Name: 발작과 같은 활동을 분석하고 운동을위한 저가의 방법 초파리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-19T15:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: 학습하세요 Drosophila melanogaster의 운동 및 발작 행동을 웹캠과 Image J 소프트웨어를 활용해 분석하는 저비용 방법을. 이 기법은 유전적 및 약리학적 조작의 효과를 정량적으로 평가할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는 또한 미세 조정에 자신의 작품이 분석을 위해 크리스 버너, 스티븐 맥키 니, 로라 토빈, 제니 Gilbreath, 애슐리 Olley, 메간 호퍼, 그리고 메간 하이드에 대한 감사의 표현을하고 싶습니다.

1. 개인의 준비 운동력 분석을 위해 파리 <ol><li> 전송 부드럽게 각각의 빈 병을 활용하고면 마개를 가진 유리 병 캡에 의해 파리. 파리가 관찰되기 전에 그대로 20 ~ 30 분을 앉아 할 수 있습니다. 그것은 이전의 연구는 unanesthetized 파리 (14)에 비해 마취 노출이 동작을 변경할 수 있습니다 것처럼 이전의 행동 관찰에 시간 내에 파리를 마취하지하는 것이 중요합니다. </li><li> 부드럽게 유리 병 밖으로 비행을 눌러 공기 통로를 허용하는 작은 슬릿 (5 밀리 높이) 5 cm 직경 페트리 접시 덮개 아래에 각각의 파리를 놓습니다. 아래에서 조명하고 페트리 접시 위에 장착 된 웹캠을 사용하여 파리를 관찰합니다. </li></ol> 2. 개인의 준비 발작 분석에 파리 <ol><li> 이틀 이전 발작에 민감한 파리를 피드 표준 효모 / 옥수수 가루 / 한천 미디어 또는 표준 용지 중 하나는 약물과 직접 혼합. 데이터가 여기에 제시된 내용은, 파리는 1 합 하나를 공급했다표준 용지 또는 메트포르민의 25 MG와 혼합 표준 용지 1 g의 F. </li><li> 파리는 각각의 빈 유리 병에 부드러운 터치하여이를 전송하고면 마개를 가진 작은 유리 병 모자, 미디어 또는 미디어 플러스 약물에 이틀 동안 공급 한 후. 파리가 관찰하기 전에 20 분 동안 그대로 앉아 할 수 있습니다. 그것은 이전의 연구는 unanesthetized 파리 (14)에 비해 마취 노출이 동작을 변경할 수 있습니다 것처럼 이전의 행동 관찰에 시간 내에 파리를 마취하지하는 것이 중요합니다. </li><li> 10 초 동안 가장 높은 설정을 사용하여 실험실 vortexer를에 하나의 비행을 포함 소용돌이 개인 병. 직접 종이 위에 장착 된 웹캠 아래 종이의 빈 흰색 시트에 고정 된 비행을 놓습니다. </li></ol> 3. 비디오 녹화 <ol><li> HandyAvi 소프트웨어 프로그램을 사용하여 이동 또는 SLA 기록 <a href="http://www.azcendant.com/download.htm">http://www.azcendant.com/download.htm을</a> . 이 프로그램에 웹캠을 사용하여사용자 설정에 기초하여 이미지를 캡처. </li><li> 캡처 탭에서 시간 경과 이미지 옵션 창이 열리면 캡처 장치와 웹캠을 선택을 선택합니다. 대부분의 실험을 위해 640 × 480의 비디오 프레임 크기가 적합합니다. </li><li> 압축 인텔 IYUV 코덱을 선택하고 발작 분석 0.1 초 / 프레임을 선택하거나 이동 분석에 대한 0.1 ~ 0.5 초 / 프레임을 선택합니다. 고급 탭에서 각 캡처. BMP 이미지 파일 작성을 선택하고 (이미지 스택)가 소요 이미지를 저장하는 프로그램의 폴더를 선택합니다. </li><li> 종이 시트에 죽은 파리를 놓습니다. 비디오 설정 상자를 클릭하고 밝은 흰색 배경 및 어두운 비행과 명확한 대조가되도록 장치 설정 탭에서 설정을 조정합니다. </li><li> 녹음을 시작하려면 시작 버튼을 클릭합니다. 기록 기간이 끝나면 정지 버튼을 클릭합니다. 이미지 스택은 현재 선택한 폴더에 있어야합니다. 참고 : 녹화를 시작하기 전에 확인하는 FOL이미지 스택을 선택 데르가 비어 있습니다. </li></ol> 4. ImageJ에 사용 데이터 분석 <ol><li> 에서 다운로드 할 수 있습니다 오픈 NIH의 무료 이미지 처리 소프트웨어 ImageJ에, <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html">http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html</a> . 