Name: 형성 초점 : 세포 기반 분석은 유전자의 발암 성 가능성을 파악하기 위해 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 18 s
Description: 배우세요 형성 초점 분석법을 통해 마우스 섬유아세포에서 유전자의 발암성을 평가하는 방법을. 레트로바이러스 감염과 수정자 바이올렛 염색을 활용하여 세포 변형을 정량화하고 암 연구에 활용할 수 있습니다.

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이 작품은 NIH 감독의 새로운 혁신 상 프로그램 (ED)에서 부여에 의해 지원되었다. AA는 국립 암 연구소 (National Cancer Institute)와 국립 과학 재단 (National Science Foundation)에서 학부 상에 의해 부분적으로 지원되었다.

1. 바이러스 성 벡터를 만들기 목적 유전자뿐만 아니라, 양성 및 음성 대조군에 대한 코딩 서열은, 전통적인 클로닝 방법 (PCR 증폭, 제한 효소 및 라이 게이션)에 의하여 pBABEpuro 삽입된다. BamHI로, SnaBI로, EcoRI 및 SalI로 : DNA가 삽입 될 수있다 벡터 네 개의 제한 부위가있다. <ol><li> QIAGEN 플라스미드 미디 키트를 사용하여 유능한 세포에서 형질 급 플라스미드 DNA를 준비합니다. </li><li> NanoDrop2000 분광 광도계를 이용하여 DNA 농도를 측정한다. </li></ol> 2. 레트로 바이러스 생산 Plat의 E-패키징 세포주 NIH 3T3 세포가 관심 cDNA를 제공한다 ecotropic 레트로 바이러스를 생산하는 데 사용한다. <ol><li> 냉동 세포에서 Plat의-E 문화 구축 <ol><li> 빠르게 37 ° C의 물을 욕조에 Plat의-E 세포를 해동하고 15 ML 원뿔 튜브에 전송할 수 있습니다. 천천히 (뒤를 Plat의-E 매체의 9를 가하여lbecco 개변 이글 DMEM 배지 + 10 % 소 태아 혈청 (FBS) 및 스트렙토 마이신 +). </li><li> 180 X에서 튜브를 원심 분리기 g 5 분 상층 액을 버린다. </li><li> 10cm의 배양 접시에 작은지면-E 매체 및 전송 10 mL로 세포를 다시 일시 중지합니다. </li><li> 그들은 80 ~ 90 %의 합류 (약 2 일) 때까지 37 ° C, 5 % CO 2 배양기에서 세포를 품어. </li></ol></li><li> 셀 분할 <ol><li> 매체를 대기음 PBS로 한 번 세포를 씻으십시오. </li><li> 0.05 % 트립신 EDTA 2 ㎖를 추가하고 실온에서 1 분 동안 품어. </li><li> 도청 손가락으로 세포를 분리 Plat의-E 배지 10 mL를 넣고 15 ㎖의 튜브에 세포 현탁액을 전송. </li><li> 180 X에서 튜브를 원심 분리기 g 5 분 상층 액을 버린다. </li><li> 작은지면-E 매체의 10 ml의 세포를 재현 탁 1에서 새로운 요리를 시드 : 4-1 : 6 희석. </li></ol></li><li> 작은지면-E 시드 및 형질 <ol><li> 시드 2 × 10 (6)어떤 항생제없이 작은지면-E 매체를 이용하여 10cm 배양 접시 당 세포. </li><li> 37 ° C, 5 % CO 2 배양기에서 세포 O / N을 품어. </li><li> 다음 날, 1.5 ml의 미세 원심 분리 튜브에 옵티-MEM 300 μl를 전송합니다. </li><li> 옵티-MEM으로 준비 관, 폴리에틸렌 이민의 27 μL (PEI), 비용 효율적인 형질 전환 시약 (12)를 추가합니다. 