Name: 나트륨 히알루 론산의 망막 주사 설치류에있는 망막 박리 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-11T15:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 58 s
Description: 배우세요 설치류에서 나트륨 히알루 론산 주사를 이용한 재현 가능한 망막 박리 모델을 만드는 방법을. 이 기법은 망막 질환에서 광수용체 세포 사멸 연구와 잠재적 치료법 평가에 필수적입니다.

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우리는 중요한 검토 그녀의 지원을 위해 웬디 차오 감사합니다. 이 작품은 실명 재단 (DGV), 라이온스 안구 연구 기금 (DGV) 및 Yeatts 가족 (JWM의 관대 한 기부를 방지하기 위해 바슈롬 유리체 망막 원정대 (HM), 국립 안과 연구소의 보조금 EY014104 (JWM), 연구에 의해 지원되었다 및 DGV).

동물의 모든 실험은 비전있는 연구를위한 협회와 안과 및 비전 연구에서 동물의 사용을위한 안과 정책에 따라 수행하고, 지침과 규정은 매사추세츠 눈과 귀 부속 진료소 동물 보호위원회에 의해 규정되었다. 1. 전처리 <ol><li> MG (60)의 혼합물을 복강 내 주사로 8 주령 마우스를 마취 / 케타민과 10 ㎎ / kg 자일 라진을 kg. </li><li> 수염을 잘라. 그들은 시각화 및 기기 배치를 방해하기 때문에이 수행됩니다. </li><li> 5 % 페닐에 0.5 %의 tropicamide와 동공을 팽창. </li><li> 속눈썹을 잘라. 그들은 시각화 및 기기 배치를 방해하기 때문에이 또한 이루어집니다. </li><li> 국소 마취 (0.5 % proparacaine 염산염 눈 해결책)을 적용합니다. </li></ol> 2. 현미경 수술 <ol><li> 측면 POS에서 마우스를 설정외과 의사를 향해 코 ition. 발가락 핀치는 수술 마취를 확인하기 위해 수행되고, 멸균 장갑 전에 수술을 시작하기 입게된다. </li><li> 사후 각막 윤부에서 시간 결막을 절개하고 공막에서 결막을 분리합니다. 공막을 관통하지 마십시오. 이 단계 후, 눈을 제어하는​​ 집게와 각막 윤부에 결막을 파악. </li><li> 확인 경사와 30 G 바늘의 끝 부분을 사용하여 자체 밀봉 공막 절개는 지적했다. 공막을 공막 터널을 확인하고 맥락막에 공막 (그림 1) 침투. 망막을 관통하지 마십시오. 맥락막 출혈이 발생하고 공막 상처를 통해 제공하는 경우, 출혈이 멈출 때까지 수술 창으로 수렴를 수행합니다. 이 공막 상처가 각자 밀봉 안압과 함께있을 것입니다. </li><li> 안압을 감소시키기 위해 30 G 바늘로 찔린 각막. 전자시 조리개와 렌즈를 손상하지 않도록 아이리스 바늘 평행 사용전방에 n 다음. 안압은 각자 물개로 상처의 원인이됩니다. </li><li> 베벨 (안 눈을 향해) 아래로 향하게 한 망막 하 공간에 해밀턴 10 μL 주사기에 연결된 33 G 바늘을 삽입하고 기본 RPE에서 감각 신경 망막을 분리 부드럽게 3.5 μL의 히알루 론산 나트륨을 주입. 망막이 침투하면 히알루 론산 나트륨은 유리 같은 공간이 아니라 망막 하 공간으로 이동하기 때문에 33 G 바늘로 망막을 관통하지 마십시오. 또한,이 경구 눈물을 생성하기 때문에 빠른 주입을 피하고, 히알루 론산 나트륨은 전방으로 누출됩니다. </li><li> 수성 유머는 안압을 조절하는 집게로 각막 구멍 주위에 각막을 눌러 각막 구멍에서 흘러 보자. </li><li> 수술 창을 사용하여 공막 상처 누설의 유무를 확인합니다. </li><li> 히알루 론산 나트륨 누설의 위험을 줄이기 위해, 시아 노 아크릴 레이트 접착제 수술에 배치공막 상처. </li><li> 시아 노 아크릴 레이트 수술 접착제를 사용하여 원래의 위치로 결막을 다시 연결합니다. 이것은 상기 히알루 론산 나트륨 누설의 위험을 감소시킬 것이다. </li><li> 커버 유리를 사용하여 안저를 확인하고, 망막 하 출혈없이 수포 RD의 생성을 확인합니다. </li></ol> 3. 후 처리 <ol><li> 감염의 위험을 줄이기 위해 눈 바시 트라 신 항생제 연고를 적용한다. </li><li> 낮은 혈압 낮은 체온 이후 일으키는 마취 (케타민 (ketamine)과 자일 라진의 혼합물)을 방지하기 위해 가열 패드에 마우스를 유지합니다. </li><li> 그들이 마취에서 각성 후 다시 동물 케이지에 마우스를 놓습니다. 합병증 매일 쥐를 모니터링합니다. 어떤 합병증이 발생하는 경우, 아래에 설명 된대로 쥐를 안락사. </li></ol> 4. 희생 <ol><li> 100 mg을 복강 내 주사 후 자궁 경부 탈구로 쥐를 안락사 / 펜 토바 비탈 나트륨 및 enuclea kg을각 실험을위한 적절한 시점에서 눈 테 (미도시). 히알루 론산 나트륨이 누출 수 있기 때문에 안구 적출하는 동안 눈에 압력을 가하지 마십시오. 수 포성 RDS는 적어도 14 일 동안 지속되어야한다. </li></ol>

