Name: Marble Burying 및 Nestlet Shredding as Tests of Repetitive, Comobive-like behaviors in Mice(쥐의 반복적이고 강박적인 행동 테스트로서의 Marble Burying and Nestlet shredding as Marble Burying and Nestlet shredding as testitive, compulsive-like behaviors in mice) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-12-24T13:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: 학습하세요 쥐의 반복적 강박 행동을 평가하는 marble burying 및 nestlet shredding 테스트 방법을. 이 기법은 인간의 강박장애와 자폐스펙트럼장애 연구에 활용됩니다.

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이 작업은 재향 군인회와 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 보조금으로 지원되었습니다.

동물을 사용한 모든 프로토콜은 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 실험실 동물 관리 및 사용 가이드(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)의 권장 사항에 따라 엄격하게 수행되었습니다. 프로토콜은 Wayne State University의 기관 관리 및 사용 위원회(허가 번호 A3310-01)의 승인을 받았습니다.
1. 대리석 매몰 및 Nestlet 파쇄를 위한 케이지 준비
<ol>
	<li>대리석 매립 테스트를 위해 필터 상단 덮개가 장착된 표준 폴리카보네이트 쥐 케이지(26cm x 48cm x 20cm)를 사용하십시오. 각 케이지에 5cm 깊이로 신선하고 향이 없는 쥐 침구 재료를 추가하고 침구 표면에 동일한 크기의 다른 케이지를 삽입하여 침구 표면을 평평하게 만듭니다. 이것은 대리석 배치에 사용할 수 있는 침구 표면에 평행선의 템플릿을 인상화하는 추가 이점이 있습니다.</li>
	<li>표준 유리 장난감 구슬(다양한 스타일 및 색상, 직경 15mm, 무게 5.2g)을 4개의 구슬로 구성된 5줄의 침구 표면에 부드럽게 놓습니다(그림 1A 참조). 중성 실험실 세제로 구슬을 씻고 증류수 탈이온수로 완전히 헹구고 매번 사용하기 전에 말리십시오.</li>
	<li>nestlet 파쇄 테스트를 위해 필터 상단 덮개가 장착된 표준 폴리카보네이트 쥐 케이지(19cm x 29cm x 13cm)를 사용하십시오. 각 케이지에 0.5cm 깊이까지 신선하고 향이 없는 쥐 침구 재료를 추가하고 침구 표면에 동일한 크기의 다른 케이지를 삽입하여 침구를 포장합니다.</li>
	<li>분석 저울에서 시중에서 판매되는 면 섬유 nestlet(5cm x 5cm, 5mm 두께, 각각 ~2.5g)의 무게를 측정하고 각 테스트 케이지의 침구 위에 하나의 nestlet을 놓습니다(그림 3A 참조).</li>
	<li>타이밍 세션 길이에 대한 중지 감시 또는 타이머를 설정합니다(각 테스트당 30분).</li>
</ol>
2. 실험 전 동물 취급
<ol>
	<li>생쥐를 개별적으로 또는 그룹으로 12시간의 라이트/다크 주기가 있는 방에 수용합니다. 모든 쥐에게 음식과 물을 자유자재로 제공하십시오. 테스트하기 3-5일 전에 쥐를 부드럽게 다루십시오. 두 테스트 모두에 성별 중 하나의 마우스를 사용하십시오.</li>
	<li>오전 9:00에서 오후 4:00 사이에 행동 테스트를 수행하고 테스트 시작 60분 전에 마우스가 포함된 모든 가정용 케이지를 테스트실로 운반합니다.</li>
</ol>
3. 대리석 매몰 테스트
<ol>
	<li>구슬이 들어 있는 케이지 모서리에 마우스 한 마리를 놓고 가능한 한 구슬에서 멀리 떨어진 침구 위에 마우스를 조심스럽게 놓고 케이지에 필터 상단 덮개를 놓습니다. 테스트 중에는 음식과 물을 주지 마십시오. 마우스를 30분 동안 방해받지 않고 케이지에 그대로 두십시오.</li>
	<li>실험 완료 후 마우스를 제거하고 가정용 케이지로 되돌려 놓고, 케이지에서 피험자를 제거하는 과정에서 구슬을 움직이거나 빼내지 않도록 각별히 주의합니다.</li>
	<li>과제 채점자(2-3)는 묻힌 구슬의 수를 세기 위해 검사 중인 마우스의 치료 조건이나 유전자형을 못합니다. 대리석 표면적의 2/3가 침구로 덮여 있는 경우 대리석이 묻힌 것으로 점수를 매깁니다. 각 마우스에 대해 묻힌 구슬의 수에 대한 평균 점수입니다.</li>
	<li>침구에서 구슬 20개를 모두 회수합니다. 침구는 처분하십시오.</li>
</ol>
4. Nestlet 파쇄 테스트
<ol>
	<li>미리 계량된 단일 nestlet이 들어 있는 케이지에 마우스 한 마리를 넣고 케이지에 필터 상단 덮개를 놓습니다. 테스트 중에는 음식과 물을 주지 마십시오. 30분 동안 둥지가 있는 케이지에 마우스를 방해받지 않고 그대로 두십시오.</li>
	<li>마우스를 제거하고 테스트 완료 후 홈 케이지로 돌아갑니다. 집게로 케이지에서 남아 있는 손상되지 않은 nestlet 재료를 제거하고 O/N을 건조시킵니다.</li>
	<li>파쇄되지 않은 나머지 nestlet의 무게를 측정하고 이 무게를 시작 무게로 나누어 파쇄된 nestlet의 백분율을 계산합니다. 원하는 경우, 피험자 쥐가 생성한 둥지의 형태에 대해 5점 둥지 등급 척도17을 사용하여 점수를 매기되, 이 척도는 일반적으로 집착적인 파쇄가 아닌 둥지 건설에 점수를 매기기 위한 것임을 인식합니다.</li>
	<li>남은 파쇄된 둥지 재료와 침구는 폐기합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Chamberlain, S. R., Blackwell, A. D., Fineberg, N. A., Robbins, T. W., Sahakian, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuropsychology+of+obsessive+compulsive+disorder%3A+the+importance+of+failures+in+cognitive+and+behavioural+inhibition+as+candidate+endophenotypic+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">The neuropsychology of obsessive compulsive disorder: the importance of failures in cognitive and behavioural inhibition as candidate endophenotypic markers.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 29, 399-419 (2005).</li>
<li>McGuire, J. F., Lewin, A. B., Horng, B., Murphy, T. K., Storch, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nature%2C+assessment%2C+and+treatment+of+obsessive-compulsive+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Postgrad.+Med%22%5BJournal%5D)">The nature, assessment, and treatment of obsessive-compulsive disorder.</a> Postgrad. Med. 124, 152-165 (2012).</li>
<li>Fineberg, N. A., Brown, A., Reghunandanan, S., Pampaloni, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence-based+pharmacotherapy+of+obsessive-compulsive+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Neuropsychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Evidence-based pharmacotherapy of obsessive-compulsive disorder.</a> Int. J. Neuropsychopharmacol. 15, 1173-1191 (2012).</li>
