Name: 이소성 심장 이식 마우스 모델을 사용하여 폐동맥 판막 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 56 s
Description: 학습하세요 조직공학 심장판막에서 신생조직 형성과 협착 발달의 세포 및 분자 메커니즘을 마우스 모델을 통해 연구하는 방법을. 고주파 초음파로 판막 기능을 모니터링합니다.

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이 작품은 CKB에 NIH (RO1 HL098228)에서 교부금에 의해 부분적으로 지원되었다.

참고 : 모든 동물의 절차는 전국 어린이 병원 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 심장 밸브 기증자 마우스 1. 폐 심장 밸브 수확 <ol><li> 수술 전에 수술 도구를 압력솥 : 미세 가위, 배 마이크로 집게, 배 미세 혈관 클램프, 1X 클램프 적용 집게, 1X 마이크로 니들 홀더, 1X 봄 가위, 1X 트랙터를 1x는. </li><li> 6-8 주 된 여성 C57BL / 6 마​​우스는 폐 심장 판막 기증자로 사용됩니다. 케이지에서 마우스를 제거하고 무게를 달고, 다음 케타민 / 자일 라진 칵테일 (케타민, 200 ㎎ / ㎏과 자일 라진, 20 ㎎ / kg, IP) 과다 복용으로 안락사. </li><li> 가슴 부분을 클립 및 패드에 지느러미 드러 누움 위치에 마우스를 놓습니다. 그런 다음 개흉술을합니다. 심장을 노출 우심방에 작은 상처를 확인하고 차가운 얼음 식염수 좌심실을 perfuse. </li><li> 퉁명스럽게 상승에서 폐동맥 (PA)를 해부하다오르타. 폐동맥의 2mm의 커프스와 함께 폐 밸브 (PV)를 잘라. 마음의 나머지를 폐기하십시오. </li><li> 차가운 헤파린과 생리 식염수 (100 단위 / ml)에 PV를 저장합니다. 주 : PV는 기증자의 심장에 이식하기 전에 2 시간 동안 용액에 보관하실 수 있습니다. </li></ol> 2. 기증자의 심장 준비 <ol><li> 6-8 주 된 여성 C57BL / 6 마​​우스가 심장 기증자로 사용됩니다. 케이지에서 마우스를 제거하고 무게를 달고, 다음 케타민 / 자일 라진 칵테일 (케타민, 200 ㎎ / ㎏과 자일 라진, 20 ㎎ / kg, IP) 과다 복용으로 안락사. 이 터미널의 절차입니다. </li><li> 가슴 부분을 클립 및 패드에 지느러미 드러 누움 위치에 마우스를 놓습니다. 그런 다음 개흉술을합니다. 퉁명스럽게 심장, 하대 정맥 (IVC), 우수한 대정 맥 (SVC), 상행 대동맥, PA, 폐 정맥을 분리합니다. 얼음 차가운 멸균 식염수로 IVC를 Perfuse. </li><li> IVC, SVC하고 우수한 잘라 6-0 실크 봉합사와 폐 혈관을 결찰합자. </li><li> 2mm 팔목과 대동맥 및 PA를 잘라. </li><li> PV를 잘라서 폐기하십시오. </li></ol> 기증자의 심장 위에 3. 심장 밸브 이식 <ol><li> 즉시 2.5 단계 후, 기증자의 마음에 단계 1.5에서 심장 밸브를 배치하고 심장 밸브의 방향. </li><li> 테이퍼 바늘에 10-0 모노 필라멘트 봉합사를 사용하여 밸브의 오른쪽에 스티치와 PV를 확보하고 태양 광 발전의 다른 측면에서 5-6 stiches와 함께 지속적으로 봉합하기 시작합니다. </li><li> 전방 측을 마친 후 수평 심장 회전 공여체 심장에 PV의이면을 봉합하기 시작한다. </li><li> 차가운 멸균 헤파린 / 식염수에 마음을 저장합니다. 