참고 : 프로그램을 다운로드 외에도 Multitracker 플러그인이 다운로드 및에 나타낸 바와 같이 설치되어야 <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html">http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html</a> . </li><li> 파일 탭을 클릭 한 다음 가져 오기 → 이미지 시퀀스를 선택하여 ImageJ에로 이미지 스택을 가져옵니다. <ol><li> 이미지 스택이 포함 된 폴더를 선택하고 이미지 중 하나를 선택하고 열기를 선택합니다. 순서 옵션 대화 상자가 열립니다. 숫자 정렬 이름을 클릭 한 다음 확인을 선택하여 이미지 스택은 ImageJ에에로드됩니다. </li></ol></li><li> 임계 모든 이미지 각 플라이가되는 흰색 배경으로 구성되도록검은 점으로 변환. 이 프로세스를 시작하기 전에 이미지 탭에서 유형 → 8 비트를 선택하여 8 비트 형식으로 이미지를 변환 할 수 있습니다. <ol><li> 다시 이미지 탭을 클릭 → 임계 값을 조정을 선택합니다. 이 임계 값 포인트 조정할 수 있습니다 차단하는 임계 값 대화 상자가 열립니다. </li><li> 슬라이스 검은 점이 부족한 경우이 여분의 검은 점 또는 있는지 확인하기 위해 이미지를 스캔합니다. 이 경우, 문제를 완화하기 위해 임계 값을 조정한다. 일반적으로 임계 값은 적절한 값으로 프로그램 기본값으로 조정할 필요가 없습니다. 참고 : 스택의 모든 슬라이드가 비행의 위치를​​ 나타내는 하나의 검은 점이 있어야합니다. </li><li> 임계 값 대화 상자에서 적용을 선택하고 대화 상자에 마스크를 변환 열립니다. 옵션을 클릭하기 만하면 임계 값에 OK 이미지 스택을 클릭하지 마십시오. </li></ol></li><li> 이미지 스택을 임계 화 한 후, 선택 Multitracker 플러그인 플러그인 탭 아래에 순서대로픽셀 파리의 움직임을 측정합니다. 개체 추적기 대화 상자가 나타납니다. <ol><li> 대화 상자에 나와있는 네 가지 옵션을 모두 클릭 한 다음 확인을 선택합니다. Multitracker 플러그인은 다음 각 조각의 검은 점에 좌표를 연결하고 결과 창뿐만 아니라 픽셀의 전체 경로 길이의이 나열됩니다. 경로 창은 비행했다 경로의 그래픽 디스플레이를 제공합니다. </li><li> 결과 창에서 x 및 y 좌표 목록을 복사 Excel 스프레드 시트에 데이터를 붙여 넣습니다. 스택의 모든 슬라이드가있는 검은 점이이없는 경우, Multitracker 프로그램은 해당 슬라이드에서 중지됩니다. 이 경우, 그것은 보장하기 위해 8.4과 재 임계 스택 단계로 돌아갈 필요하다는 문제 슬라이드 흑점 등 플라이 레지스터. </li></ol></li><li> 공백의 흰색 종이에 일cm 이격 된 두 점의 별도의 이미지를 촬영, 경로는 cm로 픽셀에서 길이로 변환하기 위해. <ol><li> 위의 사항을 따르십시오단계 (3.1-4.4.2)를 결정하는 X, Y, 픽셀은 두 개의 점 좌표와 cm에 대응하는 화소의 수를 결정하기 위해이 정보를 사용한다. 이 변환율은 cm의 움직임 데이터를 생성하는 5 단계에서 사용된다. 참고 :이 작업이 완료되면, 그것은 이후의 모든 기록 고정 카메라를 유지하는 것이 중요합니다. 카메라가 이동되거나 조정될 때마다, 하나는 cm로 픽셀을 변환하는이 단계를 반복 할 필요가있다. </li><li> 상체 위치 및 광 강도 / 반사에 약간의 변동이 이미지를 임계 화 때 생성되는 블랙 도트의 크기와 중심에 영향을 미칠 것이기 때문에 Multitracker 플러그에 의해 생성 된 경로 길이는 움직임을 과대. 이 잡음은 플라이 운동의 정확한 추정을 얻기 위해서 제거되어야한다. </li></ol></li></ol> 5. Excel을 사용하여 데이터 분석 <ol><li> X의 시리즈를 수입하여 기록 된 데이터에서 노이즈를 제거, Y는 Multitracker 홍보에 의해 생성 된 좌표비행 분석, 저자에 의해 만들어진 엑셀 VBA 프로그램에 ogram. (이 프로그램은 저자에게 연락하여 무료 지원을받을 수 있습니다.) </li><li> 클릭 저에게 버튼을 클릭하고 임계 값 차단을 선택합니다. SLA 분석 0.5 cm / sec의 임계 값을 선택하거나 이동 분석 0.1-0.3 cm / 초 사이의 값을 선택한다. 확인을 클릭하고 프로그램은 속도, 시간 및 이동 거리를 계산합니다. 주 :이 프로그램은 순차적 0.5-1.0 초 빈들의 데이터를 평가하는 슬라이딩 윈도우를 사용하여 분석하고 그 윈도우 중에 속도를 계산한다. 사용자 정의 차단 아무 이상이 비행 이동으로 처리됩니다. </li></ol>

