Name: 검증 된 내시경 채점 시스템을 사용하여 대장염과 대장 종양의 위험을 평가하기 위해 마우스의 유연한 대장 내시경 검사 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-16T20:30:00.000+00:00
Duration: 15 min 49 s
Description: 학습하세요 마우스 대장 내시경 검사 방법과 검증된 채점 시스템을 통해 대장염 및 대장 종양 위험을 평가하는 기술을. 이 프로토콜은 정상 해부학 이해와 최소 침습 기법을 포함합니다.

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사라 코삭, 미첼 Guanzon, 성 Yeun 양 그들의 실험 동물의 내시경 검사하는 동안 그들의 협력을위한 리 구오 지아, 특별 감사.

1. 내시경 시스템 설정 <ol><li> 제조업체의 지시에 따라 쥐를 마취하기 전에 내시경 검사 시스템을 설정합니다. 이 프로토콜에 대한 인간을 위해 디자인 된 비디오 ureteroscope (그림 1)를 사용합니다. 삽입 튜브의 외경은 9.9 프랑스 (3.3 mm)이며, 그 선단부가 8.5 프랑스 (2.8 mm)이며, 계측 채널의 내부 직경은 6 프랑스 (1.2 mm)이다. </li><li> 내시경의 사용이 질병 전송에 연결되지 않은 있지만, [9], 포자 형성 미생물로 작업 할 때 70 % 에탄올 (10) 또는 적절한 기술과 내시경 및 렌즈를 소독. 세균 살균 윤활유 및 비 긁힘은 내시경 끝을 포화시키는 조직을 닦아 준비한다. </li><li> 계측 채널의 상단에 공기의 전체 3 ML의 주사기 (또는 적절한 CO 2 가스 혼합물)를 연결합니다. </li><li> 전원을 켜고, 정상 흰색 빛의 화이트 밸런스를 설정,적용뿐만 아니라 협 대역 영상 (NBI) 모드. 이 특성 비정상적인 혈관 (11)이 궤양 성 및 종 양성 병변 등의 점막에 미세 혈관 구조를 강조하는 등 2001 년 이후, NBI는 진단 영상의 혜택을 제공하고 있습니다. NBI 필터 모드는 헤모글로빈과 구조를 강조 390-445 nm의 530-550 nm의에 캡처 빛의 파장을 제한합니다. </li><li> 당신의 결과를 기록하기 위해 평가 점수 양식 (그림 2)를 인쇄합니다. (6.1 절 참조) 시험 전에 예상되는 정상 및 NBI 이미지 (그림 3A)와 정의와 각 기준의 성적에 익숙해 지. </li><li> 원하는 경우, chromoendoscopy 위해 인산 완충 식염수 (PBS)에 착색제 기반 솔루션을 준비. chromoendoscopy에서, 시험은 점막 변화를 강조하기 위해 조영제 등의 염료를 사용하여 수행됩니다. 메틸렌 블루 (0.1-1 %)과 인디고 카민 (0.1 %) 솔루션 (그림 3B)를 사용합니다. 주의즉, 메틸렌 블루는 시료 분석을 방해 할 수있는 산화 라디칼, 아미노산 잔기의 간접적 가교 및 DNA 분해 (12)를 생산할 수있는 산화 환원제이다. </li></ol> 2. 마우스의 전신 마취 <ol><li> 마취제 및 관리 경로를 선택합니다. 면역 체계 및 연구 목표와 약물의 잠재적 인 간섭에 대한 동물 자원 시설이나 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에서 수의사를 참조하십시오. 일부 약물은 설치류 (13)를 포함하여, 동물의 사이토 카인의 프로필 발현에 영향을 미칠 수있다. 적절한 관리와 함께, 생존 내시경 검사를위한 터미널 절차 또는 이소 플루 란에 주사 tribromoethanol를 사용합니다. </li><li> 유도의 경우, 0.2 ~ 0.5 L / 분의 속도로 100 % 산소에 이소 플루 란 4 ~ 5 %가 관리, 유지 보수를 위해 0.5 %를 사용합니다. 이 프로토콜은 모든 동물에 적합하지 않습니다. 귀하의 시설 수의사에게 문의적절한 지침과 교육. 동물 복지에 대한 높은 기준을 달성하기 위해 관련 IACUC 권장 사항을 준수. 마우스가 완전히 마취 경우 있는지 확인합니다. </li><li> &#39;띠&#39;실험실 접착 테이프를 사용하여 지느러미 또는 복부 위치에서지지면 테이블 마취 된 쥐. 당신의 내시경 화면의 해부학 적 방향에주의하십시오. 그 하부 사지와 꼬리를 고정합니다. 테이프의 밴드는 떨어져 호흡의 움직임을 방지하지만, 흉부 환기의 움직임을 제한하지 않도록 가슴에 배치 할 수 있습니다. </li></ol> 3. 자세한 내시경 검사 <ol><li> 다음 항문을 통해 범위를 사전에, 직장에 내시경을 삽입하기 전에 항문 주위 병변을 찾습니다. </li><li> 코트 불임 수술 윤활제 내시경. 