참고 : 기증자의 마음이받는 마우스에 주입하기 전에 2 시간 동안 용액에 보관하실 수 있습니다. </li></ol> 받는 사람 마우스에 4. 이소성 심장 이식 <ol><li> 6-8 주 된 여성 C57BL / 6 마​​우스 RECI로 사용되었다pient. 케이지에서 마우스를 제거하고 케타민 / 자일 라진 칵테일 (케타민, 100 ㎎ / ㎏과 자일 라진 10 ㎎ / ㎏)으로 마취, 그것은 무게. 케토 프로 펜 (5 ㎎ / kg)을 preanesthesia 진통제로서 사용된다. </li><li> 곤란 꼬리에 의한 진정 작용의 수준을 확인한 후, 복부와 가슴 머리를 클립. 멸균 안과 연고와 함께 눈에 기름칠을하고, 패드에 지느러미 드러 누움 위치에 마우스를 놓습니다. 베타 딘, 알코올 패드로 복부를 소독. 그런 다음 멸균 드레이프와 마우스를 커버 만 절개 영역을 노출합니다. </li><li> 치골 지역에 xyphoid 아래에서 중간 선 개복술의 절개를하고, 자체 유지 견인기를 삽입합니다. 식염수를 적신 거즈에 내장을 감싸십시오. 퉁명스럽게 신동맥 대동맥과 대정맥을 정의합니다. </li><li> 혈액 순환을 억제하는 대동맥과 IVC 주변의 근위 및 원위 두 6-0 실크 봉합사를 놓습니다. </li><li> 복부 대동맥의 오른쪽에있는 기증자의 심장을 놓고 멸균 GAU로 커버&#39;제. 식염수로 보습. </li><li> 30 G 바늘을 사용하여 복부 대동맥에 aortotomy을 확인하고 기증자의 대동맥의 크기에 가위로 구멍을 확장합니다. </li><li> 테이퍼 바늘에 멸균 10-0 모노 필라멘트 봉합사를 사용하여 측면 엔드 - 투 문합을 수행합니다. 복부 대동맥의 입구의 기단에 하나의 스티치 기증자의 대동맥을 확보하고 복부 대동맥의 말단부에서 4-5 stiches와 함께 지속적으로 봉합하기 시작합니다. </li><li> 왼쪽에 마음을 뒤집기 식염수 주입 거즈로 커버하고, 복부 대동맥의 말단부에서 4-5 stiches와 지속적으로 봉합하기 시작합니다. </li><li> 30 G 바늘을 사용하여 IVC의 venotomy을 확인하고 기증자 폐동맥의 크기로 구멍을 확장합니다. </li><li> 테이퍼 바늘에 멸균 10-0 모노 필라멘트 봉합사를 사용하여 측 문합에 종지부를 수행합니다. IVC의 개구부의 기단에 하나의 스티치 기증자 PA를 확보에서 4-5 stiches를 연속 봉합 시작하대 정맥의 말단. 대동맥 길에 있기 때문에 이번에는 반드시 기증자의 PA의 왼쪽 벽의 봉합은 IVC의 내부에 있는지 확인합니다. </li><li> 헤파린과 생리 식염수 (100 단위 / ml)로 I​​VC 루멘을 세척합니다. 선단에 계속을 봉합하여 기증자 PA 사람과받는 사람 IVC의 오른쪽 벽을 닫습니다. </li><li> 원심 합자를 제거하고 국소 흡수 멸균 지혈 에이전트를 적용하여 출혈을 제어 할 수 있습니다. 출혈이 완전히 정지 할 때, 근위 봉합사를 제거하고 출혈 같은 방법으로 제어 할 수 있습니다. </li><li> 창자를 반환하고 6-0 블랙 폴리 아미드 모노 필라멘트 봉합사를 사용하여 두 층으로 복부 근육과 피부를 닫습니다. </li><li> 0.5 ㎖의 생리 식염수를 피하 주사와 마우스가 완전히 이동할 때까지 온난화 패드 복구 새장에 마우스를 놓습니다. 복구시, 종이 침구 새 케이지에 마우스를 반환합니다. 48 시간 동안 진통제 (이부프로펜, 30 ㎎ / ㎏, 식수를) 제공합니다. 할완전히 회복 될 때까지 다른 동물의 회사에 수술을했다 동물을 반환하지. </li></ol>

