Name: 마우스의 Parabiosis : 자세한 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-06T21:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: 배우세요 마우스 parabiosis 수술 기법으로 공유 순환계를 연구하는 방법을. 팔꿈치와 무릎 관절을 연결하고 흡수성 봉합사로 피부를 봉합합니다. 수술 후 10~14일 내 혈액 키메리즘이 확인되며 면역억제제 없이 장기간 관찰이 가능합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는 수술 기법에 대한 지원은 Adriane 모슬리와 Libuse 위 Jerabek (스탠포드) 감사의 말씀을 전합니다.

모든 동물 실험은 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 UCLA의 동물 관리 및 사용위원회의 지침과 건강 가이드의 국립 연구소에 의해 수행되었다. 아래에 기술 된 절차의 지속 기간은 시작부터 끝까지 약 45-60 분이다. 1. 외과 분야의 제조 <ol><li> 깨끗한 동물 수술 방에서 절차를 수행합니다. </li><li> 장비 : 이소 플루 란 기화기, 가열 패드 Gaymer T 펌프. </li><li> 무균 도구 : 두 개의 곡선 포셉, 미세 가위, 바늘 홀더. </li><li> 멸균 장갑은 전체 절차를 수행하는 동안 사용되어야한다. </li></ol> 2. 동물의 준비 <ol><li> 같은 케이지에서 유사한 무게 및 크기의 동일한 유전 적 배경에서 두 남성 또는 여성 마우스, 배치하고 조화로운 공동 생활을 보장하기 위해 최소 2 주에 모니터링 할 수 있습니다. 여성 생쥐 인해 덜 공격적인 행동 선호된다. </li><li> 동물을 마취이소 플루 란 기화기를 사용하여. 포지 인감 유도 챔버에 넣고 마우스는 이소 플루 란 기화기 (4-5 % 년 V / V)에 연결. 마취가 유도되면, 이소 플루 란 (1.5 ~ 2 %의 V / V)에 연결된 코 콘을 통해 절차를 통하여 마취 모피 면도 영역에 동물을 전송하고 유지한다. 눈의 건조를 방지하기 위해 Q-팁 안과 연고를 적용합니다. </li><li> 앙와위에서 동물을 놓습니다. 철저 오른쪽이 약 1cm에 1cm 무릎 팔꿈치 위에서 시작에 배치 좌측 및 마우스의 오른쪽 측면에 배치 된 마우스의 좌측 면도. </li><li> 무균 철저 알코올 잎사귀 뒤에 베타 딘 적신 물티슈 (2 배)을 닦아 면도 영역을 준비합니다. 살균 패드로 덮여 가열 패드에서 마우스를 놓습니다. </li><li> 진통제의 경우, 각각 10 ㎎ / ㎏과 0.1 ㎎ / ㎏의 용량으로 복강 또는 피하 Carprofen 및 프레 놀핀을 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 로, 다시 다시, 그들의 편에 동물을 배치위로 향하게 면도 영역을 djacent. 외과 영역의 오염을 방지하기 위해 작업에만 영역을 노출 멸균 드레이프와 마우스를 포함한다. 수술을 수행 할 때 무균 유지 작은 주름 구멍을 만듭니다. 우리는 녹화하는 동안 더 나은보기를 가질 주름 창이 큰했다. </li></ol> 3. Parabiosis <ol><li> 날카로운 가위를 사용하여 팔꿈치 위 0.5 cm 각 동물 시작하는 면도 측면에 무릎 관절 아래 0.5 cm (그림 1)에있는 모든 방법을 길이 방향 피부 절개를 수행합니다. 절개 후, 부드럽게 곡선 포셉 한 쌍의 피부를 개최하여 피하 근막으로부터 피부를 분리하고 무료 피부의 0.5 cm를 만드는 두 번째 쌍의 근막을 분리합니다. 전체 절개를 따라 이러한 분리를 수행합니다. </li><li> 다른 오른쪽 주두에 동물의 왼쪽 주두를 부착하여 가입을 시작합니다. olecranons 및 무릎 관절은 모두 명확하게 구별 할 수있는 다음과 같은 일이다전자 피부 절개. 결합을 용이하게하기 위해, 먼저 마우스의 팔꿈치를 구부리고 주두 아래의 비 흡수성 3-0 봉합사의 바늘을 전달합니다. 마찬가지로, 두 번째 마우스의 팔꿈치를 구부리고 그 아래 같은 봉합을 전달합니다. 이중 수술 매듭으로 단단히 관절을 연결합니다. </li><li> 동일한 절차에 따라 무릎 관절을 연결합니다. </li><li> 조인트의 부착에 이어 연속 흡수성 5-0 Vicryl 봉합사가 무릎을 향해 팔꿈치으로부터 배쪽으로부터 시작이 동물의 피부를 연결한다. 