Name: 의 flybar : 파리에 주류 관리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-18T18:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 29 s
Description: 학습하세요 Drosophila에서 알코올 유도 행동을 측정하는 방법을, 저렴하고 쉽게 조립할 수 있는 플라이 바를 사용하여. 생체 리듬 주기에 따른 알코올 민감도 차이를 연구하고 유전적 요인의 영향을 분석할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 연구를위한 자금 조달은 플로리다 주립 대학 의과 대학 및 FSU의 생물 과학부의 지원에서 신경 과학 상에 프로그램에 의해 제공되었다. 추가 자금은 보조금의 에이드 알코올 음료 제조 업체의 연구 기금에 의해 제공되었다.

의 flybar 1. 총회 이론적 근거 및 개요 :이 시스템은 파리에 알코올 증기의 제어 비율을 관리 할 수​​ 있도록 설계되었습니다. 참고도 1의 개략적 인 개요를 제공의 flybar가 셋업 세 단계 (기류 조립, 알코올 및 물 병의 ​​셋업 및 관측 튜브의 조립체)에서 후술하는 바와 같이. 즉, 안정적인 공기 흐름이 각각 알코올과 물을 통해 버블을 혼합, 4 관찰 유리 병에 투여되는 두 개의 분획으로 분리된다. <ol><li> 공기 흐름의 조립 <ol><li> 유연한 실리콘 튜브 건물 공기 또는 Y-커넥터를 사용하여 일관성있는 공기 흐름 및 분할을 생성하는 수족관 통풍 장치 하나에 짧은 조각을 연결합니다. 시스템 (4 관측 바이알위한 통상적 1,000 ml / 분)를 통해 공기의 총량을 제어하는​​ 공기 유동 조절기를 제 1 분기를 연결한다. </li><li> 제 2 튜브의 빠른 커넥터를 삽입공기 스트림은 교정 기류 영향을주지 않고 실험의 시작 부분에 중단 될 수 있도록. Y-커넥터를 추가하고 공기 조절기로 각 분기 튜브를 연결합니다. </li><li> 공기 조절기에 튜브를 연결하고 두 개의 공기 흐름 미터를 연결합니다. </li></ol></li><li> 알코올과 물 병의 셋업 <ol><li> 공기 흐름 미터의 출구에 유연한 튜브를 추가하고 튜브의 각 길이의 끝 부분에 90 ° 굴곡과 얇은 유리 튜브 (1 ㎖ 유리 피펫의 부분)을 삽입합니다. 이것은 물과 알코올 병에 유입 공기의 흐름이 될 것입니다. </li><li> 알코올과 물이 가득 병에 그들을 통해 2 개의 구멍에 고무 마개를 놓습니다. 수욕을 사용하여 주위 온도보다 높은 일정한 온도 36 ° C의 병에서 모두 유지. 물 목욕은 27 ° C.에있는 동안 우리의 실험에서, 환경의 객실은, 25 ° C에서 유지 </li><li> 의 직선 유리 피펫을 삽입IR은 고무 마개를 통해 입구 및 병의 바닥으로부터 약 1cm까지 유체로 연장된다. </li><li> 유리의 단부가 안쪽 마개 병의 바닥에 닿을 때까지 고무 마개에 남아있는 구멍에 유리 피펫의 팔꿈치 부분을 삽입한다. 튜브의 또 다른 길이의이 공기 출구를 넣습니다. </li><li> Y-커넥터를 이용하여 공기 스트림을 재결합하고 두 구멍 뚫린 고무 마개를 통해 삽입 구부러진 유리 피펫 부와 비어 혼합 플라스크 또는 병을 통해 공기 흐름을 위해 실리콘 튜브의 다른 길이를 사용한다. 출구 혼합 된 공기 흐름을 위해 실리콘 튜브의 다른 길이를 사용합니다. </li></ol></li><li> 관측 유리 병의 조립 <ol><li> 다 관찰 바이알 각 실험에 사용될 수 있도록 공기의 4 또는 8 작은 스트림을 구하는 혼합 플라스크 2-3X 신흥 출구 기류 분할. 관찰 유리 병에 유연한 실리콘 튜브를 연결합니다. </li><li> observati을 설정유리 튜브는 알코올 증기에 대한 입구 및 출구를 제공하는 두 개의 구멍을 통해 함유 고무 마개로 밀봉 빈 바이알을 사용하여 바이알에. </li><li> 그물 제 유리관의 단부를 커버하고 유연한 플라스틱 배관의 작은 조각을 사용하는 대신에 세공을 유지한다. 는 유리 병의 절반 정도의 길이로 확장 될 때까지 첫 번째 구멍을 통해이 튜브를 삽입합니다. 필요한 경우, 아늑한 적합을 얻기 위해 테프론 테이프를 사용합니다. </li><li> 는 고무 마개의 안쪽 가장자리에 닿을 때까지 그물로 덮여 끝 또한 제 2 유리 튜브를 삽입합니다. </li><li> 희미한 붉은 빛 조건에서 파리와 대비를 극대화하기 위해 가로로 흰색 종이 조각에 튜브를 놓습니다. </li><li> 공기 흐름의 혼합 적절한 분수는 알코올을 통해 발포 및 공기 흐름은 물을 통해 버블. 연속적으로 공기 압력을 모니터하고 공기 흐름의 원하는 혼합을 유지하기 위해 필요에 따라 조정한다. 참고 : 연속 실행작은 방에있는 병렬 또는 하나의 분석에서 여러 플라이 바의 분석의 알코올 증기의 눈에 띄는 축적으로 이어질 수 있습니다. 잠재적으로 밀폐 된 방에있는 연구원에 영향을 줄 수있는 알코올 증기의 지속적인 방출을 방지하기 위해 적절한 시스템이 적절하게 실험 기간 동안 생성 된 알코올 증기를 제거하는 장소에 배치해야합니다. 알코올 증기를 제거 각각의 병에서 튀어 나온 두 번째 유리 튜브에 튜브 ~ 12 인치 조각을 연결, 그들을 묶어 깔때기 진공 시스템에 직접하십시오. 연구원은 또한 실험 시험 장소는 통풍이 있는지 확인해야합니다. </li></ol></li></ol> 실험 동물의 2. 준비 이론적 근거 및 개요 : 일반 문화와 파리의 하우징은 데이터의 변동성을 줄일 수 있습니다. 이는 파리가 경험 한 스트레스의 표준화 및 최소화를 통해 달성된다. 그 이유를 들어, 마취 (CO 2 또는 대안) 두리를 사용하지 않습니다NG 프로토콜의 다음 단계 중 하나. 또한, 파리는 학습과 기억 실험 17 등 다른 행동 분석을위한 표준으로 변동성을 최소화하기 위해 실험과 시점에 걸쳐 연령을해야한다. 다른 빛 : 어두운 에탄올에 대한 행동 반응주기 시계의 기능을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 낮의 리듬이 있는지 확인하기 위해, 실험은 특정 Zeitgeber 타임즈 (ZT)에서의 성능을 측정하기 위해 정의 된 LD 사이클 하에서 수행 될 수있다. ZT 12 시간 조명이 12시 12분 시간의 LD 사이클의 전원이 꺼져있는 동안 ZT 0, 새벽을 나타내며 LD 사이클에서의 빛의 시간으로 정의된다. 일정 조건 하에서, 시간주기의 시간 (CT)는 환경 신호, 즉 자유 실행 시간의 부재하에 동물에 대한 시간을 측정하고, 이전의 LD 인입 사이클에 관한 것이다. 야생형 초파리에서 CT는 처음 몇 일에 대해 이전 ZT을 반영일정한 프리 런주기 기간 등의 조건과 리듬에들 ~ 24 시간이다. 어두운주기를 한 후 이전의 실험에 지속적으로 어두운 (DD)로 전송 :주기 변조를 측정하고 행동에 급성 조명 효과를 제거하기 위해, 파리는 빛에 동반된다. 주기 실험은 특정 시간주기 시간 (CT)에서 성능을 측정하는 DD의 두 번째 날에 수행됩니다. 초파리에서 연속 빛 (LL) 조건은 핵심주기 유전자와 불규칙한 운동 활성 18-21과 부정맥 단기 기억 (17)에 의해 입증되는 것과 같이 행동주기 리듬의 혼란의 댐핑 또는 폐지 분자 진동과주기 장애의 원인. 프로토콜은 시간주기의 연구에 대해 최적화되어 있고, 다른 실험을 위해 단순화 될 수있다. 튜브 12 인치 사용하는 작은 빨간 불빛, 모든주기 실험은 희미한 붉은 빛 (주위의 오버 헤드 붉은 빛 &lt;벤치 위에 1 룩스를 사용하여 실시하고 있습니다~ 1 룩스의 빛). <ol><li> 12시 12분 시간 조명 아래 25 ° C에서 후면 파리 : 어두운 유입 조건 (LD). </li><li> 1 일의 일 라이트 기간 말에 갓 eclosed 파리를 수집하고 음식의 끈적 거림을 최소화하기 위해 높은 한천 농도 적은 양의 음식을 포함하는 작은 유리 병을 들고 LD 조건에서 24 시간 동안 저장합니다. 참고 : 건강, 일반적으로 개발 파리가 수집되도록하려면 우화는 문화 병에서 시작 후 첫 번째 일 이내에 수집 된 파리를 사용합니다. </li><li> 약 30 (25 ~ 35)의 일괄 처리를 수집 점등 기간의 끝으로 2 일에 흡인기, 신선한 유지 병에 송금을 사용하여 날아갑니다. </li><li> 유리 병의 끝으로 파리를 직접 강한 광원을 사용합니다. 행동 관찰은 각 실험의 끝에서 계산 파리의 총 수의 백분율로보고로이 범위 내에서 각 유리 병에 파리의 정확한 수는 중요하지 않다. </li><li> 25 ° C에서 FO​​에서 DD 조건에서 파리를 유지이일 R. </li><li> 실험의 날, 다른 조건이나 실험 전에 적어도 1 시간 동안 방에있는 실험적인 행동 룸 이외의 인큐베이터에 보관되어있는 모든 파리를 놓습니다. 순응 때문에 온도 나 습도의 변화에​​ 변화를 줄일 수 있습니다. </li><li> 행동의주기 변조 여부를 테스트하기 위해 여섯 시간 지점 일 (CT 1, 5, 9, 13, 17, 21)에서 관찰합니다. </li><li> 실험 설계의 견고성을 향상시키고 하나의 실험에 변화의 특정을 최소화하기위한 행동 실험의 한 세트에서 여러 시간 지점을 비교합니다. 반대의 명암 일정 두 개의 창업 보육 센터가 유입에 사용하는 경우 예를 들어, CT 1 CT (13)의 관찰을 동시에 얻을 수있다. 주 : 상기 절차가 일정 어둠주기 상태에서 수행 분석을위한 실험 동물의 준비를 설명한다. 다른 빛 : 암 조건은 시계의 기능을 조사하는 데 사용될 수있다알코올에 대한 행동 반응에. 낮의 리듬이 실험은 특정 Zeitgeber 시간 (ZT)에서 성능을 측정하는 LD 사이클에서 수행 할 수 있는지 확인하십시오. 또한, 프로토콜은 실험 테스트주기 부전 일정한 조명 조건 하에서 발생하는 해충으로 사용될 수있다. 조명 상태에서 보관 파리를 테스트 다른 프로토콜의 행동 분석은 여전히​​ 어두운 조건에서 수행되어야한다. 파리 인해 행동에 빛의 급성 효과를 행동의 변화를 최소화하기 위해 실험 전에 1 시간 동안 어둠에 전송해야합니다. </li></ol> 3. 행동 관찰 이론적 근거 및 개요는 다음 알코올 관리 프로토콜은 희미한 붉은 빛 조건 하에서 관찰에 최적화되어 있습니다. 두 가지 행동을 측정 LORR 및 진정 작용 플라이 만취의 두 가지 점을 나타냅니다. LORR는 손실 O를 통합 만취의 늦은 지점을 나타냅니다F 모터 및 자세 제어, 중독의 진정 대책 반면 늦게 종점. 유전자형 또는주기 변조는 다르게이 두 조치에 영향을 미칠 수 있습니다; 따라서 하나는 모두를 검사 할 수 있습니다. 즉, 플라이가 바이알에로드되어, LORR 또는 진정을 표시 파리의 개수가 주류 기상 노광시 5 분마다, 그리고 실험의 끝에 카운트 파리의 총 수를 획득한다. <ol><li> 실험을 시작하기 전에 적어도 10 분 동안 시스템 (공기, 물과 알코올 병을 통해 발포)를 통해 공기를 실행하고 기류를 보정하는 시간을 사용한다. </li><li> 공기 흐름을 중지하려면 빠른 릴리스를 분리합니다. 유리 병에 파리를로드하고 공기 흐름을 다시 연결하고 타이머를 시작합니다. 참고 : 응답 파리 또는 죽은 파리가 유지 유리 병에 남아있는 경우,이 스트레스 조건을 나타낼 수 있습니다. 일반적으로, 이러한 조건은 지주 바이알에 닫기 파리를 수용하거나 소를 사용하여 식품 찰기를 감소시킴으로써 완화 될 수있다음식 준비하는 동안 LY 높은 한천 농도. 최적의 행동 분석과 실험 사이에 최소한의 변화를 들어, 파리는 이전의 실험에 건강해야한다. </li><li> 유지하는 정확한 시간, 알코올 노출의 총 시간을 추적하는 하나의 타이머를 사용하여 5 분 간격을 표시하기 위해 두 번째 카운트 다시 타이머를 사용합니다. </li><li> 명암 대비가 증가하고 가시성을 비행, 특히 희미한 붉은 빛의 조건에 유리 병 아래에 흰색 종이를 놓습니다. </li><li> 일정한 수준을 유지하기 위해 실험 기간 동안 정기적으로 공기 흐름을 확인합니다. 기류가 안정화되면 일반적으로, 이들은 실험의 길이 동안 안정적으로 유지. </li><li> 1 시간 동안 5 분마다 한 번 자신의 복원력 반사를 잃은 파리의 수를 계산합니다. 