<li>Dove, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medications+for+adolescents+and+young+adults+with+autism+spectrum+disorders%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Medications for adolescents and young adults with autism spectrum disorders: a systematic review.</a> Pediatrics. 130, 717-726 (2012).</li>
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<li>Albelda, N., Joel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+animal+models+of+obsessive+compulsive+disorder%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Current animal models of obsessive compulsive disorder: an update.</a> Neuroscience. 211, 83-106 (2012).</li>
<li>Albelda, N., Joel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+obsessive-compulsive+disorder%3A+Exploring+pharmacology+and+neural+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">Animal models of obsessive-compulsive disorder: Exploring pharmacology and neural substrates.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 36, 47-63 (2012).</li>
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<li>Deacon, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digging+and+marble+burying+in+mice%3A+simple+methods+for+in+vivo+identification+of+biological+impacts%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Digging and marble burying in mice: simple methods for in vivo identification of biological impacts.</a> Nat. Protoc. 1, 122-124 (2006).</li>
<li>Moy, S. S., Nadler, J. J., Magnuson, T. R., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+autism+spectrum+disorders%3A+the+challenge+for+behavioral+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Med.+Genet.+C+Semin.+Med.+Genet%22%5BJournal%5D)">Mouse models of autism spectrum disorders: the challenge for behavioral genetics.</a> Am. J. Med. Genet. C Semin. Med. Genet. 142, 40-51 (2006).</li>
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<li>Angoa-Perez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+depletion+of+brain+5HT+reveals+a+common+molecular+pathway+mediating+compulsivity+and+impulsivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Genetic depletion of brain 5HT reveals a common molecular pathway mediating compulsivity and impulsivity.</a> J. Neurochem. 121, 974-984 (2012).</li>
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<li>Deacon, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+nest+building+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Assessing nest building in mice.</a> Nat. Protoc. 1, 1117-1119 (2006).</li>
<li>Thomas, D. M., Angoa Perez,, Francescutti-Verbeem, D. M., Shah, M. M., Kuhn, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+endogenous+serotonin+in+methamphetamine-induced+neurotoxicity+to+dopamine+nerve+endings+of+the+striatum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">The role of endogenous serotonin in methamphetamine-induced neurotoxicity to dopamine nerve endings of the striatum.</a> J. Neurochem. 115, 595-605 (2010).</li>
<li>Gyertyan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+marble+burying+response%3A+marbles+serve+to+measure+digging+rather+than+evoke+burying%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Analysis of the marble burying response: marbles serve to measure digging rather than evoke burying.</a> Behav. Pharmacol. 6, 24-31 (1995).</li>
<li>Thomas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marble+burying+reflects+a+repetitive+and+perseverative+behavior+more+than+novelty-induced+anxiety%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Marble burying reflects a repetitive and perseverative behavior more than novelty-induced anxiety.</a> Psychopharmacology. 204, 361-373 (2009).</li>
<li>Hayashi, E., Kuratani, K., Kinoshita, M., Hara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologically+distinctive+behaviors+other+than+burying+marbles+during+the+marble+burying+test+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Pharmacologically distinctive behaviors other than burying marbles during the marble burying test in mice.</a> Pharmacology. 86, 293-296 (2010).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