<ol><li>Stone, B., Evans, L., Coleman, J., Kuebler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+pharmacological+manipulations+that+alter+metabolism+suppress+seizure-like+activity+in%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Genetic and pharmacological manipulations that alter metabolism suppress seizure-like activity in.</a> 1496, 94-103 (2013).</li>
<li>Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+mutants+of+Drosophila+isolated+by+countercurrent+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Behavioral mutants of Drosophila isolated by countercurrent distribution.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 58, 1112-1119 (1967).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Resolution+Video+Tracking+of+Locomotion+in+Adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (24), (2009).</li>
<li>Spink, A. J., Tegelenbosch, R. A., Buma, M. O., Noldus, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EthoVision+video+tracking+systema+tool+for+behavioral+phenotyping+of+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">The EthoVision video tracking systema tool for behavioral phenotyping of transgenic mice.</a> Physiol. Behav. 73, 731-744 (2001).</li>
<li>Kohlhoff, K. J., Jahn, T. R., Lomas, D. A., Dobson, C. M., Crowther, D. C., Vendruscolo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+iFly+tracking+system+for+an+automated+locomotor+and+behavioural+analysis+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Biol%22%5BJournal%5D)">The iFly tracking system for an automated locomotor and behavioural analysis of Drosophila melanogaster.</a> Integr. Biol. 3, 755-760 (2011).</li>
<li>Gomez-Marin, A., Partoune, N., Stephens, G. J., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+tracking+of+animal+posture+and+movement+during+exploration+and+sensory+orientation+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Automated tracking of animal posture and movement during exploration and sensory orientation behaviors.</a> PLoS ONE. 7, (2002).</li>
<li>Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Resolution+analysis+of+ethanol-induced+locomotor+stimulation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">High-Resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila.</a> J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).</li>
<li>Martin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+portrait+of+locomotor+behaviour+in+Drosophila+determined+by+a+video-tracking+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Processes%22%5BJournal%5D)">A portrait of locomotor behaviour in Drosophila determined by a video-tracking paradigm.</a> Behav. Processes. 67, 207-219 (2004).</li>
<li>Meunier, N., Belgacem, Y. H., Martin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+feeding+behaviour+and+locomotor+activity+by+takeout+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of feeding behaviour and locomotor activity by takeout in Drosophila.</a> J. Exp. Biol. 210, 1424-1434 (2007).</li>
<li>Koudounas, S., Green, E. W., Clancy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliability+and+variability+of+sleep+and+activity+as+biomarkers+of+ageing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Biogerontology%22%5BJournal%5D)">Reliability and variability of sleep and activity as biomarkers of ageing in Drosophila.</a> Biogerontology. 13, 489-499 (2012).</li>
<li>Catterson, J. H., Knowles-Barley, S., James, K., Heck, M. M., Harmar, A. J., Hartley, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+modulation+of+Drosophila+sleep-wake+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Dietary modulation of Drosophila sleep-wake behaviour.</a> PLoS One. 5, (2010).</li>
<li>Donelson, N., Kim, E. Z., Slawson, J. B., Vecsey, C. G., Huber, R., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Resolution+positional+tracking+for+long-term+analysis+of+Drosophila+sleep+and+locomotion+using+the+%27%27Tracker%27%27+program%5BTitle%5D)+AND+%22PLos+ONE%22%5BJournal%5D)">High-Resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the ''Tracker'' program.</a> PLos ONE. 7, (2012).</li>
<li>Duboff, B., Fridovich-Keil, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mediators+of+a+long-term+movement+abnormality+in+a+Drosophila+melanogaster+model+of+classic+galactosemia%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Mediators of a long-term movement abnormality in a Drosophila melanogaster model of classic galactosemia.</a> Dis. Model Mech. 5, 796-803 (2012).</li>
<li>Seiger, M. B., Kink, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+anesthesia+on+the+photoresponses+of+four+sympatric+species+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Genet%22%5BJournal%5D)">The effect of anesthesia on the photoresponses of four sympatric species of Drosophila.</a> Behav. Genet. 23, 99-104 (1993).</li>
<li>Pavlidis, P., Ramaswami, M., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+easily+shocked+gene%3A+a+mutation+in+a+phospholipid+synthetic+pathway+causes+seizure%2C+neuronal+failure%2C+and+paralysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The Drosophila easily shocked gene: a mutation in a phospholipid synthetic pathway causes seizure, neuronal failure, and paralysis.</a> Cell. 79, 2333 (1994).</li>
<li>Royden, C. S., Pirrotta, V., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tko+locus%2C+site+of+a+behavioral+mutation+in+D.+melanogaster%2C+codes+for+a+protein+homologous+to+prokaryotic+ribosomal+protein+S12%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The tko locus, site of a behavioral mutation in D. melanogaster, codes for a protein homologous to prokaryotic ribosomal protein S12.</a> Cell. 51, 165-173 (1987).</li>
<li>Parker, L., Padilla, M., Du, Y., Dong, K., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+model+for+epilepsy%3A+bss+is+a+gain-of-function+mutation+in+the+para+sodium+channel+gene+that+leads+to+seizures%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a model for epilepsy: bss is a gain-of-function mutation in the para sodium channel gene that leads to seizures.</a> Genetics. , 187-534 (2011).</li>
<li>Hardie, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+AMP-activated+protein+kinase+in+the+metabolic+syndrome+and+in+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Role of AMP-activated protein kinase in the metabolic syndrome and in heart disease.</a> FEBS Lett. 582, 81-89 (2008).</li>
<li>Fulgencio, J. P., Kohl, C., Girard, J., Pegorier, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+metformin+on+fatty+acid+and+glucose+metabolism+in+freshly+isolated+hepatocytes+and+on+specific+gene+expression+in+cultured+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Pharma%22%5BJournal%5D)">Effect of metformin on fatty acid and glucose metabolism in freshly isolated hepatocytes and on specific gene expression in cultured hepatocytes.</a> Biochem. Pharma. 62, 439-446 (2001).</li>
</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

