Name: 배양 세포에서 염색체 준비 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: 배우세요 배양 세포에서 염색체를 분리하고 준비하는 방법을. 저혈압 용액과 고정액을 사용하여 G-밴딩 및 FISH 분석에 적합한 염색체 표본을 제작할 수 있습니다. 이 기법은 세포유전학 연구에 필수적입니다.

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이 논문에서 설명하는 작업은 패트릭 F. 테일러 재단의 자금에 의해 가능하게되었다.

1. 자기편 세포의 염색체 수확 <ol><li> 표준 프로토콜 <ol><li> 특정 세포 배양 조건에 따라 세포를 성장. 세포가 로그 단계 (80 % 컨 플루)에 도달 한 경우, 세포 배양 플라스크에 Colcemid의 10 μL / ㎖를 추가합니다. 2 × 10 6 세포의 최소 권장합니다. </li><li> 45 분 동안 5 % CO 2 배양기에서 37 ° C에서 세포를 품어. 멸균 피펫을 사용하여, 15 ML 원뿔 튜브에 세포에서 미디어를 전송할 수 있습니다. 옆으로 설정합니다. </li><li> 조심스럽게 플라스크에 HBSS 버퍼 2 ㎖를 추가하여 세포를 씻으십시오. 소용돌이 버퍼링 한 후 피펫을 사용하여 제거합니다. 폐기하십시오. </li><li> 이 플라스크의 전체 표면을 커버 것을 보장, 트립신 1 ML을 추가합니다. 약 2 분 동안 트립신의 세포를 둡니다. 세포의 대다수가 분리 한 후에 다시 셀에 원추형 튜브 미디어 피펫. </li><li> 15 ML 원뿔 튜브에 10 ㎖ 분량 씩에 세포 현탁액을 전송합니다.10 분 200 XG에 원심 분리기. 상층 액을 제거하고 펠렛을 재현 탁. </li><li> 원뿔 튜브에 남아있는 펠릿에 37 ° C에 데워진 된 0.075 M의 KCl 10 ㎖를 추가합니다. 의 KCl과 세포를 혼합하는 중간 속도의 소용돌이 관. </li><li> 10 분 동안 37 ° C에서 세포를 품어. 25 ℃에서 5 분 200 XG에 원심 분리기 과에 resuspend 펠렛 (약 0.5 ml의 유적까지) 뜨는을 제거합니다. </li><li> 소용돌이로 교반하면서 세포 : 조심스럽게 신선한 Carnoy의 정착액 5 ㎖ (빙초산, 메탄올의 비율은 3:1)를 추가합니다. 그런 다음 10 ㎖의 총 텍싱없이 정착보다 5 ㎖를 추가합니다. </li><li> 5 분 200 XG에 원심 분리기. 뜨는에 resuspend 세포를 제거합니다. 각 튜브에 정착의 5 ML을 추가합니다. </li><li> 5 분 200 XG에 원심 분리기. 뜨는에 resuspend 세포를 제거합니다. 각 튜브에 정착의 5 ML을 추가합니다. 세포는 지금까지 1 년에 4 ° C에 저장할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 의정서 수정 : 염색체 harvesti임파 세포 라인의 NG <ol><li> 특정 세포 배양 조건에 따라 세포를 성장. (사용은 세포가 배양되는 금액에 대해 적절한 플라스크). 세포가 로그 단계 (세포가 분할되어 대략 2 일 후)에 도달하면, 세포 배양 플라스크에 Colcemid의 10 μL / ㎖를 추가합니다. </li></ol></li><li> 의정서 수정 : 전체 혈액에서 염색체 수확 피토 헤 마글 루티 닌 (PHA)는 빨간색 신장 콩에서 유래 된 렉틴은, 인간 T-세포 (16)에 대한 강력한 유사 분열 물질이다. 72 시간 배양에 PHA의 첨가 후, 세포의 약 45 %는 S 단계에있다. 이 피크 유사 분열 활동을 대표하는, 염색체 연구에 수확하는 최적의 지점입니다. B 세포에게 17,18 분석시 등의 pokeweed (1-10 ㎍ / ㎖)와 같은 다른 유사 분열 물질이 사용될 수있다. <ol><li> 녹색 정상 나트륨 헤파린 튜브에 전체 혈액의 적어도 1 ㎖를 수집합니다. 수집 후 3 일 이내에 사용하십시오. RT UN에서 보관 혈액사용할 준비가 나타나기 전까지는. </li><li> 분취 L-글루타민 (20 % 소 태아 혈청, 1 % 페니실린 / 스트렙토 마이신, 1 % fungizone 및 1 % PHA)를 함유하는 완전 RPMI 매체 10ml에 전혈 0.25 밀리리터. 5 % CO 2와 37 ° C에서 문화. </li></ol></li><li> 의정서 수정 : 골수에서 염색체 수확 염색체 이상 클론의 관찰이 백혈병의 특정 유형에 대한 진단 할 수 있으므로 골수에서 세포 유전 학적 분석은 많은 악성 혈액 질환에 도움이됩니다. 염색체 연구는 또한 폭발의 위기와 치료에 대한 반응의 증상으로 질병의 진행을 평가하는 데 사용됩니다. 골수 세포는 활발하게 분열하고 있기 때문에, 어떠한 미토 겐 자극 9,19 필요 없다. 