Name: 에 신약 표현형을 평가 초파리 등산 분석 실험에 의한 도파민 뉴런과 뇌 전체의 면역 염색 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: 배우세요 Drosophila에서 도파민 뉴런 퇴행성 변화를 평가하는 등산 분석 및 면역 염색법을 통해 노화 관련 신경 퇴행 메커니즘을 연구하는 방법을 익히세요.

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우리는 도움이 토론에 대한 기술 지원 및 Gerasimos P. Sykiotis를 들어, 플라이 주식에 대한 크리스틴 머스을 레오 Pallanck 감사합니다. 이 작품은 MCB에 NIH 연수 부여 T32CA009363에 의해 투자되었다

1. 놀람에 의한 부정 Geotaxis의 분석 <ol><li> 원하는 유전자형의 파리를 선택, 그들을 20-30의 동물 동료의 그룹 무작위, 성별로 구분하고 2-3 일마다 새로운 음식 유리 병에 그들을 플립, 시험 비행의 각 집합 (즉, 연령 일치 동료, 하나의 집단 / 유전자형) 일주일에 한 번 이상. </li><li> 부정적인 geotaxis 테스트하기 전에 삼십 분, CO 2와 함께 파리를 마취와 두 개의 빈 음식 유리 병 (재료 표 참조) (실 치수 투명 테이프로 자신의 구멍에 결합하여 만든 사전 - 라벨 투명 플라스틱 튜브에 배치 : 19cm X 2.85 cm). 우리의 분석에서 우리는 일반적으로 25 파리 / 튜브를 사용합니다. 참고. 마취에서 회복 시간이 몇 시간 몇 분에서 변경 될 수 있습니다 (예 : O / N) 및 테스트 특정 유전자형에 최적화되어야한다. </li><li> 수직 계면에 압지 테이프 종이에 서로 다른 높이를 (1 - 20에서 cm) 표시전자, 벤치 수직. </li><li> 종이의 앞에 튜브를 넣 관은 모든 정렬되어야하고 정확한 높이 측정을 할 수 있도록 용지에 가능한 닫아야합니다. </li><li> 대 (피펫 팁 상자 등)에 종이 20-30cm의 거리에서, 관 앞에 디지털 카메라 ( &quot;특수 장비&quot;표 참조) 배치 &quot;영화&quot;옵션을 선택하고 시작 기록;이 시점에서 당신은 또한 연속적인 시험 사이의 시간을 추적하기 위해 타이머를 시작합니다. </li><li> 파리가 몇 초 (예 : 10 초)의 튜브를 눌러 튜브의 바닥에서 수집 할 수 있습니다. 이 단계는 전체 실험을하는 동안 (즉, 같은 기간, 같은 힘, 같은 연산자) 지속적으로 수행해야합니다. </li><li> 10 초 동안 디지털 카메라로 녹화 파리 &#39;운동. </li><li> 한 분 간격으로 단계 1.5-1.7 열네 번 반복합니다. </li><li> 데이터 분석 : <ol type="a"><li> 위에있는 파리의 수를 계산기록 영화의 육안 검사로 10 초 후에 2 센티미터 마크입니다. 참고 : 우리의 분석 조건에서 비행 &#39;부정적인 geotaxis 동작이 깜짝 놀라게 한 후 마지막으로 처음 10 초 이상하지 않은 (즉 파리는 그 놀라운 후 모든 방향으로 10 초를 움직이기 시작). 최소 거리는 2cm가이 시간 창에서 제어 파리 (THGal4 드라이버를 표현 즉, 1 주 이전 파리, 그림 1의 전설 참조) 올랐다. 따라서, 우리는 다양한 연령과 행동을 개시 한 후 유전자형 10 초를의 파리의 등반 활동을 분석하기위한 참고 자료로 2cm 마크를 사용했습니다. 이러한 매개 변수는 (다른 유전 적 배경 또는 실험실 조건 예 때문에) 테스트 파리의 동작의 차이점을 설명하기 위해 조정이 필요할 수 있습니다. 우리의 분석 조건에서, 모든 유전자형이 테스트는 컨트롤 유전자형의 파리 유사 더 수행 또는 알 수 있습니다. </li><li> 열 다섯의 결과의 평균을시험. </li><li> 튜브 (= % 등반 활동)에서 파리의 총 수의 백분율로 표현 평균적으로, 반복 수 (N) 각 유전자형 테스트를 독립적 인 동료의 숫자로 주어진다 </li><li> 시간이 지남에 따라 서로 다른 유전자형 사이의 통계적 유의성을 평가합니다. 이것은, 학생의 t 시험 (두 개의 유전자형을 비교하는 경우) 또는 GraphPad (GraphPad 소프트웨어, Inc.La 졸라 같은 상용 소프트웨어를 사용하여 Bonferroni 사후 검사 (다중 비교를 수행 할 때) 다음 2 방향 ANOVA 분석을 수행 할 수 있습니다 CA, USA). </li></ol></li></ol> 주의 우리는 RT에서와 동일한 조명 조건 하에서, 동일한 시간에 모든 분석을 수행 할 수 있습니다. 12 시간 / 다크 라이트 사이클 환경에서 파리를 유지 파리 &#39;전위의 행동에 circadian 리듬의 효과를 통제하는 것이 좋습니다. 2. 