The Fastest Western in Town: A Contemporary Twist on the Classic Western Blot Analysis

Jillian M. Silva; Martin McMahon

doi:10.3791/51149

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Biology

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The Fastest Western in Town: A Contemporary Twist on the Classic Western Blot Analysis

타운 웨스턴 가장 빠른 : 클래식 웨스턴 블롯 분석에 현대 트위스트

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11:43 min

February 5, 2014

DOI: 10.3791/51149-v

Jillian M. Silva¹, Martin McMahon¹

¹Diller Cancer Research Building,University of California, San Francisco

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

이 프로토콜은 웨스턴 블롯 분석을 수행의 최신 발전을 탐구한다. 이러한 신규 한 변형은 35 분간 전기 영동 실행 시간, 12 분 건조 블로 팅 전송 시스템, 및 고해상도, 고품질, 감도 및 서부 데이터의 개선 된 정확성을 생성하는 적외선 형광 단백질 감지 및 이미징 비스 - 트리스 겔 시스템을 이용한다.

이 절차의 전반적인 목표는 기존 웨스턴 블로팅 기법의 주요 개선 사항을 식별하여 서양 데이터의 해상도, 품질, 민감도 및 정확도를 향상시키는 것입니다. 이는 먼저 리튬 ESAL sulfate가 포함된 버퍼로 샘플을 준비하여 단백질 무결성을 유지하면서 단백질 환원 및 알킬화를 위한 최적의 조건을 제공함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 35분 안에 전기영동을 완료하는 BIS tris gel 시스템을 사용하여 단백질을 분리하는 것입니다.

다음으로, 눈 얼룩 건조 블로팅 시스템을 사용하여 7분 안에 단백질을 멤브레인으로 전달합니다. 마지막 단계는 두 개의 서로 다른 형광 채널에서 근적외선 염료를 사용하는 적외선 형광 이미징을 사용하여 단백질을 검출하여 동일한 멤브레인에서 두 개의 서로 다른 항원을 동시에 시각화하는 것입니다. 궁극적으로, 전통적인 웨스턴 블로팅 방법의 이러한 새로운 수정으로 인해 보다 정확한 정성적 및 정량적 데이터를 얻을 수 있으며 이 기술의 수행 시간은 크게 단축됩니다.

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