Name: 뼈 대식 세포 생산에게 골수 유래 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-22T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: 배우세요 생쥐 뼈수에서 대식세포를 분화시키는 방법을. 이 기술은 면역학 및 세포생물학 연구에 필요한 1차 대식세포를 대량으로 얻을 수 있어 세균 감염 및 면역 반응 메커니즘 연구에 활용됩니다.

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이 작품은 CNRS (PICS EG에 2012-2014)에 의해 Regione 캄파니아 (LR의 N.5, 지오 반나 모톨라에 2002년 3월 28일)에서 부여에 의해 지원되었다. 필리포 콘티 과학 협력 재단 &#39;Infectiopole 수드의 동료입니다.&#39;니콜라 Boucherit은 연구 및 기술에 대한 프랑스 정부의 동료입니다. 자금 출처는 연구 설계, 데이터 수집, 데이터 분석, 게시 할 수있는 의사 결정, 또는 원고 준비에 역할을했다.

윤리 정책 규칙에 맞는 엑스 마르세유 대학에서 동물 처리를위한 프로토콜이 우리의 기관 동물 윤리위원회 &quot;헌법위원회 Scientifique 뒤 센터 드 형성 등 드 공들인 실험 의학적 Chirurgical&quot;의 승인을 받았다 (CFREMC, 에릭 Ghigo에 프로젝트 허가 10-300122013) 의 Décret N은 1987년 10월 19일의 87-848을 °. 실험은 Faculté 드 MEDECI​​NE 드 라 티모네 (에릭 Ghigo에 실험 허가 번호 13.385)에서 수행 하였다. 1. 재료 및 문화 미디어 준비 <ol><li> 두 집게, 두 개의 가위, 두 수술 블레이드, 박격포와 유봉을 소독. </li><li> 10 % 소 태아 혈청 (FCS), 2 MM의 글루타민, 100 U / ㎖ 페니실린 / ㎖ 스트렙토 마이신 100 μg을 포함하는 완전한 DMEM를 얻습니다. </li><li> 1X PBS를 얻기 위해 멸균 증류수로 10 배 PBS를 희석. </li><li> 얼음처럼 차가운 1X PBS, 얼음처럼 차가운 완전한 DMEM, 완전한 DMEM의 워싱턴 주를 얻37 ° C.에 RMED </li></ol> 2. L929 세포 상층 액의 제조 <ol><li> 37 ° C에서 완전한 DMEM에 (이십 175cm 2 플라스크) 5 % CO 2를 합류 할 L929 세포를 성장. </li></ol> 주 : 인자 (GM-CSF)를 자극하는 과립구 - 대 식세포 콜로니가 대 식세포 (12)에 조혈 세포의 분화를 유도하는 데 필요합니다. L929 세포는 GM-CSF를 생산하고 있습니다. <ol start="2"><li> 합류, 신선한 완전한 DMEM과 문화 매체를 교체하십시오. 10 일 동안 32 ° C, 5 % CO 2에 플라스크를 전송합니다. </li><li> 수집, 수영장과 10 분 동안 750 XG에서 상층 액을 원심 분리기. 세포 펠렛을 폐기하십시오. </li><li> -20 ℃에서 15 ML 튜브 및 저장소에 보관 상층 액 </li></ol> 3. 뼈 식세포 (BMDM) 제조 예 골수 유래 <ol><li> 자궁 전위에 의해 1 마우스를 희생. <ol><li> 실험을하는 동안 무균 수술 블레이드를 사용합니다. 70 % ALCO로 피부를 소독HOL. 각 뒷다리의 상단에 절개를하고 근육을 노출하는 발쪽으로 피부를 아래로 당겨. </li><li> 뒷다리를 잘라, 멸균 가위 및 멸균 집게로 피부를 제거합니다. 살균, 얼음처럼 차가운 1X PBS (5 ㎖)를 포함하는 멸균 페트리 접시 (10분의 35 ㎜) 내 다리를 놓습니다. </li><li> 멸균 가위와 집게로 뼈에 부착되어있는 살과 근육을 제거합니다. </li></ol></li><li> 얼음처럼 차가운, 살균 1X PBS (5 ㎖)를 포함하는 새로운 멸균 페트리 접시 (10분의 35 ㎜)에 뼈를 전송합니다. 5 ML 얼음처럼 차가운, 살균 1X PBS와 뼈를 두 번 씻으십시오. </li><li> 5 ML 얼음처럼 차가운, 살균 1X PBS를 포함하는 멸균 박격포에 뼈를 전송합니다. </li><li> 멸균 가위로 관절에서 대퇴골에서 경골을 잘라. 