Name: 마우스 모델에서 자궁 - 난관 배아 전송 및 정관 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-28T13:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: 배우세요 마우스 모델에서 자궁-난관 배아 전송 기술을 통해 착상 전 배아를 자궁으로 이식하는 방법을. 이 기술은 출혈과 배아 유출을 방지하여 생식 생물학 및 보조 생식 기술 연구에 활용됩니다.

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이 작품은 BT에 대한 동물 및 조류 과학학과에서 기금에 의해 지원되었다.

모든 동물 실험은 USDA 동물 관리 및 사용 지침에 따라 벨트 스빌 지역 동물 관리 및 사용 Comittees (BAACUC 11-015)에 의해 승인되었다. 1. 마취 및 진통제 (외과 적 치료 모두에 공통) <ol><li> 마우스의 무게를 27 G 바늘로 두 1 ㎖ 주사기에 다음과 같은 마취제 및 진통제를로드 <ol><li> 케타민 (0.1 ㎎ / g : 0.01 ㎖ / 10 ㎎ / ㎖ 용액의 g)과 자일 라진 (0.01 ㎎ / g : 2 ㎎ / ㎖ 용액 0.005 ㎖ / g). </li><li> 부 프레 노르 핀 (0.1 ㎍ / g : 0.01 ㎎ / ㎖ 용액 0.01 ㎖). </li></ol></li><li> 엄지와 집게 손가락으로 가능한 한 턱에 가까운 목의 목덜미를 따기와 새끼와 약지 사이의 꼬리를 잡고 마우스를 고정시킨다. </li><li> 복강 케타민-자일 라진 혼합물을 주입. 내장 천공을 방지하기 위해,로 마우스를 길게약간의 엉덩이의 수준 이하의 머리 (그림 1A) </li><li> 엄지 손가락과 집게 손가락 (그림 1B) 사이에 목 홀드의 목덜미에 부 프레 놀핀의 피하 주사. </li><li> 따뜻한 무대에서 케이지 (깨끗하고 다른 동물 제외)에 마우스를 둡니다. </li><li> 의식하면, (발가락 핀치에 의해 확인) 후방 발 반사의 부재를 확인합니다. 눈의 건조를 방지하고 눈꺼풀 반사 (그림 1C)의 부재를 확인하기 위해 눈 연고를 적용합니다. </li><li> 이 프로토콜은 아래에 설명 된 절차를 수행 할 정도로 30 분의 최소 수술 마취 평면 제공 (프로토콜 2 및 3). 긴 시간이 필요한 경우, 1.1.1에 기술 된 투여 량의 절반 케타민 + 자일 라진의 추가 주입을 30 분 후에 적용될 수있다. 빠르고 불규칙한 하나에 호흡 패턴의 변화는 이오를 나타냅니다적절한 마취 비행기의 SS. </li></ol> 2. 정관 수술 <ol><li> 검증 된 상대 성능을 남성을 사용합니다. </li><li> , 수술 도구를 소독 수술을 수행 할 것입니다 표면을 청소하고 70 % 에탄올로 닦아주십시오. </li><li> 이전 반사 손실에 대한 검사 (프로토콜 1) 설명 된대로 마취를 수행합니다. </li><li> 제거, 따뜻한 무대에 마우스를 놓고 두 개의 가상 횡단 선 사이의 복부 지역에서 전기 가위 모피는 0.5 ㎝, 성기 이상 2.5 cm (그림 2A)를 배치했다. </li><li> 10 % 포비돈 요오드 70 % 에탄올로 순차적으로 닦아 면도 영역을 소독합니다. </li><li> 면도 영역을 노출 구멍 멸균 수건으로 외과 의사 및 커버 향해 꼬리를 위로 향한 위치에 마우스를 놓습니다. 수술 영역을 조명. </li><li> 10-15mm 세로 피부 incisio를 수행N 약 1 ㎝의 음경 위 복부의 중간 라인. 톱니 모양의 집게를 드레싱 한 다음 (그림 2A와 2B) 가위로 잘라 피부를 잡습니다. </li><li> 원격 교육의 알바 5~10밀리미터 세로 절개를 수행합니다. 톱니 모양의 집게를 microdissecting와 근육을 잡고 가위 (그림 2C)로 잘라. </li><li> 톱니 모양의 집게를 해부 마이크로으로 한쪽 고환 지방 패드를 잡고 고환을 노출 잡아 당겨, 정관 및 부고환. 