쥐의 만성 영양 주입의 모델

쥐의 혈당과 Intralipid 만성 주입을위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 이 모델은 기관의 기능과 생리 학적 매개 변수에 대한 영양 과잉의 영향을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

이 절차의 전반적인 목표는 쥐의 경정맥과 경동맥에 카테터를 삽입하여 포도당과 지질을 주입하여 만성 영양 과잉에 대한 모델로 삼는 것입니다. 이것은 먼저 카테터 삽입, 전신 마취 하에 경정맥과 경동맥을 통해 이루어집니다. 시술 후 쥐는 6일 동안 회복할 수 있습니다.

그런 다음 카테터는 케이지 상단에 장착된 밧줄과 회전대를 통해 주입 펌프에 연결됩니다. 마지막으로, 쥐는 포도당과 지질 용액을 주입합니다. 궁극적으로, 포도당 항상성에 대한 만성 영양소 과잉의 영향을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.

예를 들어, 유전자 모델과 같은 다른 모델에 비해 이 기술의 주요 장점은 영양 과잉에 대한 반응으로 베타 세포 기능의 초기 변화를 조사할 수 있다는 것입니다. 또 다른 장점은 순환계에서 포도당과 지질 내 또는 지질의 수치를 특이적으로 조절할 수 있다는 것입니다. 이제 우리는 이 기술을 사용하여 베타 세포 기능의 변화를 조사하지만 물론 인슐린 저항성과 같은 다른 생리학적 매개변수를 살펴보는 데 사용할 수 있습니다.

예를 들어, 제 실험실의 동물 건강 기술자인 그레이스 퍼거슨(Grace Ferguson)은 절차를 시작하기 전에 모든 수술 기구를 시술 최소 16시간에서 24시간 전에 오토클레이브로 멸균합니다. 살균을 위해 캐뉼레이션 튜브를 2.6% 글루트 알데히드에 넣습니다. 주입 조건당 4마리의 쥐를 사용하여 각 쥐의 무게를 측정한 다음 진통제와 항콜린제의 복용량을 계산합니다.

2-3%iso, 불소 및 산소로 쥐를 마취한 후 발가락으로 진정 수준을 확인합니다. 쥐를 꼬집어 뱃속에 눕힙니다. 귀 뒤에서 어깨 아래까지 면도한 다음 동물을 뒤로 눕히고 목 아래 부위를 앞발까지 면도합니다.

다음으로 클로르헥시딘 알코올과 요오드로 수술 부위를 3회 소독한 후 카프로펜과 글리코피롤레이트를 투여합니다. 쥐를 수술 부위로 옮긴 다음 무균 기술로 옮깁니다. 5단위의 헤파린 식염수로 채워진 1ml 주사기에 부착된 PE 50 캐뉼라를 사용하여 오른쪽 경정맥과 왼쪽 경동맥을 캐뉼러화합니다.회복 기간 동안 응고를 방지하기 위해 무딘 23 게이지 바늘을 통해 50 단위의 헤파린 식염수로 캐뉼러를 세척한 다음 다른 23 게이지 핀을 사용하여 각 캐뉼라를 닫습니다. 앞니 바닥에서 약 2.5mm 떨어진 곳을 잘라내고 쥐를 주입 재킷에 넣어 캐뉼라가 먹히지 않도록 합니다.

ISO 불소를 배출하려면 분당 1리터의 산소를 투여하십시오. 쥐가 완전히 깨어날 때까지 가열된 케이지에 쥐를 넣습니다. 수술 후 1일차와 2일차.

쥐의 체중을 측정하고, 글리코피롤레이트를 투여하고, 1일째에 2회, 2일째에 한 번, 수술 후 7일째에 텍스트 프로토콜에 따라 필요한 경우 추가 치료를 제공합니다. 주입을 위한 유속을 계산하기 위해 각 쥐의 무게를 잰 후 스프링 내부의 튜브 확장으로 경정맥의 캐뉼라를 파란색 스위블에 연결합니다. 캐뉼라를 5 단위의 헤파린 식염수로 씻어 내고 밧줄에 연결하십시오.

그런 다음 밧줄과 회전을 사용하여 쥐를 주입 시스템에 연결합니다. 이제 응고를 방지하기 위해 5단위의 헤파린 식염수로 캐뉼라를 한 번 더 씻어냅니다. 쥐가 밧줄에 적응하고 주입을 수행하기 위해 주입을 시작하기 전에 최소 24시간 동안 회전하도록 합니다.