도청 손가락으로 부드럽게 섞어 실온에서 5 분 동안 품어. </li><li> , 옵티-MEM / PEI 튜브에 형질 급 플라스미드 DNA의 9 μg의 추가 텍싱하여 부드럽게 혼합하고, 실온에서 15 분 동안 품어. </li><li> 추가 DNA / PEI Plat의-E 접시에, 37 ° C에서 O / N을 품어 복합 한 방울 씩, 5 % CO 2. </li><li> 다음 날, 형질 전환 시약을 포함하는 매체를 대기음 (항생제없이) 신선한 Plat의-E의 10 ml의 배지를 추가합니다. </li><li> 인큐베이터에 세포를 돌려줍니다. </li></ol></li></ol> 3. NIH 3T3 세포 및 감염 <ol><li> NIH 구축3T3 문화 및 시드 <ol><li> 빠르게 37 ° C의 물을 욕조에 NIH 3T3 세포를 해동하고 15 ML 튜브로 전송할 수 있습니다. 천천히 NIH 3T3 배지 (DMEM + 10 % FBS)의 구를 가하여. </li><li> 180 X에서 튜브를 원심 분리기 g 5 분 상층 액을 버린다. </li><li> 10cm 배양 접시 NIH 3T3 매체와 전사 10 mL로 세포를 재현 탁. </li><li> 37 ° C, 5 % CO 2 인큐베이터에서 세포를 배양한다. 그것은 자연 변환 (그리고 초점 형성 따라서 기초 수준)의 주파수로 문화 포화 상태에 도달하면 증가, NIH 3T3 세포는 항상 underconfluent (50~60%)을 유지하는 것이 매우 중요합니다. </li><li> 10cm 접시 당 종자 3 × 10 5 세포는 다음날 감염 O / N을 배양한다. </li></ol></li><li> 감염 <ol><li> 0.45 ㎛의 세공 크기를 나일론 멤브레인 필터로 여과 한, 10 ㎖의 일회용 주사기를 사용하고, 15 ㎖ 중에 전송해서 E-Plat의 접시에서 레트로 바이러스 상등액을 수확튜브. </li><li> (항생제없이) 세포에 신선한 Plat의-E 매체의 10 ML을 추가하고 인큐베이터에 반환. </li><li> 감염 될 수있는 NIH 3T3 세포 접시에서 매체를 대기음, 바이러스 함유 필터링 된 상층 액의 5 정기적 인 NIH 3T3 매체 ml의 5 mL를 추가합니다. </li><li> 6 ㎍ / ml의 농도로 폴리 브렌 접시에 추가. </li><li> 37 ° C, 5 % CO 2의 세포 O / N을 품어. </li><li> 감염의 두 번째 라운드에 대한 3.2.5 - 다음 날, 반복 3.2.1 단계를 반복합니다. </li><li> 일반 NIH 3T3 매체와 바이러스 함유 배지를 교체합니다. </li><li> 필요에 따라 매체를 교체, NIH 3T3 세포를 2 ~ 3 주 동안 성장하는 것을 허용합니다. 복제 판에서 전체 세포 용 해물에 기존의 단백질 전기 영동 및 면역에 의해 관심의 단백질의 발현을 확인합니다. </li></ol></li></ol> 4. 염색 및 정량화 <ol><li> 크리스탈 바이올렛 염색 <ol><li> NIH 3T3 매체를 대기음 요리를 배치얼음에. </li><li> 얼음처럼 차가운 PBS로 두 번 요리를 씻으십시오. </li><li> 10 분 동안 빙냉 메탄올로 세포를 고정. </li><li> 얼음에서 요리를 제거하고 메탄올을 대기음, 25 % 메탄올 (RT)에서 만든 0.5 % 크리스탈 바이올렛 용액 3 ㎖를 추가합니다. </li><li> RT에서 5 분 동안 요리를 품어. </li><li> 크리스탈 바이올렛 솔루션을 기음과 컬러가 린스 벗기하지 않을 때까지 조심스럽게 밀리-Q의 H 2 O와 접시를 씻어. </li><li> 요리는 벤치 탑에 O / N을 건조하도록 허용 (발견). </li></ol></li><li> 초점 정량화 <ol><li> 요리가 건조되면, 접시에 세포의 음울 색깔의 컬렉션을 측정하는 통치자를 사용합니다. 만 등의 직경보다 5mm 된 것을 계산 &quot;초점을.&quot;초점의 수를 기록하고 평균과 컨트롤에 비해 중요성을 계산합니다. </li></ol></li></ol>