<ol><li>Polito, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+morbidity+and+mortality+in+very+preterm+VLBW+infants+with+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Intens+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Increased morbidity and mortality in very preterm VLBW infants with congenital heart disease.</a> Intens Care Med. 39, 1104-1112 (2013).</li>
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<li>Sodian, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+in+vivo+experience+with+tissue-engineered+trileaflet+heart+valves%29%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Early in vivo experience with tissue-engineered trileaflet heart valves).</a> Circulation. 102, III22-III29 (2000).</li>
</ol>

우리는 공개 아무것도 없어.

이 절차의 사망률은 주로받는 사람 복부 대동맥에 기증자의 대동맥의 PV 이식 사이트와 문합에서 출혈에 의해 발생 된 20 %에 가깝습니다. 대부분의 경우, 사망률이 유의하게 48 시간의 수술 후 감소한다. 생존 마우스는 이식 된 태양 광 발전을 통해 강한 심장 박동, 혈액 흐름을 보여 주었다. 전체 과정은 경험이 풍부한 마이크로 외과 의사 네 시간이 소요됩니다. 이 기술을 마스터하기 위해 약 250 마우스를 취할 것입니다. 이소성 심장 이식은 기증자의 심장에 태양 광 주입에 비해 상대적으로 앞으로 똑바로입니다. 성공적인 HV 이식을위한 가장 중요한 단계 중 하나는 기증자 마우스의 PV 구조의 수확입니다. PV 구조는 밸브 아래 1-2mm 주위에 가로로해야한다. 나머지 조직이 너무 짧으면, 문합 어려울 것이다. 태양 광 아래의 조직, 즉 (너무 긴 경우. PA는 승천에 비해 너무 긴 것) 주입 후 대동맥을 보내고, 이식 된 PA는 비틀거나 꼬임 수 있습니다. 또 다른 중요한 단계는 이식 PA와 수신자 IVC 사이...

선천성 심장 결함은 서쪽 세계 1,2에서 유아 사망의 주요 원인 중 하나입니다. 그 중, 폐동맥 판막 협착과 뾰족한 끝이 둘있는 대동맥 판막 결함이 자주 발생하는 형태 3입니다. 심장 판막 교체 수술은 재건 수술의 일상적인 선택이 될 것입니다; 그러나, 협착 및 석회화 심장 밸브 및 항응고제에 평생 의존 등의 합병증은 만성 건강 쇠약과 죽음 4-7의 중요한 원천입니다. 또한, 성장 잠재력의 부족은 더욱 그 젊은 환자 4,8,9의 사망률을 증가시키는 개정 수술을 필요로합니다. 생분해 성 합성 심장 밸브 (8) 상에 성장 잠재력, Shinoka 외. 시드자가 세포와 기능적 여분 심장 밸브를 개발하기위한 시도. 성장 potenti와 같은 구조 네이티브 심장 밸브로 변환 합성 밸브알. 예비 많은 동물 연구는 기능적인 심장 밸브 (10)를 생성하기 위해이 방법을 사용할 수있는 가능성을 보여 주었다. 그러나, 장기 이식 연구 인해 심장 판막의 협착 발생 밸브 neotissue 점진적으로 두껍게별로 내구성을 보여 주었다. Sodian에서 작업 등. Shinoka 방법을 사용하지만, 궁극적으로 더 많은 생리 학적 프로파일 9,11,12을 구성 조직 설계 밸브의 생 역학적 특성을 준 생분해 성 엘라스토머와 PGA 매트릭스를 대체했다. 생체 내 연구에서는 이식의 성공에도 불구하고, 합류 내피 세포 라이닝이 지지체 (12)의 장기 성공을 제한 할 수있는 형성되지 않았다. 합리적 개선 번째 세대 합성 심장 밸브를 설계하기 위해, 심장 판막 이식 뮤린 모델은 세포 및 분자 메커니즘 underlyin을 조사하기 위해 만들어진G의 neotissue 형성, 밸브 두껍게, 그리고 협착 개발. 쥐 모델은 다른 종 7에서 쉽게 사용할 수없는 형질 전환 등의 분자 시약의 광대 한 배열을 제공하고 있습니다. 이 심장 판막 이식 모델에서 생체 동계 폐 심장 판막 치환술은 우선 수행 하였다; 다음 주입 심장 밸브와 심장은 미세 수술 기술을 이용하여 동계 호스트로 heterotopically 주입 하였다. 이 모델은, 체외 순환을위한 필요없이 심장 밸브 교체를 가능하게한다. 이 논문에서, 심장 판막 수확에 대한 자세한 설명은, 기증자의 심장 준비, 심장 판막 이식, 이소성 심장 이식이 설명되어 있습니다. 결과는받는 사람의 심장 박동의 독립적 인 한 기증자의 심장에서 연속적인 심장 박동을 보여 주었다. 주입 폐동맥 밸브를 통해 혈류는 펄 스파 명소와 고주파 초음파 시스템을 이용하여 측정 하였다ppler.

