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DOI: 10.3791/50386-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents a correlative microscopy method that integrates high-speed 3D live-cell fluorescent light microscopy with high-resolution cryo-electron tomography. The method is demonstrated by imaging dynamic small HIV-1 particles interacting with host HeLa cells.
우리는 고속 3D 라이브 세포 형광 현미경과 고해상도 cryo - 전자 단층 촬영을 결합하여 상호 현미경 방법을 설명합니다. 우리는 이미지 동적 호스트 헬라 세포와 상호 작용하는 작은 HIV-1 입자에 의해 상호 방식의 기능을 보여줍니다.
이 절차의 전반적인 목표는 숙주 헬라 세포와 상호 작용하는 동적 소형 HIV one 입자를 이미징하여 상관 형광 및 초저온 전자 현미경 방법의 사용법을 입증하는 것입니다. 이는 먼저 유리 바닥 배양 접시의 금 파인더 EM 그리드에서 발뒤꿈치 세포를 도금하고 성장시킨 다음 발뒤꿈치 세포를 GFP로 표지된 HIV 1 입자로 감염시킴으로써 이루어집니다. 두 번째 단계는 HIV 1 감염 세포의 타임 랩스 고속 3D 라이브 셀 컨포칼 이미지를 수집하고 유리화 후 단일 입자 역학에 대한 자동화된 3D 입자 추적으로 이미지를 분석하는 것입니다.
살아있는 세포 이미징 데이터와 동일한 바이러스 입자인 샘플은 추가적인 고해상도 3D 초저온 전자 단층 촬영 분석을 위해 극저온 형광 이미지에 위치합니다. 마지막 단계는 HIV one 입자를 포함하는 식별된 모든 위치에 대해 기울어진 cryo EM 투영 시리즈를 수집하고 imad 소프트웨어를 사용하여 가중 백 프로젝션 알고리즘으로 3D 탐을 재구성하는 것입니다. 궁극적으로, 첨단 3D 상관 생세포 형광 현미경 검사와 고해상도 초저온 전자 단층촬영을 사용하여 동적 회절, 제한된 바이러스 입자 및 숙주 세포와의 상호 작용을 직접 시각화합니다.
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