Name: 차 쥐 신생아 심근 라이브 셀 이미징은 아데노 바이러스 다음과 렌티 바이러스 형질 도입은 공 초점 현미경 디스크를 회전시키는 사용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 36 s
Description: 배우세요 차 쥐 신생아 심근세포의 라이브 셀 이미징 방법을 공 초점 회전 디스크 현미경을 사용하여 렌티바이러스와 아데노바이러스 형질도입 후 단백질 동역학을 실시간 관찰하는 기술입니다.

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렌티바이러스 포장에 대한 조언을 해주신 Dr. Alengo Nyamay'antu와 Dr. Ilse Timmerman에게 감사드립니다. 이 연구는 미국심장협회(American Heart Association) 과학자 개발 보조금 10SDG4170137의 지원을 받습니다.

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신생아 쥐에서 분리 된 주요 심근 긴 체외에서 심근의 기능을 연구하는 데 사용되었습니다. 이 프로토콜은 처음 4 ° C에서 트립신 O / N로 소화 한 후 정제 된 콜라게나, 두 단계의 효소 소화 방법을 사용하여 쥐의 새끼에서 신생아 심근의 분리하는 방법을 설명합니다. 정제 된 콜라겐 분해 공정을 이용하는 하나의 장점은 효소의 동일 등급 모두 아이솔레이션을 위해 사용된다는 점이다. 따라서, 고립 셀의 품질과 양을 실험하는 실험에서 일치한다. 세포 배양의 형질 도입의 효율이 높은 관련 실험에 필요한 경우, 아데노 바이러스와 연관된 높은 형질 도입 효율을 고려할 때, 아데노 바이러스를 사용하는 것이 더 낫다. 높은 수준의 형질 도입이 필요하지 않은 경우, 렌티 바이러스 벡터가 사용될 수있다. 아데노 바이러스 또는 렌티 바이러스 벡터를 사용하여 어느 하나의 옵션을 갖는 것은 쉽게 적절한 transd를 실현할 수있다유전자의 다른 유형에 대한 uction과 표현 수준....