정관은 고환에 중간에 위치하고 있습니다 그것은 같은 고환 벽에 부착하지 명확하게 구별 할 수있는 무료 관 (이다 혈관 한쪽 (그림 2D)을 따라 실행과 부고환). </li><li> 그들은 빨간색으로까지 마이크로 해부 톱니 모양의 집게, 불꽃 드레싱 포셉으로 정관을 잡고 (그림 2E </st)&gt; 룽, 다음 (그림 2 층) 한 번에 두 지점에서 정관을 잘라 소작하기 위해 그들을 사용합니다. 컷은 약 5 ㎜의 일부를 제거하고 두 개의 분명히 구분 소작 끝 (그림 2G)를 남겨 두어야한다. </li><li> 다시 복강에 고환, 부고환과 정관을 이동합니다. </li><li> 다른 고환의 9 단계에서 진행합니다. </li><li> 5 / 0 흡수성 봉합사 (그림 2H)으로 만든 하나 또는 두 개의 수평 매트리스 바늘로 근육을 봉합. </li><li> 하나 또는 두 개의 상처 가위 (그림 2I)로 피부를 봉합. </li><li> , vasectomised 남성 (귀 반지, 문신을 ...) 확인 그것을 따뜻한 스테이지에 배치 케이지를 이동하고 마취에서 회복 될 때까지 관찰 (의식과 흉골 드러 누움을 유지). 따뜻한 식염수 0.5 ㎖를 피하 주사는 재 향상covery. , 정관 전송시 발생 가능한 그런 일을 기록 식수에 항생제를 추가합니다. </li><li> 상처 클립 10 일 상처 어선 제거 또는 치아 포셉 한 쌍의 정관 수술 후 제거 할 수 있습니다. 과 vasectomized 남성은 수술 후 2 주 동안 짝짓기를 할 준비가 될 것입니다. </li><li> 받는 사람을 얻기 위해 그것을 사용하기 전에 비옥 한 여성과 짝짓기하여과 vasectomized 남성의 불임을 테스트합니다. </li></ol> 3. 자궁 - 난관 배아 전송 <ol><li> 마우스 morulae 또는 배반 2.5 DPC에서 pseudopregnant받는 여성이 기술에 의해 전송 될 수 있습니다. </li><li> 배아 조작 유리 피펫을 준비한다 : <ol><li> 피펫 홀더의 손상을 방지하기 위하여 유리 모세관의 끝을 연마하고 있습니다. </li><li> 약간 회전하면서 미세 화염으로 가열하여 유리 모세관의 중간 부분을 연화기적으로 두 손으로 모세관. 모세관 부분은 부드럽고 (밝은 붉은 색) 전성 상태가되면 불에서 빨리 철회하고 130 ~ 150 μm의 외부 직경을 축소하기 위해 양쪽 끝을 잡아 당깁니다. </li><li> 유리가 냉각 한 후 가볍게 다이아몬드 점, 색연필, 연마 돌 또는 네일 파일과 좁은 부분을 처치하고 양쪽에서 잡아 당겨 잘라 때까지 기다립니다. 휴식은 깨끗하고 수직이어야한다 </li></ol></li><li> 100 ~ 130 ㎛의 구멍을 떠나, 매우 신속하게 타오르는로 끝을 연마하고 있습니다. 피펫은 나중에 사용하기 위해 저장할 수 있습니다. </li><li> 따뜻한 배아 조작 미디어 (CZBH 또는 M2는 설명을 참조). </li><li> , 수술 도구를 소독 수술을 수행 할 것입니다 표면을 청소하고 70 % 에탄올로 닦아주십시오. </li><li> 이전 반사 손실에 대한 검사 (프로토콜 1) 설명 된대로 마취를 수행합니다. </li><li> T를 유지그는 따뜻한 무대에서 마우스, 무릎 및 말초 리브 (그림 3a 및 3b) 사이의 등의 지역에서 전기 가위와 모피를 제거합니다. </li><li> 10 % 포비돈 요오드 70 % 에탄올로 순차적으로 닦아 면도 영역을 소독합니다. </li><li> 데워진 배아 조작 미디어 인큐베이터에서 배아를 이동합니다. </li><li> 실체 현미경 따뜻한 무대에받는 사람을 이동하고 (머리가 ​​오른쪽 또는 외과 의사의 왼쪽 측면을 찾고있는) 의사에 횡 방향으로 발생하기 쉬운 위치에 배치합니다. </li><li> 면도 영역을 노출 구멍 멸균 수건으로 영역을 커버하고 수술 영역을 조명. </li><li> 마지막 갈비뼈와 엉덩이와 허리와 복부 (그림 3A의 사이의 라인의 지느러미 ⅓ 사이의 라인의 두개골 ⅓에 위치한 자리에 피부에 1cm 횡단 (세로) 절개를 수행차 3B). 