초파리 전위 또는 움직임 패턴을 검사 할 때, 이동 한 거리에 관한 정보, 움직임의 속도 및 이동 패턴을 추출 할 수있는 유용하다. 이러한 정보를 추출하기 위해, 고가의 장비는 전통적 종종 드물게 4,8,9 같은 분석법을 사용하고자 작은 실험실 또는 실험실에 대한 금지입니다 사용되어왔다. 여기에 설명 된 분석은 거리 (그림 2와 그림 6) 운동, 속도 여행을 결정하는 데 사용 (그림 4, 7) 수 채 2 백 달러를 비용 운동 (그림 1, 5)를 사용하여 장비 및 패턴 . 우리가 개발 한 엑셀 VBA 프로그램을 사용하여, X의 시리즈는, Y는 ImageJ에 프로그램이 모든 정보를 추출하기 위해 분석 할 수 있습니다에 의해 생성 된 좌표. 이 시스템은이발작에 민감한 초파리 BS 돌연변이 1 SLA의 두 유전자 및 약물 ...

짧은 수명 및 사용할 수있는 강력한 유전자 도구를 감안할 때, 초파리는 각종 질병의 원인 및 다양한 생물학적 과정의 기본 생리를 조사를위한 훌륭한 모델 시스템입니다. 많은 경우에, 그것은, 행동 또는 약리 유전 조작이 모델 생물 1,2 운동력에 미치는 효과를 측정하는 것이 유리하다. 일반적으로 이차원 3-7 플라이 움직임을 측정하기 위해 사용되는 다양한 방법이있다. 이 시스템은 동시에 여러 파리의 추적을 지원할 수와 속도, 레코드 경로의 길이를 측정하고 비행 이동 소요 시간의 백분율을 기록 할 수 있습니다. 그들은 운동 및 비행 이동 6-9의 성적으로 동종 이형의 성격에 약물의 효과를 포함하여 다양한 상황에서의 움직임을 연구하는 데 사용되었습니다. 이러한 시스템의 주요 단점은 추적 SYS의 비용이다TEM 또는 해당 소프트웨어와 카메라. 경우에 따라이 달러의 수천에서 실행할 수 있습니다. 비용은 새롭게 절연 돌연변이의 이동성 패턴을 정량화, 예를 들면, 이러한 시스템의 제한된 사용을 필요 랩위한 특정 관심사이다. 간단하지만 덜 강력한 방법은 레코드 운동 플라이가 폐쇄 관 10,11의 중간에 배치되어 외광의 빔 경로를 횡단하는 횟수에 기초하여 시스템을 사용하는 것이다. 이러한 시스템은 운동과 수면 각성주기에 대한 가치있는 정보를 제공 할 수 있지만, 그들은 그들이 비행의 실제 경로를 캡처로 장애 조치 또는 추정의 움직임에 따라 수 있기 때문이다. 추가 고해상도의 방법이 이러한 제한 12를 시도하고 회피하는 데 사용되었습니다 있지만, 예를 들어, 관의 끝에서 상당한 움직임을 전시 파리가 낮은 운동을 등록합니다 항공사. 간단하고 저렴 여전히 geotaxi를 측정하는 장치를 등반하는의, 하나의 튜브 또는 튜브를 2,13의 시리즈를 통해 파리의 상향 이동. 이러한 시스템은 저렴하고 쉽게 geotaxis 결함을 식별 할 수 있지만, 그들은 조사자가 관심을 가질 것 운동의 많은 다른 양상을 캡처하지 못한다. 많은 실험실 - 설치와 사용하는 것은 D. melanogaster의 균주의 행동 차이를 특성화 유익한 도구가 될 것입니다 간단한 저가의 강력한 분석 시스템하십시오. 여기에서 우리는 채 2 백 달러를위한 설정하고 파리의 이동 경로, 속도 및 시간에 대한 정보를 제공 할 수있는 할 수있는 분석을 설명합니다. 분석의 효능을 입증하기 위해, 우리는 그것을 식별하는 데 사용 될 수 있다는 것을 보여주는 데이터를 제시, 발작과 약물 메트포르민의 2) 능력에 취약 방에 민감한 (BS) 돌연변이는 1) 전위의 결함이있는 일반적 발작 같은 활성 (SLA) I의 강도를 줄이기 위해, II 형 당뇨병을 치료하는 데 사용N 개의 BS 돌연변이.