유봉을 사용하여 5 ㎖ 얼음처럼 차가운, 살균 1X PBS를 포함하는 멸균 박격포 부드럽게 뼈를 분쇄. </li><li> 얼음처럼 차가운 15 ML 튜브에 뜨는을 수집합니다. 이 단계의 3 배를 반복합니다. </li><li> 70 μm의 나일론 셀 스트라 통해 필터고체 조각을 제거하는 iner. 4 ℃에서 10 분 동안 450 XG에서 여과 액을 원심 분리기 </li><li> 조심스럽게 상층 액을 버린다. 30 초 동안 10 ㎖ 적혈구 세포 용해 버퍼에 펠렛을 떼어 놓다. 20 ㎖의 얼음처럼 차가운, 완전한 DMEM을 추가합니다. </li></ol> 주 :이 단계의 목적은 적혈구 오염 제거하는 것이다, 따라서,이 단계는 적혈구 세포 용해 완충액에 의해 조혈 세포의 변질을 방지하기 위해 2 분 이내에 수행해야한다. <ol start="8"><li> 4 ℃에서 10 분 동안 450 XG에 원심 분리기 조심스럽게 상층 액을 버린다. 37 ℃로 가온 한 20 ㎖ 완전한 DMEM에서 펠렛을 떼어 놓다 </li><li> 2 페트리 접시 (20분의 100 ㎜)로 분해 세포를 전송합니다. 37 ℃에서 4 시간 동안 그들을 품어 </li><li> 실온에서 50 ML 튜브에 상층 액을 수집합니다. 상주 대식 세포를 포함하는 요리를 폐기하십시오. </li></ol> 참고 :이 단계의 목적은 주민 뼈 MARRO을 제거하는 것입니다문화 처리 된 플라스틱을 준수 할 수있는 능력에 의해 w 식세포. 이러한 상주 식세포는 다른 실험에 사용될 수있다. <ol start="11"><li> 4 ℃에서 10 분 동안 450 XG에서 수집 된 상층 액을 원심 분리기 상층 액을 버린다. </li><li> 10 ㎖의 15 % L929 세포의 상층 액을 포함하는 완전한 DMEM 부드럽게 펠렛을 떼어 놓다. 40 μm의 나일론 셀 스트레이너를 통해 세포를 필터링합니다. </li><li> 여과 액을 복구 할 수 있습니다. 140 ㎖의 15 % L929 휴대 미디어로 보충 된 완전한 DMEM에 수집 된 여과 액 (10 ㎖)를 추가합니다. </li><li> 페트리 접시 (15 페트리 접시, 20분의 100 ㎜) 당 세포 현탁액 10 ㎖를 배포합니다. 37 ° C, 5 % CO 2에서 세포를 품어. </li><li> 3 일 동안 세포를 성장 </li><li> 10 ㎖의 15 % L929 보충 된 완전한 DMEM을 추가합니다. 4 추가 일 동안 세포를 품어. </li></ol> 참고 : 거꾸로 현미경으로 주기적으로 세포 성장을 모니터 (3.14-3.16 단계). 식세포가 될 것입니다문화의 3 일 후에 관찰했다. 4. 수확 BMDMs <ol><li> 뜨는을 제거합니다. 완전한 DMEM으로 BMDMs을 2 회 반복 </li><li> 5 ㎖를 37 ℃로 예열 된 완전한 DMEM 추가 부드럽게 고무 경찰관으로 긁어 BMDMs를 분리합니다. </li><li> 10 분 450 XG에 50 ML 튜브와 원심 분리기에 BMDMs를 수집합니다. 조심스럽게 20 ML 완전한 DMEM으로 세포 펠렛을 떼어 놓다. </li><li> 트리 판 블루의 존재에 BMDMs 카운트 (더 이상 10 % 이상 사망률이 관찰 될 수 없습니다). </li></ol> 참고 : 일반적으로, 약 6-7.5 × 10 7 대식 세포는 대 식세포의 15 페트리 접시 (20분의 100 ㎜)에서 얻을 수 있습니다. 약 4 ~ 5 × 10 6 대 식세포 / 페트리 접시 (20분의 100 밀리)가있다. <ol start="5"><li> 실험에 필요한 BMDMs를 준비합니다. 37 ° C에서 전체 미디어의 16 시간 후, 5 % CO 2, 대식 세포는 다시 지원을 준수합니다. </li></ol> 5. BMDMs 저장 <ol><li> 고립 BMDMs (4.3 단계)를 수집합니다. 10 분 450 XG에 원심 분리기. 참고 : BMDMs은 액체 질소에 냉동 할 수있다. </li><li> 각 앰풀에 / ㎖ 피펫 1 ㎖ 4 × 10 6 세포의 최종 농도 10 % DMSO 및 90 % FCS로 구성된 미디어를 동결을 Resuspend 세포 펠렛. </li><li> 1 ° C / 분의 냉각 속도로 세포를 동결. 24 시간 후, 장기간 저장을 위해 액체 질소 용기에 앰플을 전송. </li></ol>

