Name: 생명 염색 강화 형광 이미징을 사용하여 바렛 식도에있는 신 생물의 진단 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-11T16:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: 학습하세요 생명 염색 강화 형광 이미징(VFI)을 사용하여 바렛 식도의 선 모양과 신생물을 시각화하는 방법을. 이 비침습 기술은 고해상도 상피 이미징과 형광 대비제를 결합하여 이형성 및 암을 효과적으로 식별합니다.

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이 작품은 건강 보조금 R01 CA140257-01의 국립 연구소의 국립 암 연구소에 의해 지원됩니다.

<html> 주 : 동의는 환자로부터 얻은 것입니다. 또한,이 연구는 인간의 복지에 대한 모든, 기관, 국가, 국제 가이드 라인을 준수하여 수행되었습니다. 1. 컴퓨터 준비 <ol><li> 에 노트북을 켜고 DVI2USB 캡처 카드에서 USB를 연결합니다. </li></ol> 2. 모니터를 준비 <ol><li> 내시경 오히려 컴퓨터보다이 화면에서 동영상을 볼 수 있도록 모니터하고 떠있을 위해 DVI 케이블을 연결합니다. </li><li> 서 모니터가 켜져 있고 DVI로 설정되어 있는지 확인합니다. </li><li> 올림푸스 시스템의 뒷면에 떠있을 연결 후 벽에 장착 된 대형 모니터에 이미지를 볼 수있는 올림푸스 시스템의 입력 버튼을 누릅니다. </li></ol> 3. 레이저 다이오드 드라이버 설정 <ol><li> 확인 레이저 다이오드 드라이버가 OFF입니다 확인하십시오. 영상이 수행되기 전에 그것은 단지 몇 분에 전원을 ON으로해야합니다. </li></ol>e_title &quot;&gt; 4. 전원 스트립에게 <ol><li> 전원 스트립에 노트북, 프로세서, 레이저 다이오드 드라이버, DVI 분배기 및 Epiphan의 캡처 카드에 연결합니다. </li></ol> 5. 노트북 바탕 화면에 MDE 와이드 필드를 실행 <ol><li> &#39;현재 폴더&#39;를 기록했다. </li><li> 환자 수와 글자를 눌러 &#39;환자 폴더 만들기&#39;를 입력합니다. </li></ol> 6. 모자를 준비하고 필터 <ol><li> 필터를 취급 할 때는 항상 필터에 기름 찌꺼기의 전송을 최소화하기 위해 장갑과 킴 와이프를 사용합니다. 거즈 나 알코올 면봉은 영상을 방해 할 수있는 섬유를 남겨 둘 수 있습니다. </li><li> 필터 캡을 규정 할 수있는 플랫폼을 만드는 테이블에 몇 킴 와이프를 놓습니다. 이 지역은 소독 절차를 수행하는 동안 위장에 쉽게 액세스 할 수 있어야합니다. </li><li> 필터와 모자를 놓고 절차를 수행하는 동안 사용하기 위해 주변 킴 와이프를 유지합니다. </li></ol> 7. 