Name: 마우스 모델에서 하대 정맥 끼어 이식의 주입 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 12 min 39 s
Description: 학습하세요 조직 공학 혈관 이식편에서 신생 조직 형성과 협착 발달의 세포 및 분자 메커니즘을 마우스 모델을 사용하여 연구하는 방법을. 이 기법은 이식편 성능과 조직 통합 이해에 기여합니다.

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이 작품은 CKB에 NIH (RO1 HL098228)에서 교부금에 의해 부분적으로 지원되었다.

참고 : 모든 동물의 절차는 전국 어린이 병원 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 1. 이식 제조 <ol><li> 흄 후드 아래에 2 ㎖ 디 옥산에 100 ㎎의 P (LA / CL)을 추가하여 ε-카프로 락톤 및 L-락 타이드 공중 합체 P (LA / CL) 솔루션을합니다. 소용돌이에 솔루션을 배치하고 완전히 용해 1.5 시간 동안 지속적으로 혼합한다. </li><li> 한편, (PGA)가 냉장고에서 느껴지는 폴리 글리콜 산의 시트를 제거하고 몇 가지 5 × 8mm 섹션을 잘라. 또한 단지 필터 위의 0.1 μL 피펫의 끝을 잘라. </li><li> 피펫 팁의 선단에 19 G 바늘 (1.5 길이)를 삽입하고 PGA 마이크로 집게를 사용하여 바늘 주위 느꼈다 포장. </li><li> 19 G 바늘이 그것으로 삽입하면서 조심스럽게, 루멘 무딘 18 G 바늘을 사용하여, 근위부보다는 똑바로입니다 피펫 팁의 선단에 펠트를 밀어 넣습니다. </li><li> 피펫40 μL의 P (CL / LA)의 상단에서 피펫 팁에 솔루션을 제공합니다. PGA 솔루션 펠트 포화. 그런 다음 피펫 분배기를 사용하여 공기 방울을 밀어. 필요한 경우이 과정을 반복합니다. </li><li> 장소 50 ML 튜브에 이식하고 20 분 동안 -80 ° C 냉동고에 넣습니다. 바늘의 머리가 아래로 얼굴을 확인합니다. </li><li> 동결 건조기에 튜브를 전송하고 24 시간 동안 진공 청소기로 청소. 공기 흐름을 가지고 튜브의 뚜껑을 열 수 있는지 확인합니다. </li><li> 이식을 가지고 바늘에서 제거합니다. ~ 5mm 섹션을 떠나는 이식의 양쪽 끝을 잘라 자신의 모양을 유지하기 위해 바늘에 다시 넣어. 데시 케이 터에 이식을 유지합니다. </li><li> 바이오 안전성 후드 O / N 전에 세포 파종에 UV 빛의 밑에 발판을 놓으십시오. </li></ol> 2. 골수 단핵 세포 수확 및 절연 <ol><li> 케타민 / 자일 라진 과다 복용 (케타민, 200 ㎎ / ㎏과 자일 라진, 20 ㎎ / ㎏)와 쥐를 안락사. </li><li> 제거 뼈 (대퇴골의10 CC의 RPMI와 페트리 접시에 10 이식 착상과 장소에 3 마우스의 개발 경골). 3 CC의 RPMI로 새로운 배양 접시에 25 G 바늘과 주사기를 사용하여 뼈와 플러시 골수의 양쪽 끝을 잘라. 15 CC 튜브에 골수 및 RPMI 솔루션을 수집하고 BM의 나머지를 수집하기 위해 추가로 2 CC의 RPMI와 페트리 접시를 씻으십시오. </li><li> 샘플 (5 ~ 10 μL)를 가지고 자동 셀 카운터 또는 혈구를 사용하여 셀을 계산합니다. 그 결과를 기록한다. </li><li> 15 CC 원심 분리기 튜브에 5 CC의 피콜을 넣고 골수 RPMI 솔루션을 추가합니다. 피콜 믹싱 않도록 매우 조심스럽게 용액을 추가. </li><li> 24 ° C에서 &quot;NO 브레이크&quot;30 분 동안 528 XG에 원심 분리기 </li><li> 상위 핑크 레이어를 제거합니다. MNC 층 인 중간 클리어 층의 그림 1, 수집하고, PBS 1:1와 희석. </li><li> 24 ℃에서 10 분 동안 528 XG에서 희석 MNC 솔루션을 원심 분리기 </li><li> 뜨는 디를 제거류트 5 ㎖의 PBS와 펠렛. </li><li> 24 ℃에서 10 분 동안 528 XG에서 펠렛 솔루션을 원심 분리기 </li><li> 뜨는을 제거합니다. RPMI (~ 200 μL)의 적절한 볼륨으로 펠렛을 희석. </li><li> 5 ~ 10 ㎕의 샘플을 가지고 자동 셀 카운터 또는 혈구를 사용하여 셀을 계산합니다. 