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매사추세츠 눈과 귀 부속 진료소는 verteporfin의 사용에 관한 세 개의 미국 특허의 소유권을 보유하고 있습니다. 또한, 매사 추세 츠 눈과 귀 의무실은 황반 변성 및 다른 질환의 치료를위한 망막 맥락막 neovasculature의 선택적인 파괴에 관한 특정 특허 출원의 지분을 보유하고 있습니다. 매사추세츠 눈과 귀 부속 진료소는 특허 및 특허 출원의 결과로 로열티를 받고 밀러 박사는 매사추세츠 눈 및 로열티 공유 조항을 포함 귀 양호​​실의 기관 특허 정책 및 절차에 따라 동일한의 몫을 받는다. 저자 박사 조앤 W. 밀러는, 과거의 이사회 멤버 및 알콘 사의 전 주주이며, 현재 알콘의 컨설턴트 역할을, 이마 젠 바이오텍, ISIS 제약, Kalvista 제약, Regeneron 제약, Inc의 및 ONL 치료학, LLC. 박사 드미트리 오스 G. Vavvas에서는 아침 식사로슈, 제넨 테크, 줄기 제약에 대한 컨설턴트로.

설치류의 눈 RD 모델을 확립하기위한 방법은 여러 가지가 3-15, 22을보고되었습니다. 그것은 일반적으로 인간의 안구 내 수술 중에 사용되는 점성 재료이며, 어떠한 공지 안구 독성 1-15와 연관되지 않기 때문에 그들의 대부분은 히알루 론산 나트륨의 망막 주입을 이용한다. 히알루 론산 나트륨은, 통상보다 오히려 식염수 또는 포스페이트 완충 식염수 (PBS)는 RD의 지속 시간을 증가시킨다. transvitreal 방식 3-6 또는 경공 방법 7-15 : 히알루 론산 나트륨의 망막 주사하는 방법으로는 두 가지 방법 중 하나를 사용합니다. 두 방법 모두 안저 관찰로 수행됩니다. transvitreal 접근 방법에서는, 망막 인젝터 retinotomy가 말초 망막에 만들어, 유리 체강 내로 도입하고, 히알루 론산 나트륨는 망막 하 공간 내로 주입된다. 이 방법에서는,이 망막 눈물은 망막의 위험을 증가시키는, 만들어진다L 출혈 즉, 망막 하 공간으로 이동 될 수 있습니다. 또, retinotomy가 만들어 렌즈 부상의 위험이있다. 경공 방법에 대한 몇 가지 수정 방법이 있습니다. 전방 천자 직접 결막, 공막, 맥락막과 망막 색소 상피를 통해 망막 하 공간에 삽입되는 히알루 론산 나트륨으로 가득 주사기에 연결된 30 G 바늘로 안압을 감소 후, 이러한 방법 7-12 대부분. 히알루 론산 나트륨이어서 망막 하 공간 내로 주입된다. 경공이 방법을 사용하여 망막 눈물 및 렌즈 부상의 위험 transvitreal 방식을 사용하여보다 작다. 그러나, 30 G 바늘로 공막 제 구멍 특히 마우스의 눈을 위해, 대형이며, 망막 하 공간 내로 주입 된 히알루 론산 나트륨은 쉽게 흠집 공막을 통해 눈 모레. 이 낮은, 덜 지속적인 RD 더 많은 변수 광 수용체 세포 죽음에 이르게한다. 더욱이, 맥락막 출혈 발생하면안압 전에 망막 히알루 론산 주입으로 감소되어 있기 때문에 공막 천공 단계는 출혈은 망막 하 공간에 확산됩니다. 