급성 백혈병의 경우 24, 48 시간 배양도 설정되어 있습니다. <ol><li> 녹색 정상 나트륨 헤파린 관에서 골수의 최소 1 ㎖를 수집합니다. L-글루타민 (2을 함유하는 완전 RPMI 매체 10ml에 골수의 분취 0.25 밀리리터0 % 소 태아 혈청, 1 % 페니실린 / 스트렙토 마이신, 1 % fungizone). 5 % CO 2와 37 ° C에서 문화. </li></ol></li></ol> 2. 슬라이드 준비 및 고체 염색 한 대표 슬라이드의 신속한 평가는 G-밴딩, FISH, CGH, 또는 SKY로 추가 절차를 계속하기 전에 수확의 품질에 대한 정보를 제공합니다. 일부 연구소는 고체 얼룩에 빠른 수확 및 염색체 평가를위한 세포를 선호합니다. 대안 적으로, 위상차 현미경은이 분석을 위해 사용될 수있다. 슬라이드는 유용한 습도가 약 50 % 일 때 제조 및 주위 온도 (20-25 ℃)된다. <ol><li> 25 ℃에서 5 분 200 XG에서 세포를 원심 분리기 만 0.3 ~ 0.5 ㎖의 유적까지 뜨는을 제거합니다. </li><li> 야간 부드럽게 약 45 °의 각도로 기울어 및 현탁액이 허용되는 슬라이드에 대해 2의 거리에서 세포 현탁액의 펠릿, 피펫 세 방울을 재현 탁슬라이드 가로 질러. 슬라이드에 신선한 Carnoy의 정착액의 하나의 큰 방울을 추가합니다. </li><li> 종이 타월에 슬라이드 뒷면을 건조 후 적어도 10 분 동안 건조 밖으로 슬라이드를 앉아. 슬라이드가 완전히 건조해야한다. </li><li> 신선한 지엠 사 (Giemsa) 염색 솔루션 (Gurr 버퍼와 지엠 사 (Giemsa) 얼룩의 비율은 3:1)를 준비합니다. 염색 랙에 슬라이드를 놓습니다. 지엠 사 (Giemsa) 염색 용액에 슬라이드 전체를 커버. 슬라이드가 5 분 동안 염색 용액에 남아 보자. 증류수로 슬라이드를 씻어 흘려 공기 건조 할 수 있습니다. </li><li> 4 글라스를 덮고 퍼 마운트로 봉입 방울과 슬라이드 커버 슬립을 추가합니다. 확실히 커버 슬립 아래에 기포가 없는지 확인합니다. 초과 글라스를 덮고 퍼 마운트로 봉입는 종이 타월로 제거 할 수 있습니다. </li><li> 10X 및 100X 확대에 따라 광학 현미경으로 세포를 분석 할 수 있습니다. 중기 세포가 풍부하고 잘 확산되는 경우에, 나머지 슬라이드는 다른 실험 절차를 위해 사용될 수있다. </li></ol> 3. G-밴딩 트립신과 지엠 사 (Giemsa) (GTG)를 사용하여 &lt;P&gt; 트립신 높은 전사 활동의 결과로 DNA의 지역에서 실 염색질 (euchromatin) 히스톤을 변성 단백질 분해 효소이다. 지엠 사 (Giemsa) 염색 후,이 지역은 빛 밴드로 나타납니다. 거의 또는 전혀 전사 활동 (이질)와 매우 응축 된 염색질은 트립신 보호의 히스톤의 큰 부분이있을 것이다, 따라서 지엠 사 (Giemsa) 염색 다음 어둡게 얼룩 것입니다. 그것은 처음에 G-밴드 하나의 슬라이드에 조건을 모니터링하고 필요한 경우 후속 슬라이드의 트립신의 타이밍을 조절하는 것이 필수적입니다. <ol><li> 4 코 플린 단지에 다음과 같은 솔루션을 추가합니다. 항아리 # 1 1X HBSS의 = 30 ㎖ 및 10 배 트립신 4 ㎖ (0.5 %) 1X HBSS의 항아리 # 2 = 50 ㎖ 항아리 # 3 = 1X HBSS 45 ㎖ 및 소 태아 혈청 5 ㎖ 1X HBSS의 항아리 # 4 = 50 ㎖ </li><li> 5 초 동안 단지 1 위의 각 슬라이드, 항아리 # 2의 빠른 헹굼을 담가, 적어도 30 초 동안 항아리 # 3 항아리 # 4 빠른 헹굼을 각 슬라이드를 떠나 다음 슬라이드를 건조 할 수 있습니다. </li><li> 청정제를 준비H 지엠 사 (Giemsa) 염색 솔루션 (Gurr 버퍼와 지엠 사 (Giemsa) 얼룩의 비율은 3:1). 염색 랙에 슬라이드를 놓습니다. 지엠 사 (Giemsa) 염색 용액에 슬라이드 전체를 커버. 슬라이드가 5 분 동안 염색 용액에 남아 보자. </li><li> 그들은 더러워졌다 동일한 순서로 증류수에 슬라이드를 헹군다. 슬라이드를 약 10 분 동안 건조하도록 허용합니다. 슬라이드가 완전히 건조해야한다. </li><li> 4 글라스를 덮고 퍼 마운트로 봉입 방울과 슬라이드 커버 슬립을 추가합니다. 확실히 커버 슬립 아래에 기포가 없는지 확인합니다. 초과 글라스를 덮고 퍼 마운트로 봉입는 종이 타월로 제거 할 수 있습니다. </li><li> 10X 및 100X 확대에 따라 광학 현미경으로 세포를 분석 할 수 있습니다. 첫 번째 슬라이드의 결과에 기초하여 슬라이드의 나머지의 트립신 타이밍을 조정한다. </li></ol>