그 결과를 기록한다. 한 번 더 세고 셀을 반복하고 평균 기포 수를 계산한다. </li><li> RPMI를 사용 μL 1,000,000 cells/10에 세포 농도를 희석. </li></ol> 3. 셀 시드 <ol><li> 5 분 luminally 5 μL RPMI를 추가하여 Prewet 발판은 다음 RPMI를 제거합니다. </li><li> 비계 루멘 단계 2.12에서 RPMI에 10 ㎕의 골수 유래 모노 핵 세포를 추가하고 10 분은 세포가 발판에 첨부 할 수 있도록 기다립니다. </li><li> 1cm 길이로 19 G 바늘을 잘라 발판의 모양을 유지하기 위해 발판의 루멘에 바늘을 넣어. 24 웰 플레이트에 샘플을 놓습니다. &lt;/ 리&gt; <li> 물론 각 1,000 μL RPMI를 추가하고 인큐베이터에서 O / N을 품어. </li></ol> 4. 이식 주입 <ol><li> 수술 전에 수술 도구를 압력솥 : 미세 가위, 배 마이크로 집게, 배 미세 혈관 클램프, 1X 클램프 적용 집게, 1X 마이크로 니들 홀더, 1X 봄 가위, 1X 트랙터를 1x는. </li><li> 여성 6~8주 된 C57BL / 6은 조직 공학 혈관 이식받는 사람으로 사용됩니다. 케이지에서 마우스를 제거하고 무게를 달고, 다음 케타민 / 자일 라진 칵테일 (케타민, 100 ㎎ / ㎏과 자일 라진, 10 ㎎ / ㎏)와 복부의 오른쪽 아래 사분면에 복강 내 주사를 통해 마취. 케토 프로 펜 (5 ㎎ / kg, IP)은 미리 마취 진통제로서 사용된다. </li><li> 이야기 핀치에 의해 진정 작용의 수준을 확인한 후 복부 머리를 클립. 멸균 안과 연고와 함께 눈에 기름칠을하고, 패드에 지느러미 드러 누움 위치에 마우스를 놓습니다. 베타 딘, 알코올 패드로 복부를 소독. 공동멸균 드레이프와 마우스를 버전 만 절개 영역을 노출합니다. </li><li> 치골 지역에 xyphoid 아래에서 중간 선 개복술의 절개를하고, 자체 유지 견인기를 삽입합니다. 식염수를 적신 거즈에 내장을 감싸십시오. 퉁명스럽게 신동맥 대동맥과 대정맥을 정의합니다. </li><li> 근위 및 대동맥과 대정맥의 말단 양쪽에 두 개의 미세 혈관 클램프를 놓고 다음 퉁명스럽게 대정맥 선조 사법 대정맥에서 대동맥을 구분합니다. 필요한 경우, 테이퍼 바늘에 10-0 모노 필라멘트 봉합사로 복부 대동맥 가지를 결찰. </li><li> 멸균 10-0 봉합사를 이용하여 문합을 종료하는 근위 및 원위 끝 하대 정맥 삽입술 이식을 이식. 마우스의 해부학에 따라 이식, 보통 1~2밀리미터을 낸다. 근위 및 원위 끝 모두에서 하나의 스티치 이식을 안전하고 이식의 다른 측면에서 4 ~ 5 stiches와 함께 지속적으로 봉합하기 시작합니다. 앞면을 마친 후, 클램프 및 이식을 플립다른 측면 및 그래프트의이면을 봉합. 주입하는 동안, 급성 혈전증을 방지 자주 헤파린 용액으로 그래프트 플러시. </li><li> 근위 클램프를 제거하고 국소 흡수 멸균 지혈 에이전트를 적용하여 출혈을 제어 할 수 있습니다. 출혈이 완전히 정지 할 때, 말초 클램프를 제거하고 출혈 같은 방법으로 제어 할 수 있습니다. 이식을 통해 확인 혈액 흐름을합니다. </li><li> 포함 된 스레드 바늘로 6-0 블랙 폴리 아미드 모노 필라멘트 봉합사를 사용하여 두 층으로 복부 근육과 피부를 닫습니다. </li><li> 0.5 ㎖의 생리 식염수를 피하 주사와 마우스가 완전히 이동할 때까지 온난화 패드 복구 새장에 마우스를 놓습니다. 복구시, 종이 침구 새 케이지에 마우스를 반환합니다. 48 시간 동안 진통제 (이부프로펜, 30 ㎎ / ㎏, 식수를) 제공합니다. </li></ol>