몇몇 요인 망막 하 출혈 및 높이와 RD 16-21의 지속성 둘 다를 포함 분리 망막 RD의 효과에 영향을 미칠 수있다. 증가 RD (16, 17)의 높이 및 광 수용체 세포 손상과 광 수용체 세포 사멸이 증가하기 때문에 산소와 얕은 RD에 비해 높은 RD와도 경미한에서 필수 영양소의 감소 확산의 더 광범위한 수 있습니다. 망막 하 출혈은 광 수용체 세포 18 ~ 21에 대한 독성, 분리 된 망막이 독성의 가능한 메커니즘은 저산소증과 망막 하 출혈에 의한 신진 대사 중단 확산 장벽, 그리고 (철과 같은) 혈액 성분에 의해 유도 된 직접적인 신경 독성이 (가) 있습니다. RETI에 대한 보호 효과가보고되었다 렌즈 부상NAL 신경절 세포 (23)는 또한, RD의 유도 후 시각 세포 사멸에 영향을 미칠 수있다. 사입구 ​​사이트가 밀봉되어 있지 않은 경우뿐만 아니라, 나트륨, 히알루 론산은 적출 동안 눈 조작으로 새어있다. 이것은 차례로 결과의 해석에 영향을 미칠 수있는, 같은 얕은 RD의 잘못된 분류로 이어질 수 있습니다. 우리의 RD 재현성을 높이고 망막 하 출혈의 비율을 감소하는 히알루 론산 나트륨의 망막 하 주사 경공 방법 변경됨. 이 프로토콜의 핵심 단계는 주사 후 소듐 히알루로의 누설을 방지 30 G 바늘을 사용하는 자기 밀폐 공막 절개를 생성한다. 더 큰주의가 공막 상처에 지급되도록 이전의 방법과는 달리,이 프로토콜은 안저의 관찰없이 수행됩니다. 접착제의 응용 프로그램은 눈 밖으로 누출되는 히알루 론산 나트륨을 방지 할 수 있습니다. 우리의 경험에 의하면,이 프로토콜 W와 망막 하 출혈의 비율로 크게 다른 프로토콜보다 적은. 맥락막 출혈 공막 절개 단계 동안 발생하는 경우,이 단계는 안압을 감소시키기 전에 수행되기 때문에, 상기 공막의 상처를 통해서 눈을 종료한다. 맥락막 출혈 안압 및 감각 신경 망막 박리의 환원 후에 발생하면, 혈액 망막 하 공간 내로 절개한다. 우리는 다른 기술을 가진 10 ~ 20 %에 대비하여 케이스의 약 5 %에​​서 이런 일이 발견. 이 동물들은 분석에서 제외되어야한다. 이 기술은 또한, 감광체 또는 RPE 세포를 25 (24) 타겟팅 벡터 - 매개 유전자 전달의 망막 분사를 위해 사용될 수있다. 이러한 주사의 일반적인 차량 (PBS, 생리 식염수) 히알루 론산 나트륨보다 훨씬 적은 점성 때문에, 표준 기술은 더 누수에 시달리고있다. 본 명세서에 기재된 기술은, 이러한 위험을 감소시킴으로써, 벡터 전달 실험보다 재현성있게믿을 수있는.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50660/">Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate</a>. The footnotes were removed from the abstract due to redundancy in the introduction.