각 쥐의 경동맥에서 0.15ml의 혈액을 추출하여 혈당을 측정하는 것으로 시작합니다. 경정맥 캐뉼라를 세척하고 두 캐뉼라의 응고를 방지하기 위해 50단위의 헤파린 식염수를 사용합니다. 혈액 표본을 2%EDTA를 포함하는 0.5 밀리리터 수집 관으로 옮기고, 그 후에 10, 2 분 동안 000 RBM에 원심분리기하고, 영하 20 섭씨 온도에 플라스마를 얼린다.

여기에 나열된 각 주입 조건에 대해 60ml 주사기 2개를 채웁니다. y 커넥터와 멸균된 coex T 22 튜브를 사용하여 각 솔루션 쌍을 함께 결합합니다. 그런 다음 주사기를 Harbor 33에서 주사기 펌프에 놓고 주사기 1은 펌프의 앞쪽 위치에, 주사기 2는 뒤쪽 위치에 놓습니다.

그런 다음 케이지 바닥을 변경하고 케이지 그릴 상단에서 모든 음식을 제거한 후 150g의 표준 차우로 교체하십시오. 그런 다음 주사기를 케이지 그릴의 스위블에 연결하고 주사기를 적절하게 세척합니다. 가장 최근에 측정된 체중을 사용하여 라인에서 갇힌 공기를 제거하려면 실험 내내 유지하고자 하는 사전 결정된 포도당 수치를 기반으로 포도당 주입 속도 또는 GIR을 시간당 밀리리터로 변환하는 Excel 파일을 사용하여 주입 유량을 계산합니다.

제조업체의 설정에 따라 60개의 주사기에 대한 유량을 관리하도록 펌프를 설정하고 주사기 1과 주사기 2에 대한 속도를 입력합니다. 그런 다음 펌프를 시작하십시오. 펌프를 시동한 후 스위블이나 캐뉼러에서 누출이 없는지, 주입 튜브가 꼬이지 않았는지 확인하십시오.

또한 튜브에 기포가 없는지 확인합니다. 3시간 동안 주입한 후 소량의 혈액 샘플을 채취하고 휴대용 혈당 모니터를 사용하여 혈당 수치를 측정합니다. 소량은 혈액량 및/또는 헤마토크릿의 변화를 방지합니다.

이 시간표에 따라 추가 혈액 샘플을 채취하십시오. 측정된 혈당 값에 따라 혈당을 데시리터당 220-250밀리그램으로 유지하도록 주사기 1의 속도를 수정합니다. 주사기 2의 비율은 유리 지방산을 리터당 1밀리 몰로 유지하기 위해 일정하게 유지됩니다.

24시간 주입 후 케이지 바닥을 교체하고 케이지 그릴에 남아 있는 음식의 무게를 잰다. UNE 부분을 케이지에 다시 넣고 72시간 동안 필요에 따라 주사기를 굽고 다시 채웁니다. 쥐에게 염증이나 불편함의 징후가 있는지 관찰하고 필요에 따라 적절한 치료를 시행하십시오.

주입이 끝나면 쥐는 고혈당 또는 u 혈당 고인슐린혈증 클램프 연구를 받을 수 있으며, 이후 안락사 또는 안락사시켜 조직학 또는 구멍 분리를 위해 췌장을 채취할 수 있습니다. 이 그림은 72시간 주입 기간 동안의 혈액, 포도당 및 지방산 수치를 보여줍니다. 설계에 의해 여기에서 볼 수 있듯이 포도당 수치는 주입 내내 데시리터당 약 220-250밀리그램으로 유지됩니다.

설치류는 내인성 인슐린 분비를 증가시켜 포도당 주입을 보상하는 강력한 능력을 가지고 있습니다. 따라서 혈당 수치가 상대적으로 안정적인 상태로 유지되기 위해서는 주입 과정에서 GIR을 증가시켜야 합니다. 그럼에도 불구하고 혈당 수치는 주입이 끝날 때까지 감소하는 경향이 있습니다.

또한, 차우의 체중 측정에 기초하여, 포도당과 지방질이 주입된 동물은 칼로리 영양소를 섭취하기 때문에 자발적으로 음식 섭취를 줄입니다. 일단 숙달되면 식염수를 주입한 대조군 쥐와 달리, 이 기술은 제대로 수행되면 쥐 한 마리당 30-40분 안에 수행할 수 있습니다. 따라서 이 절차에 따라 일반적으로 고혈당 또는 U 혈당 하이퍼 인슐린 빈혈 클램프를 수행하여 인슐린 분비 또는 인슐린 민감도를 각각 측정합니다.