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</ol>

관심 없음 충돌 선언이 없습니다.

본원에 기재된 프로토콜은 BMDMs 다수 생산하는 방법을 상세. BMDM은 일차 전지이며 미성숙 대 식세포 세포주 달리, 성숙한 있기 때문에 생물학적 기능 및 단핵구로부터 분화 된 대식 세포의 특성을 갖는다. BMDMs는 유전자 검사 (RNAi의), 약물 스크리닝, 기능적 연구 기주 - 연구 및 조사의 많은 다른 분야에 사용될 수있다. 본원에 제시된 절차는 매우 간단하고 특수 장비를 필요로하지 않으며, 따라서 용이 실험실 또는 교실에서 수행 될 수있다. 이 방법은 약간의 연습과 손재주를 필요로한다. 그것은 따라서 향후 실험을 용이하게 액체 질소에 BMDMs를 저장하는 것도 가능하다. 성공적인 BMDM 문화에 대한 몇 가지 중요한 단계가 있습니다 : 1) 멸균, 건강한 문화를 유지하고는, 2) 골수 추출을 효율적으로 필요 3) L929 SUPernatant 품질이 중요하다, 4) 조혈 세포의 손상을 방지하기 위해 2 개 이상의...

대식 세포 기능의 중요한 측면은 타고난 및 적응 면역에서의 역할입니다. 때문에 불활성 입자, 세균이나 기생충을 탐식하는 그들의 능력으로, 대식 세포는 외국 침략자에 대한 방어의 첫 번째 라인이다. 일단 내면화, 미생물은 phagolysosomes 내에서 분해된다. 대 식세포는 또한 T 림프구 등의 면역 세포에 신규 모집을위한 신호와 현재의 항원을 보낼 수 있습니다. 대 식세포는 단핵 세포에서 파생됩니다. 단핵 세포는 골수 줄기 세포로부터 골수에서 발생하고이 대 식세포로 분화 말초 혈액과 여러 조직으로 마이그레이션 할 수 있습니다. 그것은 건강한 성인 마우스는 다양한 장기와 조직 (표 1) 1, 2에 몸 전체에 분포되어 약 10 8 대 식세포가 포함되어있는 것으로 추정된다. 대 식세포 때문에 자신의 미세 환경의 3,4에 적응하는 능력의 큰 표현형과 기능의 다양성을 표시합니다. 가장 중요한 macrophage 숙박 시설은 미생물을 탐식하고 파괴하는 그들의 능력에 의해 정의됩니다 자신의 살균 활동이다. 식세포 반응은 미생물의 접촉에 의해 자극 된 복잡한 시그널링 네트워크의 활성화에 의해 정의되며, 따라서, 식세포는 다양한 자극에 응답하여 적절하게 유전자 발현을 변조한다. 식균 작용 한 후, 미생물은 phagolysosome라는 구조에서 제거되고 있지만, 많은 병원성 미생물 식세포 5의 살균 기능을 파괴 할 수있는 전략을 개발했습니다. 다른 미생물 종에 의해 이용되는 파괴 메커니즘의 다양성은 식세포 과정 6의 복잡성과 phagolysosome 생합성의 증거입니다. 감염성 질환은 주요 인간의 건강 문제, 그리고 수많은 메커니즘과 분자는 대 식세포의 항균 활동에 참여한다. 또한, 미생물에 의해 납치 된 살균 속성의 목표는 알 그대로 남아 있고, 따라서 전자가대식 세포에 대한 과학적인 관심을 갱신했다 호스트 병원체 상호 작용의 진화 유전 적, 생화학 적 측면에서 관심 XPLOSION. 현재 필드에서 연구의 대부분은 식세포 활성, 사이토킨 생산 및 산화 적 버스트의 조절에 기본 식세포 다를 대식 세포주에서 수행된다. 또한, 그들은 현미경 덜 적합하다. 상호 작용 식세포 - 병원균을 조사하기 위해 그것은 더 많은 생리적 기능을 나타내는 등 골수 유래 대 식세포 (BMDMs)와 같은 차 대식 세포를 사용하는 것이 좋습니다. 이 대식 세포는 형질 전환 마우스에서 직접 분리하고, 같은 렌티 바이러스 형질 전환과 같은 새로운 기술의 가용성을 할 수 있기 때문에 또한,이 유전자 변형 BMDMs에서 작동 할 수 있으며, 자신의 유전자 발현 프로파일이 유전자 과발현 또는 RNA 간섭에 의해 변경 될 수 있습니다. 여기, 우리는 쥐의 뼈 M을 차별화하는 절차를 설명기능이 같은 단백질 체학 7, transcriptomics 8로 분석하여 다양한위한 7 일에서 대식 세포의 큰 번호를 제공합니다 식세포에 화살표, 세포 내 인신 매매는 9, 동적 스터디 10, 유전 스크린 (RNAi의) 11 심사 약물을 연구.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>21969-035</td><td></td></tr><tr><td>태아 송아지 혈청</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>10270</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>15070</td><td></td></tr><tr><td>글루타민</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>PBS (10x)</td><td>Lonza</td><td>BEM515F</td><td></td></tr><tr><td>적혈구 용해 버퍼</td><td>시그마</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>셀 스트레이너 70 &mu; m 나일론</td><td>BD Falcon</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>셀 스트레이너 40 &mu; m Nylon</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>50 ml 튜브</td><td>모든 공급업체</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>15ml 튜브</td><td>모든 공급업체</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시(100/20mm)</td><td>모든 공급업체</td><td>n/a</td><td>배양 처리된</td></tr><tr><td>페트리 접시(35/10mm)</td><td>모든 공급업체</td><td>해당 없음</td><td></td></tr></tbody></table>

뼈 대식 세포 생산에게 골수 유래

Bone Marrow-derived Macrophage Production

대 식세포는 타고난 및 적응 면역 반응의 중요한 구성 요소이며, 그들은 때문에 그들의 강력한 살균 활동의 외국 침략자에 대한 방어의 첫 번째 라인이다. 대 식세포가 널리 몸 전체에 분포하고 림프 기관에 존재하는, 간, 폐, 위장관, 중추 신경계, 뼈, 피부. 때문에 그들의 재분할 건들은 생리적 및 병리 적 과정의 넓은 범위에 참여한다. 대 식세포는 미세 환경 변화를 인식하고 조직의 항상성을 유지하기 위해 수있는 매우 다양한 세포입니다. 수많은 병원체 생존에 복제 및 감염 인간과 동물 모두를 몸 전체에 전파하기 위해 트로이 목마로 대식 세포를 사용하는 메커니즘을 진화했다. 호스트 병원체 상호 작용의 진화 유전 적, 생화학 적 측면에 대한 관심이 최근의 폭발은 대 식세포에 대한 과학적인 관심을 갱신했다. 여기에서, 우리는 설명호스트 병원체 상호 작용을 공부뿐만 아니라 다른 프로세스 대식 세포의 큰 번호를 제공합니다 쥐의 골수에서 대 식세포를 분리 및 배양하는 절차.