주류 감도 유전자형 및 유전 배경 사이에서 변화로서, 더 자주 평가를 수행하거나 긴 시간에 대한 실험을 수행하는 것이 바람직 할 수있다. </li><li> 유리 병 slightl를 들어 올려표면에서 y 및 유리 병 뒤에 종이를 향해 붉은 빛 손전등의 빛을 연출합니다. 희미한 붉은 빛의 조건에서 모든 실험을 위해 1 룩스보다 더 큰 빛 수준을 유지하기 위해 실험 유리 병에 최소 12 인치의 거리에서 핸드 헬드 빨간색 손전등을 유지합니다. </li><li> 모든 실험에 대한 표준을 설정하기 위해 노출계를 사용하여 가벼운 수준을 측정합니다. </li><li> 유리 병에 회사 탭을 적용하여 자신의 복원력 반사 손실 약 4 초 이내에 스스로를 잘하지 얼마나 많은 파리 계산 한 파리의 수를 결정합니다. LORR을 표시 파리는 여전히 자신의 다리와 날개를 이동할 수 있지만, 똑바로 자신을 켤 수 없습니다. </li><li> 세션의 끝에, 각 바이알에있는 파리의 총 수를 센다. 참고 : 경우에 따라 하나의 플라이로드는 실험 유리 병에 파리 스토퍼와 측면 사이에 잡힐 수 있습니다. 이는 어둠 속에서 수행되기 때문에, 그것은 쉽게 그래서 총 마비를 계산 할 필요가 발견되지 않을 수 있습니다올바르게 백분율을 계산하는 실험의 끝에 파리의 ER. </li></ol> 또한이 절차는 또한 다른 행동 끝점을 나타내는 파리의 진정 작용을 측정하기 위해 사용될 수있다. 진정 파리가 바로 반사를 잃은 반면, 진정 작용이 큰 알코올 노출이 필요합니다. 행동으로, 진정 작용은 파리가 유리 병에 AA 회사 탭 다음 유리 병에 움직 남아있는 명백한 모터 활동의 완전한 부족에 의해 특징 지어 질 수있다. 진정 작용의 경우, 움직임이 더 다리가 유리 병의 회사 탭의 다음 배달을 흔들며 없습니다로 남아 파리의 수를 계산합니다. 또한, 유리 병은 개별 파리는 여전히 잡는 반​​사를 유지할지 여부를 결정하기 위해 좌우로 압연 할 수 있습니다. 4. 데이터 분석 <ol><li> 각각의 병에 파리의 총 수에 따라 평가마다의 비율 LORR를 결정합니다. </li><li> calculati하여주기 시점 또는 균주 사이의 견적의 차이S 자 곡선의 직선 부분에 속하는 각각의 샘플에 대한 50 %의 LORR을, (아래 그림 2 참조) 겨. </li><li> 다른 통계 : <ol><li> 유전자형 사이의 비교가 예정되어있는 경우,이 차이는 (도 3) 사후 검사 현저한 것을 시점의 범위를 결정하기 위하여 반복 측정 ANOVAand를 사용하여 전체의 시간 과정을 분석하는 것이 바람직하다. 이 시험을 위해, 우리는 0.001의 값을 사용하는 것을 선호한다. 이것은 개개의 노광 시간에 차이가 곡선의 기울기의 유전자형의 차이뿐만 아니라, 평가 될 수있다. </li><li> 감도의 차이는 그래프의 직선 부분 (그림 4)에서 진정 작용과 같은 특정 반응 알코올 노출의 특정 시간에 결정될 수있다. </li><li> 균주 또는주기 시점 간의 차이는 표준 F-통계 및 사후 시험을 이용하여 추정 될 수있다. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Linde, K., Lyons, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+modulation+of+acute+alcohol+sensitivity+but+not+acute+tolerance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Chronobiol.+Int%22%5BJournal%5D)">Circadian modulation of acute alcohol sensitivity but not acute tolerance in Drosophila.</a> Chronobiol. Int. 28, 397-406 (2011).</li>
<li>Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+for+alcohol+reward%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model for alcohol reward.</a> Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).</li>
<li>Shohat-Ophir, G., Kaun, K. R., Azanchi, R., Mohammed, H., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+deprivation+increases+ethanol+intake+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Sexual deprivation increases ethanol intake in Drosophila.</a> Science. 335, 1351-1355 (2012).</li>
<li>Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fruit+fly%3A+A+model+organism+to+study+the+genetics+of+alcohol+abuse+and+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The fruit fly: A model organism to study the genetics of alcohol abuse and addiction.</a> Cell. 93, 909-912 (1998).</li>
<li>Guarnieri, D. J., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster%2C+a+genetic+model+system+for+alcohol+research%5BTitle%5D)+AND+%22International+Review+of+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster, a genetic model system for alcohol research.</a> International Review of Neurobiology. 54, 203-232 (2003).</li>
<li>Scholz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intoxicated+fly+brains%3A+Neurons+mediating+ethanol-induced+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenet%22%5BJournal%5D)">Intoxicated fly brains: Neurons mediating ethanol-induced behaviors.</a> J. Neurogenet. 23, 111-119 (2009).</li>
<li>Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T. Y., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+analysis+of+ethanol-induced+locomotor+stimulation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">High-resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila.</a> J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).</li>
<li>Schumann, G., Spanagel, R., Mann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candidate+genes+for+alcohol+dependence%3A+Animal+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Alcoholism%3A+Clinical+and+Experimental+Research%22%5BJournal%5D)">Candidate genes for alcohol dependence: Animal studies.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 27, 880-888 (2003).</li>
<li>Singh, C. M., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+control+of+acute+ethanol-induced+behaviors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Genetic control of acute ethanol-induced behaviors in Drosophila.</a> Alcohol Clin Exp Res. 24, 1127-1136 (2000).</li>
<li>Perreau-Lenz, S., Zghoul, T., de Fonseca, F. R., Spanagel, R., Bilbao, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+regulation+of+central+ethanol+sensitivity+by+the+mPer2+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Addiction+Biology%22%5BJournal%5D)">Circadian regulation of central ethanol sensitivity by the mPer2 gene.</a> Addiction Biology. 14, 253-259 (2009).</li>
<li>Brager, A. J., Prosser, R. A., Glass, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+and+acamprosate+modulation+of+elevated+ethanol+drinking+in+mPer2+clock+gene+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Chronobiol.+Int%22%5BJournal%5D)">Circadian and acamprosate modulation of elevated ethanol drinking in mPer2 clock gene mutant mice.</a> Chronobiol. Int. 28, 664-672 (2011).</li>
<li>Sinclair, J. D., Geller, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+consumption+by+rats+under+different+lighting+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Ethanol consumption by rats under different lighting conditions.</a> Science. 175, 1143-1144 (1972).</li>
<li>Danel, T., Jeanson, R., Touitou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+pattern+in+consumption+of+the+first+drink+of+the+day+in+alcohol-dependent+persons%5BTitle%5D)+AND+%22Chronobiol.+Int%22%5BJournal%5D)">Temporal pattern in consumption of the first drink of the day in alcohol-dependent persons.</a> Chronobiol. Int. 20, 1093-1102 (2003).</li>
<li>Kapfhamer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taok2+controls+behavioral+response+to+ethanol+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%2C+brain%2C+and+behavior%22%5BJournal%5D)">Taok2 controls behavioral response to ethanol in mice.</a> Genes, brain, and behavior. 12 (1), 87-97 (2012).</li>