<ol><li>Heart Association, A. merican <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+Disease+and+Stroke+Statistics%E2%80%942012+Update%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart Disease and Stroke Statistics—2012 Update.</a> Circulation. 125, (2012).</li>
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<li>Mirensky, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+arterial+grafts%3A+long-term+results+after+implantation+in+a+small+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered arterial grafts: long-term results after implantation in a small animal model.</a> Journal of Pediatric Surgery. 44, 1127-1133 (2009).</li>
<li>Lee, Y. U., Naito, Y., Kurobe, H., Breuer, C. K., Humphrey, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biaxial+mechanical+properties+of+the+inferior+vena+cava+in+C57BL%2F6+and+CB-17+SCID%2Fbg+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Biaxial mechanical properties of the inferior vena cava in C57BL/6 and CB-17 SCID/bg mice.</a> Journal of Biomechanics. 46, 2277-2282 (2013).</li>
</ol>

저자가 공개하는 게 없다.

TEVG의 마우스 모델은 neotissue 형성 및 협착의 개발의 세포 및 분자 메커니즘을 연구 할 수있는 유용한 도구입니다. 시드 BM-MNC는 이식 11 씨앗을 품고 세포의 두 조직 학적 및 SEM 이미지에 나타내었다. 세포 파종 효율은 DNA 분석 7을 사용하여 표시 하였다. 이 모델 시스템을 사용하여, 우리는 세포 시딩은 우리의 인간 임상 시험 3에 고장 차 모드였다 TEVG 협착의 개발의 발생률을 감소 시킨다는 것을 보여 주었다. 시드 세포는 빠르게 그들이 주변 분비 메커니즘 8,12를 통해 그 효과를 발휘 것을 제안, TEVG에서 사라졌다. 또한 neovessel 형성이 면역 매개 재생 과정이며, neovessel은 비계의 내강 표면을 따라 이웃 혈관 벽의 혈관 세포 (EC 및 SMC)의 증식에서 발생한다는 것으로 나타났다. 또한, 정상 대 식세포 침윤, 혈관 neotissue 형성에 필수적이다이 과정이 과도한 경우이지만 TEVG 협착 <...