<table><tbody><tr><td>웹캠</td><td>Logitech</td><td>Pro900</td><td>모든 품질의 웹캠으로 충분합니다.</td></tr><tr><td>HandiAVI 타임랩스 소프트웨어</td><td>Azcendant 소프트웨어</td><td></td><td>최신 버전은 http://www.azcendant.com/</td></tr> <tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td></td>에서 찾을 수 있습니다. <td>최신 버전은 http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html</td></tr><tr><td>Multiracker Plug-In</td><td>NIH</td>에서 찾을 수 있습니다<td></td>. 최신 버전은 http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html Vortexer VWR Vortex Genie 2<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>에서 찾을 수 있습니다.Vortex Genie 2와 같은 대부분의 표준 크기 와류로 충분합니다.</td></tr><tr><td>5cm 페트리 접시 커버</td><td>LabM Limited</td><td>D011</td><td>더 작거나 더 큰 페트리 접시 커버는 운동 분석의 경기장에 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>라이트 박스</td><td>맞춤형</td><td></td><td>스크랩 재료로 제작되었습니다. 조명은 운동 분석에 사용됩니다. 실내 조명에 따라 라이트 박스 없이 분석을 수행할 수 있습니다.&nbsp;</td></tr></tbody></table>

발작과 같은 활동을 분석하고 운동을위한 저가의 방법<em&gt; 초파리</em

A Low-cost Method for Analyzing Seizure-like Activity and Movement in Drosophila

비디오 추적 시스템은 초파리의 움직임을 분석하고 기관차 행동에 여러가지 이상을 검출하기 위해 널리 사용되어왔다. 이러한 시스템은 행동 풍부한 정보를 제공 할 수 있지만,이 시스템의 비용과 복잡성은 많은 실험실에 금지 될 수 있습니다. 우리는 D. melanogaster의 기관차 행동과 발작의 움직임을 측정하기위한 저가의 분석을 개발했습니다. 시스템이 거리를 이동 추적하는 저렴하고 자유 소프트웨어의 조합을 사용하여 처리 할 수​​있는 이미지를 캡처하는 웹 캠을 사용하여, 지정된 시간 기간 동안 움직임과 움직임의 지속 기간의 평균 속도. 이 시스템의 유용성을 입증하기 위해, 우리는 D.의 그룹이 3 ~ 10 배 더 민감 발작과 같은 활동 (SLA) 야생형 파리보다 돌연변이, 방에 민감한 (BS) 중풍 병자를 melanogaster의 조사. 이 새로운 시스템을 사용하여, 우리는 감지 할 수 있었다 BS mutanT 강타 무감각 (BSS)은 야생형 파리보다 새로운 환경에서 탐구 운동의 낮은 수준을 나타낸다. 또한, 시스템은 일반적으로 타입 II 당뇨병을 치료하는 데 사용되는 약물은 메트포민, BS 돌연변이의 SLA의 강도를 감소 시킨다는 것을 확인 하였다.