<li>Lasek, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+evolutionary+conserved+role+for+anaplastic+lymphoma+kinase+in+behavioral+responses+to+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">An evolutionary conserved role for anaplastic lymphoma kinase in behavioral responses to ethanol.</a> PLoS One. 6, 226-236 (2011).</li>
<li>Lasek, A. W., Giorgetti, F., Berger, K. H., Tayor, S., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lmo+genes+regulate+behavioral+responses+to+ethanol+in+Drosophila+melanogaster+and+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Lmo genes regulate behavioral responses to ethanol in Drosophila melanogaster and the mouse.</a> Alcohol Clin Exp Res. 35, 1600-1606 (2011).</li>
<li>Lyons, L. C., Roman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+modulation+of+short-term+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Circadian modulation of short-term memory in Drosophila.</a> Learning & Memory. 16, 19-27 (2009).</li>
<li>Hamblen-Coyle, M. J., Wheeler, D. A., Rutila, J. E., Rosbash, M., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavior+of+period-altered+circadian-rhythm+mutants+of+Drosophila+in+ligh-dark+cycles+%28Diptera+Drosophilidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Behav%22%5BJournal%5D)">Behavior of period-altered circadian-rhythm mutants of Drosophila in ligh-dark cycles (Diptera Drosophilidae).</a> J. Insect Behav. 5, 417-446 (1992).</li>
<li>Konopka, R. J., Pittendrigh, C., Orr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+behavior+associated+with+altered+homeostasis+and+photosensitivity+of+Drosophila+clock+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenet%22%5BJournal%5D)">Reciprocal behavior associated with altered homeostasis and photosensitivity of Drosophila clock mutants.</a> J. Neurogenet. 6, 1-10 (1989).</li>
<li>Power, J. M., Ringo, J. M., Dowse, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+period+mutations+and+light+on+the+activity+rhythms+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Rhythms%22%5BJournal%5D)">The effects of period mutations and light on the activity rhythms of Drosophila melanogaster.</a> Journal of Biological Rhythms. 10, 267-280 (1995).</li>
<li>Yoshii, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+cycles+drive+Drosophila+circadian+oscillation+in+constant+light+that+otherwise+induces+behavioural+arrhythmicity%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Temperature cycles drive Drosophila circadian oscillation in constant light that otherwise induces behavioural arrhythmicity.</a> Eur. J. Neurosci. 22, 1176-1184 (2005).</li>
<li>Berger, K. H., Heberlein, U., Moore, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+chronic%3A+two+distinct+forms+of+ethanol+tolerance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid and chronic: two distinct forms of ethanol tolerance in Drosophila.</a> Alcohol Clin Exp Res. 28, 1469-1480 (2004).</li>
<li>Scholz, H., Ramond, J., Singh, C. M., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+ethanol+tolerance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Functional ethanol tolerance in Drosophila.</a> Neuron. 28, 261-271 (2000).</li>
<li>Kong, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol-regulated+genes+that+contribute+to+ethanol+sensitivity+and+rapid+tolerance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Ethanol-regulated genes that contribute to ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila.</a> Alcohol Clin Exp Res. 34, 302-316 (2010).</li>
<li>Borycz, J., Borycz, J., Kubow, A., Lloyd, V., Meinertzhagen, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+ABC+transporter+mutants+white%2C+brown+and+scarlet+have+altered+contents+and+distribution+of+biogenic+amines+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila ABC transporter mutants white, brown and scarlet have altered contents and distribution of biogenic amines in the brain.</a> J. Exp. Biol. 211, 3454-3466 (2008).</li>
<li>Sitaraman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+is+necessary+for+place+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Serotonin is necessary for place memory in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 5579-5584 (2008).</li>
<li>Bainton, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+modulates+acute+responses+to+cocaine%2C+nicotine+and+ethanol+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Dopamine modulates acute responses to cocaine, nicotine and ethanol in Drosophila.</a> Current Biology. 10, 187-194 (2000).</li>
<li>Kong, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pair+of+dopamine+neurons+target+the+D1-like+dopamine+receptor+DopR+in+the+central+complex+to+promote+ethanol-stimulated+locomotion+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">A pair of dopamine neurons target the D1-like dopamine receptor DopR in the central complex to promote ethanol-stimulated locomotion in Drosophila.</a> Plos One. 5, (2010).</li>
<li>Xu, J., Kochanek, K. D., Murphy, S. L., Tejada-Vera, B. Deaths: Final data for 2007. , U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention: National Center for Health Statistics. (2010).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+National+Center+on+Addiction+and+Substance+Abuse%5BTitle%5D)+AND+%22Shoveling+up+II%3A+The+impact+of+substance+abuse+on+federal%2C+state+and+local+budgets%22%5BJournal%5D)">The National Center on Addiction and Substance Abuse.</a> Shoveling up II: The impact of substance abuse on federal, state and local budgets. , Columbia University. (2009).</li>
<li>NIAAA, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimated+economic+costs+of+alcohol+abuse+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Estimated economic costs of alcohol abuse in the United States.</a> , Available from: 
 