<table><tbody><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J (H-2B), 여성</td><td>Jackson Laboratories</td><td>664</td><td>8-12주</td></tr><tr><td>케타민 염산염 주입</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-2053</td><td></td></tr><tr><td>자일라진 멸균 솔루션</td><td>Akorn Inc.</td><td>NADA# 139-236</td><td></td></tr><tr><td>케토프로펜</td><td>포트 닷지 동물 건강</td><td>NDC 0856-4396-01</td><td></td></tr><tr><td>이부프로펜</td><td>PrecisionDose</td><td>NDC 68094-494-59</td><td></td></tr><tr><td>헤파린 나트륨</td><td>사젠트 Pharmaceticals</td><td>NDC 25021-400</td><td></td></tr><tr><td>식염수(멸균 0.9% 염화나트륨)</td><td>호스피라</td><td>NDC 0409-0138-22</td><td></td></tr><tr><td>0.9 % 염화나트륨 주입</td><td>호스피라 주식회사</td><td>NDC 0409-4888-10</td><td></td></tr><tr><td>바셀린 안과 연고</td><td>Dechra 수의학 제품</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>요오드 준비 패드</td><td>Triad Disposables, Inc.</td><td>NDC 50730-3201-1</td><td></td></tr><tr><td>알코올 준비 패드</td><td>McKesson Corp.</td><td>NDC 68599-5805-1</td><td></td></tr><tr><td>코튼 팁 애플리케이터</td><td>Fisher Sientific</td><td>23-400-118</td><td></td></tr><tr><td>파인 가위</td><td>FST</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 애드슨 겸</td>자 <td>FST</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>클램프 적용 겸</td>자 <td>FST</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>S & T 혈관 클램프</td><td>FST</td><td>00396-01</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위</td><td>FST</td><td>15008-08</td><td></td></tr><tr><td>Colibri 견인기</td><td>FST</td><td>17000-04</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 포셉</td><td>FST</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 - 파인 펜치</td><td>FST</td><td>11274-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5/45 포셉스</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>티쉬 니들 홀더/ 집게</td><td>Micrins</td><td>MI1540</td><td></td></tr><tr><td>블랙 폴리 아미드 모노 필라멘트 봉합사, 10-0</td><td>AROsurgical Instruments Corporation</td><td>TI638402</td><td>이식편 봉</td></tr><tr><td>합 블랙 폴리 아미드 모노 필라멘트 봉합사, 6-0</td><td>ARO수술 기기</td><td>SN-1956</td><td>근육 및 피부 폐쇄</td></tr><tr><td>용 부직포 스폰지</td><td>McKesson Corp.</td><td>94442000</td><td></td></tr><tr><td>흡수성 지혈</td>제 <td>Ethicon</td><td>1961</td><td></td></tr><tr><td>1 ml 주사기</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>3 ml 주사기</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>10 ml 주사기</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>18 G 1 1/2 in, 바늘</td><td>BD</td><td>305190</td><td></td></tr><tr><td>25 G 1 in., 바늘</td><td>BD</td><td>305125</td><td></td></tr><tr><td>30 G 1 in., 바늘</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>따뜻한 물 Recircultor</td><td>Gaymar</td><td>TP-700</td><td></td></tr><tr><td>온난화 패드</td><td>Gaymar</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>트리머</td><td>Wahl</td><td>9854-500</td><td></td></tr><tr><td>VEVO2100 고주파 초음파</td><td>VisualSonics</td><td><a href "http://www.visualsonics.com/vevo2100">http://www.visualsonics.com/vevo2100< / a></td><td>카탈로그 번호와 가격은 영업 담당자로부터 얻을 수 있습니다.</td></tr><tr><td>초음파 투과 젤</td><td>Parker Laboratories, INC.</td><td>01-02</td><td></td></tr><tr><td>탁상용 실험실 동물 마취 시스템</td><td>VetEquip, INC.</td><td></td><td></td>901806</tr><tr><td>이소플루란</td><td>박스터</td><td>1001936060</td><td></td></tr></tbody></table>