톱니 모양의 집게를 드레싱으로 피부를 잡고 가위 (그림 3C)으로 잘라. </li><li> 피부가 절단되면, 난소 (레드 / 오렌지) 또는 난소 (흰색)를 둘러싼 지방 패드는 신체의 벽을 시각화 할 수 있습니다. 절개가 어떤 큰 혈관을 절단하지 않는 자리에 난소 또는 지방 패드에 몸 벽에 0.3 ~ 0.5 센티미터 횡단 (세로) 절개를 수행합니다. 마이크로 해부 톱니 모양의 집게로 근육을 잡고 가위 (그림 3D)으로 잘라. </li><li> 머리가 외과 의사를 향하도록 마우스를 이동합니다. </li><li> 배아 조작 피펫 (그림 3E)을로드합니다 : <ol><li> CZBH 미디어 넓은 부분의 약 5 ㎜까지 조작 피펫의 좁은 부분을 통해 모세관 현상에 의해 상승 할 수 있습니다. </li><li> 작은 기포 (0.2 ~ 0.5 mm)를 채택한다. </li><li> 에서 배아 (5-10) 소개미디어의 최소량 (2-4 ㎜). </li><li> 또 다른 작은 기포 (0.2 ~ 0.5 mm) 및 미디어 소량 (0.5 mm)를 채택한다. </li><li> 입 흡인기 홀더 또는 단계 3.17에 대한 준비가 수동 장치에 부착 된 유리 피펫을 남겨주세요. </li></ol></li><li> 마이크로 해부 톱니 모양의 집게로 난소를 둘러싼 지방 패드를 잡고 난소, 난관 및 복강 중 상부 자궁의 작은 부분 (그림 3 층 및 3 세대)에 노출 마우스의 머리를 잡아 당깁니다. </li><li> 난관을 이동하고 (난관 자궁을 충족 예) 자궁 - 난관 접합을 폭로 마이크로 해부 톱니 모양의 집게로 지방 패드를 잡고, 사용할 준비가 입에 흡입기 마우스 피스를 들고. </li><li> 접근 자궁 - 난관 접합을 유지, (오른쪽 손으로하는 경우) 왼손으로 약간의 곡선 마이크로 해부 집게를 가지고 아래 사항들을 배치그 부분 위의 2mm에 대한 난관을 잡는 자궁 - 난관 접합. </li><li> 약간의 곡선 마이크로 해부 집게로 자궁 - 난관 접합부를 잡고, 27 G 바늘 (그림 3H)와 집게에 가까운 난관 부분에 구멍을. </li><li> 자궁 - 난관 접합을 통해 자궁에 바늘과 사전에 수행 된 구멍에 ​​배아 조작 피펫을 삽입 (3I 및 3J 피규어). 피펫은 자궁 - 난관 접합부 (그림 3K)을 통과하면 쉽게 미끄러진다. 파편에 의한 자궁 내막의 손상 (더 이상 3 mm 이상) 및 피펫 차단을 방지하기 위해 자궁에 아주 멀리 진행하지 마십시오. </li><li> 부드럽게 (그림 3 L)를 불어 자궁에 배아를 놓습니다. 두 기포가 자궁을 통과해야합니다. 첫 번째 거품 위의 미디어 중 일부또한 자궁 내로 방출 만 주입을 방해 할 수 있으므로, 더 많은 공기를 유입 방지 될 수있다. </li><li> 배아가 자궁에 출시 된 직후 피펫을 제거합니다. </li><li> 난관을 이동하고 지방 패드를 잡아서 다시 복강에 난소. </li><li> 5 / 0 흡수성 봉합사 (그림 3M)와 수평 매트리스 스티치 근육을 봉합. </li><li> 상처 깎기 (그림 3N)로 피부를 봉합. </li><li> 필요한 경우 다른 쪽의 10 단계에서 진행합니다. </li><li> 받는 사람 (귀 반지, 문신을 ...) 확인 (따뜻한 스테이지에 배치) 케이지로 이동하고 마취에서 회복 될 때까지 관찰 (의식과 흉골 드러 누움을 유지). </li><li> 배아 전송 중에 발생 가능한 그런 일을 주석 및 식수에 항생제를 추가합니다. 따뜻한 SalI으로의 0.5 ~ 1 ㎖를 피하 주사NE 솔루션은 복구를 향상시킵니다. </li><li> 상처 클립 10 일 상처 어선 제거 또는 집게 (그림 -30) 두 쌍의 배아 전송 후 제거 할 수 있습니다. 받는 사람이 임신을 평가하고 새끼의 수를 추정하는 그 날에 무게를 할 수 있습니다. 십오일 배아 전송 후받는 사람에게 새끼 자료를 제공합니다. </li></ol>

