Name: 비 침습 M-모드 초음파 심장 검진 법에 의한 마우스의 심장 박동의 자궁 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: 배우세요 마우스 태아 심박수를 자궁 내에서 비침습적으로 측정하는 M-모드 초음파 방법을. Mus musculus를 이용한 이 기술은 선천성 심장 질환 연구에 필수적인 생리학적 상태를 유지하며 정확한 심장 기능 평가를 가능하게 합니다.

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우리는 그림 1과 2의 사진 촬영을 위해 심 초음파 앤 Chamberland에서 훈련 마농 Laprise 감사합니다. 이 작품은 건강 연구 보조금 MOP 44,363의 캐나다 연구소와 캐나다 의자 950-216684에 의해 지원되었다.

이 프로토콜에 표시된 모든 절차는 IRCM 동물 보호위원회에 의해 승인되었습니다. 1. 초음파 시스템 및 역 준비 <ol><li> 초음파 영상 시스템을 시작하고, 제조업체의 지시 (그림 1)에 따라 scanhead뿐만 아니라 생리 컨트롤러 장치를 연결합니다. 심장 측정 프로그램 및 30 MHz의 변환기에 해당하는 scanhead을 선택합니다. </li><li> 탈 이온수로 scanhead의 노즈 피스를 입력합니다. 그들은 영상 해상도 방해로 공기 방울을 피하십시오. 이미징 플랫폼 근처의 홀더의 손잡이 사이드 (그림 1A)와 scanhead를 놓습니다. </li><li> 영상 플랫폼과 작업 영역을 소독. </li><li> 거품의 형성을 방지하고 37 ° C (그림 1B)에 해당 prewarming 용기 세트에 거꾸로 배치 완전히 초음파 젤의 병을 채우십시오. </li><li> 옥시의 검증 레벨세대와 이소 플루 란 마취의 튜브 시스템. ~ 8 배아와 함께 한 실험은 약 15 ~ 20 L의 산소를 사용합니다. </li><li> 안과 크림, 제모 크림과 영상 플랫폼 (그림 1B) 부근의 전극 젤의 병을 놓습니다. </li><li> 그 적외선 열 램프의 기능을 확인합니다. 트레이닝 동안, 열 레벨, 램프의 위치와 상수 체온과 심박을 유지하기 위하여 생쥐 램프의 거리를 설정한다. 참고 : 시스템 및 재료의 적절한 준비가 중요합니다. 긴 절차는 한 마취는 심장 박동, 혈압 및 혈액 산소 수준을 낮추는 방법으로 심장 기능을 우울하게 태아의 생리 학적 및 혈역학 적 특성에 영향을 미칠 수 있습니다. (C57BL / 6 평균 산자 수) ~ 8 태아에 대한 처리 시간은 약 1 시간이어야한다. 다른 마우스 변종 가능성이 큰 여성의 크기로, 태아의 높은 숫자를 제공 할 수 있습니다. 교육은 플라스틱 가공을 최적화하는 것이 필수적입니다NG 시간. </li></ol> 2. 마우스 준비 <ol><li> 이 응답하지 않는 될 때까지 산소의 2 % 이소 플루 란 (isoflurane)의 연속 공급 장치 (200 ㎖ / 분)와 챔버에서 임신 여성을 마취. </li><li> 산소 1.5 % 이소 플루 란 (200 ㎖ / 분)의 연속 흡입을위한 튜브를 조정하고, 테이프 (그림 2A)로 흡입 튜브를 고정, 앙와위에서 이미징 플랫폼에 마우스를 놓습니다. 충분한 마취 마우스의 편안한 자세와 꼬리와 발가락 핀치에 대한 응답의 부재로 절차를 수행하는 동안 확인해야한다. </li><li> 만 심전도 용 (오른쪽 다리도 리드 II 위치라는 왼쪽 뒷다리, 앞) 왼쪽 상단과 오른쪽 하단 전극 패드에두고 전극 젤. 리드 II 위치는 심장 박동을 결정하는 복잡한 더 나은 정의 똑바로 긍정적 인 P 파 및 QRS을 제공합니다. 테이프 (그림 2A)를 사용하여 각 패드에 네 발을 고정합니다. 눈의 건조를 방지하기 위해, 1 방울의 적용각각의 눈에 안과 연고. </li><li> 머리 깎기와 방광에 가슴에서 복부를 면도. 그런 다음 2 분 동안 제모 크림을 적용하고 신중하게 남아있는 머리카락을 제거하기 위해 거즈 및 / 또는 면봉으로 닦아냅니다. 젖꼭지를 잘라하지 않도록주의하십시오. </li><li> 몸의 온도를 모니터링하기 위해 여성의 직장에 전극 젤 prelubricated 온도계를 삽입 (플랫폼 위에 배치 적외선 가열 램프를 조정하여 37 ± 0.5 ° C로 유지해야한다). 심박수는 450 ± 50 비트 / 분 (BPM)해야한다. 온도와 심박수 모두는 생리 컨트롤러 장치 (그림 1B)에 표시됩니다. 참고 : 긴 마취, 탈모 및 초음파 젤 (데워진하지만) 여성의 심장 박동에 영향을 미칠 수있는 저체온증으로 이어질 수 있습니다. 체온이 36.5 ° C 이하로 떨어질 경우, 절차를 중단하고 온도 및 심박수를 조정하는 가열 램프의 위치를​​ 수정한다. BEF 몇 분을 기다립니다다시 진행 광석. </li></ol> 3. 