A Fluorescence-based Exonuclease Assay to Characterize DmWRNexo, Orthologue of Human Progeroid WRN Exonuclease, and Its Application to Other Nucleases

Penelope A. Mason; Ivan Boubriak; Lynne S. Cox

doi:10.3791/50722

DmWRNexo를 특성화하기 위한 형광 기반 엑소뉴클레아제 분석, human progeroid WRN 엑소뉴클레아제의 or...

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A Fluorescence-based Exonuclease Assay to Characterize DmWRNexo, Orthologue of Human Progeroid WRN Exonuclease, and Its Application to Other Nucleases

DmWRNexo를 특성화하기 위한 형광 기반 엑소뉴클레아제 분석, human progeroid WRN 엑소뉴클레아제의 orthologue 및 다른 뉴클레아제에 대한 응용

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06:10 min

December 23, 2013

DOI: 10.3791/50722-v

Penelope A. Mason¹, Ivan Boubriak¹, Lynne S. Cox¹

¹Department of Biochemistry,University of Oxford

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

엑소뉴클레아제는 게놈 안정성을 보장하는 데 중요한 역할을 합니다. WRN 엑소뉴클레아제 기능의 손실은 조기 노화를 초래합니다. in vitro에서 뉴클레아제의 기질 및 기타 요구 사항을 연구하면 in vivo에서 뉴클레아제의 역할을 밝히는 데 도움이 될 수 있습니다. 여기에서는 뉴클레아제 활성을 측정하기 위한 빠르고 재현 가능한 형광 기반 분석을 시연합니다.

이 실험은 강력한 재현 가능한 형광 기반 분석을 사용하여 엑소뉴클레아제 활성을 측정합니다. 정제된 효소를 형광 DNA 기질과 함께 배양하여 효소가 DNA를 순차적으로 분해할 수 있도록 합니다. 그런 다음 아크릴아미드 요소 겔의 DNA를 분해하여 분해 산물을 크기별로 분리합니다.

다음으로, 형광 이미징을 사용하여 엑소뉴클레아제 활성의 정도를 식별하고 정량화합니다. 분석된 결과는 바람직한 기질 반응 조건, 효소의 진행 및 전반적인 활성을 결정할 수 있습니다. 기존 방사능 기반 기술에 비해 이 기술의 주요 장점은 DNA 기질이 장기간 안정적이어서 재현성이 뛰어나고 비용이 절감되며 안전성이 향상된다는 것입니다.

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