여기에 설명 된 기술은 초파리 BS 돌연변이 1 SLA의 차이를 분석하기 이전에 사용되었다. 여기에 제시된 결과는 쉽게 충격을 BS 균주 (EAS), 강타 무감각 (BSS) 및 기술 녹아웃 (망가)를 포함한다. EAS 궤적은 포스파티딜 에탄올 아민의 합성 (15)에 관여 에탄올 키나제를 인코딩하고 망가 궤적은 미토콘드리아 riboprotein (16)를 인코딩합니다. BSS 돌연변이는 마비 (파라) 전압 문 나트륨 채널 (17)의 대립이다. 본 연구에서 사용 된 대립 유전자는 EAS 한, BSS 1 및 망가 25t되었습니다. SLA를 측정하는 방법의 효능 션 하나에 비해 발작 EAS 민감한 제어 비...

무료로 제공하고 저렴 소프트웨어 프로그램의 웹캠과 조합하여, 초파리 melanogaster의 기관차 패턴은 속도, 거리, 다양한 모터 활동의 시간의 차이를 검출하기 위해 분석 될 수있다.

Video tracking systems have been used widely to analyze Drosophila melanogaster movement and detect various abnormalities in locomotive behavior. While ...

이 실험 절차의 전반적인 목표는 초파리(drosophila)의 운동 능력 또는 발작 행동의 변화를 식별하는 것입니다. 이를 위해 먼저 마취제를 사용하여 초파리를 개별 바이알에 분리합니다. 그다음, 간단한 웹캠을 사용하여 초파리의 움직임을 기록합니다.그런 다음 데이터를 Image J로 가져와 분석을 시작합니다. 마지막으로, 맞춤 제작된 초파리 분석 소프트웨어를 사용하여 기록 기간 동안의 이동 거리, 속도 및 지속 시간을 결정합니다. 결과적으로, 이 분석법은 유전적 및 약리학적 조작과 관련된 운동 능력 또는 발작 행동의 변화를 보여줄 수 있습니다.이제 저희가 설명해 드릴 이 저비용 기록 기술은 초파리의 발작 행동과 운동 능력을 모두 분석하는 데 사용될 수 있습니다. 특히, 저희는 이 방법을 통해 초파리의 발작 행동을 변화시키는 유전적 및 약물학적 조작을 확인해 왔습니다. 오늘은 제 실험실의 학부 연구원인 Chris Burner가 이 기술을 시연하겠습니다. 우선 운동 및 발작 분석 과정 동안 초파리를 기록할 웹캠을 설치하십시오.카메라 설치가 완료되면 handy a VI 소프트웨어 프로그램을 엽니다. 녹화 설정을 조정하려면 캡처 탭에서 타임랩스 이미지 옵션을 선택하고, 새 창이 열리면 캡처 장치로 웹캠을 선택하십시오. 대부분의 실험에서는 640 by 480의 비디오 프레임 크기가 적당합니다. 압축 옵션에서 Intel IUV 코덱을 선택하고, 분석법에 따라 프레임당 초 수를 설정하십시오.고급(advanced) 탭에서 각 캡처에 대한 비트맵 이미지 파일을 생성하고, 녹화된 이미지 스택을 프로그램이 저장할 폴더를 선택하십시오. 다음으로, 종이 위에 죽은 초파리를 놓습니다. 비디오 설정 상자를 클릭하고, 장치 설정 탭에서 밝은 흰색 배경과 더 어두운 초파리가 뚜렷하게 대비될 때까지 설정을 조정하십시오.시작 버튼을 클릭하여 녹화를 시작하십시오. 녹화 기간이 종료되면 정지 버튼을 클릭하십시오. 이제 선택한 폴더에 이미지 스택이 생성되었으며, 이를 통해 운동성 분석(locomotor activity assay)을 시작할 수 있습니다.초파리를 면마개로 밀봉된 개별 바이알로 옮깁니다. 다음 단계를 진행하기 전, 초파리가 안정될 때까지 20~30분 동안 그대로 둡니다. 이 시간이 지난 후, 테스트할 초파리를 바이알 밖으로 살짝 두드려 낸 뒤 페트리 접시 덮개 아래로 옮깁니다.커버에는 공기 흐름이 가능하도록 작은 슬릿이 있어야 하며, 앞서 설치한 웹캠 아래에 초파리를 배치하십시오. 준비가 되면 시작 버튼을 눌러 운동 능력을 기록하기 시작합니다. 발작 분석의 첫 번째 단계는 2일 된 발작 민감성 초파리에게 표준 배지 또는 테스트할 약물이 혼합된 배지를 먹이는 것입니다.2일간 먹이를 공급한 후, 초파리를 가볍게 두드려 각각의 빈 바이알로 옮기고 솜 마개로 바이알을 막습니다. 관찰 전 20분 동안 초파리가 안정을 취하도록 둡니다. 준비가 되면, 랩 보텍스(lab vortex)에서 가장 높은 설정으로 바이알을 10초 동안 보텍싱합니다.고정된 초파리를 웹캠 바로 아래의 흰 종이 위에 즉시 놓습니다. 배치가 완료되면 초파리의 활동을 기록하기 시작합니다.