하지 CCD (전하 결합 소자) 센서의 코트 표면을해야합니다. </li><li> 내시경을 삽입하고 녹음을 시작합니다. 녹화 된 동영상은 M 유용합니다검사 후 필요한 경우 내시경 검사의 eticulous 평가. 점막 / 장에 자극을 최소화하기 위해 시간의 최소한의 길이 내시경 검사를 수행하려고합니다. </li><li> 천천히 창자 벽을 구별하기 위해 주사기를 사용하여 공기를 적용합니다. 마우스의 크기에 따라, 공기의 1-2 밀리리터를 사용한다. 과도한 공기 취입을 방지, 그것은 마취 된 쥐의 호흡 곤란 및 사망의 원인이 될 수 있습니다. </li><li> 당신은 공기 또는 범위의 부드러운 회전과 방법을 취소로 앞으로 내시경을 사전. 당신은 창자 루멘을 보지 않는 경우에 내시경을 진행하지 마십시오. 천공이나 대장 / 직장 눈물이 특히 젊은 마우스 (&lt;8-10주) 이전에,이 단계에서 발생할 수 있습니다. 필요에 따라 사진을 촬영합니다. </li><li> 범위는 진행으로 (정의 등 자연적으로 발생하는 점막 출혈은 외상 내시경과 관련이없는) 출혈 자연이있는 경우, 평가합니다. 내시경은 직장과 결장으로 들어가는 자연 출혈이 관찰 될 수있다. </li><li> 으로결장 벽의 투명성 SESS. 투명성은 결장에 교내 혈관을 시각화하고 주변의 다른 내장의 (그림 4) 할 수있는 능력으로 정의된다. 범위의 부드러운 움직임 (백 포워드, 시계 방향, 반 시계 방향) 혈관 다른 내장의 개념으로 이해 될 수 있는지 결정하는 것을 도울 것이다. 장간막 지방 조직 또한 볼 수 있습니다. 골반강 내 직장은 복강의 결장 벽보다 투명하게 나타나는 경우 주. </li><li> 초점 병변 (부종 지역, 미란, 궤양, 종 양성 대중)의 종류와 수를 결정하는 검사. 이것은 결장 염증 스코어 및 개발되었다 소수점 식별자를 사용하여 스코어링 형태로 기록 될 것이다. </li><li> 콜론 결장에 꼬리 쪽 구부러 지역에 도달하면 천천히 내시경을 철회 한 후 파쇄 점막으로 인해 발생하는 출혈 접촉 (의 존재를 찾아내시경) 고급 또는 제거된다. 그것은 의도적으로 대장 표면을 긁어 할 필요가 없습니다. 건강한 대장 점막 적절한 내시경 검사 후 출혈하지 않습니다. </li></ol> 4. 생체 검사 <ol><li> 조직 검사가 필요한 경우, 계측 전용 내시경 채널을 통해 생검 겸자를 삽입합니다. 장천공을 방지하기 위해 화면에 내시경 겸자의 발전을 모니터한다. </li><li> 60 ~ 80 ° 컵에 컵 각도에 대해에 집게의 생검 컵을 열고 관심의 영역으로 연출합니다. 지나치게 열 집게 또는 압력 건강 투명 장 벽의 조직 검사에 의한 천공 결과 장 조직의 여분의 레이어를 파악할 수있다. 천공이 발생하면, IACUC 권장 다음 마취 동안 동물을 안락사. 구멍은 내 독소 혈증과 복막염이 발생할. </li><li> 생검 컵을 닫고 집게는 폐쇄 유지하면서 그들을 잡아 당깁니다. </li><li> 레모조직과 집게에 부드러운 솔루션으로 조직을 세척하여 집게의 표본을했습니다. RNA는 나중에하고 PBS 일반적인 작업 솔루션입니다, 필요한 경우, 샘플을 제거하기 위해 바늘을 사용합니다. forcep 컵 침식 또는 가장자리를 절단하지 마십시오. </li></ol> 5. 마취에서 회복 <ol><li> 이 복구 될 때까지 검사를 완료하면, 마우스에 따뜻한 환경을 제공한다. 전기 빛, 또는 37 ℃로 설정 따뜻한 패드 중 하나를 사용 과열을 방지, 말초 혈관 확장 동물의 회복을 저해. 전체 복구 될 때까지 밀접하게 마우스를 모니터링합니다. </li></ol> 6. 진수 식별자와 대장 건강의 통합 내시경 채점 시스템 <ol><li> 를 위해 : (매개 변수 정의 및 프로토콜 진수 가중 점수 시스템을 사용 쥐과 대장 염증과 종양의 내시경 평가) 점수 형태 (그림 2) 아래의 매개 변수 정의를 사용하여예와 nonbiased 평가 및 상세한 기록 보관에 대한 지침과 선택 &#39;말초-근위 내시경 대장염 점수 시스템&#39;(D-근육). </li><li> 채점 시스템의 형태 (그림 2)에 설명 대장 염증의 네 개의 매개 변수를 점수. 꼼꼼하게 항문 주위 영역, 장 투명성, 출혈 장 유형 (있는 경우), 그리고 존재와 국소 병변의 양 (미란, 궤양, 및 / 또는 종 양성)을 평가한다. </li><li> 연구 목적으로 종양을 평가할 때, 수량, 위치 및 크기를 검사하고 대장지도 및 채점 양식에 막대 그래프를 사용하여 설명합니다. 얻은 점수와 병변의 수 (해당되는 경우)의 수치 합이 배경 대장 염증, 병변의 가장 주된 유형 및 병변의 수를 결정합니다. </li></ol>