대리석 묻기 및 새끼 파쇄 테스트는 생쥐의 반복적이고 강박적인 행동을 연구하기 위한 행동 방법의 좋은 예입니다. 두 테스트 모두 모델링6-11을 모델링하는 인간 장애에 대해 우수한 얼굴, 구조 및 예측 타당성을 보여줍니다. 이러한 반복적인 행동은 설치류에서 자연스럽고 자발적이며 그 빈도와 강도는 현재 표시된 것처럼 유전자 변형 후 또는 두부 손상 및 약물 치료 후에 달라질 수 있습니다. 이 두 가지 테스트의 가치는 반복적이고 원치 않는 행동의 표현을 포함하는 OCD 및 ASD와 같은 인간 정신 장애의 검증된 모델이라는 사실에서 비롯됩니다. 두 테스트 모두 TPH2 KO 마우스에서 알 수 있듯이 마우스의 파기, 매설 및 파쇄 행동 발현의 큰 변화에 강력하고 민감합니다.
기존 방법(예: 유전적, 약리학적, 신경발달 모델)과 관련하여 대리석 매몰 및 새끼 파쇄 테스트에는 많은 장점이 있습니다. 둘 다 정교하고 값비싼 장비 없이 대부분의 실험실에서 쉽...

인간 행동, 특히 정신 질환에 대한 마우스 모델은 질병 메커니즘 연구 및 새로운 치료법 개발에 중요하고 필수적인 실험적 접근 방식을 구성합니다. 많은 정신 질환은 동물에서 모델링하기가 매우 어렵습니다 (예 : 정신 분열증). 그러나 동물은 인간의 유사한 행동과 쉽게 연결될 수 있는 자연스럽고 독특한 행동을 많이 보입니다. 움직임 또는 운동 활동은 인간과 유사한 동물의 행동의 한 예입니다. 설치류는 종종 다양한 반복적인 행동에 참여하며 예를 들어 그루밍 또는 파기가 있습니다. 인간에게 반복적이고 원치 않는 행동을 보이는 것과 관련된 한 가지 정신 질환은 강박 장애(OCD)입니다. 강박장애의 매우 특징적인 행동에는 확인, 계수, 과도한 씻기나 몸단장이 포함됩니다. 강박장애는 매우 흔하며(인구의 1-3%에 영향을 미침) 쇠약하게 하는 정신 장애1. 강박장애를 치료하기 위해 많은 약리학적 및 행동학적 접근법이 사용되었습니다. 이들 중 다수는 장기적인 완화를 제공하지 못하며, 치료 요법이 끝날 때 재발하는 경우가 흔하다2,3. 반복적 행동이라는 표현과 관련된 또 다른 정신 질환은 자폐 스펙트럼 장애(ASD)입니다. ASD는 의사소통 및 사회적 상호작용의 결핍과 빙글빙글, 흔들기, 손가락 튕기기 또는 펄럭임, 복잡한 신체 움직임을 포함하는 반복적이고 고정관념화된 행동이 특징입니다. 미국 질병통제예방센터(Centers for Disease Control and Prevention)는 어린이 88명 중 1명이 ASD 진단을 받는 것으로 추정했습니다. 이 질환에 대한 치료 방법은 그 수와 효능이 극히 제한적이다4,5. 강박장애와 자폐증에서 반복적인 행동의 발생 강도와 빈도는 이러한 상태를 가진 환자에서 대부분의 다른 정상적인 행동과 사회적 상호 작용을 대체할 만큼 충분히 커질 수 있습니다. 반복적인 행동을 특징으로 하는 정신 질환의 유병률과 쇠약해지는 특성에 비추어 볼 때, 그리고 그 원인에 대한 이해가 부족하고 치료 옵션이 제한적이라는 점을 고려할 때, 이러한 행동을 연구하기 위해 동물 모델을 사용하는 것이 더욱 시급합니다.
지난 30년 동안 강박장애와 자폐증에서 볼 수 있는 반복적인 행동에 대한 수많은 동물 모델이 개발되었으며 이러한 모델을 설명하는 수많은 우수한 리뷰가 발표되었습니다6-14. 일반적으로 이러한 확립된 모델은 유전적, 약리학적, 신경발달적, 행동적으로 분류될 수 있으며 대부분은 좋은 얼굴, 구성 및 예측 타당성을 보여줍니다6,7. 우리는 유전적으로 세로토닌이 고갈된 쥐의 반복적인 행동을 평가하기 위해 대리석 매몰과 둥지 파쇄의 두 가지 행동 모델을 사용했습니다15,16. 이러한 방법에는 많은 장점이 있으며, 그 중 하나는 사용 편의성, 행동 점수를 매길 수 있는 정확성, 설치류에서 이러한 행동의 자발적인 전시, 비정상적인 행동 표현형에 대한 유전자 변형 마우스의 고처리량 스크리닝에 사용하는 것입니다. 또한, 각 테스트는 피험자의 가정용 케이지에 사용된 것과 동일한 침구가 포함된 표준 및 친숙한 설치류 하우징 케이지에서 수행되어 마우스가 새로운 테스트 챔버에 습관화될 필요성을 최소화합니다. 음식 및/또는 물 제한은 마우스가 수행하도록 "동기"를 부여하기 위해 필요하지 않습니다. 대리석 파쇄 테스트는 자연 환경(예: 굴, 탈출 터널)과 표준 케이지 침구에서 땅을 파는 쥐의 성향을 활용하고, nestlet shred 테스트는 쥐가 환경 조건(예:소리, 빛, 온도). 비전문화되고 일반적으로 구할 수 있는 설치류 사육 재료를 사용하는 대리석 매장 및 둥지 파쇄 작업은 생쥐의 반복적이고 강박적인 행동에 대한 간단하고 강력한 행동 분석입니다.

<table><tbody><tr><td>유리 장난감 구슬</td><td>로컬 장난감 매장</td><td>N / A</td><td>다양한 스타일, 색상, 투명 및 불투명</td></tr><tr><td>Nestlets</td><td>Ancare</td><td>NES3600</td><td></td></tr><tr><td>N10 시리즈 마우스 케이지</td><td>Ancare</td><td>N10HT</td><td>표준 설치류 케이지 와이어 상단</td></tr><tr><td>R20 시리즈 쥐 케이지</td><td>Ancare</td><td>R20</td><td>표준 설치류 케이지 와이어 상단</td></tr><tr><td>침대 오 콥스</td><td>앤더슨</td><td>8B</td><td>표준 설치류 벌크 침구, 1/8인치</td></tr></tbody></table>

marble burying 및 nestlet shredding as tests of repetitive, comobive-like behaviors in mice(쥐의 반복적이고 강박적인 행동 테스트로서의 marble burying and nestlet shredding as marble burying and nestlet shredding as testitive, compulsive-like behaviors in mice)

Marble Burying and Nestlet Shredding as Tests of Repetitive, Compulsive-like Behaviors in Mice