초파리는 마비 기간이 간헐적으로 섞인 급격하고 조절되지 않는 움직임을 보일 것입니다. 초파리가 스스로 자세를 바로잡으면 기록을 종료합니다. 데이터 분석을 시작하려면, 무료 이미지 처리 소프트웨어인 Image J를 실행하십시오.먼저 파일 탭을 클릭한 다음 가져오기를 선택하여 원하는 이미지 스택을 가져옵니다. 마지막으로 이미지 시퀀스를 선택합니다. 이미지 스택이 포함된 폴더를 선택하고 이미지를 엽니다.시퀀스 옵션 대화 상자가 열리면 'sort names numerically'를 선택한 다음 'Okay'를 클릭하십시오. 그러면 이미지 스택이 Image J로 로드됩니다. 다음으로, 'image' 탭을 선택하고 value의 타입을 'eight bit'로 설정하십시오. 다시 'image' 탭을 클릭하고 'adjust' 옵션에서 'threshold'를 선택하십시오.모든 이미지의 임계값을 설정하여 각각의 이미지가 흰색 배경에 초파리가 검은색 점으로 변환된 상태가 되도록 합니다. 이때 임계값 대화 상자가 열리며 컷오프 지점을 조정할 수 있습니다. 이미지들을 훑어보며 추가적인 검은색 점이 포함되어 있거나 점이 누락된 부분이 있는지 확인하십시오.필요한 경우, 문제를 해결하기 위해 임계값을 조정하십시오. 조정이 완료되면 임계값 대화 상자에서 apply를 선택하십시오. convert to mask 대화 상자가 열리면 okay를 클릭하여 이미지 스택에 임계값을 적용하십시오.초파리의 이동 거리를 픽셀 단위로 측정하려면, plugins 탭에서 multi tracker 플러그인을 선택하십시오. object tracker 대화 상자가 나타나면 제시된 네 가지 옵션을 모두 클릭하고 Okay를 선택하십시오. 그러면 multi tracker 플러그인이 검은색 부분에 좌표를 지정합니다.각 슬라이스에서의 좌표를 결과 창에 나열하고, 픽셀 단위의 총 길이를 함께 표시합니다. 경로 창에서는 파리가 이동한 경로를 그래픽으로 보여줍니다. 결과 창에서 X 및 Y 좌표 목록을 복사하여 Excel 스프레드시트에 데이터를 붙여넣으십시오.스택의 슬라이드 중 어느 하나라도 내부에 검은색 영역이 포함되어 있지 않으면, 멀티 트래커 프로그램이 해당 슬라이드에서 중단됩니다. 이런 현상이 발생하면, 파리가 검은색으로 인식되도록 스택의 임계값(threshold)을 다시 설정하십시오.해당 슬라이드에서. 픽셀 단위의 경로 길이를 센티미터로 변환하려면, 빈 흰색 종이 위에 알려진 거리만큼 떨어져 있는 두 점의 이미지를 촬영하십시오. 두 점의 XY 픽셀 좌표를 결정하고, 이 정보를 사용하여 1cm에 해당하는 픽셀 수를 산출함으로써 더 정확한 결과를 얻으십시오.맞춤 제작된 초파리 분석 프로그램으로 XY 좌표를 가져와 이미지에서 노이즈를 제거합니다. 프로그램이 실행되면, 각 유전자형 또는 처리군의 데이터를 개별 스프레드시트로 가져옵니다. 다음으로, 요약 시트(summary sheet) 탭을 선택하고 'click me' 버튼을 클릭합니다.분석 유형에 따라 임계값을 선택하고 확인을 클릭하면, 프로그램이 이동 속도, 시간 및 거리를 계산합니다. 이러한 대표 경로들은 메트포르민 처리 여부에 따른 변이 초파리의 발작 유사 활동을 보여줍니다. 테스트한 두 가지 변이체 모두에서 처리 후 발작 활동이 감소하였습니다.Metformin은 발작 분석 동안 이동한 거리와 발작 유사 활동의 총 지속 시간을 모두 유의미하게 감소시켰습니다. 이와 대조적으로, 개별 운동 경로에서의 평균 속도에는 변화가 없었습니다. 야생형 CS 초파리의 경로는 원형 경기장의 주변부에 집중된 모습을 보입니다.A 돌연변이 BSS 초파리의 경로는 동일한 농도를 보였으나, 전반적인 움직임은 더 적었습니다. 새로운 환경에서 운동 능력을 테스트했을 때, BSS 돌연변이체는 CS 초파리에 비해 경로 길이가 유의미하게 감소한 것으로 나타났습니다. 또한, 이 분석을 통해 운동 분석 과정 중 CS 초파리가 탐색할 때의 이동 속도 변화도 감지되었습니다.BSS 초파리는 몇 차례의 활동 폭발을 제외하고는 실험 내내 상대적으로 비활동적인 상태를 유지했습니다. 이 기술을 사용하여 이러한 행동 분석 중 어느 하나를 수행할 때 명심해야 할 가장 중요한 사항 중 하나는 기록을 수행하기 전에 초파리를 마취하지 않도록 하는 것입니다. 마취는 발작 행동과 운동 행동 모두에 영향을 미치며, 결과 값을 크게 변화시킬 수 있는 것으로 나타났습니다.