환자 준비 <ol><li> 사용에 동의 환자엔도 스위트 룸에 도착하기 전에 VFI와 proflavine 염료. </li><li> 위 내시경 검사 절차에 대한 위치 환자. </li><li> 멀티 스펙트럼 디지털 현미경 (MDM) 7을 사용하여 표준 백색광 영상을 진행합니다. </li></ol> 8. Proflavine를 삽입하고 스프레이 <ol><li> 백색광 영상으로 마무리 한 후, 삽입하고 그 조직을 통해 proflavine 염료를 스프레이. 1~5mm는 바렛 조직의 지역에 따라 충분합니다. 이 단계에서 proflavine 염료를 분사하여, (적어도 1 분) 충분한 시간은 VFI 전에 충분한 조직 흡수를 위해 제공됩니다. FDA (IND 102217)에서 조사 가능한 새로운 약 응용 프로그램에 적용됩니다 Proflavine는 곧 신청 후 세포 핵 내에서 집중 형광 조영제이다. 레이저 다이오드의 팬이 조직에 반사 된 빛이 전체 선의 morpholo을 평가하기 위하여 내시경을 가능하게 할 때 VFI 개별 세포 형태를 해결할 수는 없지만GY. </li></ol> 9. 레이저 다이오드를 켜고 <ol><li> 레이저 다이오드의 전원을 켭니다. 영상이 시작되기 전에이 적어도 2 분 작업을 수행합니다. </li></ol> 10. VFI에 내시경을 준비 <ol><li> 완전히 내시경을 철회. </li><li> 이전 내시경 처리에, 조수 장갑 두 쌍을 가지고 있는지 확인합니다. </li><li> 내시경은 위의 설명 된 킴 와이프 ​​플랫폼 옆에있는 조수 앞에 내시경을 보유하고 있습니다. </li><li> 킴 와이프로, 조수 내시경의 끝 부분을 청소합니다. 부드럽게 표면을 청소하고 또한 쉽게 처리하기위한 내시경의 측면을 따라 몇 센티미터를 청소해야합니다. </li><li> 청소 한 후, 장갑의 외부 쌍의 보조 처분이있다. </li><li> 보조 필터를 장착했다. 내시경에서의 보완 구멍에 필터의 짧은 원통형 돌기를 삽입합니다. 프로세스를 돕기 위해 수직 내시경 유지. </li><li> 여과 및 개최어 대신에, 필터 위에 뚜껑을 밀어 넣고 내시경의 팁 위에 아래로 누르십시오. 뚜껑은 안전하고 내시경을 세척 가장자리에 완전히에 밀어 있는지 확인합니다. 캡의 입술이 약간 내시경의 팁을 통해 확장해야합니다. 마지막으로, 반드시 필터 자리에 여전히하고 내시경의 끝으로 세척하십시오. </li></ol> 11. 내시경 식도로 돌아 가기 및 이미지 삽입 12. 식도의 내시경 제거 <ol><li> 킴 와이프를 사용하여주의 깊게 모자를 당기고 내시경을 필터링 할 수 있습니다. 뚜껑을 던져 버리고 다음 경우에 필터를 청소합니다. </li></ol> 13. 필터를 청소 <ol><li> 부드럽게 킴 와이프로 필터를 청소합니다. </li><li> Cydex와 작은 컵을 채우고 12 분 동안 필터 잠수함. 모든 몇 분은 필터를 뒤집으십시오. </li><li> 부드럽게 킴 와이프로 필터를 청소합니다. </li><li> 멸균이 시간을 필터 잠수함. 5 분 후, 분출 B를 사용ottle 가볍게 필터를 통해 멸균 물을 스프레이. </li><li> 몇 킴 와이프에 필터를 배치하고 건조 할 수 있습니다. </li><li> 킴 와이프 ​​사이에있는 저장 용기에 한 번 건조 장소. </li></ol>