차 쥐 신생아 심근 긴 시험관 1에 심근 기능을 조사하는 데 사용되었다. 그들은 몇 가지 잘 설립 방법 2-4으로 쥐 새끼에서 분리하기 쉽다. 가장 일반적인 방법은 콜라게나 또는 이전의 세포 격리에 심장의 결합 조직을 소화 트립신을 사용합니다. 연구원은 또한 성인 설치류 5-8뿐만 아니라 신생아 마우스 9,10에서 심근 세포를 분리하는 방법을 개발했습니다. 이 프로토콜은 두 단계의 효소 분해 절차를 이용하는, 신생아 래트 새끼로부터 심근 세포를 분리하는 방법을 설명한다. 트립신은 처음 4 ° C에서 O / N을 사용하고, 37 ℃에서 다음 정제 된 콜라게나된다 4 ° C에서 트립신 O / N과 심장 조직의 배양은 따뜻한 효소 용액 2 연속 배양을 사용하는 방법에 비해 수확 세포에 필요한 단계를 줄일 수 있습니다. 또, 정제 된 CO를 이용하여llagenase 오히려 조 효소보다는, 로트 간 변동 따라서 향상된 재현성을 제공하고, 제거 할 수있다. 특정 단백질의 기능 연구는 종종 아데노 11-13 및 / 또는 14-16 렌티 바이러스를 이용하여 단백질 발현 시스템을 사용한다. [주의 메시지] 바이러스 생산 및 조작은 NIH의 지침에 따라 수행되어야한다. 아데노 바이러스는 숙주의 게놈에 통합되지 않습니다. 이는 분할 셀과 비 분할 세포를 포함하여 대부분의 세포 유형뿐만 아니라 일차 전지 및 확립 세포주에서의 형질 도입 매우 높은 효율을 갖는다. 이 아데노 바이러스 유전자 발현에 대한 신뢰할 수있는 벡터합니다. 아데노 바이러스 벡터에 의해 부호화 된 단백질의 높은 수준의 전달 다음 48 시간 내에 개발하고, 그들은 몇 주 동안 17 일을 지속 할 수있다. 그러나, 단백질 발현 아데노 바이러스를 사용하는 하나의 단점은 재조합 ADE의 개발novirus은 복잡하고 시간 소모적이다. 많은 연구자들은 재조합 유전자 발현에 lentiviruses에 의존 한 이유 단점은 부분적으로 설명합니다. 아데노 바이러스 구조와는 달리, 렌티 바이러스의 구조를 생성하는 것은 빠르고 쉽습니다. lentiviruses 전체적으로 모두 분할 및 비 - 분할 세포에서 아데노 바이러스 형질 도입의보다 낮은 효율을 가지고 있지만, 그들은 숙주 게놈에 통합 않는다. 결과적으로, 형질 도입 유전자의 발현은 아데노 바이러스에 비해 lentiviruses에 안정됩니다. 때문에, 현미경의 분야에서의 기술 진보로, 그것은 재조합 단백질을 발현하는 세포의 생균 이미지를 캡처하는 것이 훨씬 쉽다. 이도 취득 비디오 레이트 속도로 진정한 보유하고 있습니다. 이 조사는 관심의 단백질의 특정 변경이 기능적으로 실시간으로 세포에 영향을 미칠 방법을 결정 할 수 있습니다. 공 촛점 회전 디스크 현미경은 리브을위한 최적의 기술을 만드는 몇 가지 주요 기능을 가지고 있습니다전자 이미징 셀 (18, 19). 동시에 점 스캔 공 초점 현미경보다 훨씬 적은 레이저 파워를 이용하면서 요꼬 회전 디스크는, 훨씬 더 빠른 이미지 수집을 허용한다. 이러한 특징 모두는 레이저가 시료에 동시에 통과하는 다수의 구멍을 포함 촛점 스피닝 디스크에 기인한다. 획득 동안, 디스크 자체가 신속하고 지속적으로 18-20을 회전시킨다. 현미경의 자동 초점 시스템을 사용함으로써, 안정된 포커스는 장기간에 걸쳐 유지된다. 이 연구원은 잘 초점을 맞춘 라이브 셀 이미지를 촬영할 수 있습니다. 획득 된 영상을 동영상 파일로 재생됩니다. 이미지는 그러한 ImageJ에 21,22 피지 23, 또는 다른 상업적으로 이용 가능한 소프트웨어로 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 분석된다.