피부 파열과 분리를 방지하기 위해 팔꿈치와 무릎 주변에있는 피부의 단단한 봉합 폐쇄를 수행합니다. 복부 피부 부착이 완료되면, 이중 수술 매듭을 수행합니다. 발생하기 쉬운 위치에 마우스를 놓고 두 번 수술 매듭으로 끝나는 봉합 등쪽을 계속합니다. 봉합사의 연속성을 확인하고 개구의 부족을 확인한다. </li><li> dehy을 방지하기 위해 피하 각 마우스에 0.9 % NaCl을 0.5 ㎖를 관리dration. </li></ol> 4. 수술 후 회복 <ol><li> 복구 될 때까지 가열 패드에 동물이 오지 않게하십시오. </li><li> 복구 후, 진통제 carprofen 및 부 프레 노르 핀을 제공합니다. (단계 2.5) 전술 한 바와 같은 용량에서 48 시간 동안 각각 복강 또는 피하 매 24 및 12 시간을 반복합니다. 이러한 흔들림 등의 통증과 고통의 흔적을 동물을 모니터링, 꼬리의 혼수, 씹는 등의 손질의 부족은 2 주 동안 매일, 다시 아치. </li><li> 예방, 2 mg의 외상 치료 / ㎖ +0.4 mg의 세균 감염을 방지하기 위해 10 일 동안 / ㎖ 트림 자신의 물병 설파 / 트리 메소 경구 현탁액으로 쥐를 치료​​. </li><li> 집 침구 소재의 구토물이기도를 막는 것을 방지하기 위해 모 놀리 식 침구 재료 (예를 들면 종이 타월이나 흡수성 살균 패드) 깨끗한 케이지의 각 parabiotic 쌍. 그들의 머리 위로와 흉골 드러 누움을 유지 할 수있을 때 침구 못 케이지에 동물을 반환합니다. 부담을 최소화하기 위해parabiotic 존재를 조절하면서 음식에 도달으로, 케이지 바닥에 적신 식품 알약을 배치합니다. 둥지 재료를 제공합니다. 1 ~ 2 주 parabiotic 마우스는 수술 쌍 앞과 뒷다리 - 사지에 일반적으로 ambulate하는 기능이 있습니다. </li><li> 혈액 키메라는 수술 후 10~14일 발생합니다. </li></ol> 5. 확인 및 역방향 절차 <ol><li> 2 주 혈액 키메라 (그림 3)을 확인하기 위해 유세포 분석을 위해 각 마우스의 꼬리 정맥에서 혈액을 채취 한 후. </li><li> 유세포 분석을위한 혈액 처리 : 10 mM의 EDTA 500 ㎕의 혈액 2 ~ 3 방울을 희석. (PBS에 희석) 2 % 덱스 트란의 500 μl를 추가, 철저하게 혼합하고, 30 분 동안 37 ° C에서 알을 품다. 5 분 동안 1,200 rpm에서 새로운 튜브, 스핀 뜨는을 전송하고 유세포 분석을 위해 PBS의 펠렛 세포 (또는 다른 버퍼)를 resuspend. </li><li> 실험 설계에 따라 parabiotic 쌍은 분리 될 수있다나중에 포인트를 톤. 우리의 경험, 우리는 어떤 합병증없이 9 개월 parabiosed 쌍을 유지하고있다. </li><li> 무균 수술 표면에 반대 절차를 수행합니다. (단계 2.2) 상술 한 바와 같이, 이소 플루 란 기화기 (4-5 %)에 접속하고 1.5-2 %의 이소 플루 란으로 마취를 유지 유도 챔버에 배치하여 마우스를 마취. </li><li> (2.3, 2.4 단계) 초기 봉합 주변 지역에서 머리를 제거하고 무균 전술 한 바와 같이 면도 영역을 준비합니다. </li><li> 진통제의 경우, 각각 10 ㎎ / ㎏과 0.1 ㎎ / ㎏의 용량으로 복강 또는 피하 Carprofen 및 프레 놀핀을 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> (단계 2.6) 전술 한 바와 같이 멸균 드레이프로 수술 영역을 커버. </li><li> 날카로운 가위를 사용하면, 측면 봉합을 따라 세로 절개를 통해 마우스를 분리하고 부드럽게 곡선 포셉 한 쌍의 두 생쥐 사이에 새로 형성된 근막을 분리합니다. 관절을 분리, 봉합사의 매듭을 잘라를 연결. 부드러운 가장자리를 달성하고 흡수 연속 5-0 코팅 Vicryl 봉합사로 피부를 다시 연결하는 절개를 따라 피부를 낸다. </li><li> 탈수를 방지하기 위해 각 마우스에 0.9 % 염화나트륨 피하 0.5 ㎖를 관리 할 수​​ 있습니다. 복구 될 때까지 가열 패드에 동물이 오지 않게하십시오. </li><li> 복구 후, 48 시간 동안 매 12 시간 진통 관리, carprofen (10 ㎎ / ㎏) 매 24 시간 및 부 프레 노르 핀 (0.1 ㎎ / ㎏)를 반복합니다. </li><li> 세균 감염이 10 일 동안 자신의 물병 설파 / 트리 메소 경구 현탁액 (2 밀리그램의 외상 치료 / ㎖ 0.4 밀리그램 / 밀리리터 트림)과 쥐를 치료​​ 방지합니다. </li></ol>