티로신 수산화 효소의 면역 형광전체 뇌 마운트의 분석 솔루션 및 버퍼 정착액 솔루션 : 인산 4 % 파라 포름 알데히드 (PFA)는 (PBS) 완충 식염수 버퍼 세척 : PBS의 0.1 %를 트리톤 X-100 0.1 M 트리스 - 염산, 산도 7.5, 0.15 M NaCl을 0.1 % 트리톤 X-100와 0.5 % BSA : 버퍼를 차단 설치 미디어 : Mowiol-DABCO (할로 E, 레인 디, 항체 - 실험실 설명서, 콜드 스프링 하버 연구소 출판부, 콜드 스프링 하버, 뉴욕, 미국, 10:418 (1988에 설명 된 프로토콜) 참조) 순서 <ol><li> 표피 왁스를 제거하기 위해 약 1 분간 70 % 에탄올로 가득 해부 접시에 파리를 넣습니다. </li><li> 전송 얼음처럼 차가운 PBS로 가득 또 다른 해부 접시에 날아간다. </li><li> 뇌를 해부 : <ol type="a"><li> 복부 측면까지 (: 제거 날개와 다리 옵션)와 함께 파리를 놓습니다. </li><li> 몸에서 떨어져 머리를 당겨 : 하나를 사용하는 집게의 집합뇌의 손상을 방지하기 위해 눈 아래 표피에 유지하기 위해 신체 다른 하나 만요 </li><li> 코를 제거합니다. </li><li> 코를 제거한 후 열려있는 왼쪽 슬릿의 반대편에 머리 표피에 보유하고 두뇌가 머리 캡슐에서 제거 될 때까지 반대 방향으로 잡아 당깁니다. </li><li> 뇌에서 모든 표피를 제거합니다. </li><li> 모든 공기 채워진 기관 조직을 제거, 이것은 다음의 부화 단계에서 부동의 두뇌를 방지 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> P-200 피펫 팁의 끝 떨어져 몇 mm를 잘라 0.1 % 트리톤 X-100/PBS 용액으로 평형 </li><li> 제조 된 P-200 피펫 팁 사용 4 % PFA / PBS의 0.5 ML로 가득 0.5 ML 에펜 도르프 튜브에 두뇌를 전송하고 절개가 완료 될 때까지 얼음에 보관하십시오. </li><li> 20 분 동안 RT에서 머리를 고정 : 랙 에펜 도르프 튜브를 넣고 nutator에 선반을 배치하여 부드러운 회전을 적용합니다. </li><li> 정착액을 제거P-1000 마이크로 피펫을 사용하여, 0.1 % 트리톤 X-100/PBS 0.5 mL를 반전하여 혼합을 추가하고 1 분 동안 품어 보자, 한번만 세척 단계를 반복합니다. </li><li> 두 번째 세척에서 버퍼를 제거하고, 0.1 % 트리톤 X-100/PBS의 0.5 ML를 추가하고 20 분 동안 RT에서 부화하자,이 단계를 두 번 반복합니다. </li><li> 세척 버퍼를 제거하고 두뇌 RT에서 1 시간 동안 (0.1 M 트리스 - 염산, 산도 7.5, 0.15 M NaCl을 0.1 % 트리톤 X-100와 0.5 % BSA) 차단 버퍼에 품어 보자. </li><li> 4 두 가지 일 ° C, 부드러운 회전 (단계 2.6. 참조), 차단 솔루션 안티 TH 항체의 1:100 희석 ( &quot;특정 시약의 표&quot;참조) 두뇌를 품어. </li><li> 단계 2.7을 세척 반복합니다. 2.8 .. </li><li> 부드러운 회전, 4 ° C에서 이틀 동안, 차 antibodyin 차단 솔루션의 1:200 희석 두뇌 평형. </li><li> 단계 2.7을 세척 반복합니다. 2.8 .. </li><li> 그림 2a에 도시 된 바와 같이 장착 슬라이드를 준비 <ol type="a"><li>체크인 yyyy 2 커버 유리 (24 X 60mm, 아니. 1.5)의 설치 미디어의 X 25 μL 상품 가격이 할인되었습니다. </li><li> 장소에 설치 매체 슬라이드의 중간에 간격을두고 건조하게 두 개의 덮개 유리 (크기 18 X 18mm, 아니. 2). </li></ol> 참고.의 공 초점 현미경의 무대에 샘플 홀더를 확인합니다. 당신은 끝 하나 (매니큐어와 테이프 사용)에 22 X 22mm 1.5 커버 유리를 부착하여 커버 유리에게 25 X 75mm 슬라이드의 같은 크기를 만들 수 있습니다. </li><li> 세척 버퍼를 제거, 설치 미디어의 50 μl를 추가하고 두뇌가 위아래로 pipetting에 의해 그것과 평형 할 수 있습니다. </li><li> 컷 P-200 피펫 팁 (단계 2.4 참조) 두 coverslips를 사이의 공간에서 슬라이드에 두뇌를 전송하고 아무 coverslip에 그들을 커버를 사용. 1.5 (그림 2A 참조; 방향에 슬라이드 두뇌 7 참조). 참고 : 시료는 전방과 포스 모두 시각화 할 수 있도록 두 개의 덮개 유리 사이에 장착되어뇌의 rior 쪽. </li><li> 모든 공기를 제거 한 구석에서 피펫; 설치 미디어 커버 유리 사이의 전체 공간을 채우기 건조하고 매니큐어와 씰 할 수 있습니다. </li><li> 공 촛점 현미경을 사용하여 1.0 μm의 스텝 크기 (Drosophila의 성인 뇌의 도파민 클러스터의 해부학 적 식별을위한 7 참조) Z-축을 따라 광 섹션의 시리즈를 취득 특정 클러스터에있는 도파민 신경 세포의 수를 평가합니다. </li></ol>

