카테터 원위부의 스톱 콕을 압력 변환기 튜브에 연결합니다. 시스템에 식염수를 채우고 기포를 제거합니다.

지속적인 마취 투여를 허용하기 위해 마취된 쥐를 삽관합니다. 케타민의 IP 주사를 투여한 후 불소의 IS를 1.5%로 낮추고 절차 전반에 걸쳐 마취 수준을 모니터링합니다. 마취 후 목 부위와 허벅지가 복부와 만나는 오른쪽 골반을 면도하고 쥐를 가열된 담요 위에 누운 자세로 눕힙니다.

눈에 윤활제를 바르고 직장 체온계를 삽입한 후 베타딘과 70% 에탄올을 반복해서 바르며 절개 부위를 문지릅니다. 쥐 위에 수술장을 놓고 구멍을 뚫어 절개 부위를 노출시킵니다. 적절한 마취 깊이를 확인한 후 메스로 목을 따라 정중선을 절개하여 조직을 완만하게 절개하여 흉골설근과 흉골 유양돌기 근육에 도달합니다.

총경동맥이 보일 때까지 둔기 절개로 근육을 조심스럽게 분리합니다. 양쪽의 경동맥을 아래에 실크 봉합사를 통과시켜 분리합니다. 뒷다리 근육이 복부와 만나는 움푹 들어간 곳에서 혈관의 근막을 제거합니다.

두 번째 절개를 합니다. 서혜부 인대에 도달할 때까지 허벅지 근육을 따라 복부 근육 아래를 절개합니다. 대퇴골 신경혈관 다발을 노출시킵니다.

아래에 실크 봉합사를 통과시켜 대퇴 동맥을 조심스럽게 분리하고 5-7mm의 노출된 혈관을 남기는 근막을 제거합니다. 일단 노출되면 동맥의 원위 끝에 영구적인 매듭을 묶습니다. 동맥의 근위부 끝에 또 다른 실크 봉합사를 놓고 느슨한 매듭을 묶습니다.

다음으로, 근위부 끝의 봉합사에 견인력을 가하여 혈류를 막고 안과 가위로 혈관 상단을 가로질러 작게 절개합니다. 혈관 주입기를 사용하여 카테터 튜브를 혈관에 삽입합니다. 카테터가 제자리에 놓이면 혈관과 카테터 주위에 느슨한 매듭을 묶어 고정합니다.

카테터 튜브를 혈관 절개 부위를 지나 7-9mm 떨어진 정중선을 향해 혈관에 삽입합니다. 혈관에서 견인력을 제거하고 자연스럽게 정렬되도록 합니다. 헤파린 0.3ml를 투여한 후 혈액 응고를 방지하기 위해 소량의 식염수로 카테터에서 혈액을 씻어냅니다.

마지막으로 압력 모니터를 켜고 장비를 보정합니다. 시술 간의 일관성을 보장하려면 수술 중 심부 온도, 혈압 및 기타 생리학적 변수에 대한 자세한 기록을 유지하는 것이 중요합니다. 시작할 준비가 되면 헤파린 처리된 주사기를 카테터에 수직 및 근위부의 스톱 콕에 연결합니다.

타이머를 1분으로 설정하고 정지 수탉을 열어 혈액을 빼낼 수 있도록 합니다. 혈액을 천천히 빼내십시오. 1분 이내에 7-9mm의 혈액을 제거해야 합니다.

그런 다음 MAP는 허혈을 달성하기 위한 목표 혈압인 약 30mm의 수은으로 떨어져야 합니다. 다음으로, 지혈 클립을 경동맥에 바르고 8분으로 설정된 타이머를 시작합니다. MAP이 수은 30mm가 아닌 경우 즉시 혈압을 확인하고 올바른 수준에 도달할 때까지 천천히 혈액을 주입하거나 빼냅니다.

이 수준을 유지하기 위해 허혈 전반에 걸쳐 조정하십시오. 8분의 허혈 기간이 끝날 때 다시 주입하기 전에 혈액이 냉각되지 않도록 혈액을 섭씨 37도로 유지하십시오. 재관류를 위해 일찍 빼낸 따뜻한 혈액을 채취하고, 지혈 이식을 제거하고 혈액이 재도입되면 분당 약 2밀리리터의 속도로 천천히 혈액을 다시 주입하고, 대퇴 동맥에서 캐뉼라를 제거하고, 동맥 절개 부위에 근위부에 두 개의 별도 매듭을 고정합니다.

5.0 Vicryl 봉합사가 있는 역 절단 바늘을 사용하여 불연속적인 패턴으로 절개 부위를 봉합합니다. 상처가 봉합되면 이소 플루오린을 끄고 쥐가 인공호흡기를 떼어내고 진통제를 투여합니다. 자발적 호흡이 돌아올 때.

동물을 발관하고 가열된 회복 케이지에 넣습니다. 원하는 시점에 완전히 회복될 때까지 동물에게 고통의 징후가 있는지 모니터링하십시오. 허혈 후, 4 % 파라 폼 알데히드로 뇌를 고정하십시오.

트랜스 심장 관류 후, 뇌 샘플은 나중에 여러 부분으로 절단되고 능선 보라색 이미지로 염색됩니다. J. 미국 국립보건원(National Institutes of Health)에서 제공하는 무료 프로그램은 뇌 손상의 정도를 나타내는 생존 가능한 뉴런을 정량화하는 데 사용됩니다. 먼저 셀 카운터 플러그인으로 이미지를 엽니다.

다음으로, 표시 색상을 선택하고 스케일의 경계 내에 있는 뉴런의 수를 셉니다. 막대 뉴런은 뉴런 형태학에 대한 간단한 포함 기준에 따라 계산됩니다. 이는 미세아교세포, 성상세포 형태 또는 작은 원형 또는 긴 관 모양에 대한 큰 파라메탈 모양 또는 제외 기준입니다.

뉴런 수를 기록한 후 세포 계수기 창을 저장합니다. 각 동물의 모든 이미지의 평균은 CA 1 해마 손상의 정량적 측정인 단일 평균 뉴런 수를 제공합니다. 이 예는 재관류 후 14일 후 8분 동안 전반적인 뇌 허혈로 인해 발생한 손상을 보여줍니다.

여기서 가짜 수술 쥐의 해마는 온전한 ca 1을 포함하여 정상적인 형태를 나타냅니다. 대조적으로, 해마의 한 부위에 국한된 손상. 허혈 및 재관류가 있는 쥐의 경우, 여기에 표시된 것은 가짜 수술 대조 동물과 전반적인 뇌 허혈에 노출된 동물의 대표적인 계수 창입니다.

손상된 CA one은 미세아교세포와 성상교세포를 포함하는 염색을 보여주며, 이는 작고 관 모양 또는 눈물방울 모양으로 보입니다. 이들은 원형 또는 초금속 모양으로 큰 손상되지 않은 해마 뉴런과 구별 될 수 있습니다. 마지막으로, 이 데이터는 허혈성 동물의 CA one 영역에서 뉴런 수가 대조군에 비해 훨씬 낮다는 것을 보여줍니다.

이 비디오를 시청한 후에는 쥐에서 일시적인 전체 뇌 허혈을 생성하는 방법과 관련 손상을 정량화하는 방법을 이해해야 합니다. 성공하려면 섬세한 수술 기술과 개발 후 마취, 혈류역학 및 생리학적 매개변수의 엄격한 유지 관리가 필요합니다. 이 기술은 연구자들이 고통받는 환자의 전반적인 뇌 허혈 후 발생하는 대뇌 사건을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.

심정지 후 소생술.