나트륨 히알루 론산의 망막 주사 설치류에있는 망막 박리 모델

본 실험 절차의 전반적인 목표는 망막하 출혈 없이 재현 가능하고 지속적인 박리 높이를 가진 실험적 망막 박리를 유도하는 것입니다. 이를 위해 먼저 후방 각막연의 측두측 결막을 절개하여 결막과 공막을 분리합니다. 두 번째 단계에서는 30 gauge 바늘 끝을 사용하여 자가 밀폐형 공막 절개 및 각막 천자를 수행합니다.

다음으로 신경감각망막을 하부의 망막색소상피로부터 분리하기 위해 sodium urinate를 망막하 공간에 주입합니다. 마지막 단계로, 공막 절개 부위에 cyanoacrylate 접착제를 도포하고 결막을 원래 위치에 다시 부착하여 sodium hall urinate의 누출 위험을 줄입니다. 최종적으로, 커버 글라스를 사용하여 안저를 검사함으로써 망막하 출혈 없이 bolus 망막 박리가 형성되었는지 확인합니다.

설치류의 망막 박리를 유도하는 기존 방법들은 망막 박리의 높이와 지속성에 변동성을 초래하여, 측정되는 세포 사멸률이 일관되지 않게 나타날 수 있습니다. 본 기술을 이용하면 망막하 출혈의 위험을 줄이면서도 재현 가능하며 지속적인 수포성 망막 박리를 유도할 수 있어, 설치류의 신뢰성 있는 망막 박리 모델을 구축할 수 있습니다. 설치류의 실험적 망막 박리는 수행 방법이 비교적 간단하고 시간 경과가 적절하며, 인간의 질환과 매우 유사합니다.

따라서 이는 광수용체 세포 사멸의 기전과 시력 상실 예방 치료법을 연구하기 위한 훌륭한 모델입니다. 망막 변성 질환에서 박리된 망막의 다양한 광수용체 세포 사멸을 연구할 때, 망막하 출혈 없이 재현 가능한 박리를 유도하는 것이 유리합니다. 이는 망막 박리 기간의 연장이나 망막하 출혈의 발생이 광수용체 세포 사멸에 영향을 미칠 수 있기 때문입니다.

8주령 마우스를 마취시킨 후 동물의 수염을 다듬고, 수술 현미경 하에서 5% phenylephrine과 0.5% tropicamide가 포함된 용액으로 동공을 확장시킵니다. 동물의 속눈썹을 제거하고, 0.5% proparacaine hydrochloride 점안액을 사용하여 국소 마취를 시행합니다. 마우스의 코가 술자 쪽을 향하도록 측위로 배치한 다음, 후방 각막연(posterior limbus)에서 측두 결막을 절개하고 핀셋을 사용하여 결막을 공막으로부터 분리합니다.

결막의 각막연 부위를 잡아 안구를 고정합니다. 그런 다음 30 gauge 바늘의 사면(bevel)이 위를 향하도록 잡습니다. 바늘 끝을 사용하여 공막에 터널을 만들고, 망막을 관통하지 않도록 주의하며 공막을 통과해 맥락막까지 진입시킵니다.

다음으로, 30 gauge 바늘을 홍채와 평행하게 잡고 각막을 천자하여 안압을 낮춥니다. 이제 바늘의 사면(bevel)이 아래를 향하도록 하여, Hamilton 10 microliter 시린지에 연결된 33 gauge 바늘을 망막하 공간에 삽입하고 sodium urinate 3.5 microliters를 주입합니다.

이렇게 하면 신경감각망막의 약 50%가 하층의 망막색소상피로부터 박리됩니다. 포셉을 사용하여 각막 천자 부위 주변의 각막을 밀어 방수가 각막 천자 부위로 흘러나오게 한 다음, 수술용 셀룰로오스 스피어를 사용하여 공막 상처 부위의 누출 여부를 확인함으로써 나트륨 요산 누출 위험을 줄입니다. 공막 상처 부위에 시아노아크릴레이트 접착제를 도포한 후 결막을 원래 위치에 다시 부착합니다.

커버 글라스를 사용하여 안저를 확인하고, 망막하 출혈 없이 망막 박리 볼루스가 형성되었는지 확인합니다. 마지막으로, 감염 위험을 줄이기 위해 눈에 항생제 연고를 도포합니다. 저체온증을 방지하기 위해 마우스를 가열 패드 위에 둡니다.

저혈압 상태가 지속된 후, 동물이 마취에서 깨어나면 다시 케이지로 돌려보냅니다. 본 프로토콜로 유도된 망막 박리의 지속성을 평가하기 위해, 박리 유도 후 3일, 7일, 14일에 냉동 절편을 제작하였습니다.

각 시점마다 6개의 안구를 사용하였으며, 헤마톡실린-에오신 염색을 통해 절편을 시각화한 결과, 모든 절편에서 수정체에 근접한 망막 박리 덩어리가 관찰되었습니다.

어떤 눈에서도 감염이나 수정체 손상의 징후가 나타나지 않았습니다. 숙련되면 이 수술은 약 5분 내에 완료할 수 있습니다. 이 시술을 시도할 때는 나트륨 누출, 심한 망막하 출혈 또는 수정체 손상이 발생하지 않도록 각 단계를 부드럽게 수행하는 것이 중요하며, 이러한 요인들은 모두 박리된 망막의 수용체 세포 사멸에 영향을 미칠 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 망막하 출혈 없이 재현 가능하고 지속적인 박리 높이를 가진 설치류의 실험적 망막 박리를 유도하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.