a-low-cost-method-for-analyzing-seizure-like-activity-movement

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

에서 복잡한 운전하는 동작의...

성인 Drosophila Melanogaster의 로코의 고해상도 비디오 추적

고주파 전기 자극 압수와 같은 활동을 사용하는 것은에서 유도된 수...

의 간질 발작의 돌연변이에 대한 Neurocircuit의 Assays Drosophila</em

확인된 뉴런과 먹이 행동에서 칼슘 신호의 동시 녹화 Drosophila melanogaster</em

이 비디오는 자유롭게 걷는 파리를 추적하여 일반적인 운동 능력을 평가하는 방법을 설명합니다. 주요 프로토콜은 비디오 추적 소프트웨어를 사용한 분석의 설정 및 데이터 분석을 보여줍니다.

자유롭게 걷는 파리 추적: 초파리의 이동을 평가하는 방법

이 보고서는 TriKinetics Drosophila Activity Monitor를 사용하여 초파리 유충 활동을 측정하는 방법을 설명합니다. 이 장치는 적외선 빔을 사용하여 최대 16 마리의 개별 동물의 움직임을 감지합니다. 데이터를 분석하여 분석 챔버 내 동물의 비율 및 위치를 포함한 모션 매개변수를 나타낼 수 있습니다.

에서 애벌레 활동의 측정<em&gt; 초파리</em&gt; 활동 모니터

섬 분석 결과 초파리 melanogaster의 기본적인 운동 동작을 평가 하는 데 사용할 수 있는 비교적 새로운, 비용 분석 결과가 이다. 이 원고는 자동 데이터 처리 및 유전 약리학 큰 스크린에 대 한 중요 한, 높은 처리량 판독 시험이 섬 분석 결과 데이터의 객관적인 정량화에 대 한 알고리즘을 설명 합니다.

Drosophila 섬 분석 결과에서 운전 행동의 높은 처리량 분석

이 프로토콜 비용 효율적이 고 편리한 약리학 대리인, 신경 단백질의 유전자 돌연변이의 테스트를 가능 하 게 초파리 melanogaster 중앙 신경 시스템의 하강 전기 활동을 기록 하는 방법을 설명 합니다. 또는 미개척된 생리 적인 통로의 역할입니다.

제 3-탈피 초파리 Melanogaster 의 중앙 신 경계 활동의 electrophysiological 녹음

현재 프로토콜은 속도, 거리 등의 매개변수를 계산하기 위해 고화질 비디오 녹화를 기반으로 각 프레임의 픽셀을 분할하는 플러그인과 호환되는 오픈 소스 소프트웨어 피지를 사용하여 손으로 만든 경기장에서 파리의 움직임을 추적 및 분석하여 초파리 의 운동 활동을 평가합니다.

초파리에서 운동 활동을 분석하는 간단한 기술

여기에서는 간질 활동을 모니터링하기 위해 GCaMP6 발현 성인 초파리의 생체 외 칼슘 이미징 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 생체 외 칼슘 이미징을 통해 성인 초파리의 ictal 사건을 조사하는 데 유용한 도구를 제공하여 세포 수준에서 간질의 잠재적 메커니즘을 탐구할 수 있도록 합니다.

Ex Vivo (체외 주행) 간질의 초파리 모델을 위한 칼슘 영상

이 프로토콜은 간질 치료를 위한 고유한 항경련 화합물을 식별하기 위해 Drosophila 유충을 사용하는 방법을 자세히 설명합니다.

Drosophila 유충에서 전기 충격에 의해 유도된 발작 활동

학습하세요 Drosophila melanogaster의 운동 및 발작 행동을 웹캠과 Image J 소프트웨어를 활용해 분석하는 저비용 방법을. 이 기법은 유전적 및 약리학적 조작의 효과를 정량적으로 평가할 수 있습니다.

발작과 같은 활동을 분석하고 운동을위한 저가의 방법

더 많은 동영상 탐색