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저자는 더 경쟁 재정적 이익을 선언하지 않습니다.

정관 수술은 큰 어려움을 포함하지 않는 비교적 똑 바른 앞으로 수술 기법이다. 포비돈 요오드와 에탄올로 소독하는 경우는 복막을 자극 할 수 있으므로 (에탄올) 마지막 세척, 포비돈 요오드를 제거해야합니다. 정관에 프리 또한 음낭 또는 복부 8 횡 절개를 수행함으로써 달성 될 수있다. 음낭 절개로 인해 필요한 비교적 작은 절개를하고 조금 더 나은 수술 후 행동 (11) 복부 절개를 횡단하는 것을 권장하고있다. 그것은 두 번 같은 정관을 소작하고 기능 정관을 떠나는 초보자 외과 방지, 모두 고환에서 바사 deferentia에 쉽고 명확하게 액세스 할 수 있기 때문에, 우리는 음낭을 통해 복부 절개를 선호한다. 모두 복부 기술 사이에, 우리는 transver을 통해 원격 교육의 알바 세로 절개를 선호SAL이 복부 탈장의 개발을 피하고 모든 복부 근육 섬유를 절단하지 않기 때문에. 그러나 정관 및 자궁 - 난관 배아...

배아 전송 아마 마우스 모델에서 수행되는 가장 흔한 수술입니다. 이 기술은 시험 관내 조작 기술을 실시 배아에서 자손을 구하는 것이 필수적이며, 따라서, 전핵 주입, 렌티 바이러스 형질 도입, 또는 키메라 형성에 의해 유전자 변형 된 모델의 개발에 필요한 단계를 구성한다. 또한,이 기술은 착상 전 개발 과정에서 발생하는 다양한 모욕의 개발 효과에 대한 연구를 할 수 있습니다. 인공 재생 기술 한 또는 상이한 물질 또는 대사 2의 비정상적인 농도에 노출의 사용은 주입 또는 태반 장애 및 자손 장기 효과의 결과 배아 발달에 영향을 미칠 수있다. 신뢰성 및 재현성 배아 전송 기술은 일관된 남자 주입 및 태아 발달에 실험적 치료 가능한 부정적 영향을 시험하는 데있어 매우 중요NER. 쥐의 착상 전 배아는 0.5 일 포스트 교미의 ampullae (DPC) pseudopregnant받는 사람 (난관 전송) 3.4 또는 2.5의 DPC pseudopregnant받는 사람의 자궁 (자궁 전송) 5,6를 통해 난관에 하나를받는 여성에 전송 될 수 자신의 발달 단계에 따라 달라집니다. 예컨대 배아 또는 유도 된 다 능성 줄기 세포를 주입하여 키메라 생쥐를 생성하기 위해 사용되는 것과 같은 포배기 배아에서는, 보통 자궁 전송함으로써 전송된다. 배반포는 0.5 DPC받는 사람의 난관에 전송 될 수 있지만, 배아 주입이 발생하기 전에 모욕 복구에 2 일이 휴면을 거치고 있기 때문에 그것은, 발달 장애 물질에 대한 덜 생리적 테스트를 구성한다. 자궁 입금 자궁 내강으로 배아 조작 피펫의 액세스를 허용하는 개구를 생성하기 위해 좁은 바늘 자궁벽을 천공 포함한다.lthough이 기술은 좋은 결과를 얻을 수 있습니다, 용어 생존 (즉, 강아지에 개발 이전 배아의 비율)는 종종 낮은 7,8 예측할 수있다. 자궁 벽의 구멍은 어떤 해로운 부작용을 수반한다. 먼저, 근육층은 매우 혈관 조직이며 천자 종종 작은 출혈 초래한다. 혈액은 배아 전송 피펫을 차단하거나 배아 사망 및 / 또는 주입 실패의 원인이되는 자궁 내강에 침입 할 수 있습니다. 혈액 세포와 파편이 할구에 연결할 수 소나없이 배아가 전송되는 경우에 특히 적합합니다. 배아가 전송 된 이후에 두 번째로, 수행 개구는 밀봉되지 않기 때문에, 그들은 오리피스를 역류하고 너무 큰 부피 자궁에 도입되었을 때 복강으로 추방 될 수있다. 설명 자궁 - 난관 배아 전송이 여기에 EMBR을 제공하기 위해 자궁 - 난관 접합을 활용자궁벽을 천공함으로써 그 불리한 결과 구를 피할 필요없이 자궁 YOS. 배아 전송에 사용되는 pseudopregnant받는 여성은 남성과 vasectomized 8 자연 교배에 의해 얻을 수있다. 불임 남성에 의해 생성 된 정액 분비는 전송 된 배아를 수용하게됩니다 자궁 필요합니다. 받는 사람을 얻으려면 세 6 개월 8 주 2 여성의 최대 값은 오후에과 vasectomized 남성으로 배치됩니다. 다음 날 아침, 여성은 질 성교 마개, 남성의 정액에서 응고 단백질의 덩어리의 존재를 확인합니다. 정합은 보통 자정 중에 발생할 때, 질 플러그 검출의 일 0.5 DPC 것으로 간주된다. 과 vasectomized 남성은 일부 업체에서 구입 할 수 있지만, 여기에 기술 된 수술은 비교적 간단하고 배아 전송에 필요 이상으로 추가 장비가 필요하지 않습니다.