Erratum: Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

광 수용체는 기본 망막 색소 상피 세포에서 분리 될 때 광 수용체 세포의 죽음 이후 시각적 감소가 발생. 감광체의 물리적 분리는 연령 관련 황반 변성 (AMD), 중심 장액 맥락 망막 병증, 당뇨 망막 병증, 및 미숙아 망막증,뿐만 아니라 열공 (즉 망막 브레이크로 인한) 망막 박리 (등 각종 망막 질환에서 볼 RD). 히알루 론산 나트륨의 망막 주사 광 수용체의 변성 1-15의 병태 생리에 대한 통찰력을 제공하는 광 수용체 세포 죽음에 이르게 RD를 만들 수있는 널리 사용되는 모델입니다. 2001 년 처음 7에 도입 된 망막 히알루 론산 나트륨 주입에 의해 유도 된 광 수용체의 변성, (주 일) 적당한 시간 코스의 이점이있다. 그러나, 애니에 동물로부터 시각 세포 손실의 상당한 변동을 가질 수있다1) 높이와 RD의 기간, 망막 하 출혈의 2) 발생 : 인해 RD 후 광 수용체 세포의 죽음에 영향을 미치는 두 가지 주요 요인에 L. 두 요인에 기여하는 방법에 대한 기술 가파른 학습 곡선이있다. 시각 세포 변성 RD의 높이에 따라 증가, 망막 색소 상피 간의 거리로서 (RPE)는 층과 감광체는 16-17을 증가시킨다. 이 보고서와 일치, 우리의 이전 실험은 얕은의 RD보다 포성의 RD에 더 많은 광 수용체의 죽음을 보여 주었다. 또한, 망막 출혈 감광체 세포 독성이며 시각 세포 사멸에 영향을 미치는 18-21 것으로보고되었다. 마찬가지로, 우리는 망막 하 출혈없이 RD를보다 망막 하 출혈의 RD에 더 많은 광 수용체의 죽음을 관찰했다. 따라서, 변동성을 최소화하는 기술은 망막 하 출혈을 피하면서 RD의 일관성을 높이 달성에 초점을해야합니다. 에서의 우리의 수정 방법으로 줄 RD는 망막 하 출혈의 드문과 눈의 같은 위치에 재현 할 수 포성과 지속적인 RD을 만들 수 있습니다. 우리는 다른 사이트에 비하여 더 넓은 동작 필드를 달성하기 쉽기 때문에 시간적 방법을 이용하여 수술을 수행 하였다. 결막의 절개 후, 자기 밀봉 공막 절개 30 G 바늘을 사용하여 제조된다. 공막 터널, 생성 된 맥락막 공막에 침투옵니다. 맥락막 출혈이 단계에서 발생하는 경우, 출혈 상처 공막을 통해 눈을 종료하고, 출혈 수술 창으로 수렴에 의해 중단 될 수있다. 전방 천자는 다음 안압을 줄이기 위해 각막에서 수행됩니다. 혼자 망막 주사 결과 망막 동맥 폐쇄 및 내부 망막의 허혈과 안압 상승으로 이어질 것입니다 때문에 이것은 중요한 단계입니다. 해밀턴 10 μL 주사기에 연결된 33 G 바늘은 다음 망막 하 공간에 삽입하고, 3.5 μ된다그럼 난 히알루 론산 나트륨 부드럽게 기본 RPE에서 감각 신경 망막을 분리 주입된다. 안저 관찰 하에서 수행되는 유도 RD의 다른 방법과 대조적으로,이 기술을 직접 관찰하에 수행된다. 공막 상처가 자체 밀봉하기 때문에, 히알루 론산 나트륨 주입 후 누설하지 않습니다. 마지막으로, 접착제는 공막 상처에 넣어되고 결막이 원래의 위치로 다시 연결됩니다. 이러한 단계는 또한 히알루 론산 나트륨 누설의 위험을 감소 지속. 3.5 ㎕의 히알루 론산 나트륨의 주입은 8 주 된 생쥐의 눈에 재현 된 RD (망막의 50 %)을 만듭니다. 그것은 따라서 재현 포성 및 영구의 RD를 허용, 눈의 누출로부터 주입 된 히알루 론산 나트륨을 방지하기 때문에 자기 밀봉 상처를 만드는 것은 우리의 수정 과정에서 가장 중요한 단계입니다.