<table><tbody><tr><td>참수용 가위 1</td>개 <td>WPI</td><td>501749</td><td>사용 전 오토클레이브</td></tr><tr><td>1개 심장 격리 및 다지기를 위한 가위 1</td>개 <td>WPI</td><td>14393</td><td>사용 전 오토클레이브</td></tr><tr><td>2개의 가는 집게(Dumont No. 5)</td><td>Sigma</td><td>F6521</td><td>사용 전 오토클레이브</td></tr><tr><td>3개 멸균된 10cm 플라스틱 접시</td><td>Sigma</td><td>CLS430165</td><td>심장 분리용</td></tr><tr><td>3.5cm 유리 바닥 배양 접시</td><td>MatTek</td><td>P35G-1.5-20-C</td><td>미래의 살아있는 세포 이미징을 위한 심근세포의 최종 도금용. ibidi의 마이크로 디쉬는 허용되는 대안입니다.</td></tr><tr><td>3.5cm 유리 바닥 배양 접시</td><td>MatTek</td><td>P35G-0.17-14-C</td><td>TIRF 또는 고해상도 이미지</td></tr><tr><td>에탄올 용액, 물 중 70%(v/v)</td><td>Sigma</td><td>E7148</td><td></td></tr><tr><td>2% 젤라틴</td><td>Sigma</td><td>G1393</td><td></td></tr><tr><td>1 멸균 10cm 플라스틱 접시</td><td>Sigma</td><td>CLS430165</td><td>trypsinization</td></tr><tr><td>알루미늄 호일</td><td>모든 브랜드</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sigma</td><td>P7543</td><td></td></tr><tr><td>2 개의 10cm 플라스틱 세포 배양 접시</td><td>Sigma</td><td>CLS430165</td><td>선택</td></tr><tr><td>Autopipette</td><td>Drummond Scientific</td><td>4-000-300</td><td>trituration 용</td></tr><tr><td>세포 계수기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cellometer, 자동 세포 계수기</td><td>nexcelom</td><td></td><td>세포 검사 및 계수</td></tr><tr><td>현미경 및 혈구 분석기</td><td>모든 브랜드</td><td></td> 세포를 <td>확인하고 계산하려면</td></tr><tr><td>Trypan 블루 솔루션, 0.4 %</td> <td>invitrogen</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>CO2 인큐베이터</td><td>Sanyo</td><td>MCO-19AIC</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이팅 궤도 쉐이커</td><td>시그마</td><td>Z673129</td><td>37 °C에서 콜라겐 분해 효소로 심장 조직을 흔들기 위해; C 170-200 rpm에서</td></tr><tr><td>10 mg/ml BrdU 용액</td><td>BD Pharmingen 550891</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM, 고포도</td>당 <td>인비트로겐</td><td>41965039</td><td>프로토콜에 표시된 대로 배지를 혼합하고</td></tr><tr><td>MEM</td><td>invitrogen</td><td>31095029</td><td>프로토콜에 표시된 대로 배지를 혼합하고 사용 전에 데우</td></tr>는 <tr><td>Fetal bovine serum</td><td>invitrogen</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신(10,000 U/ml)&nbsp;</td><td>invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Section 2 Lentiviral transduction</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3 Packaging plasmids</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>pMDLg/pRRE</td><td>Addgene</td><td>12251</td><td></td></tr><tr><td>pRSV-Rev</td><td>Addgene</td><td>12253</td><td></td></tr><tr><td>pMD2.G</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>렌티바이러스 전달 벡터, pLVX-IRES-Puro</td><td>Clontech</td><td>632183</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM(무혈청 배지)</td> <td>invitrogen</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>트랜스펙션 시약</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>폴리에틸렌이민" Max", (MW 40,000) - 고효능 선형 PEI (자유 염기 형태로 Mw 25,000에 해당)&nbsp;</td><td>Polysciences</td><td>24765-2</td><td>Roche X-tremeGENE 9의 X-tremeGENE 9로 치환 할 수</td></tr> 있으며, <tr><td></td><td>형질 주입 시약으로 PEI를 대체</td>하는 <td>Roche</td><td>6365779001</td></tr><tr><td>Chloroquine</td><td>Sigma</td><td>C6628</td><td>물에 용해시켜 100mM 원액을 만듭니다. 엔도솜 산성화의 억제는 10-100 &mu로 달성 할 수 있습니다. M 클로로퀸.</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>시그마</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Luer-Lok 주사기, 멸균</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>0.45 &mu; m 필터</td><td>Sigma</td><td>F8677</td><td>셀룰로오스 아세테이트 또는 폴리에테르설폰(PES)(저단백질 결합) 필터만 사용하십시오. 니트로셀룰로오스 필터를 사용하지 마십시오. 니트로셀룰로오스는 렌티바이러스 외피의 표면 단백질과 결합하여 바이러스를 파괴합니다.</td></tr><tr><td>헥사디메트린 브로마이드</td><td>시그마</td><td>H9268</td><td>물에 녹여 8mg/ml의 원액을 만든 다음 여과하여 살균합니다.</td></tr><tr><td>폴리에틸렌 글리콜 6,000</td><td>시그마</td><td>81260</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>시그마</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>수산화 나트륨</td><td>시그마</td><td>S5881</td><td></td></tr><tr><td>섹션 3 아데노바이러스 형질도입</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEK 293T 세포</td><td>ATCC</td><td>CRL-11268</td><td></td></tr><tr><td>일부 10cm 세포 배양 접시</td><td>시그마</td><td>CLS430165</td><td></td></tr><tr><td>뚜껑이 있는 96웰 마이크로플레이트, 평평한 바닥, 조직 배양, 멸균</td><td>BD Falcon</td><td>353072</td><td>적정용</td></tr><tr><td>다채널 피펫, 10-100 &mu; l, 8-channel</td><td>eppendorf</td><td>3122 000.035</td><td></td></tr><tr><td>Section 4 Live cell imaging</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spinning disk confocal microspopy</td><td>PerkinElmer</td><td>L7267000</td><td></td></tr><tr><td>온도 조절 챔버</td><td>모든 브랜드</td><td></td> 온도를 <td>37도로 유지하기 위해; C</td></tr><tr><td>A CO2 환경 시스템</td><td>모든 브랜드</td><td></td><td>CO2 농도 유지 선택 최적의</td></tr><tr><td>CO2 독립적인 매체, 글루타민</td><td>invitrogen</td><td>없음 18045-054&nbsp; &nbsp;</td><td>장시간 타임랩스 이미징용</td></tr><tr><td>DMEM, 고포도당, HEPES, 페놀 레드</td><td>인비트로겐</td> 없음 <td>21063-029</td><td>장시간 저속 이미징용</td></tr></tbody></table>

