Question 1

조직 샘플 준비에서 조직 고정은 왜 필요한가요?

Accepted Answer

조직 고정은 세포 사멸 후 자연적으로 발생하는 효소에 의한 분해를 방지하여 세포 및 조직 구조를 보존합니다. 고정은 효소 활성을 억제하고 단백질 분해 부위를 인식할 수 없게 만듭니다. 두 가지 주요 메커니즘은 조직을 강화하는 공유 결합을 형성하는 교차 결합 및 알코올이나 아세톤을 사용하여 단백질의 구조를 변형시키는 탈수를 통한 응고입니다.

Question 2

조직 고정의 두 가지 주요 메커니즘은 무엇입니까?

Accepted Answer

교차 연결은 단백질 내부 및 단백질 간의 공유 결합 형성을 포함하여 조직을 뻣뻣하게 하고 분해에 저항하게 합니다. 응고는 알코올이나 아세톤을 통해 단백질을 탈수시켜 삼차 구조를 변형시켜 소수성 영역이 단백질 표면으로 이동하게 합니다. 응고 고정은 파라핀 왁스와 같은 매체가 조직에 더 효과적으로 침투하도록 돕습니다.

Question 3

포름알데히드는 조직 준비에서 고정제로서 어떻게 작용합니까?

Accepted Answer

포르말린, 물에 용해된 포름알데하이드는, 리신 및 글루타민과 같은 아미노산 측쇄의 1차 아민에 부착하여, 메틸렌 교각이라 불리는 안정한 교차 결합을 형성합니다. 이 교차 결합 과정은 본질적으로 느리며, 완료하는 데 1-2일이 소요됩니다. 포르말린은 중성 pH를 유지하고 조직 인공물을 방지하기 위해 인산염으로 완충될 때 가장 잘 작동합니다.

Question 4

조직 고정을 시작하기 전에 고려해야 할 요소는 무엇입니까?

Accepted Answer

표본 확산도 고려: 고정제는 확산 계수 및 시간과 관련된 속도로 조직에 침투하므로 철저한 고정을 위해 시료는 두께 4mm로 제한되어야 합니다. 또한 고정제 부피와 pH를 고려하십시오. 시약 고갈을 방지하기 위해 고정제와 시료의 비율은 최소 40:1이어야 합니다. 포르말린은 중성 pH를 유지하고 조직 인공물을 피하기 위해 인산염으로 완충되어야 합니다.

Question 5

조직학적 준비에 미디어를 포함시키는 목적은 무엇입니까?

Accepted Answer

매체 임베딩은 조직 자체와 유사한 기계적 강성을 가진 시편을 지원합니다. 파라핀 왁스는 가장 일반적인 임베딩 매체입니다. 너무 뻣뻣하거나 너무 약한 매체는 절단 결함을 일으키므로 적절한 임베딩 매체를 선택하는 것이 매우 중요합니다. 파라핀 임베딩을 시작하기 전에 시료는 물을 에탄올로, 그 다음 자일렌으로 대체하여 탈수되어야 하고, 마지막으로 예열된 파라핀 왁스를 통과해야 합니다.

Question 6

냉동 단면 처리는 전통적인 파라핀 포매 단면 처리와 어떻게 다른가요?

Accepted Answer

냉동 절편은 OCT (최적 절단 온도) 매질에서 조직을 빠르게 동결시키고, -20°C로 유지된 냉동 현미경으로 절편을 만드는 방법으로 고정을 회피합니다. 파라핀 절편이 수조 처리를 필요로 하는 반면, 냉동 절편은 절편을 만든 직후 양전하를 띤 유리 슬라이드에 바로 옮겨집니다. 이 방법은 교차 연결이 발생하지 않기 때문에 항체 표지를 위한 단백질 구조를 더 잘 보존합니다.

Question 7

파라핀 왁스 외에 어떤 임베딩 방법이 있습니까?

Accepted Answer

아가로스 임베딩은 새로 준비한 액체 아가로스로 샘플을 덮어 냉각 시 조직을 제자리에 고정시킵니다. 진동 블레이드가 있는 진동칼은 아가로스에 임베드된 샘플에서 두께 50-1000 µm의 섹션을 절단합니다. 샘플은 일반적으로 염색 전에 아가로스에서 제거하고 진공 그리스를 사용하여 슬라이드에 장착합니다. 두꺼운 아가로스 섹션은 고해상도 이미징을 위해 광학 현미경 원리 기기 및 응용을 사용하여 가장 잘 볼 수 있습니다.

광학 현미경 검사를위한 조직 학적 샘플 준비 - 평가 퀴즈