<ol><li>Bayersdorfer, F., Voigt, A., Schneuwly,, Botella, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine-dependent+neurodegeneration+in+Drosophila+models+of+familial+and+sporadic+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Dopamine-dependent neurodegeneration in Drosophila models of familial and sporadic Parkinson's disease.</a> Neurobiol. Dis. 40, 113-119 (2010).</li>
<li>Feany, M. B., Bender, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Nature. 404, 394-398 (2000).</li>
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</ol>

우리는 우리가 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

분석은 서로 다른 질병에 연결된 유전 배경 (5 위)뿐 아니라 노화 DA 신경 세포의 유지에 경로 또는 작은 화합물 신호, 특정 유전자의 역할을 연구하는 유용한 방법을 제공합니다 여기에 설명. 초파리의 놀람에 의한 부정 geotaxis 동작은 광범위하게, 특히 PD 연결된 돌연변이의 존재에있는 다른 유전 적 배경에서 DA 뉴런의 기능에 대한 읽기 아웃 기능으로 사용되었습니다. 다른 연구들 일부 불일치는 (더 자세한 논의 12) 관찰되었다. 이들은 적어도 각 관에서 시험 비행의 수 (파리 &#39;코호트 대 한 비행), CO 후 복구 시간 2 - 매개 마취 연속의 수 등 다양한 분석 셋업 및 조건에 부분적으로 기인 된 실험 (디의 예로서 4 11 참조fferent 분석 셋업). 따라서 이러한 매개 변수를 제어하는​​ 것이 수 있으며, 필요한 경우 특정 분석 요구 사항을...

