2013년 11월 22일
매우 높은 주파수의 초음파는 작은 동물의 심장 이상을 검사 할 수있는 강력한 라이브 이미징 도구입니다. 그 noninvasiveness는 태아의 생리 학적 상태를 유지 할 수 있습니다. 여기서, 우리는 자궁에서 E18.5에서 태아의 심장 박동수를 측정하는 M-모드 초음파의 사용을 보여줍니다.
이 절차의 전반적인 목표는 간단한 M 모드 초음파를 사용하여 E 18.5에서 자궁 내 마우스 배아의 심박수를 측정하는 것입니다. 이것은 먼저 지속적인 마취와 함께 임산부를 플랫폼에 안전하게 눕힘으로써 달성됩니다. 둘째, 배아의 위치는 암컷의 복부 표피를 따라 확인됩니다.
세 번째 단계는 30메가헤르츠 트랜스듀서를 사용하여 각 배아의 심박수를 측정하는 것입니다. 그런 다음 유전형 분석을 위해 배아 꼬리를 수집합니다. 궁극적으로, 결과는 심장 주기당 소요 시간을 밀리초 단위로 측정하여 각 배아의 심박수가 자궁에서 어떻게 결정되는지 보여줄 수 있습니다.
비디오 현미경 검사와 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 전문가와 비전문가 모두를 위해 설계된 간단한 방법이며 매우 정확한 심박수 측정을 제공한다는 것입니다. 시스템 및 재료의 적절한 준비가 중요하며 지나치게 긴 절차는 태아의 생리학적 및 혈역학적 특성에 영향을 미칠 수 있습니다. 초음파 이미징 시스템을 시작합니다.
30MHz 변환기에 해당하는 스캔 헤드를 연결하고 컨트롤러 장치의 생리학 컨트롤러 장치를 연결합니다. 심장 측정 프로그램을 선택합니다. 다음으로, 스캔 헤드의 코 부분에 이온수를 채웁니다.
기포는 이미징 해상도를 방해하므로 피하십시오. 소독된 작업 영역의 이미징 플랫폼 근처 홀더에 핸들 사이트가 위로 향하도록 스캔 헤드를 놓고 초음파 젤 병을 완전히 채웁니다. 큰 기포를 형성하지 마십시오.
섭씨 37도로 설정된 예열 용기에 병을 거꾸로 놓습니다. 마취를 위해 튜빙 시스템의 산소 및 iso 불소 수준을 확인합니다. 약 8개의 배아를 대상으로 한 실험은 15-20리터의 산소를 사용하며, 수행하는 데 한 시간 이상 걸리지 않는다.
안과용 연고, 제모 크림, 전극 젤 병을 이미징 플랫폼 근처에 놓습니다. 적외선 열 lamp 작동 중입니다. 그 아래에 놓인 쥐가 체온과 일정한 심박수를 유지할 수 있도록 정확한 거리와 강도로 설정해야 합니다.
임산부가 무반응이 될 때까지 2%의 isof, 불소 및 산소를 지속적으로 공급하는 챔버에서 임신한 여성을 마취합니다. 이미징 플랫폼의 마우스를 누운 자세로 놓습니다. 1.5% iso 불소와 산소를 지속적으로 흡입할 수 있도록 튜브를 조정하고 흡입 튜브를 테이프로 고정합니다.
시술 중에 마우스의 편안한 자세와 꼬리와 발가락 꼬집음에 대한 반응이 없는지 여부에 따라 충분한 마취를 확인해야 합니다. 전극 젤을 오른쪽 네 다리와 왼쪽 뒷다리의 왼쪽 상단과 오른쪽 하단 전극 패드에만 놓습니다. 심전도 검사의 경우 눈의 건조를 방지하기 위해 테이프를 사용하여 4개의 발을 각 패드에 고정합니다.
안과용 밤을 각 눈에 한 방울 떨어뜨립니다. 그런 다음 이발기로 가슴에서 방광까지 복부를 면도합니다. 젖꼭지를 자르지 않도록 주의한 다음 제모 크림을 2분 동안 바르고 거즈로 조심스럽게 닦아내어 남아 있는 털을 제거합니다.
마지막으로, 전극 젤로 미리 윤활 된 온도계를 여성의 직장에 삽입합니다. 적외선 열을 조정하여 체온과 심박수를 유지하십시오.amp. 체온이 섭씨 36.5도 이하로 떨어지면 중지하고 램프를 조정하고 몇 분 정도 기다렸다가 계속 진행하십시오.
이를 위해서는 모든 기구를 준비한 후 인내심이 필요하며, 배아를 천천히 그리고 가볍게 찾기 위해 벌거벗은 복부를 부드럽게 누릅니다. 대부분의 배아가 각 자궁 뿔의 복부 표면 아래 단일 층에 있도록 펼치면 자루가 선형으로 연결됩니다. 퍼뜨릴 때 이 순서를 준수하십시오.