선천성 심장 결함이 미국에서 출산의 약 8 %에 영향을 미치는 심각한 상황이다. 선천성 심장 결함 또는 2.4 1,000 명당 출생과 그 유아의 약 25 %가 자신의 수명의 첫 해에 침략적인 치료를 필요로합니다. 선천성 심장 질환에 대한 가장 효과적인 치료법은 재건 수술이다. 불행하게도, 현재 혈관 도관의 사용에서 발생하는 합병증은 수술 후 사망률과 사망의 가장 중요한 원인입니다. 이 문제를 해결하기 위해, 우리는 임상 2에 대한 첫 번째 조직 공학 혈관 이식 (TEVGs)를 개발했다. TEVGs은자가 골수 파생 된 단핵 세포 (BM-다국적 기업)의 시드 및 선천성 심장 수술을위한 정맥 도관으로 이식 된 생분해 성 폴리 에스테르 튜브로 구성되었다. 결과는 후속 1-3 세에 우수한 개통 률을 보였으 나 협착의 중요한 발생률 <s&gt; 3,4입니다. 그것은 neotissue 혈관 형성 및 TEVG 협착의 개발을 기본 메커니즘을 더 잘 이해가 필요했던 것이 분명했다. 더 TEVGs의 개발 및 협착증 전개 메커니즘을 이해하기 위해, 양의 모델은 5,6를 생성 하였다. 이 모델에서, TEVGs 성공적으로 생활 용기로 변환 및 형태와 기본 정맥의 기능 모두에서 유사했다. 큰 동물 모델의 사용은 TEVGs의 임상 사용을 주었 중요한 사전 임상 정보를 제공하는 좋은 첫 번째 단계였다. 그러나, 대형 동물 모델을 사용하여 TEVGs 혈관 neotissue 형성의 세포 및 분자 메커니즘의 완전한 이해로 인해 종의 특정 분자 도구의 부족으로 인해 혈관 세포의 표현형의 분자 특성의 한계로 제한됩니다. 이러한 단점을 극복하기 위해, TEVGs의 쥐 모델은 마우스 유전학의 급속한 발전과 자신의 광범위한 molecula의 이유에 의해 개발되었다단축 시간 규모의 추가 장점과 연구의 특성화. 쥐 IVC의 개재 모델을 충실하게 큰 동물과 인간에서 발생 neovessel 형성 과정을 효과적으로 요약,하지만 훨씬 짧은 시간 코스 6-9 이상. 여기에, 생분해 성 지지체를 사용하여 작은 규모의 이식 제조를위한 상세한 프로토콜, BM-MNC 수확 및 격리, 발판에 BM-MNC 파종 및 쥐 모델 이식 주입을 설​​명했다.