여기에 설명 된 분석의 특이성은 도파민 뉴런 3의 특정 표현을 달성하기 위해 티로신 수산화 효소 유전자의 조절 서열을 이용 GAL4 플라이 라인의 사용에 의존하고 있습니다. 티로신 수산화 효소는 도파민 합성의 첫 번째 및 속도 제한 단계를 촉매. 생체 내에서 DA의 뉴런 (예 6을 참조)을 식별 할 수있는 좋은 후보 TH하는 도파민의과 성인 플라이 뇌 중복의 TH 면역 반응. 또한, THGal4의 발현 패턴 도파 탈 카르복시 화 효소 유전자의 조절 서열을 포함하고 DA 뉴런에서뿐만 아니라 유전자 발현을 드라이브 같은 DdcGal4 다른 GAL4 라인보다 더 구체적이고, 또한 3 glial 세포의 serotoninergic 뉴런 집합에 . Feany 및 벤더 (2000)은 최초의 PD 링크 된 인간 α-synuclein의 유전자의 팬의 연결을 표현 역의 진보적 인 손실을 가속 관찰초파리 rtle에 의한 부정 geotaxis 동작. 우리는 expressionof α-synuclein의 유전자 10를 구동하는 DA-신경 세포의 특정 THGal4 줄을 사용하여 유사한 결과를 관찰하고이에 NRF2 통로의 신경 역할을 연구하기 위해이 기능을 읽기 중 사용한 PD 14 초파리 모델. 여기에 설명 된 특정 분석은 2와 3에서 적응됩니다. 초파리 뇌 (예 : 11 7 참조) 공 촛점 현미경에 의해 뇌 전체 마운트에 시각화 할 수있는 적어도 5 개의 다른 클러스터에 배치 100 개 이상의 DA 뉴런 (PPL1, PPL2, PAL, PPM1 / 2, PPM3)가 포함되어 있습니다. 그러나 연령에 따라 신경 변성이 PD 연결된 유전자가 변이 된 곳에 파리에서 관찰 / 인간의 질병을 모델로 과발현이며 나이 9, 11과 초파리 뇌의 감소에있는 DA의 뉴런의 수 있는지 여부를 아직 논란이있다5. DA 신경 세포에서 인간의 α-synuclein의 발현은 영향을 가지고 있으며, 따라서, PD를위한 모델로 사용하고있다. 여기에서 우리는 DA의 뉴런은 세포 마커로 TH를 사용하여 마운트 전체 뇌의 계산에 대한 분석을 설명합니다. 이 분석은 13, 10에서 적응하고있다.

<table><tbody><tr><td>Rabbit anti-tyrosine hydroxylase antibody</td><td>Millipore</td><td>AB152</td><td></td></tr><tr><td>Donkey TRITC-labeled anti rabbit IgG antibody</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>711-026-152</td><td></td></tr><tr><td>Mowiol</td><td>Calbiochem</td><td>475904</td><td></td></tr><tr><td>DABCO</td><td>Sigma</td><td>D2522</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">장비</td></tr><tr><td>폴리스티렌 바이알</td><td>VWR</td><td>89092-734</td><td>28.5 x 95 mm</td></tr><tr><td>디지털 카메라</td><td>Canon</td><td>PowerShot A3100IS (모델)</td><td>12.1 메가픽셀 4X 광학 줌</td></tr><tr><td>유리 커버 슬립 번호 1.5</td><td>VWR</td><td>48366 205 48393 252</td><td>크기: 18 x 18 mm, 24 x 60 mm</td></tr><tr><td>유리 커버 슬립 번호 2</td><td>VWR</td><td>48368-040</td><td>크기: 18 x 18 mm</td></tr><tr><td>해부 접시</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>70543-01</td><td>크기: 30 mm O.D.</td></tr><tr><td>Dumostar No. 5 핀셋</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72705-01</td><td></td></tr><tr><td>입체 현미경</td><td>Carl Zeiss</td><td>Stemi 2000 (모델)</td><td></td></tr><tr><td>공간 현미경</td><td>Leica</td><td>SP2 또는 SP5 (모델)</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">재료 테이블.</td></tr></tbody></table>