<ol><li>Huang, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonoscopy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Surg.+Endosc%22%5BJournal%5D)">Colonoscopy in mice.</a> Surg. Endosc. 16, 22-24 (2002).</li>
<li>Wirtz, S., Becker, C., Blumberg, R., Galle, P. R., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+T+cell-dependent+experimental+colitis+in+SCID+mice+by+local+administration+of+an+adenovirus+expressing+IL-18+antisense+mRNA%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Treatment of T cell-dependent experimental colitis in SCID mice by local administration of an adenovirus expressing IL-18 antisense mRNA.</a> J. Immunol. 168, 411-420 (2002).</li>
<li>Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miniaturized+multichannel+near+infrared+endoscope+for+mouse+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging.</a> Mol Imaging. 2, 350-357 (2003).</li>
<li>Becker, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+colitis+and+colon+cancer+development+in+mice+using+high+resolution+chromoendoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy.</a> Gut. 54, 950-954 (2005).</li>
<li>Ravnic, D. J., Konerding, M. A., Huss, H. T., Wolloscheck, T., Pratt, J. P., Mentzer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+microvideo+endoscopy+of+the+colonic+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Murine microvideo endoscopy of the colonic microcirculation.</a> J. Surg. Res. 142, 97-103 (2007).</li>
<li>Hamilton, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+for+mast+cell+tryptase+in+acute+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Essential role for mast cell tryptase in acute experimental colitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 290-295 (2011).</li>
<li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+colonoscopy+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li>
<li>Hensley, H. H., Merkel, C. E., Chang, W. C., Devarajan, K., Cooper, H. S., Clapper, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+imaging+and+size+estimation+of+colorectal+adenomas+in+the+multiple+intestinal+neoplasia+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest.+Endosc%22%5BJournal%5D)">Endoscopic imaging and size estimation of colorectal adenomas in the multiple intestinal neoplasia mouse.</a> Gastrointest. Endosc. 69, 742-749 (2009).</li>
<li>Banerjee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+control+during+GI+endoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest.+Endosc%22%5BJournal%5D)">Infection control during GI endoscopy.</a> Gastrointest. Endosc. 67, 781-790 (2008).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleaning+and+disinfection+of+equipment+for+gastrointestinal+endoscopy.+Report+of+a+Working%5BTitle%5D)+AND+%22Party+of+the+British+Society+of+Gastroenterology+Endoscopy+Committee.+Gut%22%5BJournal%5D)">Cleaning and disinfection of equipment for gastrointestinal endoscopy. Report of a Working.</a> Party of the British Society of Gastroenterology Endoscopy Committee. Gut. 42, 585-593 (1998).</li>
<li>Sano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+diagnostic+method+based+on+color+imaging+using+narrow+band+imaging+%28NBI%29+system+for+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest.+Endosc%22%5BJournal%5D)">New diagnostic method based on color imaging using narrow band imaging (NBI) system for gastrointestinal tract.</a> Gastrointest. Endosc. 53, 125-12 (2001).</li>
<li>Davies, J., Burke, D., Olliver, J. R., Hardie, L. J., Wild, C. P., Routledge, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methylene+blue+but+not+indigo+carmine+causes+DNA+damage+to+colonocytes+in+vitro+and+in+vivo+at+concentrations+used+in+clinical+chromoendoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Methylene blue but not indigo carmine causes DNA damage to colonocytes in vitro and in vivo at concentrations used in clinical chromoendoscopy.</a> Gut. 56, 155-156 (2007).</li>
<li>Chiang, N., Schwab, J. M., Fredman, G., Kasuga, K., Gelman, S., Serhan, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthetics+impact+the+resolution+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Anesthetics impact the resolution of inflammation.</a> PLoS One. 3, e1879(2008).</li>
<li>Zilberman, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+digital+flexible+ureteroscope%3A+in+vitro+assessment+of+optical+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Endourol%22%5BJournal%5D)">The digital flexible ureteroscope: in vitro assessment of optical characteristics.</a> J. Endourol. 25, 519-522 (2011).</li>
<li>Machida, H., Sano, Y., Hamamoto, Y., Muto, M., Kozu, T., Tajiri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Narrow-band+imaging+in+the+diagnosis+of+colorectal+mucosal+lesions%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Narrow-band imaging in the diagnosis of colorectal mucosal lesions: a pilot study.</a> Endoscopy. 36, 1094-1098 (2004).</li>
<li>Dohoo, I., Martin, W., Stryhn, H. Cohort studies. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDohoo%2C+I+%22Veterinary+Epidemiologic+Research%22">Veterinary Epidemiologic Research</a>. McPike, S. M. , AVC, Inc. Charlottetown, Prince Edward Island, Canada. 151-162 (2003).</li>
<li>Yiou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+pelvic+floor+disorders%3A+evidence+from+a+histomorphologic+study+of+the+perineum+and+a+mouse+model+of+rectal+prolapse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anat%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of pelvic floor disorders: evidence from a histomorphologic study of the perineum and a mouse model of rectal prolapse.</a> J. Anat. 199, 599-607 (2001).</li>
</ol>

금융 또는 공개의 이익의 충돌이 없습니다.