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</ol>

우리는 다양한 인간에서 얻은 세포 유형, 붉은 털 원숭이, 쥐, 생쥐 11,20-22 등 다양한 생물의 세포에서 염색체 분리를위한 본 절차를 이용했다. 표준 프로토콜은 제공되지만, 특정 주요 단계와 변수는 세포의 이러한 다양한 유형의 조정해야 할 수도 있습니다. 몇몇 특정 단계 염색체 제제 및 결과의 최상의 품질을 보장​​하기 위해 G-밴딩 모두에 중요하다. 분석에 영향을 미칠 수있는 변수 중 하나는 Colcemid 배양 시간입니다. Colcemid의 부족 시간이 적은 중기 확산과 이상, 중복 염색체를 얻을 수 있습니다. Colcemid의 긴 배양 시간을 분석하기 어려운 짧고 두꺼운 염색체가 발생합니다. 또 다른 중요한 변수는 저장성 용액의 몰 농도이다. 0.075 M 염화칼륨 용액은 충분한 세포를 용균없이 확산 적절한 염색체을 수득 세포를 팽창한다. 추가 할 때혼합하면서 Carnoy의 고착성 용액을, 제 5 ml의 펠릿에 첨가되어야한다. 이 여분의 단백질 모두가 샘플을 저장하거나 슬라이드를 준비하기 전에 ...