배아 확인 <ol><li> 부드럽게 배아를 찾을 수 벌거 벗은 복부를 아래로 누릅니다. 천천히 가볍게 복부 표면에서 단일 층에서 배아의 대부분을 가지고 그들을 밖으로 확산. 각 자궁 혼, 주머니가 선형 적으로 서로 연결되어있다. 확산 할 때이 순서를 존중하려고합니다. </li><li> 마크 자신의 전방 / 후방 및 지느러미 / 복부 방향과 영구 마커와 여성의 벌거 벗은 복부의 각 배아. 방향을 아는 것은 프로브와 심장의 위치를​​ 용이하게합니다. (; 그림 2B 각각 1, 2, 3, ..., 1 &#39;, 2&#39;, 3 &#39;...) 자궁 경부에서 시작 번호 오른쪽에있는 배아 왼쪽 뿔. 참고 : (I) 과도한 힘을 가진 배아를 확산하지 마십시오. (그림 2C)을 추적하기 위해 종이에 자신의 위치를 스케치합니다. (II) C57BL / 6 여성은 리터당 8 ~ 태아있다. 그러나 각 쓰레기에 0-2 배아는 L입니다자신의 이미지가 불가능하고, 다른 사람 아래에 ocated. 분석에서 이러한 배아를 제외하고 필요한 경우 더 많은 새끼를 평가합니다. </li></ol> 4. 심박수 측정 <ol><li> 벌거 벗은 복부에 데워진 초음파 젤을 소량 넣고 골고루 퍼졌다. 거품 형성을 피할 것. 이미지에 특정 지역에서 겔 다량 (~ 5 ㎖)를 첨가. </li><li> 두꺼운 겔 층 (10mm)과 접촉 프로브를 잡고 심장 박동을 찾고있는 동안 서서히 피부쪽으로 프로브를 이동합니다. 심장 박동이 화면에 가시화되면, 촬상면 (도 2D)에 자신의 최대 크기 모두 심실을 갖도록 프로브의 각도를 조정한다. </li><li> 영상을 획득 시작합니다. 팔뚝 역에 쉬고,보기 화면 (그림 2D)에서 라이브 영상을 얻기 위해 초음파 젤에 변환기를 배치합니다. 상단의 트랜스 듀서의 능선을 유지하고 scanhead의 취향을 클릭(이미지의 왼쪽 상단 모서리에있는) 해당 마커가 화면에 시각화 손 운동과 지역의 조정을 할 수 있습니다. </li><li> 자궁 경부에서 시작 화면의 심장 박동을 시각화 (각각 오른쪽 또는 왼쪽 자궁 경적의 1 또는 1 &#39;)으로 표시된 가장 가까운 배아로 이동합니다. 초점 심도가 고정되어 있기 때문에, 부드럽게 원하는 이미지 평면을 얻기 위해 젤과의 접촉을 잃지 않고 / 아래 및 옆으로 프로브를 이동합니다. </li><li> 더 나은 데이터 수집을위한 초점 영역을 나타내는 황색 점선으로 표시된 영역 내 화면의 중심에 심장 박동을 위치. </li><li> 라이브 녹음을 획득. 스카우트의 이미지를 획득하고 (그림 3A)를 기록 다시 시작합니다. 안정적인 기록 10 초 최소 취득하면, 녹음을 중지하고 저장합니다. </li><li> 다음 배아를 진행합니다. </li><li> 모든 배아는 기록의 목록을 보려면 키보드의 키를 눌러 &quot;찾아보기&quot;를 분석하면. 각 기록 M 모드 TRACI을 재생NG와 평균 심장 박동수 (도 3b)을 구하는 인접한 피크 (시간 / 유동주기) 사이의 간격의 다수의 측정 (추적 당 적어도 5)를 수행한다. 참고 : 일부 프로토콜 흔들림 scanhead의 고정 스탠드를 사용하는 것이 좋습니다. 그러나, 횡 배아의 관찰 어렵게 분석의 각도를 억제. 스탠드 각 배아 조정되어야 것으로도, 분석 속도가 느려. 역에 팔을 정착하면서 scanhead을 잡고 효율적으로 흔들림 최소화 할 수 있습니다. 5-10 임신 한 여성과 훈련의 결과를 최적화하는 것이 좋습니다. </li></ol> 5. 유전자형 <ol><li> 깨끗한 수술 가위 집게를 사용하여, 길이 방향으로 피부와 복부의 근육 층을 새겨. 각 자궁 경적의 주머니를 찾아 번호를 일치합니다. 위에서 사용 된 순서로 배아를 노출하는 난황을 열 컷. 선형 배열에없는 경우, 조각에 태아 위치의 스케치피부에 자국이 더 이상 볼 수 있습니다 일단 종이 필수적 일 것이다. </li><li> 게놈 DNA는 매우 효율적으로 배아의 꼬리에서 추출한으로 유전자형에 꼬리 만 ~ 4mm를 잘라. 참고 : (I) 수술은 영상 실에서 별도의 위치에서 수행해야 할 수 있습니다. 그러나, 마우스를 이동 번호 배아의 트랙을 유지하기 위하여 이미징 플랫폼에서 수술을하지 않는 것이 중요하다. 수술을 최적화하는 동물 시설 관리자에게 문의하십시오. 태아는 촬영 후 유전자형에 제거 할 때 (II) 임신 한 여성이 빠르게 인한 혈액 손실에 죽는다. 우리의 동물 관리위원회에서 권장하는대로, 꼬리 절단 한 후, 태아는 저체온증에 의해 마취 얼음에 3 분을 배치 한 다음 가위로 목을 베. </li></ol>