생쥐의 내시경 기술의 수정 및 문제 해결에 대한 몇 가지 고려 사항이있다. 가요 성 내시경의 사용 중에 마스터해야 절차의 중요한 측면은 만곡 및 토크 제어의 코디 복부 팽만 및 마우스 호흡기 손상을 방지하는 데 필요한 공기량의 조절, 및보기 컨트롤의 사소한 기술적 측면을 포함 . 토크 제어는 장천공의 위험을 최소화하기 위해 중요하다. 제대로 처리하면, 쥐 유연한 내시경 검사는 직접 시각화 및 연구 분야의 장 지역의 생검 표본 추출을 할 수있는 매우 안전하고, 신속하게 절차가됩니다. (그림 5) 찌꺼기로 인해보기 장애물을 해결하기 위해, 분변 알약은 일반적으로도 공복 또는 완하제의 사용 후 관찰되는 점을 이해하는 것이 중요하다. 존재하는 경우, 대변은 쉽게 부드러운 공기 기능과 근접하게 이동할 수 있습니다ufflation. 사례의 약 11 %에서, 또한 PBS 관장 1 ㎖를 사용하는 것이 필요하다. 복부 팽만하거나 임신을 갖고있는 것 같다 동물을 ...

쥐 내시경을 통해 1-3 년을위한 유용한 연구 도구로 수행되었습니다. 일부는 S 상 결장경을 사용하고 있지만 지금까지 쥐 내시경을 사용하는 대부분의 연구는, 딱딱한 내시경을 사용했습니다. 뮤린 내시경 즉각적인 결과를 제공하고 장내 정상, 염증의 중증도, 이러한 체중 감소, 설사 및 조직학 간접 측정, (병변 누덕 때 차선이다)에 비해 종양의 진행의 정도를 객관적 추정하면서 결장의 전반적인 건강에 대한 통찰력을 제공. 안락사하고 콜론 분석 1을위한 수확하는 동물을 필요로 기존의 조직 학적 검사에 반대 특히, 내시경 검사는 시간이 지남에 따라 실험 동물 모델의 반복 평가를 할 수 있습니다. 이러한 장점에도 불구하고, 뮤린 내시경 기술의 광범위한 사용은 불가능했습니다 implementati 및 표준화 된 프로토콜의 부족에 의해 제한된다에 대한 병리학 적 연구 결과의 점수. 제대로 구현, 쥐 내시경 검사는 더 이상 우리의 이해와 염증성 장 질환, 대장염, 대장 종양을 포함한 여러 만성 위장 질환 상태의 동물 모델의 특성을 용이하게하기 위해 큰 약속을 보유하고 있습니다. 쥐 내시경 기술의 유틸리티는 표준화 된 시험 절차의 존재와 장 병리에 대한 일관성, 비 중복 및 신뢰성 평가 시스템이 필요 재현성 및 객관성에 달려있다. 적어도 세 가지 설명 득점 대장염 4-6의 내시경 평가를위한 시스템뿐만 아니라 대장 종양 생쥐의 4,7,8에 출판되었다. 그러나 이러한보고 방법 및 채점 시스템은 연구를 통해 쉽게 비교할 수 없습니다. 많은 경우에, 병변의 분류에 사용되는 기준에 대한 명확한 정의가없고, 기준이 관련 될 때, 이들은 매우 다양. 또한,대장염 종양, 하나의 측정 도구에 동시에 발생 및 결과에 대한 상호 작용 효과를 가질 수있는 가장 일반적인 대장 병변의 두 가지 모두의 평가를 통합보고 된 채점 시스템이 없습니다. 마지막으로, 대장염에 존재 내시경 채점 시스템은 종종 제한 차별 염증 카테고리가 (즉. 종종 1-4 short 정수 저울에 좁은 득점 옵션) 제대로 질병의 진행 시나리오를 대표하는 매개 변수 통계 분석의 사용을 가능하게합니다. 본 논문에서는 뮤린 대장염 및 결장 종양의 중증도를 평가하고, 항문 주위 영역, 직장 및 원위부 대장의 해부학 적 평가에이 기술을 채용하기위한 표준화 된 프로토콜을 설명하는가요 성 내시경을 사용하는 방법을 설명한다. 우리는 외상 및 이미지 유물을 최소화하기 위해 내시경 검사를하는 동안 효과적인 문제 해결을 설명하고, 우리는 재현 할 수있는 평가 시스템을 설명검증 게시 된 임상 매개 변수를 기반으로. 채점 시스템 (특정 진단 값으로 결과를 강조하기 위해 12 염증, 종양의 매핑이 가능 등급과 플로팅 옵션, 새로운 소수점 유닛 시스템 (즉, 진수 식별자)와 차별의 높은 수준을 사용하여 장의 염증과 종양 모두의 평가를 통합 즉, 종양 개발, 내시경 검사 등 중 합병증). 소수점 식별자의 사용은 더욱 하류 분석에 대한 중요한 데이터 세트를 신속하게 추적을 허용한다. 마지막으로, 우리는 대장염 및 대장염 관련 암 (덱스 트란 황산 나트륨 (DSS) 유도 성 대장염, 클로스 트리 디움 남과 어울리지 않는 감염 및 azoxymethane / DSS 유발 대장 암)의 여러 쥐 모델에서 신뢰성 및 채점 시스템의 유효성 테스트를 수행합니다.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane, USP</td><td>Webster Veterinary</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgical lubricant</td><td>Savage laboratories</td><td>surgilube, 0281-0205-45</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline</td><td>Thermo Scientific SH30256</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>Ambion</td><td>AM7021</td><td></td></tr><tr><td>메틸렌 블루 1% 수용액</td><td>Fisher Science Education</td><td>S96393</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>유연한 디지털 요관경</td><td>올림푸스 아메리카</td><td>URF-V</td><td></td></tr><tr><td>비디오 시스템 센터</td><td>올림푸스 아메리카</td><td>VISERA Pro OTV-S7 Pro</td><td></td></tr><tr><td>크세논 광원</td><td>올림푸스 아메리카</td><td>VISERA Pro CLV-S40 Pro</td><td></td></tr><tr><td>비디오 레코더</td><td>MediCapture, Inc.</td><td>MediCap USB200</td><td></td></tr><tr><td>플렉시블 생검 컵 겸자</td><td>올림푸스 아메리카</td><td>FBC-3115</td><td></td></tr><tr><td>마취기</td><td>안타넥스 주식회사</td><td>EZ-7000 클래식 시스템</td><td></td></tr></tbody></table>