이소성 심장 이식 마우스 모델을 사용하여 폐동맥 판막 이식

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

조직 공학 심장 판막, 특히 decellularized 밸브, 혼합 결과와 교정 수술의 임상 사용에 추진력을 얻기 시작됩니다. 그러나, neotissue 개발, 밸브 두껍게, 그리고 협착 개발의 세포 및 분자 메커니즘은 광범위하게 연구되어 있지 않습니다. 위의 질문에 대답하기 위해, 우리는 쥐의 이소성 심장 판막 이식 모델을 개발했다. 심장 밸브는 밸브 기증자 마우스에서 수확 및 심장 기증자 마우스에 이식했다. 새로운 밸브 마음은받는 사람 마우스 heterotopically 이식했다. 이식 된 심장은받는 사람의 심장 박동의 독립적 인 자신의 심장 박동을 보여 주었다. 혈류는 펄 스파 도플러와 고주파 초음파 시스템을 이용하여 정량 하였다. 이식 된 폐 밸브를 통과하는 흐름은 최소한의 역류와 흐름을 앞으로 보여 피크 흐름은 100mm / 초에 가까웠다. 심장 판막 이식이 쥐 모델은 highl입니다다목적 Y, 그래서 수정 된 다른 혈역학 환경을 제공하기 위하여 및 / 또는 조직 공학 심장 판막에 neotissue 개발을 연구하기위한 다양한 트랜스 제닉 마우스와 함께 사용할 수있는 적응 될 수있다.

도 1은 이소성 심장 이식을 이용한 심장 판막 이식 모델의 개략도를 도시한다. 심장 판막은 기증자의 심장에서 수확 및 제 기증자 마우스의 심장에 이식했다. 그런 다음 새로운 심장 판막과 마음이받는 사람 마우스의 복부에 이식했다. 2 오른쪽 심장 이식 (B) 후, 복부 공간 (A)에 이식 마음의 그림을 보여주고, 이식 후 5 분 그림. 대동맥과 IVC의 양쪽에 봉합사를 제거하면, 마음은 나중에 1 ~ 2 분을 이길 시작하고 더 많은 혈액 순환과 핑커됩니다. 우심방이 더 (B)보다 (C)에 넓히고 있습니다. 마음은 점점 더 강한 박동 및 24 시간 후 안정되어있다. 이식 된 폐 밸브를 통해 혈액의 흐름을 사용하여 십일 주입 후 경피적으로 측정 하였다펄스 파 도플러 모드 (도 3)와</s...

조직 공학 심장 판막에 neotissue 형성 및 협착증 개발을 기초 세포 및 분자 메커니즘을 이해하기 위해, 이소성 심장 판막 이식 뮤린 모델이 개발되었다. 폐동맥 판막은 이소성 심장 이식 기술을 사용하여 수신자에게 이식 하였다.