강박 장애(OCD) 및 자폐 스펙트럼 장애(ASD)는 심각하고 쇠약하게 만드는 정신 질환이며 각각 특히 어린이에게 중요한 공중 보건 문제를 구성합니다. 이 두 가지 조건은 모두 무의미한 행동의 반복적인 표현에 의해 강조됩니다. 강박장애를 앓고 있는 사람들은 종종 확인, 잦은 손 씻기, 숫자 세기를 보여줍니다. ASD를 앓고 있는 아동은 또한 반복적인 두드리기, 팔이나 손 펄럭이기, 흔들기에 참여합니다. 이러한 행동은 표현의 강도와 빈도가 매우 다양할 수 있습니다. 더 강렬한 형태의 반복적인 행동은 심지어 부상(예: 과도한 그루밍, 손 씻기, 자기 자극)을 초래할 수도 있습니다. 따라서 이러한 행동은 매우 파괴적이며 정상적인 사회적 담론을 어렵게 만든다. 강박장애와 자폐장애의 반복적 행동에 대한 치료 옵션은 다소 제한적이며, 각 상태에 대해 보다 효과적인 치료법을 개발하는 데 큰 관심이 있습니다. 지난 30년 동안 강박적인 행동을 평가하기 위한 수많은 동물 모델이 개발되었다. 아마도 가장 타당성과 사용 편의성이 가장 높은 동물 모델은 대리석 매장 테스트와 둥지 파쇄 테스트 일 것입니다. 두 테스트 모두 대상 행동이 마우스에서 자발적으로 발생한다는 사실을 이용합니다. 대리석 매립 테스트에서는 깨끗한 침구 표면에 20 개의 대리석이 배열됩니다. 30분 동안 묻힌 구슬의 수는 피험자의 치료나 상태에 대해 알지 못하는 조사관에 의해 점수가 매겨집니다. nestlet 파쇄 테스트에서는 펄프면 섬유로 구성된 nestlet을 미리 계량하여 케이지 침구 위에 놓고 30분의 테스트 세션 후에 손상되지 않은 nestlet의 양을 측정합니다. 현재 우리는 대리석 매립 및 둥지 파쇄에 대한 프로토콜을 설명하고 영화 문서를 보여줍니다. 두 검사 모두 쉽고 정확하게 채점되며, 유전자 조작, 질병 또는 머리 부상으로 인한 강박적인 행동의 작은 변화에도 민감합니다.

구슬 묻기 및 네슬렛 파쇄 테스트의 주요 장점은 각각이 테스트 완료 후 정량화할 수 있는 마우스의 자연스럽고 자발적인 행동에 의존한다는 점이며, 이를 통해 단일 연구자가 실험을 설정한 후 세션이 끝날 때까지 테스트실 밖에 머물 수 있다는 것입니다. 구슬 묻기 테스트의 핵심 요소는 테스트 후 케이지에서 피험체를 조심스럽게 제거하는 것입니다. 마우스는 일반적으로 포획을 피하려고 시도하며, 이 과정에서 부분적으로 묻혀 있던 구슬을 밀어내거나 옮길 수 있고, 테스트 세션 종료 시 묻히지 않았던 구슬을 부분적으로 묻을 수 있습니다. 그림 1A는 피험체를 넣기 직전의 테스트 케이지를 위에서 본 모습입니다. 저희는 (원하는 경우) 묻기 행동 외에도 구슬의 이동을 추적하기 위해 이와 같이 구슬을 정밀하게 정렬하는 방식을 선호합니다. 예시 실험에서, 저희는 야생형(WT) 마우스와 뇌 세로토닌(5HT) 생합성의 초기 및 속도 제한 효소인 tryptophan hydroxylase 2(TPH2) 유전자가 결핍된 마우스의...

질병, 머리 부상, 유전자 변형 및 약물 투여 쥐의 치료는 행동에 깊은 영향을 미칠 수 있습니다. 대리석 매몰 및 둥지 파쇄와 같은 잘 특성화되고 검증된 접근 방식을 사용하여 인간 강박 장애 및 자폐 스펙트럼 장애의 모델로 생쥐에서 강박과 유사한 행동을 정확하게 문서화할 수 있습니다.

Marble Burying 및 Nestlet Shredding as Tests of Repetitive, Comobive-like behaviors in Mice(쥐의 반복적이고 강박적인 행동 테스트로서의 Marble Burying and Nestlet shredding as Marble Burying and Nestlet shredding as testitive, compulsive-like behaviors in mice)

Obsessive-compulsive disorder (OCD) and autism spectrum disorders (ASD) are serious and debilitating psychiatric conditions and each constitutes a ...