검증 된 내시경 채점 시스템을 사용하여 대장염과 대장 종양의 위험을 평가하기 위해 마우스의 유연한 대장 내시경 검사

Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

연구 목적 현대 내시경의 사용은 크게 위장 병리에 대한 우리의 이해를 촉진했다. 특히, 실험 내시경은 만성 염증성 장 질환의 메커니즘과 대장 암의 진행을 평가하는 것과 같은 하나의 실험 동물에서 반복 평가를 필요로 연구에 매우 유용합니다. 그러나, 연구를 통해 사용 방법은 매우 다양하다. 적어도 세 내시경 채점 시스템은 쥐 대장염에 대해 게시 및 대장 종양의 평가를위한 프로토콜이 수반 대장 염증의 존재를 해결하기 위해 실패 출판되었습니다. 이 연구는 개발과 동시에 염증과 종양 모두의 평가를 통합하는 재생 가능한 내시경 채점 시스템의 유효성을 검사합니다. 항문 주위 결과에 따라 대장 염증의 정도와 심각도 1) 평가 (월마트의 투명성이 새로운 채점 시스템은 세 가지 주요 구성 요소가 있습니다L, 점막 출혈 및 국소 병변), 2) 종양 병변 (격자지도와 막대 그래프), 관찰 병변의 할당 된 범주와 소수점 단위를 기준으로 자신의 병리학 및 연구 관련하여 임상 사례 3) 숫자 정렬의 양적 기록 내시경 합병증 (진수 식별자). 여기에 제공된 영상과 원고는 수사관이 인접 내시경 대장염 (D-근육에서 원심을 차별화 할 수있는 시스템 옵션을 사용하여, 잘 확인하고 재현성 내시경 방법을 사용하여 자신의 실험 쥐를 득점 할 수 있도록, IACUC 승인 된 프로토콜에 따라 제조 하였다 ).

본 연구에서 제시하는 프로토콜과 이미지는 올림푸스 URF-V 유연한 내시경 (14)과 NBI 11, 15으로 제조 하였다. 영상은 MPEG-2 포맷과 JPG, TIF, PNG, 또는 표준 USB 플래시 휴대용 메모리에 양도 최대 1,280 X 1,024 픽셀,와 DICOM 형식으로 사진에 저장되었다. NBI는 헤모글로빈을 함유 조직의 시각적 대비를 향상시킵니다. 일반 빛과 NBI 영상은 대장 점막의 정상적인 해부학과 궤양과 종양 개발 (도 3a 및도 6A) 동안 정상 및 비정상 혈관 사이의 차이점을 설명하는 주요 기능입니다. chromoendoscopy 동안 조영제 등의 메틸렌 블루 이미지는 결장 지하실의 공중 일반적인 벌집 모양 (그림 3b에 가까이 참조)를 공개, 근접 촬영 이미지의 장점을 보여줍니다. 지금까지, 우리는 500 개 이상의 쥐 내시경 검사의 FOLLO를 수행 ...

지난 몇 년 동안, 새로운 세대의 내시경은 쥐 대장염과 대장 종양을 평가하기위한 중요한 진단 연구 보조로 등장했습니다. 우리는 생쥐의 염증과 대장 종양의 내시경 적 평가뿐만 아니라 대장염과 대장 종양의 내시경 심각도를 문서화하는 진수 식별자를 사용하는 새로운 채점 시스템에 여기에 대한 자세한 프로토콜을 제시한다.

The use of modern endoscopy for research purposes has greatly facilitated our understanding of gastrointestinal pathologies. In particular, experimental ...