차 쥐 신생아 심근 라이브 셀 이미징은 아데노 바이러스 다음과 렌티 바이러스 형질 도입은 공 초점 현미경 디스크를 회전시키는 사용

Live Cell Imaging of Primary Rat Neonatal Cardiomyocytes Following Adenoviral and Lentiviral Transduction Using Confocal Spinning Disk Microscopy

그들은 쉽게 하나의 절차에 많은 수에서 고립 될 수 있기 때문에 기본 쥐 신생아 심근 세포는 체외 심장 혈관 연구의 기본에 유용합니다. 인해 현미경 기술의 발전으로는 세포에 대하여 최소한의 광독성 우려 실시간으로 세포 사건을 조사하는 목적으로 생균 이미지를 캡처하는 비교적 용이하다. 이 프로토콜은 세포의 특성을 조절하는 렌티 바이러스 및 아데노 바이러스 전달 다음 공 촛점 회전 디스크 현미경을 사용하여 기본 쥐 신생아 심근 세포 라이브 인터벌 영상을 촬영하는 방법에 대해 설명합니다. 바이러스의 2 종류의 애플리케이션이 쉽게 두 개의 다른 유전자에 대한 적절한 전달 속도 및 발현 수준을 달성 할 수있다. 잘 집중 생균 이미지는 오랜 기간 동안 안정을 유지 초점 현미경의 자동 초점 시스템을 사용하여 얻을 수있다. 이 방법을 적용, 외생 적 엔지니어의 기능일차 배양 된 세포에서 발현 에드 단백질은 분석 될 수있다. 또한,이 시스템은 siRNA를 사용을 통해뿐만 아니라 화학 조절제의 유전자의 기능을 검사하는 데 사용될 수있다.

기술, 렌티 바이러스 부호화 EGFP (강화 된 녹색 형광 단백질) 태그 Cx43 (connexin43에) 또는 세포에서 EGFP-태그 된 단백질을 표현하는 데 사용 된 돌연변이 Cx43 (32), 및 아데노 인코딩 FGFR1DN (섬유 아세포 성장 인자 수용체 1 우성 네거티브를 설명하기 위해 ) 세포 33-35에서 FGF 신호를 종료하는 데 사용되었다. 심근 세포의 분리는 다음과 같은 세 가지 일, 절연은 심근 세포에서 EGFP-태그 된 단백질을 표현하기 위해 렌티 바이러스로 형질 도입 하였다. 그런 렌티 바이러스 형질 도입 3 일 후에, 절연 심근 더욱 세포에서 FGF 신호를 제거하기 위해 아데노 인코딩 FGFR1DN 형질 도입 하였다. 형질 도입 된 외래 유전자를 표현하는 세포에 대한 충분한 시간을 허용 한 후, 회전 디스크 공 초점 현미경은 생균 이미지를 캡처하는 데 사용되었다. 획득 된 영상을 동영상 파일로 재생 및 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 분석된다. 자세한 표상에 대...