<ol><li>Bert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exp%C3%A9riences+et+consid%C3%A9rations+sur+la+greffe+animale%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+de+l%27Anatomie+et+de+la+Physiologie%22%5BJournal%5D)">Expériences et considérations sur la greffe animale.</a> Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 Forthcoming.</li>
<li>Bunster, E., Meyer, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+methods+of+parabiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">Improved methods of parabiosis.</a> Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).</li>
<li>Waskow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+parabiotic+mice+for+the+study+of+DC+and+DC+precursor+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of parabiotic mice for the study of DC and DC precursor circulation.</a> Methods Mol. Biol. 595, 413-428 (2010).</li>
<li>Finerty, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiosis+in+physiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Parabiosis in physiological studies.</a> Physiol. Rev. 32, 277-302 (1952).</li>
<li>Aicher, A., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonbone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells%3A+what+is+their+exact+location%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Nonbone marrow-derived endothelial progenitor cells: what is their exact location.</a> Circ. Res. 101, e102(2007).</li>
<li>Abe, S., Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+derived+from+the+circulation+contribute+to+the+repair+of+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Cells derived from the circulation contribute to the repair of lung injury.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 170, 1158-1163 (2004).</li>
<li>Donskoy, E., Goldschneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymocytopoiesis+is+maintained+by+blood-borne+precursors+throughout+postnatal+life.+A+study+in+parabiotic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Thymocytopoiesis is maintained by blood-borne precursors throughout postnatal life. A study in parabiotic mice.</a> J. Immunol. 148, 1604-1612 (1992).</li>
<li>Powell, A. E., Anderson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fusion+between+Intestinal+epithelial+cells+and+macrophages+in+a+cancer+context+results+in+nuclear+reprogramming%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Fusion between Intestinal epithelial cells and macrophages in a cancer context results in nuclear reprogramming.</a> Cancer Res. 71, 1497-1505 (2011).</li>
<li>Duyverman, A. M., Kohno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transient+parabiosis+skin+transplantation+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">A transient parabiosis skin transplantation model in mice.</a> Nat. Protoc. 7, 763-770 (2012).</li>
<li>Ajami, B., Bennett, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+self-renewal+can+sustain+CNS+microglia+maintenance+and+function+throughout+adult+life%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life.</a> Nat. Neurosci. 10, 1538-1543 (2007).</li>
<li>Weissman, I. L., Jerabek, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerance+and+the+H-Y+antigen%3A+Requirement+for+male+T+cells%2C+but+not+B+cells%2C+to+induce+tolerance+in+neonatal+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Tolerance and the H-Y antigen: Requirement for male T cells, but not B cells, to induce tolerance in neonatal female mice.</a> Transplantation. 37, 3-6 (1984).</li>
</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없습니다.