<ol><li>Hoffman, J. I., Kaplan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+incidence+of+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">The incidence of congenital heart disease.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 39, 1890-1900 (2002).</li>
<li>Miller, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+brain+development+in+newborns+with+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Abnormal brain development in newborns with congenital heart disease.</a> N. Engl. J. Med. 357, 1928-1938 (2007).</li>
<li>Bruneau, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+developmental+genetics+of+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The developmental genetics of congenital heart disease.</a> Nature. 451, 943-948 (2008).</li>
<li>Wessels, A., Sedmera, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+anatomy+of+the+heart%3A+a+tale+of+mice+and%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Developmental anatomy of the heart: a tale of mice and.</a> 15, 165-176 (2003).</li>
<li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ENU+induced+mutations+causing+congenital+cardiovascular+anomalies%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">ENU induced mutations causing congenital cardiovascular anomalies.</a> Development. 131, 6211-6223 (2004).</li>
<li>Seidah, N. G., Prat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+and+therapeutic+targeting+of+the+proprotein+convertases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">The biology and therapeutic targeting of the proprotein convertases.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 11, 367-383 (2012).</li>
<li>Roebroek, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+ventral+closure+and+axial+rotation+in+embryos+lacking+the+proprotein+convertase+Furin%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Failure of ventral closure and axial rotation in embryos lacking the proprotein convertase Furin.</a> Development. 125, 4863-4876 (1998).</li>
<li>Roebroek, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+redundancy+of+the+proprotein+convertase+furin+in+mouse+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Limited redundancy of the proprotein convertase furin in mouse liver.</a> J. Biol. Chem. 279, 53442-53450 (2004).</li>
<li>Kisanuki, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tie2-Cre+transgenic+mice%3A+a+new+model+for+endothelial+cell-lineage+analysis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Tie2-Cre transgenic mice: a new model for endothelial cell-lineage analysis in vivo.</a> Dev. Biol. 230, 230-242 (2001).</li>
<li>Kim, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+endothelial+furin+leads+to+cardiac+malformation+and+early+postnatal+death%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Loss of endothelial furin leads to cardiac malformation and early postnatal death.</a> Mol. Cell Biol. 32, 3382-3391 (2012).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