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<li>Nair, S. K., Burley, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-ray+structures+of+Myc-Max+and+Mad-Max+recognizing+DNA.+Molecular+bases+of+regulation+by+proto-oncogenic+transcription+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">X-ray structures of Myc-Max and Mad-Max recognizing DNA. Molecular bases of regulation by proto-oncogenic transcription factors.</a> Cell. 112, 193-205 (2003).</li>
</ol>

저자가 공개하는 게 없다.

FFA는 체외에서 악성 변화를 평가하기위한 빠르고 쉬운 방법을 제공합니다. 이는 후보 유전자의 상대적으로 큰 수의 검사 의무이며, 그 완만 한 기술적 요구는 비용 효율적인 만든다. 또한, 두 개 이상의 유전자를 공 발현 할 수있다 조합 발암 잠재력을 평가하는 (때때로 &quot;협동&quot;분석법이라 함). 이 분석의 장점은 간단 기술, 정량의 용이성과 상대적으로 짧은 턴어라운드 시간에 의존하고있다. 그것은 그것이 모든 시험 관내 분석의 한계를 제기 않는다는 점을 강조해야한다. 분석은 암세포의 한 표현형 특성을 측정함으로써 평가 발암 변환, 즉, 자신의 능력을 배양 접시에 단층 넘을한다. 부정적인 결과는, 따라서,이 특정 phenotyp을 추진하지 않고 변화를 유도 할 수있는 특정 암에서 신중하게 해석되어야한다e 또는 다른 유전자 (즉, 협력 위에서 언급 한)와 동시 발현을 필요로 할 수있다. 이 경우에, 그것은 예를 들면 증식률 혈청 요건 및 / 또는 독립적 앵커리지 의해 결...

종양 세포 유전자 발현의 패턴에서 증식 및 형태 학적 변화 후성 유전학에, 변경의 폭 넓은 정상 대조 구별 될 수있다. 후자 중에서, 궁극적으로 동물에 주입시 종양을 형성하는 능력은 악성화 (3)의 유용한 측정 지표 인 혈청에 의존하여, 접점 (밀도) 억제의 상실, 앵커리지 - 독립된 확산 인수를 감소. 생체 외 및 생체 내 분석 몇몇 셀룰러 변환을 위해 개발되었다. 시험 관내 분석법을 목표 (환원 혈청 성장)을 식별하고 배양 모폴로지 (초점 형성 어 세이), 문화 역학 (성장 속도, 포화 농도) 및 성장 인자의 변화가 측정 또는 요구 사항 앵커리지 (소프트 한천의 성장). 세포 유형의 악성 특성을 결정하기위한 금 표준 실험 동물에서 종양 형성 (이종) 남아있다. 그러나, t그는 비용 및 생체 내 연구의 길이는 항상 후보 종양 유전자의 첫 번째 검증 단계 또는 스크리닝 그들을 정당화하지 않습니다. 어떤 시험 관내 분석은 유전자의 발암 가능성의 명확한 평가를 제공하지 않지만, 그들은 생체 내 (in vivo) 연구가 미래를 좁힐 수 발암 가능성에 대한 통찰력을 제공 않습니다. 시험관 내에서 종양 발생 가능성을 평가하기위한 가장 널리 사용되는 시스템 중 하나는 초점 형성 분석법이있다. 이 접근법은 NIH 3T3 마우스 섬유 모세포, 강한 접촉 억제를 나타내고 형질 전환되지 않은 세포주의 사용에 의존한다. 밀도에 의존하는 성장의 손실 종양 유전자 결과의 과발현; 형질 전환 된 세포를 용이하게 형질 전환되지 않은 세포의 배경에 대해 단층 가시화 &quot;초점&quot;을 형성하는, 다층으로 성장할 수있다. 접점의 ON 인 손실에 의해 입증되는 바와 같이 포커스 정량법 형성 후, 악성 변환을 유도하는 후보의 종양 유전자 능력을 측정측정 표현형으로 ition. FFA (예를 들면, Src에 4 BRAF 5) 단백질 키나제의 과발현, 전사 인자 (예, N-myc의 6) (예 P2RY8 7), G는 단백질 - 결합 수용체와 GTP 아제 (예에 의해 변형을 평가하기 위해 사용되어왔다 , 라스 1), 다른 사람의 사이에서. 이 분석의 상대적 용이성은 유전자의 과발현은 체외에서 NIH 3T3 마우스 섬유 아세포를 변환 할만큼 충분한 지 여부에 대한 신속하고 시각적으로 명확한 답을 제공 할 것입니다 좋은 선택입니다. 이 프로토콜에서 설명 FFA 패키징 바이러스 단백질을 제공 Plat의 E-패키징 세포주 (8)를 사용하고, 레트로 바이러스 벡터 pBABEpuro 9 (Addgene 플라스미드 1764)는 레트로 바이러스를 생성한다. 관심의 유전자를 포함하는 구조체 pBABEpuro 형질 감염 후, E-Plat의 세포주는 NIH 3T3 세포를 감염시키기 위해 사용될 수 ecotropic 레트로 바이러스를 생성 할 것이다. 티유전자 전달에있어서의 그의 바이러스 전통적인 화학적 형질 전환 방법보다 더 효율적이며 지속적으로 10 유전자를 발현 할 수있는 방법을 제공한다. 일단 NIH 3T3 세포의 게놈 내로 혼입, 목적 유전자의 과발현은 바이러스 긴 말단 반복 (LTR) 프로모터 (11)에 의해 구동된다. 이 상수는 식 NIH 3T3 세포상의 초점의 형성에 의해 측정 된 관심 유전자, 종양 활성을 가지고 있는지 여부를 결정하는데 사용될 수있다.