<table><tbody><tr><td>케타민</td><td>VEDCO</td><td>Ketaved ANADA 200-257</td><td>면허가 있는 수의사가 주문해야 합니다.</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>Anased NADA #139-236</td><td>면허가 있는 수의사의 지시를 받아야 합니다.</td></tr><tr><td>부프레노르핀</td><td>제네릭</td><td>NDC 400-42-010-01</td><td>면허가 있는 수의사가 주문</td></tr>해야 합니다.<tr><td>눈 연고</td><td>Novartis</td><td>Genteal</td><td></td></tr><tr><td>항생제</td><td>Pfizer</td><td>Clavamox NADA #55-101.</td><td>식수(아목시실린 트리하이드레이트 0.3mg/ml 및 클라불란산 칼륨 0.075mg/ml)에 첨가됩니다. 물 250ml에 재구성된 15ml 병 1.5ml를 추가합니다.</td></tr><tr><td>드레싱 톱니 겸</td>자 <td>ROBOZ</td><td>RS-8120</td><td>모든 중간 크기의 외과 등급 강철 직선 집게가 작동합니다.</td></tr><tr><td>미세 해부 톱니 모양의 집게</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5137</td><td>이것들은 90&period; 각도로 구부러져 있습니다. 원하는 경우 직선 집게를 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>약간 구부러진 미세 해부 겸자</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5136</td><td>이 모델은 난관을 잡는 데 특히 유용합니다.</td></tr><tr><td>가위</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5880</td><td>일반 수술 등급의 강철 작은 직선 가위가 작동합니다.</td></tr><tr><td>27G 바늘</td><td>Beckton-Dickinson</td><td>305136</td><td>작은 바늘 (30G)도 사용할 수 있습니다.25G는 조금 너무 클 수 있습니다.</td></tr><tr><td>클립 어플리어</td><td>MiKRon</td><td>42763</td><td></td></tr><tr><td>9mm 클립</td><td>MiKRon</td><td>427631</td><td></td></tr><tr><td>클립 제거제</td><td>MiKRon</td><td>7637</td><td>대신 두 쌍의 치아 집게(ROBOZ RS-8160)를 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>봉합사 바늘 홀더</td><td>ROBOZ</td><td>RS-7820</td><td></td></tr><tr><td>봉합</td>사 <td>다우스트 젤</td><td>5-0 Dexon S 7204-21</td><td>좁은 곡선 바늘로 4-0에서 6-0 흡수성 봉합사를 대체할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>유리 모세관</td><td>VWR</td><td>100 ul 보정 피펫 53432-921</td><td>여기에는 0.22 &#181만 부착하면 되는 구강 흡입기 시스템이 포함되어 있습니다. m 필터를 튜브에 삽입하여 사용할 수 있습니다. 자세한 내용은 Nagy et al.8Burner에서 얻을 수</td></tr> <tr><td>있습니다</td>. <td>KISAG AG</td><td>Typ 2002</td><td>가스 작동식 버너는 Kigas(동일한 공급업체의 CH-4512)로 충전할 수 있습니다. 알코올 버너도 사용할 수 있지만 가스는 더 높은 온도를 제공하며 이 버너는 작고 정밀한 화염을 제공합니다.</td></tr><tr><td>실체현미경</td><td>Leica</td><td>MZFLIII</td><td>이것은 형광이 있는 고가의 실체현미경으로 다른 용도로도 사용할 수 있습니다. 몇 가지 예를 들면 Leica MZ8 또는 Nikon SMZ-10 또는 SMZ-2B와 같은 더 저렴한 옵션이 있습니다. 두 개의 실체 현미경을 사용하는 것이 좋으며, 하나는 배아를 다루기 위한 것이고(아주 좋은 것일 필요는 없음) 다른 하나는 수용자를 위한 것입니다. 수혜자에게 사용되는 것은 무대 플레이트에서 대물 렌즈까지 긴 거리를 표시해야 무대 플레이트(난관이 배치될 위치) 위로 3-4cm 높이에서 초점을 맞출 수 있어야 하며 여전히 외과의를 위한 약간의 공간을 남겨둘 수 있어야 합니다. 대부분의 실체 현미경은 이 작업을 수행할 수 있지만 일부는 수행할 수 없습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>광섬유 발광</td><td>Dolan Jenner</td><td>Fiber lite</td><td>수술 부위를 발광합니다. 다양한 시스템을 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>따뜻한 단계</td><td>미국식 범위</td><td><a href="https://exch.mail.umd.edu/owa/redir.aspx? C=1qTJKejamUSfudeYG_MlZHvTY3dsJM9Iaqr2SnwGD4ECWGzB8e8Rpg--_L7u0vJmyatXQJzGQ0k.& URL=http%3a%2f%2fstore.amscope.com%2ftcs-100.html" target="_blank">http://store.amscope.com/tcs-100.html</a></td><td>실체현미경의 스테이지 플레이트 위에 놓을 수 있습니다. 일부 수정(수평을 맞추기 위해 막대기 삽입)tage 실체 현미경에 비해 너무 짧은 경우 필요할 수 있습니다. 사용 가능한 경우 케이지를 데우는 데 큰 따뜻한 단계를 사용할 수 있습니다. 그렇지 않은 경우 일반 가열 패드를 사용할 수 있지만 온도를 확인해야 합니다.</td></tr><tr><td>배아 조작을 위한 배양 접시</td><td>Falcon</td><td>353001</td><td>351008도 사용할 수 있습니다. 그들은 더 좁은 방울을 만들었습니다.</td></tr></tbody></table>