안녕하세요.저는 도쿄에 있는 닌텐도 대학의 pH를 방문하는 토모히로 카니(Tomohiro Kani)이고, 웨스턴 리저브 대학교 의과대학의 소화기 건강 연구 센터(Digestive Health Research Center)의 소장인 파비오 엘리(Fabio Elli)입니다. 이 비디오에서는 마우스에서 대장내시경을 수행하는 방법론을 설명합니다. 정상적인 내시경 해부학적 구조에 익숙해지는 것의 중요성을 강조합니다.외상 및 이미지 아티팩트를 최소화하기 위해 내시경 검사 중 문제를 효과적으로 해결하는 방법을 설명합니다. 마지막으로, 대장염 및 대장염 관련 암의 뮤 아이 모델에서 장 염증 평가를 위한 채점 시스템을 설명하십시오. 경청해 주셔서 감사합니다.먼저 내시경을 비디오 시스템 센터와 광원에 부착할 때 내시경 시스템을 설정합니다. 내시경을 살균하고 공기 주입을 위해 주사기를 부착합니다. 그런 다음 시스템을 켜고 동물과 함께 화이트 밸런스를 조정합니다.적절하게 마취 및 구속되면 내시경 검사를 시작합니다. 필요에 따라 생검 샘플을 얻을 수 있습니다. 범위를 지정한 후 마지막에 복구를 위해 조명으로 마우스를 따뜻하게 합니다.대장 염증 및 대장 관련 대장암 평가를 위한 채점 시스템이 설명됩니다. 내시경 시스템 설정. 내시경 시스템에는 비디오 시스템 센터, 크세논 광원 및 비디오 레코더가 포함됩니다.우리는 쥐의 대장 내시경을 위해 인간 요관경을 사용합니다. 당사의 스코프 URFV는 CCD 센서를 사용하는 유연한 비디오 스코프입니다. 삽입 튜브의 외경은 3.3mm이고 말단 끝의 직경은 2.8mm입니다.시작하려면 스코프를 비디오 시스템 센터와 광원에 연결합니다. 다음으로, 내시경과 렌즈 표면을 70% 에탄올로 살균합니다. 그런 다음 3mm 주사기를 작업 채널에 부착합니다.이것은 흡입 또는 흡인으로 루미날 내 공기의 양을 조절하는 데 사용됩니다. 메인 스위치를 켜고 화이트 밸런스를 설정합니다. 또한 NBI 모드 2에서 설정하여 마우스를 마취하는 것을 잊지 마십시오.먼저, 흡입 마취를 시연하겠습니다 불소를 사용하여 4-5%의 불소를 유도에 사용합니다. 마우스가 움직임을 멈춘 후 농도를 유지 용량인 1-2%로 줄입니다.꼬리와 하지를 테이핑하여 테이블 위에 마우스를 제지합니다. 테일 테이핑은 범위를 지정하는 동안 마우스를 고정하는 데 특히 중요합니다.또한, tri bromo의 복강 내 주사. 에탄올은 마취에 사용할 수 있습니다. 3. 내시경 검사항문 주위 병변은 내시경 평가의 일부가 아니지만 중요한 소견이므로 삽입 전에 관찰해야 하며 외상성 출혈과 혼동하지 않아야 합니다.내시경을 수술용 윤활제로 코팅하기 전에 CCD 센서를 코팅하지 마십시오. 항문을 통해 내시경을 삽입합니다. 이 초기 삽입은 맹인 삽입이 결장 결장 점막을 손상시킬 수 있으므로 가능한 한 부드럽게 이루어져야 합니다.조명을 켜고 녹음을 시작합니다. 에어 시린지를 천천히 조심스럽게 밀어 시야를 확보합니다. 공기를 너무 많이 주입하면 입안이 죽을 수 있습니다.자연 출혈의 존재 여부는 내시경을 직장 또는 결장 각도에 삽입할 때 판단해야 합니다. 핸들링은 뷰를 수직으로 조정하고 토크 제어는 수평 조정을 위한 것입니다. 이 두 컨트롤 간의 조정은 매우 중요합니다.투명도를 관찰합니다. 정상적인 결장에서 벽은 정상적인 혈관으로 투명하고 두께가 없습니다. 투명성은 혈관 또는 벽외 장기의 벽면 가시성으로 정의됩니다.삽입과 당기기를 반복하는 동작은 정상 결장에서의 평가에 도움이 됩니다. 검사 중에 작은 혈관과 큰 혈관이 모두 보입니다. 필요에 따라 사진이나 생검 샘플을 촬영할 수 있습니다.접촉 출혈이 있는지 확인하십시오. 내시경을 빼낼 때 의도적으로 점막을 긁어낼 필요는 없습니다. 협대역 이미징 모드는 점막에 있는 혈관의 미세한 구조를 강조합니다.직장은 근육으로 둘러싸여 있지만 결장은 주변 조직에 의해 고정되어 있지 않습니다. 이러한 해부학적 차이 때문에 직장에서는 벽외 내장이 보이지 않습니다. 대변 알갱이는 때때로 항문 가까이에 존재합니다.공기 흡입으로 제거할 수 있지만 때로는 지속되어 내시경 시야를 방해할 수 있습니다. 이 경우 대변을 씻어내기 위해 최대 1mil의 PBS 관장을 사용합니다. 대변은 보통 몇 분 후에 배설된다.렌즈에 번짐으로 인해 발생하는 흐릿한 시야도 일반적인 문제이며, 특히 대장염이나 출혈의 경우 더욱 그렇습니다. 