본 절차의 전체적인 목적은 반복적 및 강박적 유사 행동을 평가하고 입증하기 위한 신뢰할 수 있는 패러다임으로서 대리석 매몰(marble burying) 및 둥지 재료 파쇄(nestle shredding)의 간편함을 보여주는 것입니다. 설치류를 대상으로 하는 대리석 매몰 테스트에서는 깔짚 표면에 20개의 대리석을 균등한 간격으로 배치하여 케이지를 준비합니다. 그 다음 마우스를 케이지에 넣고 30분 동안 대리석과 함께 방해받지 않은 상태로 둡니다.이 시간이 지나면 마우스를 제거하고 Nestle 테스트를 위해 묻힌 구슬의 개수를 셉니다. 마우스를 넣기 전 케이지에 손상되지 않은 Nestle를 배치합니다. 30분 후 마우스를 제거하고, Nestle가 하룻밤 동안 마르도록 둔 다음 찢어진 Nestle의 백분율을 계산합니다.최종적으로, 녹아웃 마우스와 야생형 마우스 사이에서 구슬 묻기, 매립 및 Nestle 파쇄 행동의 차이를 확인할 수 있습니다. 시연 절차는 본 연구실의 대학원생인 Denise Briggs, 박사후 연구원 Mariana Ango Perez, 그리고 연구원 Dean of Francescutti가 진행하겠습니다. 모든 동물은 먹이와 물을 자유롭게 섭취할 수 있는 환경에서 12시간 명암 주기로 사육되었습니다.최상의 결과를 얻으려면, 테스트 전 3~5일 동안 하루에 한 번씩 각 마우스를 부드럽게 핸들링하십시오. 동물을 테스트할 준비가 되면, 첫 번째 테스트를 시작하기 60분 전에 케이지를 테스트실로 이동시키십시오.대리석 구슬 베어링 테스트를 위해, 필터 덮개가 장착된 표준 폴리카보네이트 쥐 케이지를 사용하십시오. 각 케이지에 향이 없는 신선한 마우스 베딩 재료를 5 cm 깊이로 넣고, 동일한 크기의 다른 케이지를 삽입하여 베딩 표면을 평평하게 맞춥니다. 이 방법은 베딩 표면에 평행선 템플릿을 새길 수 있다는 추가적인 장점이 있습니다. 세척하십시오.표준 유리 장난감 구슬을 순한 실험실용 세제로 충분히 헹구고 탈이온 증류수로 세척한 후, 매 사용 전에 건조시킵니다. 준비가 되면 구슬을 베딩 표면에 부드럽게 누릅니다. 각 행에 4개씩 총 5행의 구슬을 배치하고, 세션 시간을 측정하기 위해 스톱워치나 타이머를 준비합니다.테스트를 시작하려면, 마우스가 구슬에서 최대한 멀리 떨어진 케이지 모퉁이를 향하게 하십시오. 케이지에 필터 덮개를 씌우고 마우스가 구슬이 있는 환경에서 30분 동안 방해받지 않도록 둡니다. 테스트 기간이 끝나면 마우스를 꺼내어 원래의 홈 케이지로 돌려보냅니다.케이지에서 피험체를 꺼내는 과정에서 구슬이 움직이거나 이탈하지 않도록 각별히 주의하십시오. 그 후, 처리 조건을 알지 못하는 2~3명의 연구자가 매몰된 구슬의 수를 측정해야 합니다. 구슬이 완전히 덮여 있을 때 매몰된 것으로 간주합니다.표면적의 3분의 2가 베딩으로 덮여 있다면, 각 마우스당 묻힌 구슬의 개수에 대한 점수를 평균냅니다. 