여기서 설명하는 parabiosis 방법은 낮은 사망률 최소한의 기술적 어려움과 결과를 제시한다. 무릎 및 팔꿈치 관절의 첨부 파일 Bunster과 메이어 기술의 상당한 개선이다. 그러나, 프로 시저 따라서 수술 내내 멸균 조건의 유지가 필수적이다 침습 남아있다. 상기 수술 부위의 감염을 방지하기 위해서는 parabiosed 동물 항생제의 조합을 수신하고 주기적으로 감시하는 것이 중요하다. 회사 지원을 보장하고 고통을 방지하기 위해, 팔꿈치와 무릎을 연결하는 봉합은 오히려 조직을 통과하는 것보다 관절을 둘러싸고해야합니다. 이소 플루 란 흡입에 대한 대안으로서, 마취 케타민 / 자일 라진 또는 기관위원회의 승인 다른 마취제의 복강 내 주사를 이용하여 유도 될 수있다. 이소 플루 란을 사용하는 장점은 급속 마취를 유도하고 크게 R을 줄일 수 있다는 것이다ecovery 시간. 또한, 마취의 수준을 정밀하게 제어 할 수있다. 두 동...

Parabiosis, 수술은이 유기체의 접합은, 제 공유 순환계를 연구하는 모델을 개발하는 방법으로 폴 버트에 의해 1864 년에 설명되고이 한 쥐의 피부와 근육 벽의 결합으로 구성 하였다. Parabiosis 염증 3의 사이트에있는 미세 혈관의 형성을 촉진하고 뇌하수체와 생식선뿐만 아니라 고혈압 4 신장의 역할 사이의 호르몬 통신 등의 생리 학적 연구에서 여러 응용 프로그램을 가지고 있습니다. 그것은 또한, 혈관 신생 4.0, 조혈 줄기 세포 (6)의 이동, 및 림프구 매매 7뿐만 아니라 종양 전이 8,9에서 염증성 또는 줄기 세포 순환의 역할과 동역학에서 전구 세포의 모집 및 통합을 조사하기 위해 사용되어왔다 및 신경 퇴행성 질환 10. parabiosis 거짓말의 한 가지 중요한 장점그의 제휴 동물 면역 반응을 유발하지 않고 세포의 이동과 혈관 신생을 허용, 일반적인 순환 항원을 공유 할 수 있습니다. 중요한 것은, 와이즈맨 등.이 남성과 여성의 생쥐 사이 parabiosis을 보여 주었다은 11 항체 안티 HY의 형성으로 이어질하지 않습니다. 폴 버트에 의해 설명 원래의 프로토콜에서 두 동물은 피부와 근육 벽 (1)의 연결을 통해 함께 합류했다. 그러나이 방법은, 동물에 상당한 부담을 야기 인해 상처의 감염에 높은 사망률의 결과. 그 이후 parabiosis 기술은 가장 지배적 인 1933 년 2 Bunster과 메이어에 의해 제안 된 프로토콜 인으로 여러 그룹에 의해 수정되었습니다. 그들의 방법은 동물에 대한 더 나은 지원 및 더 적은 고통을 허용, 견갑골의 관절, 체강, 피부의 결합 포함되어 있습니다. 동시에, 새로운 방법은 최소의 수술 치료와 유의 귀착cantly는 사망률을 감소. 여기에 설명 된 프로토콜은 덜 침습적이고 탄력이 합류 할 수 Bunster과 메이어 기술의 변형이다. 즉, 마우스는 팔꿈치, 무릎 관절뿐만 아니라 피부를 통해 연결된다. 따라서이 결합을 막고 피부의 확장과 적은 통증과 합병증의 원인이됩니다. 여기에서 우리는 마우스를 표현하는 구성 적 GFP에 야생형 (WT) 성인 마우스의 결합을 설명합니다. 우리는 수술 후 2 주 우리가 공유 순환계를 만드는이 수술의 효능을 입증 혈액 키메라 비율​​의 50 %를 달성 할 수 있음을 보여준다.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane-Phoenix</td><td>Clipper</td><td>NDC 57319-559-06</td><td></td></tr><tr><td>Posi-Seal 유도 챔버</td><td>분자 이미징 제품</td><td>AS-01-0530-SM</td><td></td></tr><tr><td>휴대용 마취 시스템</td><td>분자 이미징 제품</td><td>AS-01-0007</td><td></td></tr><tr><td>Gaymer T 펌프</td><td>Gaymar Industries, Inc</td><td>TP650</td><td></td></tr><tr><td>온난화 담요(가열 패드)</td><td>Kent Scientific Corp</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>곡선 집게</td><td>Roboz</td><td>RS-5101</td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>FST 14063-09</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>FST</td><td>FST 12501-13</td><td></td></tr><tr><td>전기 면도기</td><td>Oster</td><td>Golden A5</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스의 parabiosis : 자세한 프로토콜

Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Parabiosis 혈행의 공유를 허용하는 두 가지 생물의 연합 수술이다. 이 동물의 피부에 부착하면 염증 부위에서의 미세 혈관 형성을 촉진한다. Parabiotic 파트너는 순환 항원을 공유하고, 따라서 불리한 면역 반응의 무료입니다. 먼저 1864 년 1 폴 버트에 의해 설명, parabiosis 수술은 동물의 생존 2을 개선하기 위해 1933 년에 Bunster과 메이어에 의해 세련되었다. 현재 프로토콜에서 두 개의 마우스는 수술 Bunster과 메이어 기술의 변경 다음과 결합된다. 동물은 봉합 피부에 부담을 방지 확고한 지원을 허용하는 피부의 첨부 파일 다음에 팔꿈치와 무릎 관절을 통해 연결되어있다. 여기서, 우리는 세부 사항에서 야생형 (WT) 마우스에 마우스를 표현하는 유비쿼터스 GFP의 결합 parabiotic에 대해 설명합니다. 혈액 circulat 두 주 절차 후에, 한 쌍의 분리되고 GFP 양성 세포는 유세포 분석에 의해 검출 될 수있다WT 마우스의 이온. 혈액 키메라는 하나가 다른 하나의 동물에서 순환 세포의 기여를 조사 할 수있다.

두 생물의 parabiosis의 예상 결과는 일반적인 혈액 순환에 각 동물의 순환 시스템의 동일한 기여 (그림 2)입니다. 하나는 쉽게 유세포 분석에 의한 parabiosed WT와 GFP 긍정적 인 생쥐의 혈액의 성공적인 평형을 확인할 수 있습니다. 여기에, 정맥의 혈액은 수술 후에 2 주에 모두 parabionts의 꼬리에서 얻어진 것으로, (적혈구를 제외하는) 말초 혈액 세포에 대한 분획 하였다. 분별 조혈 유래 세포 분획은 후속 GFP 양성 및 WT 세포의 존재를 유동 세포 계측법에 의해 분석 하였다. 약 반 GFP 긍정적 인 반 WT 혈액 세포 (53 % WT 세포와 47 % GFP 세포) (그림 3)으로 표시된 바와 같이 이전의 연구와 일치, WT 마우스의 혈액은 키메라의 존재를 공개했다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/50556/50556fig1.jpg" /><br ...