염색체 분석은 염색체 불안정성과 유전 질환 및 악성 종양의 1,2,8,9로 이어지는 재 배열을 진단하기 위해 전 세계적으로 이용되는 기존의 기술입니다. 또한, 헌법과 암 획득 유전자 이상을 진단 및 연구에 대한 높은 해상도는 형광 제자리 교잡 (FISH)와 같은 고전적인 세포 유전 학적 절차 및 분자 유전 학적 방법의 조합, 비교 게놈 교잡 (CGH)을 달성 할 수 있습니다 그리고 스펙트럼의 핵형 분석 (SKY) 14, 15. 더 최근에, 이러한 기술은 줄기 세포 연구와 관련된 염색체 불안정성의 평가에 이용되어왔다. 이러한 장기 배양 된 배아 세포 (ES)와 다양한 생물의 성체 줄기 세포의 이수성으로 핵형 이상은 여러 실험실에서보고되었다. 최근의 증거는 어떤 세포주가 본질적으로 염색체 instabi하는 경향 것을 지원에 관계없이 배양 조건의 품 질. 확립 및 / 또는 인간, 마우스 또는 히말라야 줄기 세포주를 유지하면 이러한 이유로, 염색체 분석 품질 관리 프로세스의 일부로서 추천. 많은 보고서 배양 10-13 줄기 세포 및 악성 세포 또는 다양한 유기체의 염색체 안정성을 모니터링 루틴 세포 유전학 및 분자의 사용에 대한 관심의 증가를 설명한다. 이러한 프로토콜은 점점 그 배양 세포 (13)의 급속한 염색체 평가에 비유 전적 연구소에서 사용되고있다. 우리는 다양한 유기체에서 파생 된 임상 및 연구 목적으로 세포 모두에 적용 할 수있는 다양한 종류의 세포에서 염색체 준비를위한 우리의 기본적인 절차를 제시한다.

<table><tbody><tr><td>KaryoMAX Colcemid</td><td>Gibco</td><td>15212-012</td><td></td></tr><tr><td>HBSS 버퍼</td><td>Gibco</td><td>24020-117</td><td></td></tr><tr><td>0.5% 트립신 EDTA 10x</td><td>Gibco</td><td>15400-054</td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>버퍼 정제 "GURR"</td><td>Gibco</td><td>10580-013</td><td></td></tr><tr><td>Geimsa Stain</td><td>Ricca Chemical Company</td><td>3250-16</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 5810</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td>Caledon 실험실 화학 물질</td><td>6700130</td><td></td></tr><tr><td>빙하 아세트산</td><td>Krackeler Scientific Inc.</td><td>Tel.: 11-9508-05</td><td></td></tr></tbody></table>

배양 세포에서 염색체 준비

Chromosome Preparation From Cultured Cells

염색체 (염색체) 분석에 널리 염색체 불안정성의 검출에 사용된다. G-밴딩과 같은 현장 하이브리드 화 (물고기)의 형광 등의 분자 기술에 의해 다음 경우,이 분석은 하나 이상의 염색체를 포함하는 게놈 재 배열 부분의 이익 또는 손실을 포함 수차에 대한 개별 세포를 분석 할 수있는 강력한 기능을 가지고 있습니다. 인간의 염색체 이상이 약 1 160 명당 1, 2, 모든 유산 60 ~ 80 %가 발생하는 3,4, 사산의 10 % 2,5, 선천성 심장 질환 6 3-6 %를 개인의 13 % 불임의 경우 2, 발달 지연과 출생 결함 (7)을 가진 많은 환자에서. 클론 염색체 이상을 관찰 모두 진단 및 예후 중요성 8,9이 표시되었습니다로 악성 종양의 세포 유전 학적 분석은 정기적으로, 연구자와 임상의에 의해 사용된다.60, 염색체 분리는 유전자 치료에 대한 소중하고 인간이 아닌 영장류와 설치류 10-13를 포함하여 생물의 줄기 세포 연구. 염색체는 혈액 림프구, 피부 섬유 아세포, amniocytes, 태반, 골수, 종양 표본을 포함한 살아있는 조직의 세포로부터 단리 할 수​​있다. 그들이 가장 응축 때문에 더 명확하게 볼 수 있습니다 때 염색체는 유사 분열의 중기 단계에서 분석된다. 염색체 분리 기술의 첫번째 단계는 후속 anaphase 단계로 진행하는 세포를 방지하기 Colcemid 함께 인큐베이션 스핀들 섬유의 파괴를 수반한다. 세포는 그 다음 저장성 용액으로 처리하고 Carnoy의 고착성과의 팽윤 상태로 보존된다. 세포는 그 다음 슬라이드에 떨어 된 후 다양한 절차에 이용 될 수있다. G-밴딩이 특징 빛과 어둠 밴드를 만들 지엠 사 (Giemsa)로 염색 한 다음 트립신 처리를 포함한다. 같은 홍보염색체를 분리 ocedure는 원위치 혼성화 (FISH) 형광, 비교 게놈 혼성화 (CGH) 및 스펙트럼 핵형 (SKY) 14,15 같은 절차에 대한 세포의 제조에 사용될 수있다.