M-모드 초음파 심장 검진 법은 마우스 배아의 자궁 내 심장 요금에 측정 할 수있는 효과적이고 간단한 방법입니다. 시판 트랜스 듀서는 작은 고동 치는 마음을 시각화하기에 충분한 해상도를 제공합니다. 따라서, 그런 펄스 측정과 같은 다른 방법에 비해, 매우 정확한 심박수 측정을 허용하고, 고해상도 비디오 현미경을 대체 할 수있다. 그러나, 현재의 도구는 배아의 각을 시각화하는 지루한 과정을 의미, 모든 배아의 동시 분석을 허용하지 않습니다. 또한,보기의 비교적 좁은 필드와 필드 (2D 이미지)의 깊이의 부재는 숙련 된 손에 의해 달성 수동 조정이 필요합니다. 실제로, 적절한 교육이 크게이 방법의 효율성을 극대화 할 수 있습니다. 배아 심장 박동수 (E18.5)의 생체 측정에서 이전의 방법과 다른, 그것은 수행과 같은 비 침습적 라이브 영상으로 심장 기능의 생리 학적 평가를 제공합니다개복 수술을 필요로하지. 대신, 임신 한 여성의 복부에 태아의 위...

CHD는 출생 1에서 사망의 가장 흔한 감염성 원인이다. 여러 수술은 종종 삶의 질 1을 손상 남아있을 수 있습니다 주제의 구조적 결함을 해결하기 위해 필요합니다. CHD를 가진 아이들은 자주 개발 2,3에 자궁의 결과에 중요한 나타내는, 그들은 수술을하지 않은 경우에도 신경 장애를 개발한다. 이러한 임신 중 바이러스 나 화학 물질 (알코올)에 노출, 원인 CHD로 모두 유전과 환경 요인. 유전 적 기여를 공부하는 것은 초기 단계에서 아직이지만, 빠르게 성장. 이 참여자를 식별하고 간단하고 강력한 도구와 돌연변이 생쥐를 표현형, 심장 개발에 자신의 역할을 이해하는 것은 매우 도움이 될 것입니다. 마우스는 실제로 CHD을 연구하는 선택의 동물 모델이며, 인간의 대부분의 경우는 마우스 4,5에서 재현 할 수 있습니다. 결과적으로, 태아의 심장 마우스 표현형은 INC되고있다reasingly 중요한 인간의 관상 동맥 질환의 원인을 조사하고 적절한 도구가 필요합니다. 고정 표본에 대한 조직 학적 연구는 매우 중요한 있지만, 살아있는 동물의 실시간 영상은 심장의 생리를 이해하는 것이 중요합니다. 비디오 현미경 라이브 영상을 제공합니다. 그러나, 따라서 자신의 생리 학적 및 혈역학 적 상태를 손상, 배아를 노출하는 개복 수술이 필요합니다. 최근 심 초음파 검사는 병원에서뿐만 아니라 생쥐의 심장 평가를위한 표준 영상 기술이되고있다. 마우스 태아 심장 초음파 검사는 표준 임상 초음파 시스템뿐 아니라 초고 주파수 초음파 시스템을 이용하여 수행된다. 후자는 30 MHz 또는 이차원 화상을 생성하고, 초기 배아 단계의 평가를 허용 고주파 트랜스 듀서를 제공한다. 이 트랜스 듀서는, 그러나, 적절한 영상 평면을 획득하고 근본적인 심장 PA를 결정하기에 충분하다 상대적으로 가난한 침투 깊이 (~ 13mm)을 가지고심장 박동, 심장 확장 및 수축기 및 격벽 및 벽 두께에 좌우 심실 내경, 개복술을 수행하지 않고 같은 rameters. 우리의 연구는 배아 일 E18.5에서 마우스 태아의 심장 박동수를 평가하기 위해 매우 높은 주파수의 초음파 시스템을 사용했습니다. 우리는 12.7 mm의 초점 거리를 가진 태아의 크기, 주어진 이상적인 20mm × 20 ​​mm의 필드보기를 제공하는 30 MHz의 변환기를 선택했다. 그러나, 높은 주파수 변환기는 초기 발달 단계를 분석하기 위해 선택 될 수있다. 선택한 M-모드는 1000 프레임 / 초 높은 시간 해상도에 모션 덕분에 조직의 시각화를 할 수 있습니다. 전체 절차는 간단하고 태아의 생리 학적 및 혈역학 적 상태의 교란을 방지하기 위해 가능한 한 빨리 수행되어야한다. 약 8 배아의 분석은 약 1 시간이 필요합니다.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>제약 파트너, 캐나다 Inc.</td><td>CP0406v2</td><td>1-클로로-2,2,2-트리플루오로에틸 디플루오로메틸 에테르</td></tr><tr><td>초음파 겔</td><td>Parker Laboratories Inc.</td><td>Aquasonic 투명</td><td></td></tr><tr><td>전극 젤</td><td>Parker Laboratories Inc.</td><td>Spectra 360</td><td></td></tr><tr><td>안과용 젤</td><td>Novartis</td><td>티어 젤</td><td></td></tr><tr><td>탈모 크림</td><td>Church Dwight Co., Inc.</td><td>Nair</td><td></td></tr><tr><td>이발기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>거즈/면 스왑</td><td>Q-팁</td><td></td><td></td></tr><tr><td>영구 마커</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>고해상도 생체 초음파 이미징 시스템</td><td>Visual Sonics</td><td>Vevo770</td><td></td></tr><tr><td>30MHz 변환기</td><td>Visual Sonics</td><td>RMV707B</td><td></td></tr><tr><td>이미징 플랫폼 및 생리학 컨트롤러 유닛</td><td>Visual Sonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마취 시스템</td><td>Cyprane North America Inc.</td><td></td><td></td>312462</tr><tr><td>적외선 난방 램프</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