이 유기체의 접합 Parabiotic 공유 순환 시스템의 개발에 이르게한다. 이 프로토콜에서, 우리는 야생형 마우스와 구성 적 GFP 발현 마우스 사이 parabiotic 연결을 형성하는 수술 단계를 설명한다.

마우스의 Parabiosis : 자세한 프로토콜

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

이 실험 절차의 전체적인 목표는 두 마리 생쥐의 파라바이오시스(parabiosis) 결합을 수행하여 공유 혈관계 시스템을 연구하는 것입니다. 이를 위해 먼저 동물의 인접한 측면에 절개를 가합니다. 근막을 분리한 후, 두 생쥐의 팔꿈치와 무릎 관절을 단단히 연결합니다.마지막 단계는 연속 봉합사를 이용하여 두 동물의 피부를 연결하는 것입니다. 최종적으로, 시술 후 10~14일 이내에 유세포 분석을 통해 혈액 키메리즘을 확인할 수 있습니다. 골수 이식이나 세포 주입과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 면역 억제제가 필요하지 않으며, 장기간 동안 CX 순환을 유지할 수 있다는 점입니다.시연할 절차는 턱 결찰술입니다. 실험실의 동물 외과 전문의는 최소 2주 전에 성별이 같고(가급적 암컷), 유전적 배경이 동일하며 크기와 체중이 비슷한 마우스 쌍을 여러 케이지에 구성하십시오. 조화로운 쌍이 선택되면, 청결한 동물 수술실에서 파라바이오시스(parabiosis)를 수행하십시오.모든 접촉 표면, 도구 및 장갑이 멸균되었는지 확인하십시오. isoflurane 기화기와 연결된 PAI seal 유도 챔버에서 마우스를 마취시킵니다. 마취가 유도되면, 시술 전 과정 동안 마취 상태를 유지하십시오.노즈 콘을 사용하여 낮은 농도의 isoflurane을 투여한 후, 복부 털을 양측에서 삭모하고 안연고를 도포합니다. 그런 다음 베타딘에 적신 솜으로 삭모 부위를 철저히 닦아내고 알코올 솜으로 닦아 무균적으로 준비합니다.다음으로, 멸균 패드로 덮인 가열 패드 위로 마우스를 옮깁니다. 진통제로 carprofen과 buprenorphine을 사용합니다. 마우스를 털을 민 부위가 위로 향하도록 서로 등을 맞대고 옆으로 눕힙니다.그런 다음 멸균 드레이프로 마우스를 덮고 수술 부위만 노출시킵니다. 날카로운 가위를 사용하여 각 동물의 무릎 관절 0.5 cm 아래에서 시작하여 팔꿈치 0.5 cm 위에서 끝나는 종방향 피부 절개를 수행합니다. 절개 후, 한 쌍의 곡선 핀셋으로 피부를 들어 올리고 다른 한 쌍의 핀셋으로 근막을 분리하여 피하 근막에서 피부를 조심스럽게 떼어냅니다.0.5 cm의 여유 피부를 만들기 위해, LEC와 무릎 관절이 명확하게 구분되도록 합니다. 피부 절개 후, 좌우 LEC를 연결하기 시작합니다. 먼저 첫 번째 마우스의 팔꿈치를 구부리고 3.0 봉합사의 바늘을 Theon 아래로 통과시킵니다.둘째로, 두 번째 마우스의 팔꿈

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 프로토콜은 남성의 testes에서 정자를 추출 후 여성 쥐를 inseminating하는 방법을 보여줍니다. 정확한 시간 발달 연구에서뿐만 아니라 유전자 변형 작업 필요한 경우이 절차는 유용합니다.