에 신약 표현형을 평가<em&gt; 초파리</em&gt; 등산 분석 실험에 의한 도파민 뉴런과 뇌 전체의 면역 염색

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

초파리는 신경계 노화와 병적 인 퇴행성 과정을 연구하는 중요한 모델 생물이다. 실험 시스템으로 파리의 장점은 유전 온순함, 짧은 수명과 관찰하고 정량적으로 복잡한 행동을 분석 할 수 있습니다. 초파리 뇌의 특정 신경 세포 집단에서 질병에 연결된 유전자의 발현 등 파킨슨 병과 알츠하이머 5 인간 neurodegenerative 질병을 모델링하는 데 사용할 수 있습니다. 도파민 (DA) 신경 세포는 노화 인간의 두뇌에서 가장 취약한 신경 인구 중입니다. 파킨슨 병에 (PD), 가장 일반적인 퇴행성 운동 장애, DA 뉴런의 가속 손실 전위 함수의 진보와 돌이킬 수없는 쇠퇴에 이르게한다. 나이와 환경 독소에 노출뿐만 아니라, DA 뉴런의 손실은 코드의 특정 돌연변이에 의해 악화됩니다여러 유전자 또는 프로모터 영역. 같은 PD-연관된 대립 유전자의 식별은 생체 내에서 DA 뉴런의 신경 퇴행을 연구하는 모델로 초파리의 사용에 대한 실험적 기초를 제공합니다. 예를 들어, 초파리 DA 뉴런 recapitulates 인간의 질병의 일부 기능, DA의 뉴런의 예를 들어 진보적 인 손실 감소 전위 기능이있는 PD 링크 된 인간 α-synuclein의 유전자의 발현. 따라서,이 모델이 성공적으로 PD 8 잠재적 인 치료 목표를 식별하는 데 사용되었습니다. 전체 성인 뇌의 놀람에 의한 부정 geotaxis 응답 및 티로신 수산화 면역 염색에 따라 등반 분석이 DA 뉴런의 수를 모니터링하는 마운트 : 여기에 우리가 일반적으로 초파리의 DA 뉴런의 나이에 따라 신경 변성을 연구하는 데 사용 된 두 가지 분석을 설명 다른 나이에. 두 경우 모두, UAS t의 생체 내 발현DA의 뉴런에 특별히 ransgenes은 티로신 수산화 효소 (TH) 프로모터 GAL4 드라이버 3 호선, 10을 사용하여 얻을 수 있습니다.

우리는 분석이 PD (14)의 초파리 모델에서의 응력 보호 NRF2 통로의 역할을 연구하기 위해 여기에 설명 된 사용했습니다. 이 모델은 TH GAL4 드라이버 2, 10를 사용하여 DA 뉴런에서 인간의 α-synuclein의 유전자의 발현에 의존합니다. 그림 1은 TH GAL4 드라이버의 통제하에 서로 다른 형질 전환 유전자를 표현하는 남성 파리의 놀람에 의한 부정 geotaxis (등산) 분석의 대표적인 결과를 보여줍니다. 모든 유전자형은 시간이 지남에 따라 전위의 활동의 감소를 나타내고 테스트하지만, PD-링크, 인간 α-synuclein의 유전자가 나이 대조군 파리에 상대적으로 빠른 속도로 하락 (혼자 TH GAL4 드라이버)를 전시 표현 항공사 또는 공동 표현을 날아 NRF2 DNA 바인딩 파트너 MAF-S. 비슷한 결과는 여성 파리에서 관찰되었다. <p class="jove...

여기에 우리가있는 도파민 (DA) 신경 세포의 연령에 따라 신경 변성을 연구하기 위해 설립 된 두 가지 분석을 설명<em&gt; 초파리</em&gt; 등산 / DA 뉴런의 변성 및 전체 뇌 마운트의 DA 뉴런을 식별하고 계산하는 데 사용되는 티로신 수산화 효소 면역 염색의 기능 효과를 연구 할 수 있도록 놀라게 의한 부정 geotaxis 분석.

Drosophila melanogaster is a valuable model organism to study aging and pathological degenerative processes in the nervous system. The advantages of the ...