 <a target="_blank" href="www.medtext.com/hdcn.htm">www.medtext.com/hdcn.htm</a> (1992).</li>
<li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+ethanol+consumption+in+Drosophila+models+features+of+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction.</a> Current Biology. 19, 2126-2132 (2009).</li>
<li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addiction-like+behavior+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Communicative+%26+Integrative+Biology%22%5BJournal%5D)">Addiction-like behavior in Drosophila.</a> Communicative & Integrative Biology. 3, 357-359 (2010).</li>
<li>Rodan, A. R., Rothenfluh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+behavioral+alcohol+responses+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22International+Review+of+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The genetics of behavioral alcohol responses in Drosophila.</a> International Review of Neurobiology. 91, 25-51 (2010).</li>
<li>Boothroyd, C. E., Young, M. W. Molecular and Biophysical Mechanisms of Arousal, Alertness, and Attention. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoothroyd%2C+CE+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22">Annals of the New York Academy of Sciences</a>. Pfaff, D. W., Kieffer, B. 1129, Blackwell Publishing. 350-357 (2008).</li>
<li>Nitabach, M. N., Taghert, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+the+Drosophila+circadian+control+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Organization of the Drosophila circadian control circuit.</a> Current Biology. 18, 84-93 (2008).</li>
<li>Sheeba, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+melanogaster+circadian+pacemaker+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Genet%22%5BJournal%5D)">The Drosophila melanogaster circadian pacemaker circuit.</a> J. Genet. 87, 485-493 (2008).</li>
<li>Cohan, F. M., Graf, J. -D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latitudinal+cline+in+Drosophila+melanogaster+for+knockdown+resistance+to+ethanol+fumes+and+for+rates+of+response+to+selection+for+further+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Latitudinal cline in Drosophila melanogaster for knockdown resistance to ethanol fumes and for rates of response to selection for further resistance.</a> Evolution. , 278-293 (1985).</li>
<li>Moore, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+intoxication+in+Drosophila%3A+Genetic+and+pharmacological+evidence+for+regulation+by+the+cAMP+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Ethanol intoxication in Drosophila: Genetic and pharmacological evidence for regulation by the cAMP signaling pathway.</a> Cell. 93, 997-1007 (1998).</li>
<li>Berger, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+sensitivity+and+tolerance+in+long-term+memory+mutants+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Ethanol sensitivity and tolerance in long-term memory mutants of Drosophila melanogaster.</a> Alcohol Clin Exp Res. 32, 895-908 (2008).</li>
<li>Pohl, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+Genes+Differentially+Affect+Tolerance+to+Ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22in+Drosophila.+Alcoholism%3A+Clinical+and+Experimental+Research%22%5BJournal%5D)">Circadian Genes Differentially Affect Tolerance to Ethanol.</a> in Drosophila. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. , (2013).</li>
<li>Bhandari, P., Kendler, K. S., Bettinger, J. C., Davies, A. G., Grotewiel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+assay+for+evoked+locomotor+behavior+in+Drosophila+reveals+a+role+for+integrins+in+ethanol+sensitivity+and+rapid+ethanol+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Alcoholism%3A+Clinical+and+Experimental+Research%22%5BJournal%5D)">An assay for evoked locomotor behavior in Drosophila reveals a role for integrins in ethanol sensitivity and rapid ethanol tolerance.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 33, 1794-1805 (2009).</li>
<li>Rothenfluh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+behavioral+responses+to+ethanol+are+regulated+by+alternate+RhoGAP18B+isoforms%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Distinct behavioral responses to ethanol are regulated by alternate RhoGAP18B isoforms.</a> Cell. 127, (1016).</li>
</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