마우스 모델에서 자궁 - 난관 배아 전송 및 정관

Utero-tubal Embryo Transfer and Vasectomy in the Mouse Model

대리 여성에게 착상 전 배아의 전송은 성적인 변경의 효과는 이후의 태아 발달과 성인의 건강에 착상 전 개발 과정에서 발생한 연구하는 유전자 변형 마우스 또는 생산을위한 필수 단계입니다. 효과적이고 일관된 배아 전송 기술의 사용은 유전자 변형 동물의 생성을 향상시키고 주입 속도와 용어 생존에 다른 치료의 효과를 결정하기 위하여 중요하다. 배반포 단계의 배아는 일반적으로 배아 조작 피펫을 소개하는 자궁 벽에 구멍을 수행, 자궁 전송에 의해 전송됩니다. 피펫이 철회 된 후 자궁에서 수행 구멍이 닫히지 않습니다, 인해 자궁의 긍정적 인 압력에 복강에 배아 수 유출. 천자는 또한 주입을 손상 출혈을 생성 블록 전송 피펫 및 배아 D에 영향을 미칠 수 있습니다조나없이 배아가 전송 특히 evelopment. 따라서,이 기술은 종종 매우 변수 및 전반적인 낮은 배아 생존율가 발생합니다. 이러한 부정적인 효과를 방지, 자궁 - 난관 배아 전송 배아의 유출을 막는 자연 장벽 자궁 - 난관 접합을 활용하여 자궁 벽의 구멍을 피하십시오. 과 vasectomized 남성은 pseudopregnant받는 사람을 얻기 위해 필요합니다. 정관 수술을 수행 할 수있는 기술은 자궁 - 난관 배아 전송에 대한 보완 설명되어 있습니다.