이 절차의 전체 목표는 형질전환 파리에서 도파민성 뉴런의 신경퇴행을 평가하는 것입니다. 이는 갈라 4 UAS 시스템을 통해 티로신 하이드록실라제 프로모터의 제어하에 원하는 형질전환 유전자를 먼저 발현하여 이루어집니다. 절차의 두 번째 단계는 원하는 유전형의 파리를 수집하고, 성별로 분리하고, 나이를 지정하는 것입니다.세 번째 단계는 부정적 지구 축을 통해 나이가 들어감에 따라 파리의 등반 활동을 테스트하는 것입니다. 마지막 단계는 다른 나이에 수집된 해부된 뇌에서 도파민성 뉴런의 수를 계산하는 것입니다. 결과적으로 결과는 동물의 운동 행동과 도파민성 뉴런 집단의 크기에 변화를 보여줄 것입니다.이 접근 방식의 함의는 파킨슨병과 같은 신경퇴행성 질환의 치료로 확장됩니다. 이 접근 방식은 신경 보호 유전자 및 약물 치료 개입을 식별하는 데 도움이 될 수 있습니다. 분석을 설정하기 위해 원하는 유전형의 나이가 일치하는 파리를 선택하십시오. 성별로 분리하고 무작위로 20~30 마리의 동물로 무리를 지어 랜덤하게 그룹화하십시오.각 무리는 통계적 샘플을 나타냅니다. 운동 행동에 대한 일주기 리듬의 영향을 제어하기 위해 12 시간 빛 어두움 주기에서 무리를 유지하고, 테스트 실에서 재현할 수 있는 온도로 유지하십시오. 두 세 일마다 무리의 용기를 교체하고 일주일에 한 번 일관된 시간에 테스트하십시오.테스트 30분 전에 각 무리를 이산화탄소로 마취하고 빈 식품 용기를 테이프로 연결하여 만든 라벨이 붙은 플라스틱 튜브로 옮기십시오. 파리는 5~10분 후에 깨어나야 하지만 마취로부터의 완전한 회복은 나이와 유전형에 따라 다르므로 최적화되어야 합니다. 이제 테스트 용기 뒤에 볼 수 있는 높이 스케일을 만듭니다.흰 종이에 1~20센티미터 간격으로 거리를 표시합니다. 그런 다음 스케일을 위치에 고정합니다. 이제 테스트할 튜브를 스케일에 정렬하여 약 20~30센티미터 떨어진 곳에 위치시킵니다.용기의 정사각형 뷰를 가진 디지털 카메라를 배치합니다. 튜브의 레이블과 스케일이 명확하게 보이도록 합니다. 위치가 정해지면 녹화를 시작하고 디지털 타이머를 시작합니다.이제 몇 초 동안 튜브를 두드리십시오. 모든 파리가 튜브 바닥에 모여야 합니다. 이 단계는 실험 전체에 걸쳐 동일한 지속 시간과 동일한 힘으로 일관되게 수행해야 합니다.1분 후, 두 번째의 15회 연속 시도에 대해 두 번째 시도를 다시 반복합니다. 15회 시도가 모두 완료되면 동영상을 시각적으로 검사하여 파리를 신선한 용기로 반환합니다. 코호트당 15회 수행된 각 시도에 대해 2센티미터 표시 이상의 파리 수를 계산합니다.10초가 경과한 후, 2센티미터 표시는 경험적으로 결정되며, 테스트되는 나이의 많은 부분에서 10센티미터 이후에 모든 제어가 교차한 거리입니다. 15회 시도에서 평균 점수를 얻고 코호트 구성원의 백분율로 표현합니다. 통계적 반복의 수는 각 그룹에 대해 테스트된 코호트 수와 같으며, 15회 시도에 의한 것이 아닙니다.다른 유전형 간의 통계적 중요성을 학생의 T-검정, anova 또는 기타 적절한 분석 방법을 사용하여 평가합니다. 파리를 70% 에탄올이 든 해부 접시에 약 1분 동안 넣습니다. 표피 왁스를 제거합니다.그런 다음 파리를 얼음 찬 PBS로 채운 또 다른 해부 접시로 옮기고 뇌를 해부하는 과정을 진행합니다. 파리를 배쪽이 위를 향하게 위치시키고 선택적으로

assessing-neurodegenerative-phenotypes-drosophila-dopaminergic

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

, 전위의 기능을 측정하는 학습을위한 행동 assays, 및 메모리...

에 시금 운동력이있는 사람, 학습, 및 메모리 적자 Drosophila</emNeurodegeneration의> 모델

이 비디오는 비행 이동을 정량화하는 간단한 방법을 설명하고 수행된 등반 분석을 보여줍니다. 비행 등반 분석은 음성 지오택시 반응에 의존하는 운동 기능의 일반적인 테스트입니다.

플라이 클라이밍 분석: Drosophila melanogaster에서 일반 운동을 테스트하는 방법

우리는 신경퇴행성 질환의 모델로 Drosophila melanogaster에서 최적화되고 저렴하며 신뢰할 수 있는 음성 지오택시 분석을 제시합니다. 경미한 운동 결함에 더 민감하기 때문에 이 분석은 잠재적인 유전적 상호 작용 및 약물 표적을 스크리닝하는 데 도움이 됩니다.

