수초 희소 돌기 아교 세포 당 단백질 (MOG 35-55) C57BL / 6 쥐에 실험자가 면역 뇌척수염 (EAE) 유도
April 15th, 2014
실험자가 면역 뇌척수염 (EAE)는 다발성 경화증의 설립 동물 모델입니다. C57BL / 6 마우스는 중추 신경계 자기 반응성 면역 세포에 의해 야기 오름차순 이완성 마비를 초래 미엘린 희소 돌기 아교 세포의 당 단백질 (MOG) 펩티드 35-55 (MOG 35-55)로 면역화된다. 질병 유도 및 모니터링을위한 프로토콜이 논의 될 것이다.
이 절차의 전반적인 목표는 다발성 경화증의 임상적 및 병태생리학적 특징을 모방하는 실험적 자가면역 뇌척수염의 동물 모델을 유도하는 것입니다. 이것은 먼저 항원과 보조제 및 백일해 독소를 준비함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계는 항원과 CFA 에멀젼을 피하로 주입하고 백일해 독소를 복강내에 주입
하는 것입니다.이틀 후, m은 다시 복강내 백일해 독소를 주사합니다. 그런 다음 동물의 체중을 측정하고 임상 점수를 매일 평가합니다. 궁극적으로, 실험적 자가면역 및 뇌척수염의 임상 징후는 일반적으로 면역 접종 후 9일에서 14일 사이에 관찰할 수 있습니다.
예를 들어, 리존(rizone)과 같은 독성 제제 또는 EIE의 다른 변종을 포함하는 기존 프로토콜의 이 기술의 주요 장점은 모두 적응 면역 체계의 관여와 같은 근본적인 병리학적 특징이 크게 다른 다발성 경화증의 특징을 모방하는 이유입니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 예방 접종의 어려운 취급으로 인해 어려움을 겪을 것입니다. 동물의 스트레스를 줄이고 발달 후 최적의 예방 접종을 보장하는 것이 절대적으로 필요합니다.
이 모델은 신경면역학 분야의 연구자들이 녹아웃 동물을 특성화할 수 있는 길을 열었습니다. 새로운 분자 약물 표적을 식별하거나 유망한 약물 후보를 테스트하기 위해 펩타이드 용액을 준비하려면 동결건조된 MOG 35-55 펩타이드를 이중 증류수에 희석하여 최종 농도가 밀리리터당 2밀리그램이 되도록 합니다. 이 용액은 마우스당 100마이크로리터가 필요하며 준비 중에 일부 부피가 손실됩니다.
따라서 필요한 용액의 양을 1.5-2배 만드십시오. 펩타이드 용액을 섭씨 영하 20도에서 보관하여 완전한 엽상체를 보조제 또는 CFA가 100mg의 건조된 마이코박테리움을 결핵에 투여하도록 합니다. H 37 RA를 절구에 넣고 절구로 갈아서 얇은 가루를 얻습니다.
그런 다음 10ml의 불완전한 엽상체 보조제를 추가하여 밀리리터당 10mg의 CFA 양말 용액을 얻습니다. CFA 재고는 예방 접종 당일에 필요할 때까지 섭씨 4도에서 보관할 수 있습니다. CFA 원액을 밀리리터당 2밀리그램의 최종 농도로 불완전한 fres 보조제로 희석하고 완전히 혼합하여 미립자 물질을 재현탁하고 얼음 위에 놓습니다.
MOG 35 내지 55 펩타이드 용액의 분취액을 해동한 후. 얼음 위에 올려 놓으십시오. 2밀리리터 주사기와 27게이지 캐뉼라를 사용하여 1밀리리터의 CFA를 추출합니다.
그런 다음 두 번째 2밀리리터 주사기와 20게이지 캐뉼러를 사용하여 1밀리리터의 MOG 35-55 용액을 추출합니다. 기포를 제거하고 두 주사기를 3방향 밸브로 연결합니다. 3방향 밸브가 거의 닫힌 상태에서 한 주사기에서 다른 주사기로 에멀젼을 밀어 넣고 다시 10분 동안 완전히 혼합합니다.
완료되면 용액은 상이 분리되지 않고 흰색이고 뻣뻣하며 점성이 있어야 합니다. 이제 에멀젼을 예방 접종 최소 30분 또는 최대 며칠 동안 그대로 두십시오. 예방 접종 당일에는 용액을 두 개의 주사기 중 하나에 넣고 27 게이지 캐뉼라를 연결합니다.
500마이크로리터의 이중 증류수에 500마이크로그램의 백일해 독소를 재구성합니다. 밀리리터당 100마이크로그램의 스톡 용액의 경우 필요할 때까지 스톡 용액을 섭씨 4도에서 보관하십시오. 예방 접종 당일에는 백일해 원액을 1 대 50으로 희석합니다.
PBS를 사용하여 400나노그램의 백일해 독소가 포함된 주사용 희석된 백일해 용액 200마이크로리터가 든 주사기를 준비하고 바늘 허브의 데드 스페이스를 위해 추가로 100마이크로리터를 끌어냅니다. iso fluorine으로 마우스를 마취한 후 발가락 꼬집기를 사용하여 마취 수준을 평가합니다. 100마이크로리터의 항원 CFA 에멀젼을 각 뒷구리의 두 개의 다른 부위에 피하로 주입합니다.