자궁 - 난관 배아 전송은 자궁 배아 전송 2,9,10에 관련된 합병증을 방지 자궁에 배아를 전송하는 평균을 제공한다. 표 1에서 우리는 우리가 기술하는 프로토콜 다음 CD1받는 사람에게 조작의 종류를 실시 CD1의 배반포를 전송 얻은 몇 가지 대표적인 결과를 보여줍니다. 기간 (강아지의 결과로 태아의 %) 또는 (렌티 바이러스 노출의 경우) E15에 생존 생존은 수정란 단계 (IVC)에서 체외에서 단순히 배양 배아, 키메라 새끼를 생성하는 IPSC 주입을 실시 배아 사이의 유사하다 자신의 조나 제거했다 배아 전송하기 전에 7 시간 동안 렌티 바이러스에 노출 된 태아. 따라서, 자궁 - 난관 배아 전송, 특히 투명대가 부족한 것과 같은 복잡하고 렌티 바이러스 배양 배아를 전송하는 신뢰할 수있는 기술이다. <p class="jove_content" fo:keep-together.within 페이지 = &quot;항상&quot...

자궁 - 난관 배아 입금 자궁 전송을 수행 할 때 발생할 수있는 배아 유출을 방지하는 장벽으로 자궁 - 난관 접합부를 사용한다. 과 vasectomized 남성은 배아 전송 pseudopregnant받는 사람을 얻기 위해 필요합니다. 두 가지 기술을 설명합니다.

The transfer of preimplantation embryos to a surrogate female is a required step for the production of genetically modified mice or to study the effects ...

본 절차의 전체적인 목표는 착상 전 배아를 2.5 DPC 가임 상태의 수용자 자궁으로 이식하는 것입니다. 이는 먼저 난소, 자궁관(uct) 및 자궁의 첫 번째 섹션을 노출시킨 후, 바늘로 자궁관을 천자함으로써 수행됩니다.다음으로, 유리 모세관 피펫을 구멍을 통해 자궁강 내부로 삽입합니다. 마지막으로, 배아를 자궁 내로 방출합니다. 최종적으로, 태어난 새끼의 수를 통해 이식된 착상 전 배아의 생존율을 확인합니다.자궁 배아 이식과 같은 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 자궁벽을 천자하지 않으므로 출혈과 배아 유출을 방지할 수 있다는 점입니다. 모든 동물 실험은 USDA 동물 보호 및 사용 가이드라인에 따라 벨츠빌(Beltsville) 지역 동물 보호 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다. 교배 능력이 검증된 수컷 마우스에 마취제와 진통제를 투여하고 동물이 적절하게 진정되었음을 확인한 후, 마우스를 가온 스테이지 위에 놓고 전기 바리캉을 사용하여 음경 위쪽으로 0.5 cm와 2.5 cm 지점에 설정한 두 가상의 횡선 사이의 복부 털을 제거합니다.10% 포비돈 요오드와 70% 에탄올을 사용하여 제모된 부위를 소독합니다. 다음으로, 드레싱용 치상 포셉으로 복부 중앙선의 피부를 잡고, 음경 상단 약 1cm 지점에서 10~15mm 길이로 피부를 종절개합니다. 그런 후 박리용 치상 포셉으로 백선을 잡고 마이크로 가위로 근육을 절개합니다.톱니 모양의 해부용 포셉으로 고환 부근의 지방 패드를 한쪽으로 잡고 당겨 고환, 정관 및 부고환을 노출시킵니다. 정관은 고환의 내측에 위치하며 뚜렷하게 구분되는 관 형태입니다. 정관을 잡고 플레임 드레싱 포셉으로 색이 붉게 변할 때까지 유지한 후, 정관의 두 지점을 동시에 절단 및 소작합니다. 이때 약 5 mm 정도의 분량을 제거하여 소작된 두 끝단이 명확하게 분리되도록 해야 합니다. 고환, 부고환, 정관을 다시 복강 내로 밀어 넣고 반대편 고환에도 동일한 절차를 반복합니다. 그 후 5-0 흡수성 봉합사를 사용하여 근육에 한두 개의 수평 매트리스 봉합을 실시하고, 한두 개의 상처 클리퍼를 사용하여 피부를 봉합합니다.수컷을 확인한 후, 가온 스테이지 위에 놓인 케이지로 옮기고 마취에서 회복될 때까지 관찰하십시오. 정관 절제술 이송 중에 발생할 수 있는 사례들을 기록하고 음용수에 항생제를 첨가하십시오. 배아 조작용 유리 피펫을 준비하기 위해, 먼저 유리 모세관의 끝부분을 연마하십시오.피펫

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

의 마우스 모델 Utero에 이식

장 장간막의 동맥 계단식으로 자궁 조직의 자동 이식에 의한 마우스 및 쥐에 endometriosis의 수술 유도의 설명입니다.