<table><tbody><tr><td>폴리글리콜산 (PGA) 펠트</td><td>Biomedical Structures</td><td></td><td>Custome은</td></tr><tr><td>Pipet 팁, 0.1-10 &mu를 주문했습니다. 엘&nbsp;</td><td>Fisher Sientific</td><td>02-707-456</td><td></td></tr><tr><td>동결건조기&nbsp;</td><td>Labconco</td><td>7070020</td><td></td></tr><tr><td>RPMI medium 1604</td><td>Gibco</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>페트리 디쉬</td><td>BD</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>24-웰 플레이트</td><td>Corning</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>15 cc 튜브&nbsp;</td><td>BD</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>Sigma</td><td>10831-100ml</td><td>'Histopaque'라고도 함</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Littauer 뼈 절단기 4.5" 스트레이트</td><td>Roboz</td><td>RS-8480</td><td>BM 수확</td></tr><tr><td>집게용 4.5"</td> <td>Roboz</td><td>RS-8120</td><td>BM 수확</td></tr><tr><td>가위용 4.5"</td> <td>Roboz</td><td>RS-5912</td><td>BM 수확</td></tr><tr><td>현미경</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J (H-2b), 여성</td><td>Jackson Laboratories</td><td>664</td><td>8-12 주</td></tr><tr><td>케타민 염산염 주입</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-2053</td><td></td></tr><tr><td>자일라진 멸균 용액</td><td>Akorn Inc.</td><td>NADA# 139-236</td><td></td></tr><tr><td>케토프로펜</td><td>포트 닷지 동물 건강</td><td>NDC 0856-4396-01</td><td></td></tr><tr><td>이부프로펜</td><td>정밀 투여</td><td>NDC 68094-494-59</td><td></td></tr><tr><td>헤파린 나트륨</td><td>사젠트 Pharmaceticals</td><td>NDC 25021-400</td><td></td></tr><tr><td>식염수(멸균 0.9% 염화나트륨)</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-0138-22</td><td></td></tr><tr><td>0.9 % 염화나트륨 주입</td><td>(주)호스피라</td><td>NDC 0409-4888-10</td><td></td></tr><tr><td>바셀린 안과 연고</td><td>Dechra 수의학 제품</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>요오드 준비 패드</td><td>Triad Disposables, Inc.</td><td>NDC 50730-3201-1</td><td></td></tr><tr><td>알코올 준비 패드</td><td>McKesson Corp.</td><td>NDC 68599-5805-1</td><td></td></tr><tr><td>코튼 팁 애플리케이터</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-118</td><td></td></tr><tr><td>파인 시저</td><td>FST</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 애드슨 겸</td>자 <td>FST</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>클램프 적용 겸</td>자 <td>FST</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>S & T 혈관 클램프</td><td>FST</td><td>00396-01</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위</td><td>FST</td><td>15008-08</td><td></td></tr><tr><td>Colibri 견인기</td><td>FST</td><td>17000-04</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 집게</td><td>FST</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 - 미세 집게</td><td>FST</td><td>11274-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5/45 집게</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Tish 바늘 홀더/ 겸자</td><td>Micrins</td><td>MI1540</td><td></td></tr><tr><td>블랙 폴리아미드 모노필라멘트 봉합사, 10-0</td><td>AROsurgical Instruments Corporation</td><td>TI638402</td><td>이식편</td></tr><tr><td>블랙 폴리아미드 모노필라멘트 봉합사, 6-0</td><td>ARO외과 기구</td><td>SN-1956</td><td>근육 및 피부 폐쇄용</td></tr><tr><td>부직포 스폰지</td><td>McKesson Corp.</td><td>94442000</td><td></td></tr><tr><td>흡수성 지혈</td>제 <td>Ethicon</td><td>1961</td><td></td></tr><tr><td>1 ml 주사기</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>3 ml 주사기</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>10 ml 주사기</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>18 G 1.5 in, 바늘</td><td>BD</td><td>305190</td><td></td></tr><tr><td>25 G 1 in, 바늘</td><td>BD</td><td>305125</td><td></td></tr><tr><td>30 G 1 in, 바늘</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>온수 순환기</td><td>Gaymar</td><td>TP-700</td><td></td></tr><tr><td>온난화 패드</td><td>Gaymar</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>트리머</td><td>Wahl</td><td>9854-500</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스 모델에서 하대 정맥 끼어 이식의 주입

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

골수 단핵 세포 (골수 세포)의 시드 생분해 성 지지체는 종종 선천성 심장 기형을 치료하는 재건 수술에 사용됩니다. 장기 임상 결과는 협착의 중요한 발생으로, 그러나, 우수한 개통 률을 보였다. 혈관 neotissue 형성의 세포 및 분자 메커니즘을 조사하고 조직 공학 혈관 이식 (TEVGs)에 협착 개발을 방지하기 위해, 우리는 약 1mm 내경 이식 마우스 모델을 개발했다. 첫째, TEVGs는 폴리 글리콜 산 부직포로 제조 생분해 성 관 비계 조립 하였다는 ε-카프로 락톤 및 L-락 타이드 공중 합체로 코팅 된 메쉬 느꼈다. 지지체는 그 후, 동결 건조기에 넣고 24 시간 동안 진공, 세포 시딩까지 데시 케이 터에 보관 하였다. 둘째, 골수 공여 쥐로부터 수거하고 단핵 세포는 밀도 구배 원심 분리에 의해 분리 하였다. 셋째, 약 백만 세포되었습니다발판에 씨앗을 품고 및 O / N을 배양 마지막으로, 시드 발판은 다음 C57BL / 6 마​​우스의 신동맥 대정맥 개재 이식으로 이식되었다. 이식 이식은 혈전 색 전성 합병증 또는 동맥류 형성의 증거도없이 우수한 개통 (&gt; 90 %)을 보여 주었다. 이 쥐 모델은 이해에서 우리를 돕고 TEVG에 neotissue 형성의 세포 및 분자 메커니즘을 정량화합니다.