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</ol>

공개 아무것도 없다.

양성 상피화 생은 고급 발육과 선암에서 구별 할 수 있기 때문에 표준 내시경 감시로, BE에있는 종양은 종종 8 놓친. 나은이 현재 피할 수없는 오류를 해결하기 위해 소화기를 활성화 할 도구로서 중요한 염색 강화 형광 이미징함으로써 조직 유형을 차별화 할 수있는 독특한 기능을 제공하는 조직의 선의 형태를 강조한다. 또한, 2.5 cm까지 시야를 제공하여, VFI는 의심스러운 병변이 더 유명하고, 효율적이고 체계적으로 전체 원위부 식도를 통해 패닝 내시경을 할 수 있습니다. 이 새로운 기술을 사용하려면 먼저 그 조직을 통해, proflavine, 국소 조영제 스프레이. 그리고, 내시경을 제거한 후 495 ㎚의 롱 패스 필터 안전하게 MDM 팁으로 캡핑 될 필요가있다. 마지막으로, 그 조직 근처에 내시경을 다시 삽입 한 다음 전환 후레이저 다이오드에 흰색 빛은 녹색 형광 조직의 선의 프레임 워크의 생체 내 이미징에서 제공합니다. <p c...

지난 40 년 동안 식도 선암 (EAC)의 빈도는 크게 1,2 증가했다; 아직 만기가 진단, 5 년 생존율은 20 % 미만 3이다. BE의 내시경 감시의 현재 표준은 EAC의 근간을 이루며, 세그먼트의 임의의 네 quandrant 집게 &#39;생검 백색광 내시경이다. 불행하게도,이 기술은 종종 표준 백색광 영상 4 차별화, 평면 미묘하고 어려울 수있는 종양이 골대를 벗어났습니다. 생체 내에서 세포의 기능을 강조하기 위해 공 초점 레이저 현미경을 사용하여 성공이되었지만, 병변은 여전히 인해보기 5의 감소 필드에 누락 될 수 있습니다. 더 촛점 microendoscopic 이미징 영역을 강조 할 수있는 &#39;다리&#39;기술을 갖는 것은 크게 도움이 될 것입니다. 따라서 타지하는 능력을 향상 향상된 레드 플래그 이미징 양상BE에있는 T와 조직 검사 초기 종양은 초기 치료 가능한 단계에서 EAC를 검출하는 수단이 될 것이며 더 효과적인 치료 이후에 개선 된 생존율을 초래할 수 있습니다. VFI는 선의 형태를 선택하고 생체 내 진단 6 개선의 희망에 원위부 식도 종양 (고급 발육 이상 및 암) 윤곽을 그리다, 외인성 국소 형광등 대비, proflavine와 고해상도 상피 영상을 결합하는 새로운 기술입니다. 곧 신청 후 세포 핵 내에서 집중 proflavine의 여기에, 형광 이미지는 내시경이 선의 형태를 시각화 할 수 있도록 공간 50 ~ 100 μM의 해상도와 2.5 cm까지 시야를 제공한다. 그 결과,이 방법은 oblitera이 종양과 BE에서, 연속, 같은 간격의 분비 및 전반적인 균일 한 형태를 가지고 고전 바렛 화생을 구별하는 소화기를 수선의 건축의 기. 여기에서 우리는 다중 분광 내시경이 새로운 기술의 프로토콜을 설명하고, 고급 발육 이상 및 암 양성 상피화 생의 형태 학적 변화를 묘사 한이 장치의 유용성을 입증하는 대표적인 결과를 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>Filter*</td><td>Schott North America, Inc., Duryea, Pennsylvania</td><td>적용되지 않음</td><td>495nm 장역 통과 필터</td></tr><tr><td>Halo Cap &ndash; 중간*</td><td>Barrx Medical</td><td>CP-002A</td><td></td></tr><tr><td>프로세서*</td><td>Pentax</td><td>EPK-i</td><td></td></tr><tr><td>다중 스펙트럼 디지털 현미경**</td><td>적용되지</td><td></td><td></td>않음</tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark</td><td>KimTech 과학</td><td>S-8115</td></tr><tr><td>Cidex</td><td>고급 살균 제품&nbsp;</td><td>CIDEX OPA 용액</td><td></td></tr><tr><td>프로플라빈 헤미설페이트(0.01% w/v)</td><td></td><td></td><td>FDA(IND 102,217)</td></tr><tr><td>레이저 다이오드*</td><td>Nichia Corporation</td><td>해당 없음</td><td>455nm</td></tr><tr><td>이미지 캡처*</td><td>Labview</td><td>해당</td><td></td>없음</tr><tr><td>스프레이 카테터</td><td>Olympus</td><td>해당</td><td></td> 없음</tr><tr><td colspan="4">*참고 자료 내 장비 세부 사항 6. **장비 참고 문헌 7의 세부 사항</td></tr></tbody></table>

생명 염색 강화 형광 이미징을 사용하여 바렛 식도에있는 신 생물의 진단

Diagnosis of Neoplasia in Barrett&#8217;s Esophagus using Vital-dye Enhanced Fluorescence Imaging