알코올 남용과 사회에 대한 알코올 중독의 비용은 모두 29 인간과 경제적 비용의 측면에서 엄청난 (30, 31). 초파리 모델로 신속하게 개인의 많은 수의 행동 반응을 조사하는 빠르고 다양한 시스템을 제공하고 같은 광범위 알코올 5,7,32-34 및주기 연구 35-37에 모두 사용하고있다. 여기, 우리는주기 조건에서 성인 파리에 알코올 증기의 제어 관리를위한 간단한 프로토콜을 설명했다. 표준화 된 조건에서 재배 파리는 자신의 복원력 반사를 잃은 파리의 수를 5 분마다 득점하는 동안 1 시간 동안 알코올 증기에 노출되어 있습니다. 여기에 설명 된 프로토콜로 인해 일정 조건에서 유입 및 주택에 대한 추가 요구 사항의주기 실험에 최적화되어 있습니다. 여러 단계를 간소화 할 수 있습니다이러한 적어도 하루 또는 어두운 붉은 빛의 조건 하에서...

초파리 melanogaster의이 약 2,3에 대한 인간의 응답과 유사하다 알코올 1 이상성 행동 반응을 보여줍니다. , 및 진정 작용 (응답 모터 활동의 완전한 부족 : 알코올 농도가 낮은 초기 노출되면, 모터 조정의 부족, 자세 제어의 손실 보상하기 반사 (LORR 바로 잡는 반​​사 손실)로 대체, 전시 증가 운동 활성을 날아 기계적인 자극에) 알코올에 노출이 4-9 진행됨. 내인성주기 클록 생쥐 10,11, 12 래트에서 관찰로서 주류 감도 및 독성의 강한 변조기이고, 13 인간. 초파리 연구의 최근 발전은주기 시계가 급성 알코올 감도 있지만 알코올 내성 1 변조 보여 주었다. 돌연변이 연구와 공간의 유전자 조작을 통해 초파리에서 사용할 수있는 강력한 유전 적 접근 방법시간적 유전자 발현 복잡한 동작을위한 내부 세포 및 분자 메커니즘을 식별 약진을 허용하는 시스템을 제공한다. 조사 도구로 초파리의 사용은 급속히 포유류 14-16로 번역 할 수있는 알코올의 신경 생물학을 이해하는 실질적인 발전을 허용했다. 일 주기성 시계가 주류 감도를 변조 통해 분자 메커니즘의 이해를 용이하게하기 위해 균일주기 ​​시점 걸쳐 행동 반응, 희미한 적색 광 조건에서 사용하기에 적합한 알코올 투여 프로토콜을 측정하기 위해 필요하다. 초파리의 경우, 알코올 만성 노출 또는 안정적으로 급성 노출에 대한 증기의 형태로 알코올을 투여 통해 음식 섭취를 통해 관리 할 수있다. 여기에서, 우리는 상실 바로 잡는 반사 (LORR) 1주기 변조의 평가뿐만 아니라 적합한 알코올 관리 프로토콜을 설명진정. 일정한 온도에서 12 시간의 LD주기 다음 실험 질문에 따라 2 ~ 5 일 제어 빛 정권에 전송 : 파리는 12 시간으로 동반된다. 초파리는 다른 이름으로 flybar 장치 에탄올 증기에 노출된다. 이 장치에서 공기의 제어 양의 물과 알코올을 통해 발포되며, 증기는 유리 병 주택 파리에 혼합과 연결됩니다. 파리 분마다 5는 반사 신경을 보상하기 또는 진정되고있다 표시하지 않습니다 수 득점됩니다. 각 시점에 대한 LORR 비율은주기 시간 지점 사이 또는 파리의 변종 사이의 계산 및 비교됩니다. 행동 분석 옵션과 결합 된의 flybar 알코올 배달을 사용하여 알코올 배달의 단순성과 신뢰성이 어두운 조건에서 실시주기 실험의 중요한 이점을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>알코올 190 증거</td><td>다양한</td><td></td><td></td></tr><tr><td>통풍기</td><td>지역 애완 동물 상점</td><td></td><td>우리는 Whisper 60</td></tr><tr><td>실리콘 튜브 1/8 "</td>을 사용합니다.<td>VWR</td><td>408060-0030</td><td></td></tr><tr><td>120&deg; Y-커넥터</td><td>VWR</td><td>82017-256</td><td></td></tr><tr><td>빠른 분리</td><td>VWR</td><td>46600-048</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 튜브 클램프</td><td>Bell-art products</td><td>132250000</td><td>이 또는 다음</td></tr><tr><td>미니어처 공기 조절기</td><td>McMaster-Carr</td><td>8727K11</td><td>이 또는 이전</td></tr><tr><td>미니어처 공기 조절기 장착 브래킷</td><td>McMaster-Carr</td><td>9891K66</td><td></td></tr><tr><td>Gilmont 크기 12 유량계</td><td>VWR</td><td>29895-242</td><td></td></tr><tr><td>도구 클립</td><td>McMaster-Carr</td><td>1722A43</td><td>유량계를 고정하기 위해</td></tr><tr><td>바이알</td><td>VWR</td><td>89092-722</td><td></td></tr><tr><td>두 개의 구멍이 있는 고무 마개</td><td>VWR</td><td>59585-186</td><td>바이알에 적합</td></tr><tr><td>5mm Pyrex 유리관</td><td>Trikinetics</td><td>PGT5x65</td><td>이전 스토퍼</td></tr><tr><td>테프론 테이프</td>에 가장 적합<td>철물점</td><td></td><td>필요한 경우 스토퍼에 꼭 맞도록 고무</td></tr><tr><td>마개</td><td>VWR</td><td>59582-122</td><td>우리의 병에 맞습니다</td></tr><tr><td>일회용 유리 피펫</td><td>VWR</td><td>53283-768</td><td>가열로 길이와 구부리기에 맞게 절단</td></tr><tr><td>매우 세밀한 나일론 그물</td><td>VWR</td><td>다양한</td><td></td></tr><tr><td>15 와트 전구</td><td>철물점</td><td></td><td>천장 빨간불</td></tr><tr><td>사진 빨간 안전 광 필터</td><td></td><td></td><td>오버 헤드 빨간 빛</td></tr><tr><td>빨간 빛 미니 손전등 빨간 필터</td><td>Mag-light</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