고품질 중기 스프레드 염색체 분석을 위해 필수적입니다. 성공적인 분석이 잘 확산 적합한 염색체 형태의있다 염색체를 얻을 수 있습니다. 제대로 G-밴드 염색체는 특성 밝은 부분과 어두운 줄무늬 패턴이 포함되어 있습니다. <img alt="그림 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50203/50203fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50203/50203fig1.jpg" /> 그림 1. 염색체는 평균 길이가되는 성공적인 염색체 확산, 잘 확산 쉽게 서로 식별 가능하고, 빛과 어둠 밴드 사이에 충분한 대비. 좋은 염색체 형태가 나타내는 모든 재배에 대한 개별 염색체 및 평가의 식별 가능 염색체 불안정.

염색체는 림프구 나 피부 섬유 아 세포 등 살아있는 세포에서 분리하고, 인간이나 쥐 등의 유기체에서 할 수있다. 이러한 염색체의 준비는 더 일상 G 밴딩과 같은 현장 하이브리드 화 (물고기)의 형광, 비교 게놈 교잡 (CGH) 및 스펙트럼 핵형 분석 (SKY) 등의 분자 세포 유전 학적 과정에 활용 될 수있다.

Chromosome (cytogenetic) analysis is widely used for the detection of chromosome instability. When followed by G-banding and molecular techniques such as ...