비 침습 m-모드 초음파 심장 검진 법에 의한 마우스의 심장 박동의 자궁 측정

In utero Measurement of Heart Rate in Mouse by Noninvasive M-mode Echocardiography

선천성 심장 질환 (CHD)의 출생에서 사망의 가장 흔한 감염성 원인이다. CHD의 발생 빈도는 4 ~ 50 / 1, 000의 출생 (질병 및 상해 지역 추정, 세계 보건기구, 2004)까지입니다. 종종 삶의 질을 손상 수술은 관상 동맥 질환의 원인을 발견의 중요성을 우리에게 상기시켜, 심장 결함을 해결하는 데 필요한. 돌연변이 마우스 모델과 라이브 영상 기술이 질병의 원인을 연구하는 중요한 도구가되었다. 고급 방법은 태아의 비정상적인 마음의 라이브 영상을 할 수 있지만, 후자의 생리 학적 및 혈역학 적 상태는 종종 인해 수술 및 / 또는 긴 절차에 손상됩니다. 비 침습 초음파 영상은, 그러나, 수술함으로써 그들의 생리 기능을 유지, 배아를 노출하지 않고 사용할 수있다. 여기서, 우리는 자궁에서 E18.5에서 태아의 심장 박동을 평가하기 위해 간단한 M-모드 초음파를 사용합니다. 비정상적인 심장 박동의 검출은 참으로 좋은 인디입니다따라서 심장의 기능 장애의 산 및 심장 마비로 이어질 수 있습니다 발달 결함의 식별의 첫 번째 단계를 구성한다.