의 flybar : 파리에 주류 관리

The FlyBar: Administering Alcohol to Flies

초파리 (Drosophila의 melanogaster의)은 알코올 연구 및주기 생물학 모두 설치 한 모델입니다. 최근에는주기 클록 주류 감도 아니지만 관용의 형성을 조절하는 것이 보였다. 여기, 우리는 세부 사항에 우리의 프로토콜을 설명합니다. 알콜의 flybar를 사용 파리에 투여된다. 이 설정에서, 포화 알코올 증기는 설정 비율 가습 공기와 혼합되고, 최대 4 개의 튜브에서 파리에 투여. 파리는 반복 실험 사이의 변화를 최소화하기 위해 표준화 된 조건에서 사육된다. 다른 유전자형이나 치료의 3 일 된 파리는 바람직하게는 직접 비교가 가능하게하는 두 개의 서로 다른 시점 (예를 들어, CT 5, CT 17)의 파리를 일치시켜, 실험에 사용됩니다. 실험 동안, 플라이는 휘어진 (LORR)을 보상하기의 손실을 나타내는 알코올 증기의 미리 결정된 비율 및 해충의 수에 1 시간 동안 노출되거나 나오지 아르ATION은 5 분마다 계산됩니다. 데이터는 세 개의 서로 다른 통계적인 방법을 사용하여 분석 할 수있다. 첫 번째는 파리의 50 %가 자신의 복원력 반사를 잃은하는 시간을 확인하고 유의 한 차이는 시점 사이에 존재 여부를 확인하기 위해 분산 분석 (ANOVA)을 사용하는 것입니다. 두 번째는 ANOVA 분석 한 다음 특정 시간 (분), 후 LORR을 보여 백분율 파리를 결정하는 것입니다. 마지막 방법은 다변량 통계를 사용하여 전체 시간 시리즈를 분석하는 것입니다. 프로토콜은 유전자형 간의 비주기 실험이나 비교에 사용될 수있다.

마커로 50 % LORR를 사용하여 알코올 감도의주기 변조. 하루 동안 주류 감도주기 변조를 보여주는 대표적인 예는도 2에 제시된다. LORR는 캔톤-S의 DD의 2 차 하루 동안 여섯 시점에서 측정 한 50 % LORR은 각 시점에 대해 결정 하였다. (: F 5,45 = 7.39, P &lt;0.001, N = 6 ~ 10 시간마다 포인트 ANOVA) 분석은 하루 중 상당한 시간을 효과를 보여 주었다. 피셔의 LSD 테스트 CT 21 대 CT13, CT17 대 CT9 및 CT9 대 CT 21, CT9 대 CT17, CT5 대 CT13, CT5 대 CT5, CT5 대 CT1 사이에 유의 한 차이를 보였다.이 결과는 일치 우리의 이전에 발행 된 결과를 1. 야생 형 및 돌연변이 체의 차이점. <p class="jo...

초파리는 알코올에 대한 행동 반응의 세포 및 분자 토대를 해부를위한 중요한 모델 시스템으로 떠오르고있다. 여기에서 우리는 쉽게 다른 실험에 적용 할 수 있고 학부 연구에 매우 적합하다주기 컨텍스트에서 주류 감도 데이터의 수집을위한 프로토콜을 제시한다.

Fruit flies (Drosophila melanogaster) are an established model for both alcohol research and circadian biology. Recently, we showed that the circadian ...