퇴행성 신경 질환의 초파리 모델에서 등반 결함의 정량 분석

초파리 널리 신경 퇴행을 연구하기위한 모델 시스템으로 사용된다. 이 프로토콜은, 뇌의 공포 형성에 의해 결정된 바와 같이, 정량 할 수있는 변성하는 방법을 설명한다. 또한 인해 하나의 샘플로 처리 및 절편 제어 및 실험 파리에 의해 실험 절차에 효과를 최소화 할 수 있습니다.

질량 조직학은에 신경 퇴행을 정량화하기<em&gt; 초파리</em

이 프로토콜 설명 해 부와 성인 초파리 melanogaster 의 immunostaining 뇌 조직. 특히,이 프로토콜은 신경 개발의 많은 측면을 기본 일반적인 원리를 밝히기 위해 정확 하 게 사용할 수 있는 예제 신경 하위 집합으로 초파리 버섯 몸과 포토 리셉터 뉴런의 사용을 강조 표시 합니다.

해 부 및 Immunofluorescent 얼룩의 버섯 몸과 성인 초파리 melanogaster 두뇌 신경 세포 포토 리셉터

이 단계별 프로토콜 파리의 수백을 접대 하 고 전기 모터에 의해 그들의 행동을 동기화 하는 자동화 된 멀티 실린더 시스템을 사용 하 여 초파리 부정적인 geotaxis 동작을 분석 합니다. 동기화 시 디지털 기록 및 자체 디자인된 RflyDetection 소프트웨어를 사용 하 여 분석 된 비행 부정적인 geotaxis 동작 분석입니다.

Neurodegeneration의 초파리 모델에서 성인 등반 동작을 분석 하기 위한 자동화 된 신속한 반복 부정적인 Geotaxis 분석 결과

단백질 집계 및 autophagic 플럭스의 초파리 모델의 중앙 신 경계에서의 형광 이미징-기반 세포 생물학 연구에서 양적 데이터를 추출 하는 간단 하 고 융통성 있는 워크플로 개발 했습니다. neurodegeneration입니다.

ImageJ를 사용 하 여 붙일 태그가 단백질의 편견된 분석 통해 초파리 에서 Neurodegeneration의 양적 세포 생물학

우리는 Drosophila melanogaster에있는 신경 변성을 전시하는 돌연변이를 위한 스크린에 전방 유전 접근을 사용하여 프로토콜을 제시합니다. 그것은 궁극적으로 신경 보호의 프로세스와 관련있는 새로운 유전자를 확인하기 위하여 등반 분석, 기관학 분석, 유전자 매핑 및 DNA 순서를 통합합니다.

소독멜라노가스터에서 새로운 신경보호 유전자를 식별하기 위한 생체 전방 유전자 스크린

이 연구는 참수, 고정, 동결 절제, 형광 염색, 면역 염색 및 이미징을 포함하는 조직 처리를 위한 단순화된 프로토콜을 제시하며, 이는 공초점 및 다광자 이미징으로 확장될 수 있습니다. 이 방법은 복잡한 해부에 필적하는 효능을 유지하며 고급 운동 기술의 필요성을 우회합니다. 정량적 이미지 분석은 광범위한 조사 잠재력을 제공합니다.

향상된 뇌 형광 염색 및 면역 염색을 위한 초파리 머리의 직접 동결 절편

이 프로토콜은 전통적인 포유류 모델에 대한 대안으로 운동 기능 장애의 정량화를 통해 초파리의 신경 독성을 평가하기 위한 고처리량, 비용 효율적인 방법을 제시합니다. 민감하고 재현 가능하며 윤리적으로 유리한 모델을 사용하여 제약 화합물, 환경 제제 또는 유전자 변형의 신경독성 영향을 평가하는 것을 목표로 합니다.

신경독성에 대한 판독으로서의 Drosophila melanogaster 의 운동 기능 장애에 대한 행동 분석

배우세요 Drosophila에서 도파민 뉴런 퇴행성 변화를 평가하는 등산 분석 및 면역 염색법을 통해 노화 관련 신경 퇴행 메커니즘을 연구하는 방법을 익히세요.

에 신약 표현형을 평가

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