<table><tbody><tr><td>Ketaject</td><td>Phoenix</td><td>2010025</td><td></td></tr><tr><td>AnaSed</td><td>LLOYD</td><td>4004821</td><td></td></tr><tr><td>5% 페닐에프린 / 0.5% 트로피카미드</td><td>매사추세츠 눈과 귀 약국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.5% 프로파라카인 염산염 안과 솔루션</td><td>AKORN</td><td>17478-263-12</td><td></td></tr><tr><td>Provics</td><td>Alcon</td><td>8065183085</td><td></td></tr><tr><td>Webglue</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-8566128</td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>Leica</td><td>MG90</td><td></td></tr><tr><td>30G1/2 PrecisionGlide Needle</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Weck-Cel Eye Spears</td><td>Beaver-Visitec</td><td>0008685</td><td></td></tr><tr><td>10 Microliter Syringe</td><td>Hamilton</td><td>7635-01</td><td></td></tr><tr><td>33 게이지, 0.5 인치 바늘</td><td>Hamilton</td><td>7803-05</td><td></td></tr><tr><td>18x18mm 커버 유리</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>18-548A</td><td></td></tr></tbody></table>

나트륨 히알루 론산의 망막 주사 설치류에있는 망막 박리 모델

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

히알루 론산 나트륨의 망막 주사는 망막 박리 (RD)를 유도하는 널리 사용되는 방법입니다. 그러나, RD 또는 망막 하 출혈의 발생의 높이와 기간은 분리 망막 시각 세포 사멸에 영향을 미칠 수있다. 그러므로, 시각 세포 사멸을 평가하기 위해 망막 하 출혈없이 재현성의 RD를 생성하는 것이 유리하다. 우리는 망막 하 출혈의 드문와 재생 가능한 위치에 수포와 영구의 RD를 생성하기 위해 이전에보고 된 방법을 수정했습니다. 이러한 변형 방법의 중요한 단계는 망막 하 공간 내로 주입 한 후 히알루 론산 나트륨의 누설을 방지 할 수있는 자기 - 밀봉 공막 절개의 창조이다. 30 G 바늘 맥락막 공막에 침투 한 다음 자체 밀봉 공막 절개, 공막 터널이 생성을 확인합니다. 맥락막 출혈이 단계에서 발생할 수 있지만, 수술 창으로와 수렴 맥락막 단의 속도를 감소orrhage. 이 방법은 열공 RD, 조산, 당뇨병 성 망막증, 중심 장액 맥락 망막 병증, 연령 관련 황반 변성 (AMD)의 망막 병증 등의 RD를 포함 질병에 광수 죽음보다 재현성 및 신뢰성있는 모델을 할 수 있습니다.