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

본 절차의 전반적인 목표는 조직 공학 심장 판막 내에서 신생 조직 형성, 판막 증후 및 협착 발생의 기저가 되는 세포 및 분자 메커니즘을 조사하는 것입니다. 이는 먼저 공여 마우스 심장 조직에서 폐동맥 판막을 채취함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 두 번째 공여체로부터 심장 전체를 채취합니다.그 후 공여자의 폐동맥판막을 공여자의 심장에 이식하고, 새로운 심장 판막이 장착된 심장을 수혜자 마우스에 이질적 부위(heterotopically)로 이식합니다. 최종적으로 이식된 심장의 기능과 폐동맥판막을 통한 혈류는 고주파 초음파 시스템의 펄스파 도플러(pulse wave Doppler) 모드로 모니터링할 수 있습니다. 다른 대형 동물 모델보다 마우스 모델을 사용할 때의 주요 장점은, 마우스 모델을 통해 광범위한 분자 시약을 활용할 수 있어 협착증 및 조직 공학 심장 판막의 발달 과정에서 혈관 신생 조직 형성의 근저에 있는 세포 분자 기전을 연구할 수 있다는 점입니다. 일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 연구자는 생존 미세수술의 복잡성으로 인해 어려움을 겪을 수 있습니다.이식 부위의 적절한 삼투 현상을 익히기 어렵고, 출혈 없이 소구경 혈관에 삼투 작용을 수행하는 것이 까다롭기 때문에 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다. 공여용 폐심장판막을 채취하려면, 먼저 6~8주 된 암컷 공여 마우스(C 57 black six)의 흉부 부위를 클립으로 고정하고 마우스를 배측 상향 자세로 놓습니다. 흉강 절개술 후 심장을 노출시키고, 우심방에 작은 절개를 낸 다음 좌심실에 얼음처럼 차가운 식염수를 관류합니다. 다음으로 둔성 박리를 통해 상행 대동맥에서 폐동맥을 분리한 후, 2 mm 크기의 폐동맥 커프와 함께 폐심장판막을 절제합니다. 절제한 폐심장판막은 공여 심장 이식 전까지 최대 2시간 동안 차가운 헤파린 식염수 용액에 보관하며, 이어서 공여 심장을 채취합니다.방금 시연한 것과 같이 안락사시킨 6~8주령의 암컷 공여자 C 57 black six 생쥐의 흉강을 절개한 후, 심장, 하대정맥, 상대정맥, 상행 대동맥, 폐동맥 및 폐정맥을 둔탁하게 분리합니다. 하대정맥을 차가운 멸균 식염수로 세척한 다음, 하대정맥, 상대정맥 및 폐정맥을 6.0 silk 봉합사로 결찰하고 결찰 부위 상단을 절단합니다. 대동맥과 폐동맥을 2 mm 커프와 함께 절단하고, 폐동맥판을 절제하여 공여자 심장에 폐심장판막을 이식합니다. 먼저 판막을 공여자 심장에 배치하고 조직의 방향을 맞춥니다.다음으로, 테이퍼 바늘(tapered needle)에 끼워진 10-0 모노필라멘트 봉합사를 사용하여 판막의 오른쪽에 봉합을 실시하여 고정합니다. 그런 다음 폐동맥판의 반대편을 따라 5~6회의 연속 봉합을 실시합니다. 판막의 앞면 봉합을 마친 후, 심장을 수평으로 회전시켜 폐동맥판의 뒷면을 공여자 심장에 봉합합니다.그다음 공여 심장의 폐정맥을 결찰하고 심장을 적출합니다. 그 후 수혜 쥐에게 이식하기 전까지 최대 2시간 동안 심장을 차가운 헤파린 식염수 용액에 보관합니다. 이제 발가락 집기(toe pinch)를 통해 6~8주령의 암컷 C 57 black six 수혜 쥐의 진정 상태를 확인합니다.그 다음 복부 털을 깎고 멸균 안연고로 눈을 윤활시킨 후, 마우스를 배측으로 눕히고 Betadine과 알코올 솜으로 복부를 소독하며, 절개 부위만 노출시킨 채 멸균 드레이프로 마우스를 덮습니다. 이어서 검상돌기 아래부터 치골 상부까지 정중선 개복 절개를 실시합니다. 그다음 자가 유지 견인기를 삽입하고 생리식염수에 적신 거즈로 장을 감쌉니다.둔하게 박리하여 신장하 대동맥과 하대정맥을 정의합니다. 