이 프로토콜은 컨포칼 회전 디스크 현미경을 사용하여 렌티바이러스 및 아데노바이러스 형질도입 후 1차 쥐 신생아 심근세포를 사용하여 살아있는 세포를 이미징하는 방법을 설명합니다. 이를 통해 살아있는 심근세포의 세포 과정을 자세히 관찰할 수 있습니다.

Primary rat neonatal cardiomyocytes are useful in basic in vitro cardiovascular research because they can be easily isolated in large numbers in a single ...

본 절차의 전반적인 목표는 공초점 회전 원판 현미경(confocal spinning disc microscopy)을 사용하여 렌티바이러스 및 아데노바이러스 형질전환 후의 쥐 신생아 일차 심근세포의 타임랩스 이미지를 획득하는 것입니다. 이를 위해 먼저 새끼 쥐로부터 심근세포를 채취하여 유리 바닥 배양 접시에 분주합니다. 다음 단계로, 심근세포에 렌티바이러스를 이용해 EGFP 표지 Conexion 43을 형질전환하고, 이어서 아데노바이러스를 이용해 dominant negative fgfr를 형질전환합니다.마지막 단계는 공초점 회전 디스크 현미경(confocal spinning disc microscopy)을 사용하여 타임랩스 이미지를 획득하는 것입니다. 최종적으로 획득한 타임랩스 이미지로 재생되는 영상을 얻을 수 있습니다. 이 영상은 아데노바이러스로 발현된 dominant negative fgfr one 단백질에 의해 세포 조건이 변화된 살아있는 일차 심근세포에서, 렌티바이러스 유전자로 발현된 EGFP 태그 단백질의 분포를 보여줍니다.이 기술의 주요 장점 중 하나는 스피닝 디스크 공초점 현미경을 사용하여, 아데노바이러스 또는 이후 개발된 형질전환에 의해 유도된 유전자 발현에 따른 원하는 조건에서 살아있는 세포의 타임랩스 이미징을 수행할 수 있다는 점입니다. 따라서 이 방법은 신생 쥐 심근세포에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 또한 일차 배양된 생쥐 신생 심근세포, 일차 배양된 생쥐 성체 심근세포 및 기타 배양 세포와 같은 다른 시스템에도 적용될 수 있습니다.일반적으로 현미경 사용이 처음인 연구자들은 시간이 경과함에 따라 발생하는 스테이지의 미세한 밀림 현상으로 인해 초점이 잘 맞은 이미지를 얻는 데 어려움을 겪습니다. 장비의 자동 초점(auto-focus) 기능을 사용하면 안정적인 초점을 유지할 수 있으며, 이를 통해 연구자가 초점이 정확하게 맞은 이미지를 더욱 쉽게 촬영할 수 있습니다. 본 실험 과정에 사용되는 신생아 심근세포는 생후 1~2일 된 쥐 새끼로부터 분리한 것입니다.멸균된 도구를 사용하여 안락사시킨 동물로부터 뛰고 있는 심장을 최대한 빠르게 적출하여, 50 mL 원심분리관에 담긴 30 mL의 냉각된 C-M-F-H-B-S-S 용액에 넣습니다. 일반적으로 총 10개의 심장을 두 개의 50 mL 원심분리관에 나누어 수집하며, 각 관에는 30 mL의 냉각된 C-M-F-H-B-S-S 용액과 함께 5개의 심장

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

성인 심장 myocytes 동물 마음으로부터 격리하고 며칠 동안 교양 수있는 기본 세포입니다. 이 문화가 기간 내에 adenoviral 유전자 전송은 유전자 인코딩 bi​​osensors (GEBs) 또는 형광 융합 단백질을 표현하는 데 사용할 수 있습니다. 두 접근 방법 공촛점 현미경에 의해 세포 조사를 허용합니다.

공촛점 이미징에 대한 분리 및 성인 심장 Myocytes의 유전자 조작

여기에서 우리는 필요한 도구를...

생체 마우스 Neuroepithelium에서 단일 세포 분열의 라이브 영상

기본 마우스 심근 문화는 근원 섬유 조직과 기능의 조사를 위해 중요한 도구 중 하나입니다. 다음 프로토콜은 신생아 마우스 마음에서 차 심근의 격리와 문화를 설명합니다. 얻어진 심근 배양 이후 역학적, 생화학 및 세포 생물학의 다양한 분석을 위해 사용될 수있다.