이 방법의 목적은 쉽게 몇 일 대식 세포의 큰 숫자를 얻을 수 있었다. 골수 세포의 제조는도 1에 도시되어있다. 뒷다리의 뼈를 수집 및 박격포에서 격돌했다. 상주 식세포는 골수 세포 제제로부터 제거 된 후에, 골수 세포를 GM-CSF (0 일)와 함께 배양 하였다. 3 일 후에, 문화 전 라운드와 비 접착 있던 세포, 대 식세포로 분화 및 (그림 1A)을 준수하기 시작합니다. 세포 계측법 분석 F4/80를 사용하여 HLA-DR 마커는 세포 따라서 그들은 대식 세포 (그림 1B)로 분화하는 것을 증명 모두 마커를 표명 것으로 나타났다. 7 일 후에, BMDM 단층는 6-7.5 × 10 7 BMDM / 마우스를 얻었다. 대 식세포는 실험의 다양한 유형 (도 2)에서 이용 될 수있다. BMDMs의 기능적 활동은 다른 방식으로 결정될 수있다. 예를 들어, BMDM는 phagocytosIS는 라텍...

대 식세포는 긴 타고난 및 적응 면역 반응의 중요한 구성 요소로 인식되고있다. 대식 세포와 미생물 사이의 상호 작용의 진화 유전 적, 생화학 적 측면에 관한 지식의 최근의 폭발은 대 식세포에 과학적인 관심을 갱신했다. 이 문서에서는 마우스 골수에서 대식 세포를 구별하는 방법을 설명합니다.