일부 균주에서는 몇 개의 배아가 다른 배아 아래에 위치합니다. 이러한 배아를 분석에서 제외합니다. 여성의 벌거벗은 복부에 있는 각 배아를 전방, 후방, 등쪽 배쪽 방향이 표시된 영구 마커로 표시합니다.
자궁 경부에서 시작하여 오른쪽 및 왼쪽 뿔에 있는 배아에 번호를 매깁니다. 그런 다음 종이에 위치를 스케치하여 추적하십시오. 소량의 예열 초음파 젤을 벌거벗은 복부에 놓고 골고루 펴 바릅니다.
거품 형성을 피하십시오. 특정 부위에 약 5 밀리리터의 젤을 첨가하여 장시간 마취, 탈모 및 초음파 젤을 이미지화합니다. 비록 예온은 저체온증으로 이어질 수 있으며 결과적으로 여성의 체온에 영향을 미칠 수 있습니다.
체온이 섭씨 36.5도 이하로 떨어지거나 심박수가 분당 400회 미만으로 떨어지면 시술 중 언제든지 중지하고 가열 램프를 더 가까이 이동한 다음 활력 징후가 다시 조정될 때까지 몇 분 동안 기다리십시오. 프로브를 두꺼운 젤 층과 접촉시키고 박동하는 심장을 찾으면서 프로브를 피부 쪽으로 점차적으로 움직입니다. 그런 다음 이미징 평면에서 양쪽 심실이 가장 큰 크기가 되도록 프로브의 각도를 조정합니다.
팔뚝을 스테이션에 올려 놓고 이미지를 획득하기 시작합니다. 트랜스듀서를 초음파 젤에 올려 놓고 view잉 스크린. 트랜스듀서의 융기가 위쪽을 향하도록 유지하고 스킨 헤드 방향 마커를 클릭합니다.
자궁경부를 시작하여, 가장 가까운 배아로 이동하고, 초점 영역의 화면 중앙에서 박동하는 심장을 시각화합니다. 프로브를 젤과의 접촉을 잃지 않고 위아래로, 그리고 옆으로 부드럽게 움직입니다. 원하는 이미지 평면을 얻으려면 라이브 녹음을 획득합니다.
스카우트 이미지를 얻고 다음 배아로 진행하기 전에 최소 5초 동안 기록을 재개합니다. 모든 배아가 분석되면 키보드에서 찾아보기를 누릅니다. 에 view 기록 목록, 기록된 각 M 모드 트레이싱을 재생하고 최소 6개의 인접한 피크 사이의 간격을 측정하여 평균 심박수를 얻습니다.
마우스를 움직이지 말고 이미징 플랫폼에서 수술 절차를 수행하여 깨끗한 수술 용 가위와 집게를 사용하여 세로로 크기, 복부의 피부 및 근육층을 추적하십시오. 각 자궁 뿔에서 자루를 찾아 숫자를 일치시킵니다. 참나무 자루를 잘라 위에서 사용한 순서대로 배아를 드러냅니다.
선형 배열이 아닌 경우, 각 꼬리를 약 4mm씩 자른 배아 위치의 종이 스케치를 참조하십시오. 유전형 분석의 경우, 게놈 DNA가 완료되면 배아 꼬리에서 매우 효율적으로 추출되므로 동물 관리 위원회에 따라 모든 동물을 안락사시키십시오. 설명된 방법을 사용하여 내피 세포에서 시리아 프로테아제 퓨린의 영향을 평가했습니다.
자궁 내 E 18.5에서 마우스 배아의 심박수를 측정한 결과, 동형접합적이지만 이형접합적(heterozygous)이 아닌 반향 배아(echo embryos)가 퓨린(furin)이 결핍된 배아는 빈맥을 앓고 있는 것으로 나타났습니다. 이 기술은 6-8개의 배아 1리터에 대해 약 1시간 안에 완료할 수 있습니다.
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본 연구는 E18.5에서 자궁 내 마우스 배아의 심박수를 측정하기 위해 M-모드 초음파를 사용하는 방법을 보여줍니다. 이 기술의 비침습적인 특성으로 인해 영상 촬영 중에 배아의 생리 상태를 유지할 수 있습니다.
Noninvasive in utero M-mode echocardiography enables accurate, physiologically relevant measurement of embryonic heart rate in mouse models, supporting early-stage cardiovascular target validation. This approach preserves native hemodynamics, providing high-confidence functional readouts essential for de-risking genetic models of congenital heart disease. The method strengthens translational continuity from discovery biology to preclinical assessment in cardiovascular drug discovery portfolios.
This noninvasive measurement method integrates at the interface of early discovery and preclinical validation, bridging genetic model characterization and translational cardiac assessment.