위의 방법은 자궁에서 E18.5에서 마우스 태아의 심장 박동수에 내피 세포에 존재 세린 프로테아제 furin의 부재의 영향을 평가하기 위해 사용되었다. Furin 기본 잔류 후 proprotein의의 convertases (PCS) 그 베기 단백질 전구체의 가족에 속한다. Furin와 그 기판은 분비 단백질 및 단리는 골지체, 엔도 좀에서 또는 세포 표면에서 발생할 수있다. furin의 핵심 기판 TGFB 및 심장 개발에 중요한 역할을 같은 뼈 형태 형성 단백질 (BMP에) 등 TGFB 같은 요인을 포함한다. PC의 가족의 다른 구성원은 체외 절단 (6)에 의해 furin의 전형적인 기판을 활성화 할 수 있습니다. 개발하는 동안 furin의 키와 고유 한 역할은 배아 일 11 7에서 furin 결핍 된 배아의 조기 사망에 의해 입증된다. furin 결핍 배아에 의해 전시 된 결함의 대부분의 중요한 기능을 ...

매우 높은 주파수의 초음파는 작은 동물의 심장 이상을 검사 할 수있는 강력한 라이브 이미징 도구입니다. 그 noninvasiveness는 태아의 생리 학적 상태를 유지 할 수 있습니다. 여기서, 우리는 자궁에서 E18.5에서 태아의 심장 박동수를 측정하는 M-모드 초음파의 사용을 보여줍니다.

비 침습 M-모드 초음파 심장 검진 법에 의한 마우스의 심장 박동의 자궁 측정

Congenital heart disease (CHD) is the most frequent noninfectious cause of death at birth. The incidence of CHD ranges from 4 to 50/1,000 births (Disease ...

본 절차의 전반적인 목적은 간단한 M-모드 초음파를 사용하여 E 18.5 단계의 생쥐 배아의 자궁 내 심박수를 측정하는 것입니다. 이를 위해 먼저 임신한 암컷을 지속적인 마취 상태에서 플랫폼 위에 안정적으로 배치합니다. 그 다음, 암컷 복부의 표피를 따라 배아의 위치를 확인합니다.세 번째 단계는 30 megahertz 트랜스듀서를 사용하여 각 배아의 심박수를 측정하는 것입니다. 그 다음, 유전자형 분석을 위해 배아의 꼬리를 수집합니다. 최종적으로, 심장 주기당 소요되는 시간을 milliseconds 단위로 측정함으로써 각 배아의 심박수가 자궁 내에서 어떻게 결정되는지 확인할 수 있습니다.비디오 현미경과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 전문가와 비전문가 모두를 위해 설계된 간단한 방법이며, 매우 정확한 심박수 측정이 가능하다는 점입니다. 시스템과 재료의 적절한 준비가 매우 중요하며, 절차가 지나치게 길어지면 태아의 생리학적 및 혈역학적 특성에 영향을 줄 수 있습니다. 초음파 영상 시스템을 시작하십시오.30 megahertz 트랜스듀서에 해당하는 스캔 헤드를 연결하고, 컨트롤러 유닛의 생리학 컨트롤러 유닛을 연결합니다. 심장 측정 프로그램을 선택하십시오. 다음으로, 스캔 헤드의 노즈피스를 이온수(ionized water)로 채웁니다.기포는 영상 해상도를 저하시키므로 생기지 않도록 주의하십시오. 소독된 작업 구역 내 영상 플랫폼 근처의 홀더에 스캔 헤드의 손잡이 부분이 위로 향하도록 놓으십시오. 초음파 젤 병을 완전히 채우되, 큰 기포가 생기지 않도록 주의하십시오.병을 37°C로 설정된 예열 용기에 거꾸로 세워 놓습니다. 마취용 튜빙 시스템의 산소 및 iso fluorine 농도를 확인합니다. 약 8개의 배아를 사용하는 한 번의 실험에는 15~20L의 산소가 소모되며, 수행 시간은 1시간을 초과하지 않아야 합니다.안과용 밤, 제모 크림, 전극 젤 병을 이미징 플랫폼 근처에 배치하십시오. 적외선 열램프가 작동하는지 확인하십시오. 램프 아래에 놓인 마우스가 체온과 일정한 심박수를 유지할 수 있도록 적절한 거리와 강도로 설정해야 합니다.2% isoflurane과 산소가 지속적으로 공급되는 챔버에서 임신한 암컷 마우스가 반응이 없을 때까지 마취시킵니다. 마우스를 영상 촬영 플랫폼 위에 앙와위로 놓습니다. 1.5% isoflurane과 산소를 지속적으로 흡입할 수 있도록 튜브를 조절하고, 흡입 튜브를 테

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

Transthoracic echocardiography는 생쥐에서 심장 기능의 평가에 대한 비침 투 방법을 제공합니다. 초음파 및 도플러 영상 modalities의 조합이 심장과 함께 심장 수축기 및 diastolic 성능 평가를 제공 intracardiac 혈액 흐름의 차원 측정을 얻을하는 데 사용할 수 있습니다.