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

본 절차의 전반적인 목적은 골수 유래 세포 배양을 통해 소변으로부터 대식세포를 생성하는 것입니다. 이는 먼저 마우스 뒷다리에서 골수를 추출함으로써 이루어집니다. 두 번째 단계에서는 골수 내에 존재하는 대식세포를 제거한 후, 골수 세포를 대식세포 분화 조건에서 추가로 배양합니다.그 후 골수 세포가 대식세포로 분화되면, 실험적 분석을 위해 이를 수집할 수 있습니다. 최종적으로 공초점 현미경을 사용하여 골수 유래 대식세포 내 산성 구획의 박테리아 LPS 국소화를 입증할 수 있습니다. 대식세포 세포주를 배양하는 것과 같은 기존 방법보다 이 기술의 주요 장점은 다량의 일차 대식세포를 얻을 수 있다는 점입니다.자체 제작 단계는 학습하기 어렵고 연습이 필요하므로 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다. 성공적인 수행을 위해, 안락사시킨 마우스의 피부를 70% ethanol로 소독하십시오. 각 뒷다리의 상단부를 절개하고 피부를 발 쪽으로 당겨 근육을 노출시킵니다. 다음으로, 멸균 가위와 핀셋을 사용하여 뒷다리를 절단하십시오.피부를 제거하려면, 5 mL의 멸균 냉각 PBS가 담긴 멸균 35 mm 페트리 접시에 다리를 넣습니다. 뼈에 붙어 있는 피부와 근육을 모두 제거한 후, 5 mL의 얼음이 담긴 새로운 멸균 페트리 접시로 뼈를 옮깁니다.차갑고 멸균된 PBS. 5 mL의 PBS를 추가로 사용하여 뼈를 두 번 세척한 후, 5 mL의 ice-cold 멸균 PBS가 담긴 멸균 막자사발로 옮깁니다.이제 관절 부위에서 경골을 대퇴골로부터 절단하고, 막자사발을 사용하여 뼈를 부드럽게 으깹니다. 상층액을 얼음처럼 차가운 15 milliliter 튜브에 세 번 수집하십시오. 그런 다음 70 micron 나일론 세포 스트레이너로 조직 현탁액을 여과합니다.고체 파편을 제거하기 위해 여과액을 원심 분리하고 상층액을 조심스럽게 버립니다. 펠릿을 적혈구 용해 버퍼로 해리시키고, 30초 후에 20 mL의 얼음처럼 차가운 완전 DMEM을 추가하여 반응을 중단시킵니다. 세포를 원심 분리한 후, 펠릿을 37 °C의 완전 DMEM 20 mL에 현탁하고, 세포 현탁액을 두 개의 100 mm 페트리 접시에 나누어 담습니다. 접시를 37 °C에서 4시간 동안 배양한 다음, 상층액을 실온에서 50 mL 튜브에 수집합니다.상층액을 원심 분리한 후, 이전에 준비한 L 9 29 세포 상층액이 첨가된 완전 DMEM 10 milliliters에 펠릿을 재현탁하고, 40 micron 나일론 세포 스트레이너로 세포를 여과합니다. 여과액을 완전 DMEM 및 L 9 29 세포 배지 140 milliliters에 추가한 다음, 100 millimeter 페트리 접시 15개에 세포 현탁액을 접시당 10 milliliters씩 분배합니다. 37 degrees Celsius, 5% carbon dioxide 조건에서 완전 DMEM 및 L 9 29 상층액 10 milliliters와 함께 세포를 3일 동안 배양한 후, 추가로 4일 더 배양합니다.도립 현미경으로 세포 성장을 주기적으로 모니터링하여 골수 유래 대식세포를 수확하려면, 먼저 상층액을 흡입하여 제거합니다. 그런 다음 완전 DMEM으로 페트리 접시를 2회 세척합니다. 