그런 다음 6-0 실크 봉합사 두 개를 사용하여 대동맥과 하대정맥의 근위부와 원위부를 결찰합니다. 혈액 순환을 억제하기 위해 30게이지 바늘을 사용하여 복부 대동맥에 대동맥 절개술을, 하대정맥에 정맥 절개술을 시행합니다.가위로 절개 부위를 공여자의 대동맥 및 폐동맥 크기에 맞게 확장합니다. 공여자의 심장을 복부 대동맥의 오른쪽에 배치하고, 습윤한 멸균 거즈로 덮어 수분을 유지합니다. 복부 대동맥 절개 부위의 근위단에 한 바늘을 꿰매어 공여자의 대동맥을 고정하고, 이어서 복부 대동맥의 원위단부터 4~5바늘을 연속 봉합합니다.심장을 왼쪽으로 뒤집습니다. 식염수를 적신 거즈로 심장을 덮고, 복부 대동맥의 원위부를 4~5회의 연속 봉합으로 추가 봉합합니다. 공여자의 폐동맥을 하대정맥 개구부의 근위단에 한 바늘 꿰매어 고정한 다음, 하대정맥의 원위단부터 4~5회의 연속 봉합을 실시합니다.그 다음, 하대정맥 CVA 루멘을 헤파린과 식염수로 세척합니다. 공여자의 폐동맥 우측 벽과 수혜자의 하대정맥 CVA를 원위단까지 연속 봉합하여 폐쇄합니다. 이제 원위부 결찰사를 제거하고, 출혈을 조절하기 위해 국소 흡수성 멸균 지혈제를 도포합니다.출혈이 완전히 멈추면 근위부 봉합사를 제거하고, 이식된 심장이 성공적인 문합 후 5분 이내에 뛰기 시작할 때까지 두 번째 출혈을 동일한 방식으로 제어합니다. 그런 다음 장기를 복원하고 6-0 봉합사를 사용하여 복벽 근육과 피부를 2층으로 봉합합니다. 마지막으로 식염수 0.5 mL를 피하 주사하고, 동물이 완전히 움직일 수 있을 때까지 가온 패드가 설치된 회복 케이지에 마우스를 둡니다.회복 후, 마우스를 종이 베딩이 깔린 새 케이지에 단독으로 배치하여 완전히 회복될 때까지 관리하고 진통제를 투여하십시오. 48시간 동안 음수를 제공합니다. 본 이미지들은 심장 이식 직후와 이식 5분 후의 복강 내 이식된 심장을 보여줍니다.대동맥과 하대정맥 양측의 봉합사를 제거하면, 1~2분 이내에 심장이 뛰기 시작하며 혈액이 순환함에 따라 색이 점차 분홍색으로 변합니다. 우심방의 확장이 더 심한 점에 유의하십시오. 심박동이 점차 강해지고 24시간 후 안정되면, 이식 10일 후에 경피적으로 이식된 폐동맥판을 통한 혈류량을 측정할 수 있습니다.펄스파 도플러 모드가 탑재된 고주파 초음파 시스템을 사용하여 B 모드에서 대동맥, 우심실에 이식된 폐동맥판막 및 폐동맥의 위치를 관찰할 수 있습니다. 도식에 표시된 바와 같이 노란색 샘플 볼륨 오버레이가 이식된 PV 위에 위치합니다. 그래프에 나타난 것과 같이, 공여자 심장의 QRS 파형이 수혜자 심장의 파형과 독립적으로 리듬감 있게 검출되며, 최대 속도는 약 100 millimeters per second입니다.본 절차를 수행하는 동안, 폐동맥판 이식 부위 또는 공여자의 대동맥에서 수혜자의 복부 대동맥으로 연결되는 삼투 부위의 모든 출혈을 완전히 지혈하는 것이 중요합니다. 질환이 발생한 심장 판막을 구성하는 세포의 기원에 관한 추가적인 질문에 답하기 위해, 형질전환 마우스에 조직 공학 심장 판막을 이식하는 것과 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후, 여러분은 마우스 모델에서 폐동맥판을 적출하는 방법, 심장 판막 교체술 및 이종심장 이식술을 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하게 되었을 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마우스 heterotopic 심장 이식 모델은 거부하고 면역 반응의 메커니즘을 연구를위한 중요한 방법으로 많은 수사관에 의해 입증되었습니다. 그러나, 관련 기술은 여전히​​ 도전하고 있습니다. 표준 기술을 수정하여 우리는 1000 개 이상의 이식 성공을 있었다.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