본 절차의 전반적인 목표는 학부생 연구자나 생체 리듬 연구 입문자에게 적합하도록 저렴하고 조립이 간편한 장치를 사용하여 Drosophila의 알코올 유도 행동을 측정하는 것입니다. 이는 먼저 플라이 바(fly bar)를 조립하여 여러 그룹의 초파리를 동시에 비교함으로써 수행됩니다.절차의 다음 단계는 지정된 명암 주기에 따라 초파리를 배양하고, 실험을 위해 연령이 일치하는 초파리를 수집하는 것입니다. 그 다음, 초파리를 정해진 농도의 알코올 증기에 노출시키고 데이터를 수집합니다. 최종적으로, 정위 반사(writing reflex)의 소실 또는 진정 상태를 측정함으로써 시간대나 유전적 요인에 따른 그룹 간 알코올 민감도의 차이를 확인할 수 있습니다.행동 관찰의 어려움과 어두운 적색광으로 인해 관찰 단계를 학습하기 어렵고, 어떤 파리가 쓰기 반사(writing reflex)를 소실했는지 여부를 판단하는 것이 까다롭기 때문에 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다. 먼저 파리 바(fly bar)를 조립하십시오. 공기 흐름 장치 조립부터 시작합니다.짧은 유연한 실리콘 튜브를 건물 공기 탭이나 수족관용 에어레이터에 연결하여 공기 흐름을 공급합니다. Y 커넥터를 사용하여 공기 흐름을 분기합니다. 첫 번째 분기선을 레귤레이터에 연결합니다.시스템을 통과하는 전체 공기량을 조절하게 됩니다. 두 번째 분기 관을 퀵 커넥터에 연결하십시오. 이렇게 하면 보정된 공기 흐름에 영향을 주지 않고 필요에 따라 에어스트림을 차단할 수 있습니다.Y 커넥터를 추가하고 각 분기 튜브를 공기 흐름 조절기에 연결하십시오. 그런 다음 각 조절기를 공기 흐름 측정기에 연결하십시오. 이제 1 mL 유리 피펫을 절단하고 각 섹션에 직각 모양이 되도록 가열하여 녹여 만듭니다.이것들은 셋업에서 단단한 엘보우 튜브 역할을 하게 됩니다. 공기 유입구용 직선 유리 피펫을 한쪽 구멍을 통해 삽입하여 바닥에서 1cm 높이의 액체 내부까지 연장합니다. 다른 쪽 구멍으로는 유리 엘보우 섹션을 병 입구에 막 들어갈 때까지 삽입합니다.이 배출구를 사용하여 각 병에서 나오는 공기 흐름을 Y형 커넥터에서 결합하십시오. 유연한 튜브를 사용하여 공기 유량계를 피펫의 직선 구간에 연결하십시오. 이것들이 두 용액 병으로 들어가는 공기 입구 역할을 하게 됩니다.물 또는 알코올 용액 병 두 개를 주변 공기 온도보다 2°C 높게 설정된 항온수조에 보관하십시오. 실리콘 튜브가 연결된 두 개의 구멍이 있는 고무 마개로 병을 막으십시오. Y자 튜브의 반대쪽 끝을 두 개의 구멍이 있는 고무 마개가 달린 병에 연결하십시오.이 혼합 플라스크에서 나오는 기류는 기화된 알코올과 물을 관찰용 바이알로 공급합니다. 혼합 플라스크의 배출 기류를 두 번 또는 세 번 분할하여 4개 또는 8개의 더 작은 기류로 만듭니다. 각 관찰용 바이알당 하나씩 배정합니다.실리콘 튜브를 계속 사용하십시오. 관찰용 바이알은 알코올 증기를 위한 유입구와 유출구 역할을 하는 2공 고무 마개로 밀봉된 빈 초파리 바이알입니다. 유리 튜브가 마개 구멍에 맞게 삽입됩니다.유리관의 끝부분을 망으로 덮습니다. 유연한 플라스틱 튜브 조각을 사용하여 망을 고정합니다. 이 튜브를 첫 번째 구멍을 통해 바이알 길이의 약 절반까지 닿을 때까지 삽입합니다.필요한 경우, 테플론 테이프를 사용하여 빈틈없이 밀착시킵니다. 망이 포함된 두 번째 유리관을 고무 마개 내부 가장자리에 닿을 때까지 삽입합니다. 알코올 또는 물을 통해 버블링된 두 에어스트림의 적절한 분획을 혼합합니다.혼합 병 내의 알코올과 수증기의 원하는 혼합 비율을 유지하기 위해 공기압을 지속적으로 모니터링하고 필요에 따라 조정하십시오. 이러한 종류의 실험을 수행할 때는 항상 실험실의 환기가 충분히 이루어지는지 확인하십시오. 반복 실험 간의 편차를 최소화하려면 초파리의 사육 조건에 각별한 주의를 기울여야 합니다.초파리는 동일한 연령과 코호트의 개체들을 상호 비교 테스트할 수 있도록, 매우 엄격하게 동기화된 저밀도 조건에서 사육해야 합니다. 해 질 녘에 초파리를 채집하십시오. 갓 우화한 개체들을 수집하여, 소량의 고농도 아가(agar) 배지가 들어있는 보관 바이알에 동일한 시간에 24시간 동안 보관하십시오.다음 날, 흡입기(aspirator)를 사용하여 수집한 초파리를 약 30마리씩 코호트로 나누고, 행동의 일주기 변조를 테스트하기 위해 각 코호트를 새 바이알로 옮깁니다. 테스트 당일 6개의 균등한 시간대별로 각 조건을 테스트할 수 있도록 충분한 수의 코호트를 준비하여 일주기 변조 행동을 분석합니다. 또한, 테스트 전 2일 동안 초파리를 25 °C의 지속적인 암조건(constant darkness)에서 유지합니다.실험 설계와 관계없이, 행동 분석 전 최소 1시간 전에 초파리를 희미한 적색광만 켜진 실험 행동실로 옮기십시오. 광자극이 결과에 영향을 주지 않도록 희미한 적색광 아래에서 실험을 진행하십시오. 실험 전, 최소 10분 동안 시스템에 공기를 통과시켜 공기 흐름을 보정하십시오.관찰 바이알 아래에 흰색 종이를 놓아 대조도를 높여 초파리의 가시성을 향상시킵니다. 공기 흐름이 안정되면 퀵 릴리스를 분리하고 각 관찰 바이알에 30마리의 초파리 코호트를 넣습니다.플라이 바(fly bar)의 매 가동 시마다 각 실험 조건을 모두 테스트하십시오. 이는 실험의 견고함을 높이고 일일 변동으로 인한 영향을 최소화하기 위함입니다. 모든 관찰 바이알을 로드한 후, 공기 흐름을 다시 연결하고 타이머를 시작하십시오.타이머 하나는 알코올 노출 총 시간을 측정하는 데 사용하고, 다른 하나는 실험 전반에 걸쳐 5분 간격으로 시간을 측정하는 데 사용하십시오. 공기 흐름을 모니터링하고 일정하게 유지되도록 필요한 조정을 수행하십시오. 일반적으로 공기 흐름은 적색등 램프를 사용하여 5분마다 안정화됩니다.쓰기 반사(writing reflex)를 상실한 파리의 수를 측정하십시오. 램프는 바이알에서 최소 12인치 거리를 유지하십시오. 바이알을 강하게 톡 쳐준 후, 약 4초 이내에 스스로 벽면을 타지 못하는 파리의 수를 세십시오.이 파리들은 여전히 다리와 날개를 움직일 수는 있지만, 스스로 몸을 바로 세울 수는 없습니다. 만약 파리가 어떤 사지도 움직이지 않는다면, 이는 완전히 진정된 상태입니다. 이는 righting reflex(정위 반사)의 부재와는 다른 기준으로 평가될 수 있습니다.세션은 약 1시간 동안 진행되며, 종료 시 설명된 프로토콜을 사용하여 각 파일 내 초파리의 총 마릿수를 계산합니다. 알코올 민감도의 일주기 변조를 측정하였습니다. Canton S의 암흑기 둘째 날 동안 여섯 개의 시점에서 쓰러짐 반사(writing reflex)의 결여를 측정하였으며, 하루 중 측정 시간은 시간에 유의미한 영향을 미쳤습니다.초파리의 절반이 적응에 실패했습니다. 30% 알코올 증기로 40분 동안 진정시킨 초파리의 비율을 측정했습니다. 측정은 CT 5(주간)와 CT 17(야간)에 수행되었습니다.주관적 낮 시간 동안 진정된 파리의 수가 밤에 비해 유의미하게 적은 것으로 나타났습니다. 시계열 분석을 통해 Canton S 파리와 white 1 1 1 8 변이 파리를 비교했을 때, 쓰기 반사(writing reflex)와 진정 상태에서 차이가 있음이 확인되었습니다. Canton S 배경에서 white 1 1 1 8 파리는 Canton S보다 에탄올 증기에 반응하여 더 나은 쓰기 반사를 보였습니다. white 1 1 1 8 변이체와 야생형 파리 사이에는 진정 속도에서도 차이가 발견되었습니다.이러한 차이는 white 1 1 1 8 돌연변이로 인해 생체 내 적들의 수준이 변화했기 때문일 가능성이 가장 높습니다. 따라서 많은 형질전환 계통에 존재하는 white 1 1 1 8 돌연변이로 인한 행동 반응을 제어하는 것이 필요합니다. 이 영상을 시청하고 나면, fly barn을 사용하여 초파리에 알코올을 투여하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.초파리를 체계적인 방식으로 수집하고, 어두운 적색광 아래에서의 관찰을 최대한 표준화하는 것이 필수적입니다.