이 상황에서 우리는 공기를 주입하여 렌즈를 청소하려고 했습니다. 이 절차는 스코프를 빼지 않고 렌즈를 청소하는 데 성공할 수 있습니다.연동 운동은 장의 정상적인 생리적 활동 중 하나입니다. 연동 운동 중에는 공기 주입이 내강을 확장하는 데 성공하지 못하기 때문에 연동파가 지나갈 때까지 기다려야 합니다. 넷째, 생검 생검 검체는 유연한 생검 컵 겸자를 사용하여 얻습니다.컵은 손잡이로 열고 닫습니다. 집게를 작업 채널에 삽입합니다. 장을 뚫지 않도록 주의하세요.컵을 적당한 크기로 열고 팁을 관심 영역에 놓습니다. 컵을 부드럽게 닫고 단단히 당깁니다. 적절한 용액으로 세척하여 시편을 제거합니다.다섯 번째는 회복입니다. 검사 후 회복될 때까지 마우스를 따뜻하게 하십시오. 우리는 결장 염증에 대한 6 개의 점수를 데우기 위해 전기 조명을 사용합니다.당사의 채점 시스템은 4개의 매개변수, 즉 항문 주위 병변 1개, 결장 벽의 투명도 2개, 장 출혈 3개, 국소 병변 4개로 구성됩니다. 각 매개변수는 0에서 3까지 점수를 매길 수 있습니다. 최대 총점은 12입니다.또한 특정 내시경 결과를 강조하는 데 사용할 수 있는 십진수 단위 척도가 포함되어 있습니다. 각 매개변수에 대한 자세한 설명은 함께 제공되는 원고에서 확인할 수 있습니다. 다음은 첫 번째 요약인 항문 주위 병변입니다.이 소견은 직장에 내시경을 도입하기 전에 관찰해야 합니다. 이렇게 하면 외상성 출혈로 인한 혼동을 피할 수 있습니다. 점수가 0이면 정상입니다.점수 2는 피가 섞인 방전에 대한 것입니다. 3번은 육아 조직 또는 직장 탈출증에 대한 것입니다. Two. 투명도. 이것은 결장 벽과 주변 내장의 혈관을 시각화하는 능력을 나타냅니다.점수가 0이면 혈관이 명확하게 보인다는 것을 나타냅니다. 1점을 기록하세요. 작은 혈관은 부분적으로 보이지 않지만 큰 혈관은 보입니다.2점을 기록하세요. 작은 혈관은 일반적으로 보이지 않으며 큰 혈관도 투명하지 않습니다. 점수 3은 점수 2와 동일하고 결장의 모양이 두꺼워집니다. 3.출혈, 자연 출혈은 접촉 출혈과 구별해야 합니다. 그에 따라 판단하십시오. 점수 1은 접촉 출혈이 완만한 표준 범위 지정 절차인 점수 3에 의해 유발됨을 나타냅니다.결장에 들어갈 때 자발적인 출혈이 나타납니다. 넷째, 국소 병변. 이러한 결과는 종종 염증을 동반하는 국소 조건을 반영합니다.1점을 기록하세요. 플라크(Plaque)는 겉보기에 정상적인 점막으로 덮인 평평한 높이입니다. 2점을 기록하세요.레드 엔드 영역 침식은 3점을 얻습니다. 피브린과 같은 물질로 덮인 궤양 침식. NBI는 이것을 인식하는 데 도움이 됩니다.10진수 디스크립터. 세 개의 매개변수를 추가하고 소수점 점수.0.1을 부여했습니다. 협착의 경우 장 파열 또는 천공 점수 0.2, 종양 병변 발표 사례 1에 대한 점수 0.5.클로스트리듐 디피실 감염이 있는 마우스. 그것은 정상적인 투명도를 가지고 있지만 초기 침식을 가지고 있습니다. 작은 침식이 보이지만 배경 점막은 정상입니다.자세히 관찰하면 이 병변을 둘러싼 약간의 부종이 드러납니다. 또한. 다른 부분에서는 염증의 존재를 나타내는 소견이 없습니다. 사례 2.고지방 식단에서 DSS로 인한 대장염이 있는 마우스. 이 경우 불투명, 자발적인 출혈 및 협착이 나타납니다. 처음에는 출혈이 보입니다.그것은 자발적입니다. 여기에 협착이 있습니다. 공기 주입에 의해 확장되지 않으며 내시경이 통과할 수 없습니다.배경 점막은 붉어지고 두꺼워집니다. 또한 접촉 구타가 여기저기서 발생합니다. 이는 결장 사례의 취약성을 나타냅니다. 3.만성 DSS 대장염, 불투명도, 벽 두께 및 종양과 같은 돌출부가 있는 마우스가 보입니다. 일반적으로 흰색 칼라 벽 두께가 보이고 벽이 투명하지 않습니다. 이것은 비장 굴곡근 주위의 궤양입니다.사례 4. 아족시메탄 및 DSS로 유발된 대장염 관련 암이 있는 마우스. 여러 종양과 궤양이 있습니다.큰 편평한 유형의 돌출된 병변이 오른쪽 벽에 있고 조금 더 가까운 부위에서 또 다른 낮은 편평한 유형의 병변이 보입니다. 표면의 구조는 정상 점막과 분명히 다릅니다. NBI는 이러한 병변의 발견 및 진단에 유용합니다.직장에 섬유질 물질로 덮인 지리적으로 큰 궤양이 있습니다. 시청해 주셔서 감사합니다.