이 실험 절차의 전체적인 목적은 GB 밴딩 및 분자 세포유전학적 검사를 위해 염색체를 수확하고 준비하는 것입니다. 먼저, 세포를 로그 성장기까지 배양합니다. 그 다음 smid, 저장액 및 고정액을 사용하여 염색체를 수확합니다.슬라이드에 세포 현탁액을 떨어뜨립니다. 슬라이드 하나를 염색합니다. 염색체 표본 제작 상태를 모니터링하기 위해, 나머지 슬라이드들에 대해 GB banding 또는 분자 생물학적 기법을 진행합니다.GB 밴딩의 마지막 단계로, 광학 현미경 및 핵형 분석을 통해 염색체를 분석하십시오. 최종적으로 염색체와 핵은 핵형 분석 또는 FISH 분석에 사용될 수 있습니다. 제가 이 방법을 출판하기로 결심한 이유는 다양한 생물체의 여러 세포 유형에서 염색체 불안정성 검출 및 후속 분자 세포유전학적 검사를 요청하는 다른 연구자들의 수요가 매우 높았기 때문입니다.이 기술은 암을 포함한 많은 선천적 유전 질환의 진단과 궁극적으로는 예후 판단에 필수적인데, 이는 진단적 가치가 있는 염색체 재배열을 시각화할 수 있게 해주기 때문입니다. 이러한 질환들에 대해, 이 방법은 다양한 유형의 인간 세포에서 발견되는 염색체 재배열에 대한 통찰을 제공할 수 있습니다. 또한 Rhesus macaques, 쥐(rats) 및 마우스 배양 세포와 같은 다른 생물체의 세포에도 적용할 수 있습니다.80% 밀집도(confluency)에 도달한 2 million 개의 부착 세포에 10 µg/mL 농도의 용액 10 µL를 첨가합니다. 세포 1 mL당 Col을 처리합니다. 세포를 5% CO2 인큐베이터에서 37 °C로 45분 동안 배양합니다.그 다음 멸균 피펫을 사용하여 배양액을 15 milliliter 원심분리관으로 옮겨 나중에 사용하기 위해 보관합니다. 세포를 세척하려면 플라스크에 2 milliliter의 HBSS를 넣고 가볍게 흔든 후 버퍼를 제거합니다. 이어서 트립신 1 milliliter를 넣어 플라스크 바닥면 전체가 덮이도록 합니다. 대부분의 세포가 떨어져 나오면, 원심분리관에 보관해 두었던 배양액을 다시 세포 위로 피펫팅하여 넣어줍니다.세포 현탁액 10 milliliters를 15 milliliter 원추형 튜브에 분주합니다. 200 Gs에서 10분 동안 원심분리합니다. 상층액을 제거합니다.37 °C에서 10분간 배양한 후, 37 °C로 예열한 75 mM potassium chloride 10 mL에 펠릿을 재현탁합니다. 200 ×g에서 5분간 원심분리합니다. 25 °C에서 상층액을 0.5 mL만 남기고 모두 제거한 후, 펠릿을 조심스럽게 재현탁합니다.신선한 car noise 고정액 5 mL를 세포에 첨가하십시오. 그 다음, 고정액 5 mL를 추가로 넣고 200 Gs에서 5분 동안 볼텍스 원심분리하십시오. 각 세포 펠릿을 고정액 5 mL에 재현탁하십시오.세포를 4°C에서 최대 1년 동안 보관하십시오. 세포를 200 ×g에서 5분 동안 원심분리하십시오. 25°C에서 수행합니다.펠렛을 부드럽게 재현탁한 후, 상층액을 제거하여 0.3에서 0.5 milliliters만 남깁니다. 약 45도 각도로 기울어진 슬라이드 위에 약 2인치 거리에서 세포 현탁액 세 방울을 피펫으로 떨어뜨립니다. 그런 다음 현탁액이 슬라이드 표면을 따라 흐르도록 둡니다.슬라이드에 신선한 car noise 고정액을 한 큰 방울 추가합니다. 슬라이드 뒷면을 페이퍼 타월로 닦아낸 다음, 슬라이드를 꺼내어 완전히 건조시킵니다. 신선한 gim 유지 용액을 준비합니다.슬라이드를 염색 랙에 놓습니다. gim 유지 용액으로 슬라이드 전체를 덮습니다. 5분 후, 슬라이드를 증류수로 헹구고 배수한 다음 공기 중에서 건조시킵니다.슬라이드에 perm mount를 네 방울 가하고, 커버슬립 아래에 기포가 생기지 않도록 주의하며 커버슬립을 덮습니다. 페이퍼 타월로 과도한 perm mount를 제거합니다. 광학 현미경의 10배 및 100배 배율로 세포를 분석합니다.중기 세포가 풍부하고 잘 퍼져 있다면, 남은 슬라이드를 다른 실험 절차에 사용할 수 있습니다. 4개의 코플랜드 자(Copeland jar)에 처리 용액 50 milliliters를 각각 넣습니다. 그 후, 각 슬라이드를 1번 자에 5초 동안 담급니다.2번 병에서 슬라이드를 빠르게 헹굽니다. 3번 병에 최소 30초 동안 담가 둡니다. 4번 병에서 헹군 다음, 슬라이드를 건조시킵니다.신선한 GIM 유지 용액을 준비하십시오. 슬라이드를 염색 랙에 놓습니다. 전체 슬라이드를 GIM 유지 용액으로 5분 동안 덮어 둡니다.슬라이드를 염색한 순서와 동일한 순서로 증류수로 헹굽니다. 그 다음 최소 10분 동안 건조합니다. 앞서 설명한 대로 perm mount를 사용하여 커버슬립을 덮습니다.그 후 나머지 슬라이드들에 대해 광학 현미경으로 세포를 분석하십시오. 첫 번째 슬라이드의 결과에 기초하여 트립신 배양 시간을 조정하십시오.성공적인 분석을 통해 적절한 염색체 형태를 갖추고 잘 펼쳐진 염색체를 얻을 수 있습니다. 적절하게 GB 밴딩된 염색체는 특징적인 밝고 어두운 밴딩 패턴을 나타냅니다. 이 영상을 시청한 후에는 염색체 불안정성을 규명하기 위한 GB 밴딩 및 추가 분자 세포유전학적 검사를 위해 염색체를 수확하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.숙달되면, 이 수확 기술은 적절하게 수행될 경우 약 3시간 만에 완료할 수 있습니다. GB 밴딩 절차의 경우, 나머지 슬라이드에 GB 밴딩을 진행하기 전에 먼저 하나의 슬라이드에서 트립신 배양 시간을 테스트하는 것이 중요합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Karyotyping 널리 유전 변경을 검출에 사용되는 간단하고 유용한 기술입니다. 우리가 문화의 유지 이러한 세포의 염색체 상태를 감시하기위한 인간 배아 줄기 세포의 염색체 보급 준비 단계 프로토콜에 의해 단계를 설명합니다.