the-flybar-administering-alcohol-to-flies

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

에 대한 에탄올의 sedating 효과를 측정하는 간단한...

파리에서 에탄올 민감도를 측정하는 간단한 방법

이 비디오는 살아있는 성충 파리를 주입하는 방법을 설명하며, 표식작용 분석을 위해 표지된 입자와 트리판 블루를 파리 복부에 주입하는 프로토콜의 예시를 포함하고 있습니다.

성충 초파리 주사: 화합물 또는 라벨 전달 방법

이 비디오는 박테리아 현탁액을 파리 체강에 나노 주입하여 박테리아 증식 및 감염을 초래하는 방법을 보여줍니다. 파리의 면역 반응은 일부 박테리아를 제거하는 반면, 다른 박테리아는 면역 제거를 벗어나 숙주 내에서 생존하여 감염을 일으킵니다.

나노 인젝터를 사용하여 박테리아 현탁액으로 파리를 감염시키는 것

이 비디오는 병원성 박테리아를 체강에 직접 도입하여 초파리를 감염시키는 기술을 보여줍니다. 이 방법은 상피 장벽 및 기타 수동적 방어 메커니즘을 우회하여 전신 감염을 유도할 수 있습니다. 감염 시, 파리의 폐사율을 모니터링하고 다운스트림 분석을 수행하여 결과로 발생하는 면역 반응을 평가합니다.

파리에 전신 세균 감염을 도입하는 패혈성 바늘찌 기술

초파리에서 에탄올 민감도와 빠른 내성을 측정하기 위한 간단한 분석은 이러한 중요한 에탄올 관련 행동을 조사하기 위해 이 모델 유기체의 사용을 용이하게 합니다. 여기에서는 파리의 에탄올 감도와 빠른 내성을 측정하기 위한 비교적 간단하고 확장 가능한 분석법이 설명됩니다.

에탄올 진정 감도 및 신속한 공차 측정을위한 저렴하고 확장 가능한 행동 분석<em&gt; 초파리</em

여기에 설명 된 여러 수 제 도구의 사용 전송, 진정, 성인 Drosophila를죽일, 뿐만 아니라 유리 문화 유리 유리 병을 청소 하 고 계란을 수집. 이러한 도구는 쉽게 만들 수 있으며 Drosophila를 처리하는 데 매우 효율적입니다.

과일 파리를 처리하는 간단한 수제 도구 -초파리 멜라노가스터

Drosophila에 있는 알콜 감도를 측정하는 현재 방법은 파리의 단을 시험하기 위하여 디자인됩니다. 우리는 단일 파리의 큰 숫자에 알코올 감산 도성을 평가하기위한 간단한, 저렴한 비용, 높은 처리량 분석을 제시한다. 이 방법은 특수 공구를 필요로하지 않으며 일반적인 재료를 사용하여 모든 실험실에서 수행 할 수 있습니다.

개별 초파리 멜라노가스터의 알코올 침전 시간을 측정하기위한 높은 처리량 방법

플라이펍 분석은 과일이 에탄올의 영향으로 드로소필라 멜라노가스터가 표시하는 행동을 측정합니다. 이 분석은 모든 수준에서 실험자에 의해 쉽게 마스터되고 다양한 기화 자극에 적용되어 약물 남용 및 중독 연구를 용이하게 할 수 있습니다.

플라이펍, 에탄올 유발 행동 억제 및 과민성 연구

초파리(Drosophila melanogaster)는 생물학 및 독성 연구에 널리 사용됩니다. 파리의 유용성을 확장하기 위해 우리는 여러 파리 샘플을 휘발성 전신 마취제(VGA)에 동시에 노출시키는 기기인 직렬 마취 어레이를 개발하여 VGA의 부수적 효과(독성 및 보호)를 조사할 수 있도록 했습니다.

Drosophila melanogaster를 사용한 휘발성 물질의 고처리량 조사를 위한 직렬 마취 어레이

이 논문은 Lower dipteran fly Bradysia (Sciara) coprophila의 실험실 유지 관리 (짝짓기 및 먹이 포함)를 간략하게 설명합니다.

Lower Dipteran Fly Bradysia (Sciara) coprophila의 실험실 유지 보수 : 새로운 / 오래된 신흥 모델 유기체

학습하세요 Drosophila에서 알코올 유도 행동을 측정하는 방법을, 저렴하고 쉽게 조립할 수 있는 플라이 바를 사용하여. 생체 리듬 주기에 따른 알코올 민감도 차이를 연구하고 유전적 요인의 영향을 분석할 수 있습니다.

의 flybar : 파리에 주류 관리

더 많은 동영상 탐색