이 프로토콜에 의해 RD의 지속성을 평가하기 위해, 저온부는 일 3, 7 일했고, RD의 유도 후 14되었다. 여섯 눈은 각 시점을 위해 사용되었다. 헤 마톡 실린과 에오신 (HE) 염색이 부분을 시각화하는 데 사용되었다. 모든 섹션은 렌즈 (그림 2)에 접근하는 수 포성 RD을 보여 주었다. 한쪽 눈은 7 일째에 망막 하 출혈을 보였다. 아니 눈 감염이나 렌즈 손상의 징후를 보여 주었다. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1.jpg" alt="그림 1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1highres.jpg" /> 그림 1. 자체 밀봉 공막 절개를 만들기.이 도식은 일반 마우스의 눈의 단면 이미지를 보여줍니다. 레드 라인은 자체 밀봉 공막 절개를 나타냅니다. 30 G 바늘 맥락막 공막에 침투 한 다음 공막 터널은 자동 밀봉 공막 절개를 만듭니다. 이 공막 상처각자 밀봉 망막 하 공간에 주입 한 후 히알루 론산 나트륨의 누출을 방지하고 영구적 인 수 포성 망막 박리를 달성 할 수 안압, 함께있을 것입니다. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2.jpg" alt="그림 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2highres.jpg" /> 그림 2. 망막 박리의 시간 코스.이 안저 사진은 즉시 수술 후 망막 하 출혈이없는 포성 망막 박리를 보여줍니다. 적어도 하루에 14를 통해 망막 하 출혈없이 헤 마톡 실린과 에오신 (HE) 염색 쇼 지속적 포성 망막 박리와 저온부.

, 분리의 재현성 및 유지 높이 실험 망막 박리를 작성하고, 망막 하 출혈없이하는 망막 질환의 광 수용체 세포 손실의 병태 생리를 공부하고 잠재적 인 치료 개입을 평가하는 것이 중요합니다. 여기, 우리는 세부 사항에 이러한 방법을보고한다.