이어서 37°C의 완전 DMEM 5mL를 첨가하고 고무 폴리스맨(rubber policeman)을 사용하여 세포를 부드럽게 떼어낸 후, 골수 유래 대식세포를 50mL 튜브에 수집하고 원심 분리하여 세포를 침전시킵니다.20 mL의 완전 DMEM으로 펠렛을 재현탁합니다. 마지막으로, 트립판 블루 배제법(trypan blue exclusion)을 통해 세포 수를 측정합니다. 이 방법을 사용하면 앞서 시연한 바와 같이 골수 상주 대식세포를 제외한 원형의 비부착성 골수 세포를 분리하고 배양한 후, 단 며칠 만에 다량의 대식세포를 얻을 수 있습니다.이 대표적인 BMDM 전구 세포들을 G-M-C-S-F와 함께 배양하였습니다. 3일 후, 세포들이 부착되기 시작하며 대식세포로 분화되었습니다. 7일 후에는 골수 유래 대식세포의 조밀한 단일층이 관찰되었습니다.F4/80 및 HLA-DR에 대한 유세포 분석 결과, 골수 유래 대식세포가 두 마커를 모두 발현하는 것으로 나타나 골수 세포가 대식세포로 분화되었음을 확인하였습니다. 골수 유래 대식세포의 PHA 산성 능력을 평가하기 위해, 예상대로 세포의 라텍스 비드 내재화 능력을 모니터링하였습니다.세포당 비드 수를 통해 시간이 지남에 따라 증가하는 양상을 확인하여 엔도사이토시스(endocytic) 잠재력을 평가하였습니다. 골수 유래 대식세포를 Coxiella와 함께 공배양하였습니다. 빨간색으로 표시된 Burnett eye LPS는 파란색의 리소좀 관련 막 단백질 1(lysosomal associated membrane protein one)이 존재하는 구획에 국소화되어 있었으나, 초록색의 cathepsin D는 관찰되지 않았습니다. 이는 LPS가 후기 엔도솜(late endosomes)에 존재하며, 일반적인 골수 유래 대식세포에서 예상되는 것과 달리 리소좀과 융합하지 못했음을 보여줍니다.세균성 병원체 상호작용은 TMA Wiley eye 감염을 통해 추가로 분석되었습니다. 예상대로 빨간색으로 표시된 세균은 KPS 및 D가 포함된 구획(다시 녹색으로 표시됨)에 국한되지 않았습니다. 이 대표적인 면역 블롯에서 골수 유래 대식세포 신호 전달 경로를 평가한 결과, 조직 분리 대식세포와 마찬가지로 골수 유래 대식세포가 esia coli LPS 자극에 반응하여 인산화된 P 38 alpha map kinase 수준을 상향 조절함을 입증하였습니다.이 방법은 미생물이 세포 내 어느 구획에 국소화되어 있는지와 같은 세포 미생물학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.

bone-marrow-derived-macrophage-production

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 비디오에서는 박테리아 지질다당류와 면역글로불린 정맥 주사에 대한 반응으로 골수 유래 대식세포가 활성화되는 것을 보여줍니다.

항체에 반응하는 마우스 골수 유래 대식세포의 활성화(Activation of mouse bone marrow-derived macrophages in response to antibos)

골수 유래 대 식세포를 사용하여 대식 세포 분극 조사

우리는 인간 대 식세포의 세대를위한 간단하고 효율적인 프로토콜을 제시한다. 버피 코트는 이중 밀도 구배 원심 분리에 의해 처리되고 격리 된 단핵구는 테프론 코팅 된 세포 배양 가방에서 대 식세포로 분화된다. 이 대 식세포의 수율을 극대화하고 다음 실험을 위해 세포 수확을 용이하게한다.