자궁의 자동 이식하여 수술 유발 Endometriosis의 마우스 모델

출처: Lutz, D., et al. 발달 중인 마우스 뇌 및 척수의 자궁 내 형질도입 후 초미세구조 신경가소성 매개변수의 평가. J. Vis. 경험. (2019).이 비디오는 마우스 배아에서 자궁 내 주사를 통한 바이러스 형질도입을 보여줍니다. 임신한 쥐를 수술을 위해 준비하고 정중선 절개를 하여 자궁 뿔을 노출시킵니다. 원하는 유전자를 포함하는 바이러스와 추적 염료의 혼합물을 표적 위치의 자궁 주머니 내의 배아에 주입합니다. 그런 다음 봉합하기 전에 자궁 뿔을 다시 배치합니다.

마우스의 자궁 내 바이러스 형질도입

우리는 murine 모델에 주입의 정 맥 및 양수 내 노선을 통해는 utero에 이식 (IUT)을 수행 하기 위한 프로토콜을 설명 합니다. 독특한 면역 관용 태아 환경에 셀, 바이러스 성 벡터, 및 다른 물질을 소개 하는 것이 프로토콜을 사용할 수 있습니다.

정 맥 및 양수 내 Utero Murine 모델에 이식

보조 생식 기술 (ARTs)은 결과를 개선 하 고 관련 위험을 줄이기 위해 지속적인 평가를 하 고 있습니다. 이 원고는 인간 재생의 이상적인 동물 모델로 서 토끼의 사용을 허용 하는 효율적인 냉동 보존 프로토콜을 가진 최소 침 습 배아 전달 절차를 설명 합니다.

토끼 모형에 있는 최적 배아 단계에서 최소 침 습 배아 이식 및 배아 확산

선천성 횡격막 탈장 및 태아 기관 폐색의 다양한 동물 모델은 윤리적 문제, 비용, 수술 어려움, 크기, 생존율 및 유전 도구의 가용성에 관한 장점과 단점을 제시합니다. 이 모델은 기관 폐색과 폐 발달에 대한 증가된 발광 압력의 영향을 연구하는 새로운 도구를 제공합니다.

쥐의 트랜스테린 태아 기관 폐색 모델

임신 확립은 복잡한 배아와 자궁 누화를 포함하는 역동적인 과정입니다. 이러한 과정에 대한 산모의 자궁 환경의 정확한 기여는 여전히 활발한 조사 영역으로 남아 있습니다. 여기에서는 이러한 연구 질문을 해결하기 위해 생체 내 동물 모델을 설계하는 데 도움이 되는 자세한 프로토콜이 제공됩니다.

난소 절제된 마우스 모델에서 임신 확립에 대한 자궁 기여도를 연구하는 방법

제시된 자궁 경부 조작 방법은 정관 수술을받은 수컷과 암컷을 번식시킬 필요없이 생쥐에서 가임신을 유도 할 수 있습니다. 비수술적 배아 이식과 비수술적 인공수정의 성공을 위해서는 가임신유도가 필요하며, 이 두 가지 모두 제시되어 있다.

비수술적 배아 이식 또는 인공 수정 전에 정관 수술을 받은 수컷 없이 암컷 마우스에서 가임신을 유도하는 행위

여기에서는 마우스에서 ROSI(round spermatid injection)를 수행하는 방법, 유망한 임상 응용 기술을 가진 기술이며 배아 발달의 기전을 조사하기 위한 유용성을 소개합니다.

마우스 라운드 Spermatid 주입

여기에서는 세포질 내 정자 주입(ICSI)-배아 이식(ET) 마우스 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 제시하여 ICSI에 기인할 수 있는 포도당 대사의 연령 관련 변화를 관찰하고 인간 발달에 대한 잠재적인 장기적 영향에 대한 통찰력을 제공합니다.

세포질 내 정자 주입 후 생쥐 자손의 혈당 모니터링

배우세요 마우스 모델에서 자궁-난관 배아 전송 기술을 통해 착상 전 배아를 자궁으로 이식하는 방법을. 이 기술은 출혈과 배아 유출을 방지하여 생식 생물학 및 보조 생식 기술 연구에 활용됩니다.

마우스 모델에서 자궁 - 난관 배아 전송 및 정관

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