TEVG 주입의 개략도가도 1에 도시된다. 골수 공여 마우스로부터 수확하고, 모노 핵 세포 밀도 원심 분리를 이용하여 분리 한 후 생분해 성 지지체 상에 시드. 시드 발판은 O / N을 배양하고 하대 정맥 삽입술 이식으로받는 마우스에 이식했다. 도 2는 P-PGA (CL / LA) 지지체의 주사 전자 현미경을 도시한다. 내부 직경은 약 1mm이고 벽 두께는 약 0.17 mm이었다. 공률은 78.5 % 였고, 기공 크기는 45.4 ± 17.6 μm의되었습니다 의미합니다. C57BL / 6 마우스의 IVC에 개재 TEVG의 총 이미지가 주입 (A) 및 주입 (B) 후에 2 주 후에 그림 3. 오른쪽에 표시됩니다. (C)는 비교 네이티브 IVC의 총 ...

세포 및 분자 neotissue 형성에 대한 우리의 지식을 개선하기 위해, TEVG의 쥐 모델은 최근에 개발되었다. 이식은 C57BL / 6 마​​우스의 신동맥 대정맥 개재 이식으로 이식되었다. 이 모델은 우리의 임상 연구에서 달성 된 것과 유사한 결과를 얻을 수 있지만, 훨씬 단축 된 시간 과정을 통해.

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

이 절차의 전반적인 목표는 조직 공학 혈관 이식편의 신생 조직 형성 및 협착 발생의 세포 및 분자적 기전을 조사하는 것입니다. 먼저, 폴리그리콜산 부직포 펠트 메쉬에 epsilon-caprolactone과 L-lactide 공중합체를 코팅하여 생분해성 관형 스캐폴드를 조립합니다. 다음 단계는 골수를 채취하고 밀도 구배 원심분리를 통해 단핵구를 분리하는 것입니다.그 후 약 1 million 개의 세포를 스캐폴드에 접종하고 하룻밤 동안 배양합니다. 마지막 단계는 세포가 접종된 스캐폴드를 하대정맥 간치환 이식편으로 이식하는 것입니다. 최종적으로, 면역조직화학 분석을 통해 조직 공학 혈관 이식편 내의 세포 침투와 세포외 기질 침착 결과를 확인할 수 있습니다.이 기술의 목적은 협착의 형성 원인과 조직 공학 혈관 이식물을 더 잘 이해하고, 이러한 정보를 활용하여 더 나은 조직 공학 혈관 이식물을 설계하는 것입니다. 임상 연구 결과, 조직 공학 도관을 이식받은 환자의 거의 4분의 1에서 협착이 발생했음을 확인했습니다. 저희의 목표는 이러한 문제를 해결하는 것입니다.이 방법은 선천성 심장 질환에 적용할 수 있을 뿐만 아니라, 결장 우회술이나 다른 정맥 특성을 위한 도관 형성술에도 적용될 수 있습니다. 일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 사람들은 정맥 삼투 과정 중에 요구되는 정밀한 미세 수술 기법으로 인해 어려움을 겪었습니다. 저희는 인체 임상 시험에 사용된 조직 공학 혈관 이식편에서 새로운 조직 형성을 더 잘 특성화하고 조직 내 협착 발달을 방지할 방법을 찾는 과정에서 처음으로 이 방법에 대한 아이디어를 얻었습니다.먼저 epsilon cap lactone과 L Lactide 공중합체를 혼합하여 섞기 시작합니다. 완전히 용해되기까지 60분에서 90분이 소요됩니다. 그동안 냉동고에서 polyglycolic acid 시트를 꺼내 5 x 8 mm 크기의 조각을 여러 개 절단합니다.다음으로, 10 µL 피펫 팁의 필터를 잘라내고 원위단에 19 gauge 바늘을 삽입합니다. 핀셋을 사용하여 폴리글리콜산 펠트 조각을 바늘 주위에 감쌉니다. 그런 다음 끝이 뭉툭한 18 gauge 바늘을 사용하여, 19 gauge 바늘을 중심으로 펠트를 피펫 팁의 원위단 내부로 조심스럽게 밀어 넣습니다.공중합체 용액이 준비되면, 폴리글리콜산 펠트를 용액으로 포화시키기 위해 피펫 팁 상단에 40 µL를 넣습니다. 피펫터를 사용하여 모든 기포가 제거될 때까지