인간의 두 그라데이션 원심 분리하여 단핵구와 테프론 코팅 세포 배양 가방에서 대 식세포로 분화의 분리

여기서는 쥐 복막 대식세포를 분리하는 간단한 프로토콜을 설명합니다. 이 절차 다음에는 RNA 추출을 수행하여 Toll-like receptor 자극에 대한 유전자 발현 분석을 수행합니다.

쥐 복막 대 식세포의 분리는 수신자 같은 수용체 자극하면 유전자 발현 분석을 수행하기

대사 재프로그래밍은 M1 및 M2 대식세포 분극의 특성이자 전제 조건입니다. 이 원고는 마우스 골수 유래 대식세포에서 해당작용 및 미토콘드리아 기능의 기본 매개변수를 측정하기 위한 분석을 설명합니다. 이 도구는 특정 요인이 대식세포의 대사와 표현형에 어떤 영향을 미치는지 조사하는 데 적용할 수 있습니다.

실시간 세포 외 유출 분석을 사용하여 편광 M1과 M2 골수 유래 대 식세포의 대사 특성

과립구 대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF)로 배양된 골수 세포는 대식세포와 수지상 세포(DC)를 포함하는 이종 배양을 생성합니다. 이 방법은 MHCII 및 히알루로난(HA) 결합을 사용하여 GM-CSF 배양의 DC와 대식세포를 구별하는 방법을 강조합니다. 이 문화권의 대식세포는 폐포 대식세포와 많은 유사점을 가지고 있습니다.

마우스 골수에서 생성 및 GM-CSF의 식별 파생 폐포와 같은 대 식세포와 수지상 세포

대식세포 콜로니 자극 인자(M-CSF) 분화된 인간 단핵구 유래 대식세포의 세포 배양을 위한 프로토콜이 제시됩니다. 이 프로토콜은 대식세포로의 벌크 분화와 결합된 단핵구의 동결 보존을 활용합니다. 그런 다음 수확된 대식세포를 실험 수행에 필요한 세포 밀도의 배양 웰에 파종할 수 있습니다.

대 식세포 콜로니 자극 인자 차별화 된 인간 단핵구 유래 대 식세포의 문화

이 프로토콜은 인간이 유도한 다능성 줄기 세포로부터의 대식세포의 강력한 생성 및 이들의 후속 특성화 방법을 설명합니다. 세포 표면 마커 발현, 유전자 발현 및 기능성 세포는 이들 iPSC 유래 대식세포의 표현형 및 기능을 평가하기 위해 사용된다.

다능성 줄기 세포에서 인간 대식세포의 생산 및 특성화

이 프로토콜은 NO-산화환원 생물학을 연구하기 위해 테트라하이드로바이오프테린(BH4)- 및 유도성 일차 뮤린 대식세포-결핍 일차 뮤린 대식세포를 배양하기 위해 확립되었다. 이 연구는 실험 결과와 결과의 해석을 혼동 할 수있는 전통적인 격리 및 배양 방법에서 발견되는 BH4 및 기타 유물의 잠재적 오염을 줄이는 데 중점을 둡니다.

NO-Redox 생물학의 연구를 위한 골수 유래 대식세포의 분리 및 시험관내 배양

본 프로토콜은 마우스에서 골수 유래 대식세포의 분리 및 배양을 설명합니다.

Isolation and Culture of Bone Marrow-Derived Macrophages from Mice

이 프로토콜은 7-9일 된 신생아 마우스 골수 세포를 분리하고 L929 세포의 상층액을 과립구 집락 자극 인자(M-CSF)의 공급원으로 사용하여 분화된 대식세포를 생성하는 비효소적이고 간단한 방법을 설명합니다. 골수 유래 대식세포는 표면 항원 F4/80, CD206, CD11b 및 기능적 역량에 대해 추가로 분석되었습니다.

신생아 마우스 골수 분리 및 골수 유래 대식세포의 준비

배우세요 생쥐 뼈수에서 대식세포를 분화시키는 방법을. 이 기술은 면역학 및 세포생물학 연구에 필요한 1차 대식세포를 대량으로 얻을 수 있어 세균 감염 및 면역 반응 메커니즘 연구에 활용됩니다.

뼈 대식 세포 생산에게 골수 유래

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