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우리는 빠르게 친 염증성 에이전트 dextran 황산 나트륨 (DSS)의 세주기에 의해 다음과 일관되게 인간의 대장염에서 본 것과 morphologic와 분자 유사성과 마우스에 결장 종양을 생성 genotoxic 에이전트 azoxymethane (AOM)의 어느 관리의 프로토콜을 보여줍니다 암을 관련.

Azoxymethane (AOM)과 Dextran의 황산 나트륨 (DSS)와 모델링 대장염 - 관련 암

이 비디오는 분절 아데노-크레 감염에 의한 결장직장 마우스 모델의 생성을 설명합니다. 감염된 결장 분절은 점막의 이 분절 내에서 종양 형성을 일으켜 선종을 유발하여 궁극적으로 침습성 및 전이성 암종으로 진행됩니다. 이 모델은 암 생물학 및 전임상 치료 시험 연구를 위한 매력적인 플랫폼입니다.

분절 아데노-크레 감염: 유전자 조작 마우스 모델을 사용하여 고립된 대장암을 생성하는 기술

작은 동물 이미징 기술은 직렬 진단 시험 및 생체 내에서 치료 적 개입을 허용한다. 최근, 응용 프로그램의 범위가 크게 확대하고 현재 대장 종양 발생의 평가, 상처 치유 및 염증의 모니터링이 포함되어 있습니다. 이 프로토콜은 쥐 내시경 검사의 이러한 다양한 응용 가능성을 보여줍니다.

에 대한 쥐의 내시경 생체 발암 및 소장의 평가의 멀티 모달 이미징 상처 치유 및 염증

우리는 단단한 내시경을 사용하여 마우스의 결장 병리학 치료를 위한 치료제의 효능을 종단적으로 모니터링하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 살아있는 마우스에서 개별 종양의 치료 반응을 특성화하고 잠재적인 질병 재발을 모니터링하는 데 쉽게 사용할 수 있습니다.

라이브 마우스의 직렬 내시경 이미징을 사용하여 소장 병변에 대한 새로운 치료제의 효능의 비 침습적 평가

분절성 아데노 크리 (adeno-cre) 감염 및 고해상도 대장 내시경 검사 를 통한 대장 암의 유 전적으로 조작 된 마우스 모델을 확립하기위한 프로토콜이 제시됩니다.

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장 이식-비교-호스트 질병 및 라이브 쥐에서 미니 내 시경 평가의 유도

제시된 프로토콜은 염증성 장 질환 관련 대장암의 유도에 이어 마우스에서 부록(caecal patch)의 막강 외과적 제거를 기술한다. 이 뮤린 충수 절제술 모델은 인간 위장 병기의 병인에서 부록의 생물학적 역할을 조사 할 수 있습니다.

만성 대장염 관련 대장암의 뮤린 충수 절제술 모델은 Caecal 패치의 정확한 국소화에 의해

여기에서, 우리는 마우스에 있는 대장 내시경 유도핀치 생검을 유도하고 실시간으로 상처 폐쇄를 추적하는 절차에 대한 상세한 설명을 제공합니다. 또한, 상처 침대의 조직학적, 면역 조직 화학 및 분자 분석을 위한 조직의 제조를 위한 방법이 제공됩니다.

마우스에서 대장 내 시경 유도 핀치 생검을 수행하고 후속 조직 변화를 평가

무료 컴퓨터 보조 시스템을 사용하여 장 염증의 체계적인 점수는 궤양과 염증 변화의 존재를 특징으로 하는 대장염 모델의 조직 병리학적 변화를 정량적으로 비교할 수 있는 강력한 도구입니다. 조직학 대장염 점수 평가는 임상 관찰을 강화하고 데이터 해석을 용이하게합니다.

뮤린 Dextran 나트륨 황산염 유도 대장염 모형에 있는 장 염증을 위한 체계적인 채점 분석

방법은 생쥐에서 인간의 retinoblastoma 종양을 전파하기 위해 설명되어 있습니다. 종양 세포에 직접 면역 결함 생쥐의 눈을에 주입하고 있습니다. 이차 종양이 성공적으로 직접적으로 인간의 종양과 교양 tumorspheres에서 수확을 모두 세포를 사용하여 설립되었습니다.

면역 결함 마우스의 확립과 인간 Retinoblastoma 종양의 전파

학습하세요 마우스 대장 내시경 검사 방법과 검증된 채점 시스템을 통해 대장염 및 대장 종양 위험을 평가하는 기술을. 이 프로토콜은 정상 해부학 이해와 최소 침습 기법을 포함합니다.

검증 된 내시경 채점 시스템을 사용하여 대장염과 대장 종양의 위험을 평가하기 위해 마우스의 유연한 대장 내시경 검사

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