주사 후 피부 아래에 구근 덩어리가 형성되어야 하며 이는 실험 내내 지속되어야 합니다. 다음으로, 200마이크로리터의 백일해 독소가 들어 있는 준비된 주사기를 복강내에 주입합니다. 일일 평가를 위해 개별 마우스를 쉽게 식별할 수 있는지 확인합니다.
예를 들어, 꼬리 베이스의 색상 표시로.
개요
이 문서는 다발성 경화증의 모델인 C57BL/6 마우스에서 실험적 자가면역성 뇌수막염(EAE)의 유도에 대해 논의합니다. 이 절차는 마이엘린 올리고덴드로사이트 당단백질(MOG) 펩타이드 35-55로 면역화하여 마비의 임상적 징후를 유도합니다.
주요 연구 구성 요소
과학 분야
- 신경면역학
- 자가면역 질환
- 질병의 동물 모델
배경
- 실험적 자가면역성 뇌수막염(EAE)은 다발성 경화증을 모방합니다.
- C57BL/6 마우스는 이 모델에 일반적으로 사용됩니다.
- 면역화는 중추 신경계에 영향을 미치는 자가면역 반응을 유발합니다.
- EAE를 이해하는 것은 다발성 경화증의 잠재적 치료 표적을 식별하는 데 도움이 됩니다.
연구 목적
- 신뢰할 수 있는 EAE 동물 모델을 확립합니다.
- 다발성 경화증의 임상적 및 병리 생리학적 특징을 평가합니다.
- 신경면역학적 메커니즘 및 약물 테스트 연구를 촉진합니다.
사용된 방법
- MOG 35-55 펩타이드 및 완전 Freund의 친화제(CFA)의 준비.
- 항원 및 CFA 유화제의 피하 주사.
- 백일해 독소의 복강 내 주사.
- 임상 점수 및 동물 체중의 일일 모니터링.
주요 결과
- EAE의 임상적 징후는 면역화 후 9일에서 14일 사이에 일반적으로 관찰됩니다.
- 마우스에서 무력 마비의 성공적인 유도.
- 중추 신경계에서의 면역 반응 연구를 가능하게 합니다.
- 새로운 분자 약물 표적의 식별을 촉진합니다.
결론
- EAE 모델은 다발성 경화증을 연구하기 위한 귀중한 도구입니다.
- 성공적인 면역화를 위해서는 적절한 취급 및 스트레스 감소가 중요합니다.
- 이 방법은 신경면역학적 과정에 대한 이해를 향상시킵니다.
자주 묻는 질문
Executive Industry Relevance
The MOG35-55-induced EAE model in C57BL/6 mice provides a robust and reproducible system for studying autoimmune neuroinflammation relevant to multiple sclerosis pathophysiology. This model enables mechanistic de-risking of therapeutic candidates by recapitulating adaptive immune-mediated demyelination and neurodegeneration. It supports target validation and preclinical screening by allowing evaluation of drug effects on clinical disease progression and immune responses in a genetically tractable background.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of autoimmune hypotheses involving MOG-specific T-cell responses and CNS inflammation.
- Operational Value: Provides a standardized model for validating targets in neuroinflammatory pathways using genetic or pharmacological modulation.
- Predictive Value: Supports target confidence by modeling the effector phase of autoimmune encephalomyelitis with clinical readouts.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates quantifiable clinical scores and weight loss metrics for dose-response assessment of immunomodulatory compounds.
- Operational Value: Establishes a reproducible workflow for compound testing with defined immunization and monitoring timelines.
- Assay Readiness: Outputs enable standardized evaluation of therapeutic impact on disease onset, severity, and duration.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Facilitates mechanistic studies of immune cell infiltration, demyelination, and axonal damage relevant to MS pathology.
- Translational Continuity: Allows evaluation of target engagement and pathway modulation from discovery through preclinical validation.
- Risk-Adjusted Decisions: Informs go/no-go criteria based on clinical score thresholds and histopathological correlates.
Pipeline & Workflow Integration
The model fits within the discovery continuum from target validation through lead optimization to preclinical efficacy testing, providing immunological and clinical readouts that inform compound advancement.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing of autoimmune mechanisms and functional validation of targets in neuroinflammation.
- Screening: Delivers quantitative clinical and phenotypic outputs enabling compound comparison and structure-activity relationship analysis.
- Analytics: Generates longitudinal clinical scoring and weight data for statistical evaluation of treatment effects.
- Translational Research: Connects immunomodulatory mechanisms to disease-modifying potential in a disease-relevant system.
- Enterprise Reuse: Serves as a reusable platform for screening multiple candidates across neuroimmunology programs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Reduces mechanistic ambiguity in autoimmune CNS disorders through reproducible disease induction.
- Operational Value: Ensures standardization across studies via defined antigen preparation, adjuvant emulsification, and toxin dosing protocols.
- Strategic Value: Improves capital efficiency by enabling early de-risking of targets with high translational failure potential.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization by linking target modulation to clinical outcomes in a validated model.
Implementation Considerations
- Requires expertise in animal handling, emulsion preparation, and clinical scoring to minimize variability.
- Dependent on precise CFA-MOG emulsion quality and pertussis toxin dosing for consistent disease induction.
- Necessitates standardized scoring protocols and blinding for cross-functional data interpretation.
- Requires adaptation considerations when translating findings across different genetic backgrounds or disease variants.
- Practical limitations include model variability influenced by microbiota, housing conditions, and technician proficiency.
