쥐에서 심장 마비에 대한 세포 기반 치료 : 심근 경색에 대한 두 개흉술 및 세포 및 Biomatrix의 심 외막 이식

이 절차의 목적은 관상 동맥 결찰 및 심외막 적용을 수행하기 위해 쥐에게 이중 개흉술을 실행하는 것입니다. 이것은 먼저 네 번째 늑간 공간에서 개흉술을 시행함으로써 이루어집니다. 다음으로, 좌측 전방 하행 관상동맥 또는 LAD를 결찰합니다.

그런 다음 2주 후 다섯 번째 늑간 공간에서 두 번째 개흉술을 시행합니다. 마지막으로, 세포와 기질은 경색된 박동하는 심장의 표면에 적용됩니다. 궁극적으로 심장 초음파 검사는 심장 기능을 평가하기 위해 수행되고 조직학은 경색 크기 측정으로 수행됩니다.

흉골 절개술과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 절차가 다음과 같을 것임을 보여주는 최소 침습적 접근 방식이라는 것이며 ine Lopez는 우리 실험실에서 공동 연구자를 보냈습니다. 모든 동물은 F-E-L-A-S-A의 권장 사항과 동물 보호에 관한 스위스 법률에 따라 치료를 받았습니다. 쥐를 피혈하고 텍스트 프로토콜에 따라 대퇴골을 분리하고 청소한 후 가위를 사용하여 뼈의 양쪽 끝을 자릅니다.

그런 다음 골수를 씻어내기 위해 멸균 PBS를 뼈 심부에 주입하고 골수를 15ml 튜브에 모읍니다. 300 시간에 7 분 동안 모은 골수를 원심 분리기하십시오 G.Remove는 적혈구 용해 완충액의 3 밀리리터를 가진 supinate를 제거합니다. 펠릿을 현탁시키고 실온에서 1분 동안 현탁액을 배양한 후 소생 후 300회 G로 7분 동안 다시 회전시킵니다.

펠릿을 멸균 배양 배지에 현탁시킵니다. 150ml 배양 플라스크에 세포 배양 배지를 추가하고 배양 2일차에 세포를 파종합니다. 배지를 변경하여 비부착 세포를 제거하고 원하는 세포 밀도에 도달할 때까지 2-3주 동안 2일마다 배지를 계속 교체합니다.

첫 번째 T 개흉술을 수행하려면 먼저 쥐의 무게를 측정하고 그에 따라 인공호흡기 매개변수를 설정합니다. 환기 유출은 자동으로 정의됩니다. 그런 다음 흉부의 왼쪽 부분을 면도하고 가열 패드를 켜고 섭씨 37도로 설정합니다.

텍스트 프로토콜에 따라 쥐를 마취한 후 14 게이지 IV 카테터를 사용하여 쥐를 앙와위 자세로 가열 패드에 놓기 전에 발가락 또는 꼬리 꼬집기를 수행하고 동물을 삽관한 다음 삽관 카테터를 설치류 인공호흡기에 연결합니다. 분당 2.5리터의 산소, 2.5%의 불소, 2밀리리터의 일회 호흡량, 분당 90회의 호흡 빈도로 프로그래밍되었습니다. 킬로그램 당 0.1 밀리그램의 부프레노르핀이 든 주사기를 피하로 준비한 후 용액의 1/3을 주입한 다음 1% 베타딘 용액을 사용하여 해당 부위를 소독합니다.

다음으로, 네 번째 늑간 공간의 흉골에 수직으로 피부를 절개하고 흉부 근육의 3 층을 분리합니다. 그런 다음 갈비뼈 4번과 5번 사이의 네 번째 늑간 공간을 엽니다. 작은 견인기를 사용하여 갈비뼈를 펴고 심장을 노출시킵니다.

그런 다음 조심스럽게 심낭을 열고 왼쪽 전방 하행 관상 동맥 또는 LAD를 찾은 다음 7.0 봉합사를 사용하여 심방 아래 4mm를 접합합니다. 그런 다음 흉골에서 대략 그리고 원위부에 위치한 3개의 제로 봉합사로 허혈성 영역의 색상 변화를 제어합니다. 늑간 공간을 닫는 데 사용할 두 바늘을 만듭니다.