Karyotyping를위한 인간 배아 줄기 세포의 염색체 확산 준비

염색체 복제 타이밍 분석을위한 정량 방법 설명되어 있습니다. 방법은 형광와 함께 BrdU의 설립을...

형광등과 결합 염색체 복제 타이밍<em&gt; 현장에서</em&gt; 하이브리드

DNA 수리 경로는 게놈 무결성의 유지 보수 및 예방 돌연변이 및 암 필수적이다. 이 프로토콜의 목적은 중기는 텔로미어 DNA 반복위한 원위치 혼성화 (FISH)에 형광체를 사용하여 마우스 B 세포로부터 확산에 염색체 이상을 직접 관찰하여 게놈 불안정성을 정량화하는 것이다.

PNA-FISH에 의해 마우스 B 림프구에서 염색체 이상을 신속하게 분석

고도로 압축된 유사분열 염색질의 축합의 분자 메커니즘은 잘못 정의되어 있습니다. 당사는 HeLa 세포와 Xenopus laevis 난자 추출물에서 분리한 유사분열 염색질 클러스터를 기반으로 in vitro에서 응축 과정을 충실하게 재구성하는 cell-free 분석을 제시합니다.

셀 무료 분석은 유사 분열의 끝에서 염색질 Decondensation을 공부하기

프로토콜은 단일 및 고 복제 DNA 프로브의 FISH 검출에 적합한 빠른 공기 건조 낙하 방법으로 고품질 유사 분열 식물 염색체 확산을 준비하기위한 것으로 설명됩니다.

식물에서 물고기에 적합한 빠른 공기 건조 떨어 뜨리 염색체 제조 방법

이 프로토콜은 대기 입자상 물질로 치료 한 후 마우스 RAW264.7 대 식세포 관내에서 정량 및 염색체 이상 특성화를위한 기술을 설명한다.

를 사용하여 주변 입자상 물질에 의한 염색체 수차 분석<em&gt; 체외</em&gt; 시스템

이것은 후속 proteomic 분석에 대 한 가교 된 chromatin의 순서 특정 캡처에 의존 하는 특정 대상 loci에 새로운 상호 작용 하는 DNA 단백질을 식별 하는 방법. 잠재적인 바인딩 단백질도 세포 수정에 대 한 사전 지식이 요구 된다. 처음에 효 모에 대 한 개발, 기술은 지금 되었습니다 포유류 세포에 대 한 적응.

교 잡의 적응 포유류 세포 단백질 Chromatin 관련 단백질의 캡처

DNA 후광 제제와 형광 in situ 하이브리드화를 결합하면 뉴클레오스켈레톤과의 게놈 상호작용에 대한 고분해능 분석이 가능합니다. 부착된 게놈은 추출된 잔류 핵 내에 위치한 혼성화된 형광 신호를 유도하는 반면, 부착되지 않은 게놈은 잔류 핵을 둘러싸고 있는 DNA의 후광에 있습니다.

전체 염색체, 텔로미어 및 유전자좌를 밝히기 위한 DNA Halo Preparations의 형광 In Situ 혼성화

Hi-C 3.0은 포름알데히드 및 디숙신이미딜글루타레이트 가교결합제를 DpnII 및 DdeI 제한 효소의 칵테일과 결합하여 신호 대 잡음비와 염색질 상호 작용 감지의 분해능을 높이는 개선된 Hi-C 프로토콜입니다.

길이 척도에 걸친 염색체 형태 포착

이 프로토콜은 위상 연관 도메인(TAD)의 경계 및 조절 및 기타 DNA 서열 요소 간의 장거리 염색질 상호 작용을 포함하여 고해상도에서 메가 기반 크기의 표적 게놈 영역의 3D 조직을 특성화하는 데 사용되는 Capture Hi-C 방법을 설명합니다.

Capture Hi-C를 통한 고분해능 3D 염색질 조직 해독

배우세요 배양 세포에서 염색체를 분리하고 준비하는 방법을. 저혈압 용액과 고정액을 사용하여 G-밴딩 및 FISH 분석에 적합한 염색체 표본을 제작할 수 있습니다. 이 기법은 세포유전학 연구에 필수적입니다.

배양 세포에서 염색체 준비

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