기증자 적출 및 수혜자 혈관 문합을 위한 단순화된 방법을 포함하여 마우스의 심장 이종성 이식을 위한 미세 수술 절차를 위한 기술이 시연됩니다.

이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법

원고는 마우스에 이소성 심장 이식을 수행하는 데 필요한 단계를 설명합니다.

쥐 이소성 심장 이식 기술

고형 장기 및 혈관 복합 동종 이식을 결합하기 위해 경추 비봉합 커프 기술을 사용하여 마우스에서 새로운 이종성 흉벽, 흉선 및 심장 이식 모델을 설명합니다.

마우스의 소설 미세 수술 이소성 모델, 욕실 공산권 가슴 벽, 흉선, 및 심장 이식

여기에서, 우리는 새로운 심장 보호 전략을 조사하기 위하여 확고하게 확립되고 이용된 정형포피성 심혼 이식의 전임상 대형 동물 (돼지) 모형을 기술합니다.

정형외 심장 이식의 전 임상 돼지 모델

이성애 복부 마우스 심장 이식 모델에서 혈액 회로 재건을 위한 새로운 기술이 입증된다.

복부 마우스 심혼 이식 모형에 있는 혈액 회로 재건

이 프로토콜은 심장 판막의 동종 활성에 대한 연구를 허용하기 위해 신장 캡슐 아래에 대동맥 판막 전단지를 이식하는 간단하고 효율적인 방법을 설명합니다.

설치류의 이종 주제 심장 판막 이식을위한 단순화 된 모델

본 프로토콜에서, 마우스 심장 이식 모델은 심장 동종이식 거부반응의 메카니즘을 조사하기 위해 사용된다. 이 이종 심장 이식 모델에서는 수술 효율이 향상되고 수정된 커프 기술을 사용하여 심장 이식의 자궁경부 종단 간 문합에 의해 심장 이식편의 생존이 보장됩니다.

마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델을 위한 수정된 커프 기술

마우스 심장 이식 모델은 이식 면역학을 연구하기 위한 귀중한 연구 도구입니다. 본 프로토콜은 층류 혈류를 허용하기 위해 수혜자의 총 경동맥 및 기증자의 폐동맥 트렁크에 커프를 배치하는 것을 포함하는 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식을 자세히 설명합니다.

혈관 수갑을 이용한 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식

이 프로토콜은 마우스 자궁경부 심장 이식을 위한 단순화된 끝 투 측면 봉합 문합 기법을 제시하여, 이식 면역학 연구를 위한 견고하고 재현 가능한 모델을 제공합니다.

종단 간 문합 기법을 이용한 경추 이종성 마우스 심장 이식 이식 면역학 연구

학습하세요 조직공학 심장판막에서 신생조직 형성과 협착 발달의 세포 및 분자 메커니즘을 마우스 모델을 통해 연구하는 방법을. 고주파 초음파로 판막 기능을 모니터링합니다.

이소성 심장 이식 마우스 모델을 사용하여 폐동맥 판막 이식

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