두 조직 유형이 평평하고 혼자 백색광 영상과 구별 할 수있는 생체 내 종양에서 바렛 식도 (BE)에 양성 상피화 생을 구별 할 수있는 능력은 어려운 남아있다. 그 결과, 선의 구조를 강조 양상은 원위 식도 양성 상피 세포에서 종양을 구별하는 것이 유용 할 것이다. VFI 양성 상피 세포에서 고 등급의 이형성증과 암을 묘사하는 외인성 국소 형광 조영제를 사용하는 새로운 기술입니다. 특히, 형광 이미지는 내시경이 선의 형태를 시각화 할 수 있도록 공간 50 ~ 100 μM의 해상도와 2.5 cm까지 시야를 제공한다. 여기에, 고전 바렛 상피화 생은 연속, 같은 간격의 분비 및 전반적인 균일 한 형태를 나타납니다; 대조적으로, 종양 조직은 선의 프레임 워크의 완전한 말살로 붐비는 나타납니다. 여기에 우리의 개요를 제공계측이 새로운 기술의 프로토콜을 열거합니다. VFI 의심스러운 조직의 선의 구조와 위장을 갖는 반면, 세포 이형성증이 양상으로 확인할 수 없습니다. 따라서, 하나는 형태 학적으로이 영상 기법을 통해 낮은 수준의 발육과 BE에서 바렛 화생을 구별 할 수 없습니다. 뷰의 큰 필드와 해상도의 저하를 트레이드 오프함으로써,이 촬상 시스템은 의심되는 병변을 표적으로하고 생검 빨간색 플래그 촬상 장치로서 적어도 사용될 수있다; 정확도 측정 유망 경우 아직, VFI는 식도 하부에있는 (고급 발육 이상 또는 암로 정의) 신 생물의 진단을위한 표준 영상 기술이 될 수있다.

그림 1B는 정상 편평 상피의 경계에 둘러싸인없이 발육과 고전 바렛 식도를 보여줍니다. 주변으로 있으며 파란색 화살표로 표시됩니다 아첨 편평 상피 조직을 시작으로, 둔한 형광의 균일 한 영역이없는 선의 구조로 존재한다. 녹색 화살표는 편평 상피 조직을 둘러싼 원형의 녹색 선을 나타냅니다. 이 개요는 내시경의 캡으로 인해 발생하는 이슈입니다. 중앙에 위치한 바렛 조직으로 이동, 선의 구조는 어두운 루멘을 둘러싼 녹색 형광으로 정의 할 수 있습니다. 약간의 분비가 연장되지만 분비의 폭이 유사하고 가장자리가 명확하게 정의되어, 인접한 동맥 사이에 약간의 왜곡이 있습니다. 마지막으로, 분비 및 루멘 균등없는 응집 또는 군집 선물로 이격되어있다. 그림 2b는 낮은 수준의 발육과 바렛 식도를 보여줍니다. 그것은이다현재 낮은 수준의 발육이 있지만, 문제는이 영상 기법을 통해 형태 학적 기준으로 시각화 할 수 없습니다 것을주의하는...

생명 염색 강화 형광 이미징 (VFI)은 선의 형태를 선택하고 원위 식도 종양 (고급 발육 이상 및 암)을 묘사하는 외인성 국소 형광 대비 높은 해상도 상피 영상을 결합하여 생체 기술의 소설이다.

The ability to differentiate benign metaplasia in Barrett&#8217;s Esophagus (BE) from neoplasia in vivo remains difficult as both tissue types can be flat ...

활성 염료 강화 형광 이미징. VFI는 원위부 식도의 선 형태를 강조하고 신생물을 묘사하기 위해 외인성 국소 형광 조영제를 사용하는 고해상도 상피 이미징으로 구성됩니다. 설치 시, 모니터와 DVI 분배기 사이에 디지털 비주얼 인터페이스 케이블을 연결하십시오.모니터를 DVI로 설정하려면 화면 아래의 입력 버튼을 DVI가 나타날 때까지 누르십시오. 레이저 다이오드는 은색 금속 상자 안에 있으며, 전원 스위치 또한 내부에 위치합니다. 외부에는 레이저 다이오드를 켜기 위해 전압을 조절하는 노브가 있으며, 손잡이를 전압 노브 쪽으로 당기십시오.VFI 검사를 수행하기 전, 레이저 다이오드가 켜졌음을 나타내는 황색등이 점등됩니다. 보조자가 내시경 끝에 필터와 캡을 고정할 수 있도록 멸균 구역을 설정하십시오. 킴와이프스(Kim wipes) 두 장을 서로 겹쳐서 놓으십시오.필터를 이 플랫폼 위에 올려놓을 수 있습니다. 또한, 캡을 사용할 수 있도록 준비하십시오. 환자가 내시경실에 들어오기 전에 고지된 동의서를 받아야 합니다.본 연구의 모든 환자로부터 고지된 동의를 받았으며, 본 연구는 인간 복지를 위한 모든 기관, 국가 및 국제 가이드라인을 준수하여 수행되었음을 알려드립니다. 표준 백색광 영상 촬영을 마친 후, 관심 조직 위에 프로플라빈(pro flavin) 염료를 분무하십시오. 일반적으로 프로플라빈을 분무할 때 1~5 cc만으로도 충분합니다.백색광 연구가 완료된 후 내시경을 제거하고 레이저를 켭니다. 잔해물과 점액을 충분히 제거하기 위해 Kim wipes로 팁을 닦으며, 내시경 팁의 모든 측면을 따라 수 센티미터까지 깨끗이 닦아냅니다. 세척 후에는 필터 오염을 방지하기 위해 겉장 장갑을 벗어 Kim wipes와 함께 폐기해야 합니다. 이제 내시경 시술자가 팁을 수직으로 유지하는 동안 조수가 필터를 장착할 수 있습니다.보조자가 필터의 원통형 돌출부를 사용하여 내시경 팁에 있는 소켓으로 안내하며 필터를 제자리에 고정하는 것을 확인하십시오. 보조자는 캡을 필터 위로 밀어 넣고 내시경 팁 위로 끝까지 눌러 고정합니다. 캡의 가장자리가 내시경과 완전히 밀착되도록 안전하게 완전히 밀어 넣었는지 확인하십시오.완료되면 캡의 가장자리가 내시경 팁 위로 약간 돌출되어야 합니다. 마지막으로 필터가 여전히 제자리에 있고 내시경 팁과 수평을 이루는지 확인하십시오. 레이저 다이오드를 켜면 조직에 녹색 형광이 나타나며, 관심 조직 위로 한 번 스캔합니