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

본 실험 절차의 전반적인 목표는 망막하 출혈 없이 재현 가능하고 지속적인 박리 높이를 가진 실험적 망막 박리를 유도하는 것입니다. 이를 위해 먼저 후방 각막연의 측두측 결막을 절개하여 결막과 공막을 분리합니다. 두 번째 단계에서는 30 gauge 바늘 끝을 사용하여 자가 밀폐형 공막 절개 및 각막 천자를 수행합니다.다음으로 신경감각망막을 하부의 망막색소상피로부터 분리하기 위해 sodium urinate를 망막하 공간에 주입합니다. 마지막 단계로, 공막 절개 부위에 cyanoacrylate 접착제를 도포하고 결막을 원래 위치에 다시 부착하여 sodium hall urinate의 누출 위험을 줄입니다. 최종적으로, 커버 글라스를 사용하여 안저를 검사함으로써 망막하 출혈 없이 bolus 망막 박리가 형성되었는지 확인합니다.설치류의 망막 박리를 유도하는 기존 방법들은 망막 박리의 높이와 지속성에 변동성을 초래하여, 측정되는 세포 사멸률이 일관되지 않게 나타날 수 있습니다. 본 기술을 이용하면 망막하 출혈의 위험을 줄이면서도 재현 가능하며 지속적인 수포성 망막 박리를 유도할 수 있어, 설치류의 신뢰성 있는 망막 박리 모델을 구축할 수 있습니다. 설치류의 실험적 망막 박리는 수행 방법이 비교적 간단하고 시간 경과가 적절하며, 인간의 질환과 매우 유사합니다.따라서 이는 광수용체 세포 사멸의 기전과 시력 상실 예방 치료법을 연구하기 위한 훌륭한 모델입니다. 망막 변성 질환에서 박리된 망막의 다양한 광수용체 세포 사멸을 연구할 때, 망막하 출혈 없이 재현 가능한 박리를 유도하는 것이 유리합니다. 이는 망막 박리 기간의 연장이나 망막하 출혈의 발생이 광수용체 세포 사멸에 영향을 미칠 수 있기 때문입니다.8주령 마우스를 마취시킨 후 동물의 수염을 다듬고, 수술 현미경 하에서 5% phenylephrine과 0.5% tropicamide가 포함된 용액으로 동공을 확장시킵니다. 동물의 속눈썹을 제거하고, 0.5% proparacaine hydrochloride 점안액을 사용하여 국소 마취를 시행합니다. 마우스의 코가 술자 쪽을 향하도록 측위로 배치한 다음, 후방 각막연(posterior limbus)에서 측두 결막을 절개하고 핀셋을 사용하여 결막을 공막으로부터 분리합니다.결막의 각막연 부위를 잡아 안구를 고정합니다. 그런 다음 30 gauge 바늘의 사면(bevel)이 위를 향하도록 잡습니다. 바늘 끝을 사용하여 공막에 터널을 만들고, 망막을 관통하지 않도록 주의하며 공막을 통과해 맥락막까지 진입시킵니다.다음으로, 30 gauge 바늘을 홍채와 평행하게 잡고 각막을 천자하여 안압을 낮춥니다. 이제 바늘의 사면(bevel)이 아래를 향하도록 하여, Hamilton 10 microliter 시린지에 연결된 33 gauge 바늘을 망막하 공간에 삽입하고 sodium urinate 3.5 microliters를 주입합니다.이렇게 하면 신경감각망막의 약 50%가 하층의 망막색소상피로부터 박리됩니다. 포셉을 사용하여 각막 천자 부위 주변의 각막을 밀어 방수가 각막 천자 부위로 흘러나오게 한 다음, 수술용 셀룰로오스 스피어를 사용하여 공막 상처 부위의 누출 여부를 확인함으로써 나트륨 요산 누출 위험을 줄입니다. 공막 상처 부위에 시아노아크릴레이트 접착제를 도포한 후 결막을 원래 위치에 다시 부착합니다.커버 글라스를 사용하여 안저를 확인하고, 망막하 출혈 없이 망막 박리 볼루스가 형성되었는지 확인합니다. 마지막으로, 감염 위험을 줄이기 위해 눈에 항생제 연고를 도포합니다. 저체온증을 방지하기 위해 마우스를 가열 패드 위에 둡니다.저혈압 상태가 지속된 후, 동물이 마취에서 깨어나면 다시 케이지로 돌려보냅니다. 본 프로토콜로 유도된 망막 박리의 지속성을 평가하기 위해, 박리 유도 후 3일, 7일, 14일에 냉동 절편을 제작하였습니다.각 시점마다 6개의 안구를 사용하였으며, 헤마톡실린-에오신 염색을 통해 절편을 시각화한 결과, 모든 절편에서 수정체에 근접한 망막 박리 덩어리가 관찰되었습니다.어떤 눈에서도 감염이나 수정체 손상의 징후가 나타나지 않았습니다. 숙련되면 이 수술은 약 5분 내에 완료할 수 있습니다. 이 시술을 시도할 때는 나트륨 누출, 심한 망막하 출혈 또는 수정체 손상이 발생하지 않도록 각 단계를 부드럽게 수행하는 것이 중요하며, 이러한 요인들은 모두 박리된 망막의 수용체 세포 사멸에 영향을 미칠 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 망막하 출혈 없이 재현 가능하고 지속적인 박리 높이를 가진 설치류의 실험적 망막 박리를 유도하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

출처: Park, SW, et al. 생쥐 망막 색소 상피에서 유전자 치료를 위한 바이러스 벡터의 윤부 접근법-망막하 주사. J. Vis. 경험. (2015년)이 비디오는 마우스 모델에서 망막 색소 상피(RPE)에 바이러스 벡터를 망막하 주입하는 방법을 설명합니다. 마취 및 눈 준비부터 정확한 렌티바이러스 벡터 전달에 이르기까지 RPE에서 유전자 통합 및 발현을 보장하는 절차를 자세히 설명합니다.

마우스 모델에서 망막 색소 상피에 바이러스 벡터의 망막하 주사

여기에서 우리는 쥐와 생쥐에 RPE 세포 덩어리를 망막하 주입하기 위한 멀티미디어 형식의 커뮤니티 승인 프로토콜을 제시합니다. 이 접근 방식은 망막 변성의 동물 모델에 이식할 때 이식된 RPE 세포의 구조 가능성, 안전성 프로필 및 생존 능력을 결정하는 데 사용할 수 있습니다.