마우스에 Transthoracic Echocardiography

이 동영상은 anesthetized 마우스 echocardiography을 수행하는 레일 마운트 고주파 초음파 프로브의 사용을 보여줍니다. 방법은 컬러 도플러, 스트레인 분석뿐만 아니라 일반 목표 대비 이미징과 같은 새로운,보다 강력한 도구 이외에도 심장 기능을 모두 종래의 2 차원 및 M 모드 측정을 설명합니다.

Murine Echocardiography 및 초음파 이미징

태아 및 신생아 생쥐의 측정 왼쪽 심실 압력 (LV)이 설명되어 있습니다. 압력은 초음파지도하에 LV로 유체 가득한 변환기에 연결된 바늘을 삽입하여 측정됩니다. 케어는 실험 프로토콜 동안 정상적인 심장 기능을 유지하기 위해 이동해야합니다.

늦은 배아 및 신생아 쥐의 측정 왼쪽 심실 압력

심장 개발에 영향을 미치는 유전자 변경을 공부할 때 태아 및 perinatal 죽음은 일반적인 기능입니다. 고주파 초음파 이미징은 2-D 해상도를 개선하고 조기 심장 개발에 우수한 정보를 제공 할 수 있으며 죽기 전에 심장 구조와 기능에 미치는 영향을 감지 할 수있는 이상적인 방법입니다.

손쥐 태아 Echocardiography

이 비디오는 실험실 마우스에서 심장 초음파를 수행하는 프로토콜에 대해 설명합니다.

마우스 심초음파: 심장 형태를 평가하기 위한 비침습적 기법

여기서 우리는 생활에 초음파 미세 기포 조영제, 고립 늦은 임신 단계 쥐의 배아를 주입하는 프로토콜을 제시한다. 이 방법은 관류의 매개 변수 및 조영 증강 고주파 초음파 영상을 이용한 혈관 내 배아 분자 마커의 연구를 가능하게한다.

고주파 초음파를 사용하여 마우스 태아에 대비 이미징

태아 마우스의 높은 주파수 초음파 이미징 영상 해상도 개선 하 고 심장 개발 및 구조적 결함의 정확한 비-침략 적 특성을 제공할 수 있습니다. 여기에 설명 된 프로토콜은 실시간 태아 쥐 심장 초음파에서 vivo에서수행 하도록 설계 되었습니다.

태아 마우스 심장 혈관 이미징 높은 주파수 초음파 (30/45 m h Z) 시스템을 사용 하 여

여기서 우리는 마우스에서 정점 4 챔버 뷰를 얻기 위한 두 위치를 설명하고 비교한다. 이러한 위치는 우심실 기능의 정량화를 가능하게 하고, 비교 가능한 결과를 제공하며, 상호 교환적으로 사용될 수 있습니다.

마우스의 우심실 확장기 매개변수의 심초음파 측정

여기서, 우리는 마취제의 사용을 필요로하지 않는 초기 산후 마우스에 최적화 된 비침습적 전기 장기 (ECG) 프로토콜을 제시한다.

주산기 마우스의 비침습적 전기 검사

본 프로토콜은 7일령 신생아 마우스에서 좌심실 형태, 기능, 및 관상동맥 혈류의 심초음파학적 평가를 기술한다.

신생아 마우스의 좌심실 구조, 기능 및 관상 동맥 흐름의 심 초음파 특성

배우세요 마우스 태아 심박수를 자궁 내에서 비침습적으로 측정하는 M-모드 초음파 방법을. Mus musculus를 이용한 이 기술은 선천성 심장 질환 연구에 필수적인 생리학적 상태를 유지하며 정확한 심장 기능 평가를 가능하게 합니다.

비 침습 M-모드 초음파 심장 검진 법에 의한 마우스의 심장 박동의 자궁 측정

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