수확 정자와 마우스의 인공 수정

이 프로토콜은 서로 다른 유전적 배경을 가진 기생충 제브라피시 배아를 생성하는 방법에 대한 단계별 지침을 제공합니다. 제브라피시 배아의 탁월한 이미징 기능과 결합하면 이 방법은 관심 후보 유전자에 대한 세포 자율 기능과 비세포 자율 기능을 조사할 수 있는 독특하고 강력한 수단을 제공합니다.

Blastulae 개발의 외과 융합에 의해 Parabiotic 제브라 피쉬 배아의 생성

정액 액 화는 정액 젤에서 해방 될 정자에 대 한 필요 합니다. 이 연구는 여성 재생산 지역 포스트 성교에서 정액을 수집 하 고 정액 액 화 시간을 측정 하기 위한 절차를 제공 합니다.

후에 쥐에 있는 정액 액의 측정 및 여성 재생산 지역에서 정액 짝짓기의 컬렉션

이 프로토콜의 정형 외과 수술 후 neuroinflammation 및 행동 변화, 그리고 노화 중 조직 재생 연구 parabiosis와 결합 메커니즘을 연구 하는 데 사용 되었습니다 마우스 모델을 설명 합니다.

정형 외과 수술 후 인지 기능 장애 및 조직 재생 연구의 마우스 모델

여기, 선물이 수정된 oocyte의 perivitelline 공간에서 lentiviral 벡터의 간단한 주입에 의해 transgene 통합 및 높은 효능과 설립자 유전자 변형 생쥐의 생산을 촉진 하는 프로토콜.

유전자 변형 마우스 생산을 중재 하는 lentiviral: 창시자의 직접적인 연구를 위한 간단 하 고 매우 효율적인 방법

여기에서 우리는 포도당의 꼬리 정맥 주입을 통해 2개의 parabionts의 공유 혈액 순환의 성공적인 설치를 검출하는 새로운 방법을 기술합니다, 이는 최소한의 손상을 일으키는 원인이 되고 parabionts에 치명적이지 않습니다.

카달 정맥 포도당 주사에 의한 파라바이오틱 마우스의 공유 혈액 공급 확립 감지

제시된 자궁 경부 조작 방법은 정관 수술을받은 수컷과 암컷을 번식시킬 필요없이 생쥐에서 가임신을 유도 할 수 있습니다. 비수술적 배아 이식과 비수술적 인공수정의 성공을 위해서는 가임신유도가 필요하며, 이 두 가지 모두 제시되어 있다.

비수술적 배아 이식 또는 인공 수정 전에 정관 수술을 받은 수컷 없이 암컷 마우스에서 가임신을 유도하는 행위

여기에서 우리는 배양에서 특정 시상하부 세포 아형을 성장시키기 위한 프로토콜을 제시합니다. 세포는 적절한/고유한 막 마커를 기반으로 선택할 수 있으며 면역형광, 전기생리학 및 생화학적 분석을 포함한 많은 응용 분야에서 사용할 수 있습니다.

호르몬, 대사 및 전기 조절 연구를 위한 표적 시상하부 뉴런의 분리

여기에서는 마우스에서 ROSI(round spermatid injection)를 수행하는 방법, 유망한 임상 응용 기술을 가진 기술이며 배아 발달의 기전을 조사하기 위한 유용성을 소개합니다.

마우스 라운드 Spermatid 주입

이 논문은 단일 세포 및 핵의 염기서열 분석을 위한 gastrulating mouse embryos의 고품질 single-cell 및 nuclei suspensions를 위한 파이프라인을 설정합니다.

돌연변이 전체 마우스 배아의 단일 세포 RNA 염기서열 분석: epiblast에서 gastrulation 말기까지

배우세요 마우스 parabiosis 수술 기법으로 공유 순환계를 연구하는 방법을. 팔꿈치와 무릎 관절을 연결하고 흡수성 봉합사로 피부를 봉합합니다. 수술 후 10~14일 내 혈액 키메리즘이 확인되며 면역억제제 없이 장기간 관찰이 가능합니다.

마우스의 Parabiosis : 자세한 프로토콜

더 많은 동영상 탐색