원위 봉합사를 조입니다. 흉부를 팽창시키고 기흉을 방지하기 위해 인공호흡기 배기 튜브를 2초 동안 고정합니다. 그런 다음 두 번째 봉합사를 조입니다.

근육 층을 제자리에 다시 배치합니다. 그런 다음 5개의 제로 봉합사를 사용하여 1% 베타딘 용액으로 피부를 닫습니다. 봉합사를 소독하고 남은 부프레노르핀 용액을 주입합니다.

마취 시스템을 끄고 삽관 카테터를 제거합니다. 쥐를 IVC 장치로 되돌리기 전에 따뜻한 램프 아래 우리에 1-2시간 동안 보관하십시오. 첫 번째 개흉술 후 2주가 지나면 치유가 완료되고 흉터가 거의 보이지 않습니다.

쥐의 수술을 준비하기 위해 이 비디오에서 앞서 설명한 절차에 따라 다섯 번째 늑간 공간에서 흉골에 수직으로 피부를 절개합니다. 세 개의 근육 층을 분리하고 갈비뼈 5번과 6번 사이의 다섯 번째 늑간 공간을 엽니다. 작은 견인기를 사용하여 갈비뼈를 펴고 심장을 노출시킵니다.

약간의 접착력이 있으면 가는 집게를 사용하여 조심스럽게 완화하십시오. 다음으로, 합자 아래에 창백한 영역으로 나타나는 경색 부위를 찾습니다. 필요한 경우 정점에 10cm 길이의 7 제로 봉합사 조각을 삽입하고 좌심실을 더 잘 볼 수 있도록 부드럽게 당깁니다.

그런 다음 세포와 매트릭스를 심장의 허혈성 부위 표면에 적용합니다. 펠릿화 후, 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 6개의 세포에 10을 곱한 4배, 피브린 실란트를 사용하여 심장을 덮기 전에 팔레트를 심장에 놓습니다. 접착제 층은 세포를 심장 표면에 고정시킵니다.

정점 위치에서 봉합사 조각을 제거한 후 근육 층이 다시 제자리로 돌아가 봉합사를 하고 동물을 소독합니다. 여기에 표시된 것처럼 비디오의 앞부분에서 설명한 바와 같이. 외과적 개입 후, 동물은 체중이 감소하고 빠르게 회복한 후 적용된 치료와 무관하게 체중이 증가했다 이 카플란 그래프에서 볼 수 있듯이, 첫 번째 T 흉술술 후 생존율이 높았고, 피브린 및/또는 세포를 투여받은 동물은 이 그래프에서 볼 수 있듯이 다른 그룹보다 낮은 생존율을 보였다.

그럼에도 불구하고 전체 생존율은 1초 후에도 높은 수준을 유지했습니다. 개흉술 및 치료 심장 기능은 심장 초음파로 평가했습니다. 건강하고 경색된 동물에 대한 이러한 대표적인 M 모드 이미지는 총 104마리의 동물에서 좌심실 수축이 폐지되었음을 보여줍니다. LAD 결찰 2주 후 분획 단축이 LAD 분유 후 2주 후에 기록되었습니다.

빈도 분포는 17%의 변동 계수로 합리적으로 재현 가능한 방법을 보여줍니다.이 그림은 LAD 출산 후 2주 및 6주 후에 측정된 박출률로 심장 기능을 그래픽으로 표현한 것입니다. 이 기간 동안 심장 기능이 계속 감소합니다. 심장 재형성도 이 기간 동안 발생하며, 여기서는 s 자매 및 이완기 모두에서 기록된 좌심실 부피의 증가로 표시됩니다. 마지막으로, 심장 부분의 황금색 염색 결과, 섬유화 조직과 결국 LAD 결찰 후 6주가 지나면 생긴 경벽 흉터가 밝혀졌습니다. 이 기술을 숙달하면 제대로 수행되면 30-40분 안에 완료할 수 있습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 최소 침습 이중 개흉술을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.