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연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

이 비디오에서는 위장관 종양 조직에서 얻은 절편의 탄성 염색을 보여줍니다. 이 염색 절차는 미세한 탄성 섬유를 시각화할 수 있게 하고 탄성 층을 넘어 종양 세포의 침입을 결정하는 데 도움이 됩니다.

슬라이드 절편의 탄성 섬유 염색: 위암 전이를 관찰하는 기법

바렛 식도의 분자 드라이버에 대한 개선 된 정보를 식별 할 필요가있다. 면역 형광 염색은 세포 형태에 세포 신호 전달의 효과를 이해하기위한 유용한 기술이다. 우리는 바렛 식도 세포의 치료 적 처치를 평가하기 위하여 면역 형광 염색법을 사용하기위한 간단한 효과적인 프로토콜을 제시한다.

바렛 식도 세포의 특성에 대한 면역 방법

근적외선 형광(NIRF) 영상은 수술 중 종양의 국소화 및 수술 마진 상태의 평가를 가능하게 하여 유방암 수술의 치료 결과를 개선할 수 있습니다. 형광 종양 시뮬레이션 내포물을 포함하는 조직 시뮬레이션 유방 팬텀을 사용하여 유방암 환자에서 NIRF 이미징의 잠재적인 임상 응용을 표준화 및 교육 목적으로 평가할 수 있습니다.

유방암 수술의 잠재적 인 근적외선 형광 이미징 응용 프로그램을 평가하는 팬텀을 조직 시뮬레이션

작은 동물 이미징 기술은 직렬 진단 시험 및 생체 내에서 치료 적 개입을 허용한다. 최근, 응용 프로그램의 범위가 크게 확대하고 현재 대장 종양 발생의 평가, 상처 치유 및 염증의 모니터링이 포함되어 있습니다. 이 프로토콜은 쥐 내시경 검사의 이러한 다양한 응용 가능성을 보여줍니다.

에 대한 쥐의 내시경 생체 발암 및 소장의 평가의 멀티 모달 이미징 상처 치유 및 염증

본 연구에서는 이전 내시경 생검을 통해 위 저등급 상피내 종양으로 진단된 환자를 체계적으로 평가하고, 내시경 점막하 박리술(ESD)로 병변을 완전히 절제하여 병리학적 진단을 도출하여 병리학적 악화 위험을 증가시킬 수 있는 요인을 분석하였다.

위 저등급 상피내 종양의 병리학적 에스컬레이션을 위한 위험 예측 모델 구축 및 평가

본 프로토콜은 종양 진행의 여러 단계를 나타내는 식도 오가노이드 모델의 확립 및 조직학적 분석을 설명합니다. 이 방법을 통해 연구자들은 정상 조직에서 암 조직으로 전환하는 동안 세포 형태, 공간 조직 및 분자 마커 발현 패턴의 변화를 연구할 수 있습니다.

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