마지막으로, 20개의 구슬을 모두 회수하고 베딩을 폐기합니다. 필터 덮개가 장착된 표준 폴리카보네이트 마우스 케이지를 사용하십시오.Nestle 파쇄 테스트를 위해, 각 케이지에 향이 없는 신선한 마우스 베딩 재료를 0.5 centimeters 깊이로 넣고 앞서 설명한 대로 베딩을 다집니다. 다음으로, 시판되는 면 섬유 네스트렛(nestlets)의 무게를 잰 후 베딩 위에 Nestle 하나를 놓습니다. 각 테스트 케이지마다 세션 시간을 측정하기 위한 스톱워치 또는 타이머를 준비합니다.준비가 되면 마우스를 케이지의 벽면을 향한 한쪽 구석에 넣습니다. 케이지 위에 필터 덮개를 덮고, 마우스를 Nestle와 함께 30분 동안 그대로 둡니다. 이 시간이 지나면 마우스를 꺼내어 원래의 홈 케이지로 돌려보냅니다.케이지에서 남은 온전한 둥지 재료를 제거하고 하룻밤 동안 건조시킵니다. 다음 날, 파쇄되지 않은 둥지 재료의 무게를 측정하고, 이 무게를 초기 무게로 나누어 둥지 재료 파쇄 백분율을 계산합니다.마지막으로, 남은 잘게 찢은 둥지 재료와 깔짚을 폐기합니다. 여기에 대리석 매몰 테스트 전후의 대표적인 케이지 모습이 나와 있습니다. 야생형 마우스를 테스트했을 때는 대리석이 거의 매몰되지 않았거나 초기 위치에서 거의 이동하지 않았습니다.하지만 TPH two 녹아웃 마우스는 20개의 구슬 중 17개를 묻었습니다. 묻히지 않고 남아 있는 구슬은 화살표로 표시하였습니다. 이 측면도는 베딩 표면의 변화를 보여줍니다.테스트 후, 야생형 케이지의 상대적으로 평탄한 표면과 녹아웃 동물의 크고 깊은 골과 봉우리가 있는 불균일한 표면을 비교하십시오. 대리석 매몰 테스트의 전형적인 결과가 여기에 요약되어 있습니다. TPH two 녹아웃 생쥐는 야생형 생쥐와 비교했을 때 대리석을 유의미하게 더 많이 매몰시켰습니다.이 사진들은 파쇄 후의 대표적인 둥지 재료들을 보여줍니다. 여기서 야생형 생쥐의 둥지는 TPH2 녹아웃 생쥐의 케이지에서 수집한 둥지 재료들과 비교했을 때 소량의 파쇄만을 보여줍니다. 이 그래프는 둥지 파쇄 테스트에서 나타난 야생형 및 TPH2 녹아웃 생쥐의 전형적인 수행 능력을 보여줍니다.TPH2 녹아웃 생쥐는 야생형 생쥐보다 Nestle 재료를 훨씬 더 많이 찢습니다. 이 기술을 숙달하면 적절하게 수행했을 때 2시간 이내에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 수행할 때는 구슬이 묻힌 것으로 정의하는 기준을 일관되게 유지하고, 건조되어 찢어지지 않은 나머지 부분에서 찢어진 Nestle 조각들을 제거하는 것이 중요합니다.이 절차를 마친 후, 마우스에 SSRI와 같이 인간의 강박 장애 치료에 사용되는 약물을 투여하여, 이러한 약물들이 마우스의 강박 유사 행동을 감소시키는지 확인할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