서스펜션에 망막 색소 상피 세포를 제공하기 위해 설치류에서 망막 주사를 수행

망막 색소 상피 (RPE) 대체 전략 및 유전자 기반 치료는 여러 망막 퇴행성 조건이 고려된다. 임상 번역, 큰 눈 동물 모델은 환자에 적용 할 수있는 수술 기법을 연구해야합니다. 여기에서 우리는 다양하고 비용 효율적인 RPE 이식에 맞 망막 수술 토끼 모델을 제시한다.

토끼의 망막 수술에 대한 단계 프로토콜에 의해 단계

망막하 주사는 단백질 및 바이러스 벡터와 같은 큰 치료제를 광수용체와 망막 색소 상피에 전달하는 가장 일반적인 기술입니다. 최소한의 부수적 손상과 빠른 회복 시간으로 망막하 공간을 성공적으로 표적으로 삼는 마우스의 대체 방법이 여기에 설명되어 있습니다.

망막 하 공간에 액세스하기위한 대안의 검증 사출 방법<i&gt;를 통해</i&gt;를 Transcleral 후방 접근

Subretinal 주입은 나이 관련 황 반 변성에 대 한 줄기 세포 대체 요법의 전 임상 연구에 널리 적용 되었다. 이 시각화 된 문서에서는, 우리 쥐 눈 세포를 제공 하는 트랜스 scleral 접근을 통해 덜 위험 하 고, 재현 고 정확 하 게 수정 subretinal 주입 기술을 설명 합니다.

쥐의 눈으로 인간 망막 안료 상피 세포의 트랜스 scleral Subretinal 이식에 대 한 세련 된 프로토콜의 개발

여기를 사용 하 여 고해상도 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (HR-SD-10 월) subretinal 공간으로 유전자 치료 대리인의 납품을 지원, 그 영역 범위를 평가 하 고 포토 리셉터 활력을 특성화 새로운 접근 방식을 설명 합니다.

초고 해상도 마우스 광학 일관성 단층 촬영 망막 유전자 치료 연구에서 안 구내 주사를 돕기 위해

망막 색소 상피 세포 건조 연령 관련 황 반 변성의 고급 형태에 대 한 세포 보충 치료 될 수 있습니다. 이 프로토콜 지리적 위축의 눈이 큰 모델 및 질병의이 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식의 생성을 설명합니다.

지리적 위축의 눈이 큰 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식

비인간 영장류 (NHP)는 해부학적 및 유전적 유사성으로 인해 인간의 망막 세포 치료법을 연구하기위한 이상적인 모델입니다. 이 원고는 NHP 눈의 망막 색소 상피 세포의 피하 학적 이식 방법과 황반 조작과 관련된 수술 내 합병증을 방지하기위한 전략을 설명합니다.

퇴행성 망막 질병을 위한 비인간 영장류 모형에 있는 망막 안료 상피 이식

이 프로토콜은 망막 변성이 있거나 없는 마우스 수용자에서 수술 합병증 발생률이 낮은 망막하 세포 이식편을 안전하고 정확하게 전달하기 위한 동공 시야 유도 경공막 접근법을 제시합니다.

망막 변성 마우스 모델에서 망막하 이식편의 Transpupillary-Guided Trans-Scleral Transplantation

이 논문은 쥐의 망막하 주사 방법을 설명하며, 주사 부위와 망막 박리 부위를 모두 제어하기 위해 수술 중 시각화를 활용합니다.

쥐의 망막하 주사 및 망막 박리에 대한 수술 중 시각화

배우세요 설치류에서 나트륨 히알루 론산 주사를 이용한 재현 가능한 망막 박리 모델을 만드는 방법을. 이 기법은 망막 질환에서 광수용체 세포 사멸 연구와 잠재적 치료법 평가에 필수적입니다.

나트륨 히알루 론산의 망막 주사 설치류에있는 망막 박리 모델

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