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마우스 heterotopic 심장 이식 모델은 거부하고 면역 반응의 메커니즘을 연구를위한 중요한 방법으로 많은 수사관에 의해 입증되었습니다. 그러나, 관련 기술은 여전히​​ 도전하고 있습니다. 표준 기술을 수정하여 우리는 1000 개 이상의 이식 성공을 있었다.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

조직 공학 심장 판막에 neotissue 형성 및 협착증 개발을 기초 세포 및 분자 메커니즘을 이해하기 위해, 이소성 심장 판막 이식 뮤린 모델이 개발되었다. 폐동맥 판막은 이소성 심장 이식 기술을 사용하여 수신자에게 이식 하였다.

이소성 심장 이식 마우스 모델을 사용하여 폐동맥 판막 이식

커프 기술은 기술적으로 어려운 작은 혈관의 봉합 문합을 피함으로써 마우스의 이소성 경추 심장 이식 모델을 단축하고 용이하게 합니다. 이 비디오 백서에 표시된 기술적 세부 사항을 통해 연구자는 실험실에서 이 모델을 설정할 수 있습니다.

마우스의 이소성 자궁 심장 이식

이 비디오는 쥐의 정맥 삽입 수술 후 근육 내막 증식증의 발달을 연구하는 모델을 보여줍니다.

정맥 삽입 위치 모델 : 바이 패스 이식 개통을 연구하기위한 적절한 모델

본 프로토콜은 정맥 이식편을 사용하여 정맥 혈관 화 수술 후 정맥 심상 증식을 감쇠하는 전략을 개발하기 위한 동맥 혈압에 정맥을 복종시킴으로써 정맥 친혈증을 실험적으로 만드는 것을 목표로 합니다.

정맥 이식편을 사용하여 동맥 혈압하에서 인티맥 증식을 평가하는 재혈관 외과를 모방한 토끼 정맥 중개 모델

이성애 복부 마우스 심장 이식 모델에서 혈액 회로 재건을 위한 새로운 기술이 입증된다.

복부 마우스 심혼 이식 모형에 있는 혈액 회로 재건

마우스 심장 이식 모델은 이식 면역학을 연구하기 위한 귀중한 연구 도구입니다. 본 프로토콜은 층류 혈류를 허용하기 위해 수혜자의 총 경동맥 및 기증자의 폐동맥 트렁크에 커프를 배치하는 것을 포함하는 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식을 자세히 설명합니다.

혈관 수갑을 이용한 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식

이 프로토콜은 마우스 orthotopic 간 이식에서 커프 기술을 사용하여 혈관 재건을 위한 기술 정보를 제공합니다.

Mouse Orthotopic Liver Transplantation에서 Cuff Technique을 사용한 혈관 재건

여기에서는 커프 기법을 사용하여 조직 공학 혈관 이식편을 마우스 경동맥에 이식하기 위한 프로토콜을 제시하여 혈관 조직 재생 메커니즘을 조사하는 데 적합한 동물 모델을 제공합니다.

커프 기법을 통한 마우스 경동맥에 조직 공학 혈관 이식편 이식

우리는 이종 소성 후다리에서 목으로의 혈관 형성 종합 동체이식 마우스 모델을 제시합니다. 이 초미세수술 프로토콜은 0.3-0.5mm 혈관 문합을 포함하며, 나일론 필라멘트 유도와 정맥 커핑을 통합합니다. 이 연구는 관성 합성 동체 이식에서 내성, 허혈-재관류 손상, 면역학적 기전에 관한 번역 연구를 위한 신뢰할 수 있는 기반을 제공합니다.

쥐에서의 이소성 하지에서 목으로의 이식: 혈관 복합 동체이식의 초미세수술 모델

학습하세요 조직 공학 혈관 이식편에서 신생 조직 형성과 협착 발달의 세포 및 분자 메커니즘을 마우스 모델을 사용하여 연구하는 방법을. 이 기법은 이식편 성능과 조직 통합 이해에 기여합니다.

마우스 모델에서 하대 정맥 끼어 이식의 주입

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