쥐에서 반복적인 강박적인 행동 테스트로서의 대리석 매몰 및 네스틀릿 절단

내는, 둥지 및 비장은 쥐가 쉽게 실험실에서 수행하는 종 - 전형적인 활동입니다. 이 문서들은 쉽고 저렴하게 평가하는 방법을 설명합니다. 이러한 프로토콜은 마우스 스트레인, 뇌 병변 및 질환에 매우 민감합니다. 또한 그들은 생쥐에 대한 "환경 농축"를 구성하고, "3 RS"18 "다듬 는다"부분을 구현.

평가는 마우스에 둥지 건설, 그리고 비장을내는

Inchworming 충분한 톱밥 침구 테스트 케이지에 배치 할 때 BTBR T + Itpr 3TF / J (BTBR) 마우스에 표시되는 고도의 반복적 인 동기 파는 움직임이다. 절차는 청소년의 사회적 상호 작용 프로토콜의 변형이며, 자폐증 스펙트럼 장애와 관련된 반복적 인 모터 stereotypies을 평가하기 위해 여기에 사용됩니다.

Inchworming : BTBR의 소설 모터 상동증 (stereotypy)을<em&gt; T<sup&gt; +</sup&gt; Itpr3<sup&gt; TF</sup</em자폐증의&gt; / J 마우스 모델

고차원적 제한, 반복적 행동(RRB)은 영향을 받는 개인의 삶을 방해합니다.  이러한 행동은 설치류에서 모델링하기 어렵기 때문에 RRB에 대한 잠재적 치료법이나 개입에 대한 기본적인 생물 의학 연구를 어렵게 만듭니다.  여기에서는 새로운 물체 탐사를 마우스의 고차 RRB에 대한 잠재적 분석으로 설명합니다.