분리 및 문화 신생아 마우스 심근

신생아 쥐 심근세포의 격리는 시간이 많이 걸리고 예측할 수 없는 절차입니다.  이 연구는 세포를 보다 효율적으로 사용할 수 있도록 하는 신생아 쥐 심근세포의 동결 보존 및 해동 방법을 설명합니다. 해동된 NRCM은 매번 분리를 수행할 필요 없이 다양한 실험에 사용할 수 있습니다.

분리 및 신생아 쥐 심근 세포의 냉동 보존

이 프로토콜은 높은 수율, 순도 및 생존력을 가진 성체 마우스 심근세포의 재현 가능한 분리 및 장기 배양을 위한 단계별 방법을 설명합니다.

격리, 문화 및 성인 마우스 심근 세포의 형질 도입

우리는 온전한 배아 및 출생 후 심장 내부 깊숙한 곳에서 형광 단백질로 표지된 세포를 체적 측정으로 이미지화하는 프로토콜을 설명합니다. 전체 산 염색과 함께 조직 제거 방법을 사용하면 배아 또는 출생 후 심장 내부의 단일 형광 단백질 표지 세포를 명확하고 정확하게 이미지화할 수 있습니다.

영상은 단일 셀 해상도에서 배아 및 출생 후의 마음을 해제

심근세포의 세포주기 변이와 세포 분열을 구별하기 위해 심근세포 핵의 명확한 식별을 위한 Myh6-H2B-mCh 형질전환 마우스와 세포 분열과 세포주기 변이를 구별하기 위한 CAG-eGFP-아닐린 마우스의 두 가지 형질전환 마우스 라인을 사용하는 프로토콜을 제시합니다.

출생 후 심근 세포의 세포주기 변화의 시각화 및 핵의 결정

이 원고는 Gata4, Hand2, Mef2c 및 Tbx5의 레트로바이러스 매개 전달을 사용하여 다양한 재프로그래밍된 심장 아형의 생성 및 정량화를 위한 단계별 프로토콜을 설명합니다.

마우스 배아 섬유 아 세포의 전사 인자 매개 재 프로그래밍에 따라 심근 서브 타입을 평가

여기서, 우리는 성인 마우스와 쥐 심근세포의 격리, 형질 전환 및 장기 문화에 대한 프로토콜을 제시합니다.

성인 마우스및 쥐 심근세포의 격리, 트랜스페션 및 장기 문화

여기에서, 우리는 시간 경과 공초점 현미경에 의해 산후 마우스 망막 외식편에서 신경돌기 형태 형성을 조사하는 방법을 제시한다. 우리는 Cre 의존성 방식으로 막 표적화된 형광 단백질을 발현하는 재조합 아데노-관련 바이러스 벡터를 사용하는 망막 세포 유형의 희소 표지 및 획득 및 이들의 미세 공정에 대한 접근법을 기술한다.

유전자 표적화된 망막 세포 집단의 희소 아데노-연관 바이러스 표지를 이용한 뉴런 수목화의 타임랩스 이미징

분리된 쥐 근세포에서 칼슘(Ca 2+) 과도 측정과 함께 근절 길이 검출을 통한 수축 기능의 측정을 설명하는 일련의 프로토콜이 제시됩니다. 심부전 동물 모델에서의 연구에 대한이 접근법의 적용도 포함됩니다.

설치류 근육 세포에서 심장 수축 기능 장애 및Ca 2+ 과도 현상 분석

배우세요 차 쥐 신생아 심근세포의 라이브 셀 이미징 방법을 공 초점 회전 디스크 현미경을 사용하여 렌티바이러스와 아데노바이러스 형질도입 후 단백질 동역학을 실시간 관찰하는 기술입니다.

차 쥐 신생아 심근 라이브 셀 이미징은 아데노 바이러스 다음과 렌티 바이러스 형질 도입은 공 초점 현미경 디스크를 회전시키는 사용

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