마우스의 높은 주문 반복적 인 행동에 대한 잠재적 인 분석으로 소설 개체 탐사

여기에는 β- 아밀로이드증 및 타우 병증 유전자 변형 마우스 모델에서인지 및 기능 운동 행동에 대한 생체 내 효능을 나타내는 화합물을 스크리닝하는데 사용될 수있는 단계적 행동 스크리닝 방법이 기재되어있다. 이 방법은 단기 및 작업 메모리 작업에서 활동을 위해 화합물을 스크리닝하기 위해 최적화됩니다.

아밀로이드 -β 및 타우 신경 병증의 유전자 변형 마우스 모델에서 자발적 교대, 새로운 대상 인식 및 사지 걸림의 평가

이 프로토콜은 공간 학습 및 반 즈 미로 사용 하 여 메모리를 측정 합니다. 새로운 계 집 아이-에서-조 난 패러다임 쥐에서 prosocial 동작과 운동 활동을 평가 하는 데 사용 됩니다.

공간 학습 및 반 즈 미로 계 집 아이-에서-조 난 패러다임을 사용 하 여 마우스 Prosocial 동작 분석

모터 기술의 포괄적인 행동 테스트 배터리 분위기-사회적 상호 작용, 우울증, 불안 등-인식 neurodegeneration 관련 행동 변화 생쥐에서의 반복 된 평가 위해 설계 되었습니다.

모터 기술, 분위기, 그리고 쥐에 있는 인식의 반복 된 평가 행동 테스트 배터리

여기에서, 우리는 몇몇 신경장애 및 질병에서 손상되는 것으로 알려져 있는 마우스에 있는 둥지 건물 행동을 정량화하는 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 4개의 자료의 유용성을 검토하고 채점에서 평가자 계약을 정량화하여 분석의 유효성과 신뢰성을 향상시킬 수 있는 기회를 제공합니다.

마우스의 행동 적자의 초기 지표로 둥지 건물 행동

이 원고는 Angelman 증후군 마우스 모델을 검증하기 위해 재현 가능한 행동 테스트 세트를 제공합니다.

Angelman 증후군 마우스 모델의 행동 특성

설치류 모델은 자폐 스펙트럼 장애(ASD)와 관련된 핵심 행동을 연구하는 데 유용한 도구입니다. 이 기사에서는 생쥐에서 ASD의 핵심 기능을 모델링하기 위한 두 가지 행동 테스트, 즉 반복적인 행동을 평가하는 셀프 그루밍(self-grooming)과 사회적 장애를 문서화하는 3개의 챔버 사회적 상호 작용 테스트(three-chamber social interaction test)에 대해 설명합니다.

생쥐의 자폐증과 유사한 행동을 평가하기 위한 전략

M&amp;M(지방과 설탕으로 만든 매우 맛있는 음식)에 간헐적으로 접근하는 것을 사용하여 쥐에서 폭식 모델이 확립되었습니다. 이 고지방, 고설탕 식품에 간헐적으로 접근하는 생쥐는 음식에 지속적으로 접근하거나 전혀 접근하지 않는 쥐에 비해 스트레스와 같은 행동, 칼로리 섭취 증가 및 표준 차우보다 해당 음식을 선호하는 것으로 나타났습니다.

생쥐의 간헐적 폭식 모델

여기에서는 신생아 마우스에서 다양한 산소 농도로 통제된 환경에서 투여하여 저산소증을 유도하는 프로토콜을 제시합니다. 출생 시 산소 변화에 노출된 마우스 모델은 자폐증과 같은 행동 표현형 변화의 유도에 관여하는 miRNA의 발현을 지속적으로 변화시켰습니다.

저산소증은 마우스에서 자폐증 스펙트럼 장애의 비멘델 유전과 관련된 miRNA 수준을 변경합니다.

학습하세요 쥐의 반복적 강박 행동을 평가하는 marble burying 및 nestlet shredding 테스트 방법을. 이 기법은 인간의 강박장애와 자폐스펙트럼장애 연구에 활용됩니다.

Marble Burying 및 Nestlet Shredding as Tests of Repetitive, Comobive-like behaviors in Mice(쥐의 반복적이고 강박적인 행동 테스트로서의 Marble Burying and Nestlet shredding as Marble Burying and Nestlet shredding as testitive, compulsive-like behaviors in mice) (동영상) | JoVE Journal

Marble Burying 및 Nestlet Shredding as Tests of Repetitive, Comobive-like behaviors in Mice(쥐의 반복적이고 강박적인 행동 테스트로서의 Marble Burying and Nestlet shredding as Marble Burying and Nestlet shredding as testitive, compulsive-like behaviors in mice)

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