<table><tbody><tr><td>pBABE-puro vector</td><td>Addgene</td><td>Plasmid 1764</td><td>클로닝 벡터</td></tr><tr><td>Platinum-E Retroviral Packaging Cell Line, Ecotropic</td><td>Cell Biolabs, Inc.</td><td>바이러스 생산을 위한</td> <td>RV-101</td> 세포주</tr><tr><td>NIH 3T3 세포주 쥐</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>93061524</td><td>초점 형성 분석을 위한 세포주</td></tr><tr><td>10ml BD Luer-Lok 팁 주사기</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td>바이러스 생산 시약</td></tr><tr><td>0.45 &mu; m Puradisc 주사기 필터</td><td>Whatman</td><td>6750-2504</td><td>바이러스 생산 시약</td></tr><tr><td>폴리에틸렌이민(PEI)</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>23966-2</td><td>세포 형질주입 시약</td></tr><tr><td>폴리브레네 감염 / 형질주입 시약</td><td>EMD Millipore</td><td>TR-1003-G</td><td>세포 형질주입 시약</td></tr><tr><td>크리스탈 바이올렛</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>C581-25</td><td>세포 염색 시약</td></tr><tr><td>플라스미드 플러스 미디 키트</td><td>QIAGEN</td><td>12945</td><td>플라스미드 정제</td></tr><tr><td>BD 팔콘 조직 배양 접시</td><td>BD Biosciences</td><td>353003</td><td>세포 배양 용품</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11995-065</td><td>세포 배양 배지</td></tr><tr><td>0.05% Trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25300-054</td><td>세포 배양 용품</td></tr><tr><td>Opti-MEM I 환원 혈청 배지</td><td>Gibco</td><td>31985-062</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>배지 Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td>세포 배양 배지</td></tr></tbody></table>

형성 초점 : 세포 기반 분석은 유전자의 발암 성 가능성을 파악하기 위해

Focus Formation: A Cell-based Assay to Determine the Oncogenic Potential of a Gene

세포의 악성 형질전환은 전형적으로 증식 증가, 접촉 억제 상실, 고정 독립적 성장 잠재력 획득 및 실험 동물에서 종양을 형성하는 능력과 관련이 있습니다1. NIH 3T3 세포에서 Ras 신호 전달 경로는 Ras 변환으로 알려진 이러한 이벤트 중 많은 부분을 유발하는 것으로 알려져 있습니다. NIH 3T3 세포에 과발현 유전자를 도입하면 형태학적 변형 및 접촉 억제 상실을 촉진할 수 있으며, 이는 관심 유전자의 발암 가능성을 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다. 종양유전자의 형질전환 가능성의 한 측면을 평가하기 위한 간단한 방법을 제공하는 분석법은 FFA(Focus Formation Assay)2입니다. NIH 3T3 세포가 배양에서 정상적으로 분열할 때 합류 단층에 도달할 때까지 분열합니다. 그러나 과발현된 종양유전자가 있는 경우 이러한 세포는 조밀한 다층 초점1에서 성장하기 시작할 수 있으며, 이는 결정 바이올렛 또는 Hema 3 염색으로 시각화하고 정량화할 수 있습니다. 이 기사에서는 관심 유전자를 NIH 3T3 세포로 레트로바이러스 형질전환하는 FFA 프로토콜과 염색을 통해 병소 수를 정량화하는 방법에 대해 설명합니다. 레트로바이러스 형질도입은 형질주입보다 더 효율적인 유전자 전달 방법을 제공하며, 친환경성 쥐 레트로바이러스의 사용은 잠재적인 인간 종양유전자를 다룰 때 생물안전성 제어를 제공합니다.

MXD3는 MYC / MAX / MAD 네트워크의 구성원 인 염기성 헬릭스 - 루프 - 헬릭스 류신 지퍼 (bHLHZ) 전사 인자이다. 그것은 MAD 가족 13-15의 비정형 부재이며, 그것은 암화 (16, 17)에 관여하는 것으로보고되었다. pBABEpuro (대조군)과 MYC (양성 대조군)과 비교했을 때, MXD3가 과발현 된 NIH 3T3 요리는 훨씬 적은 초점 (그림 1A)를했다. 도 1b의 데이터는 중요성을 결정하기 위해 여러 실험으로부터 수집 하였다. 이 MYC와 유사한 활동 (알려진 발암 유전자)를 가지고 있기 때문에 MXD3의 발암 가능성을 결정하는 초기 관심이 있었다. 그러나,이 분석 결과는 MXD3는 종양 유전자의 기능을하지 않는 것이 좋습니다. <img alt="그림 1...

초점 형성의 분석은 후보 종양 유전자의 변화 가능성을 평가하기위한 간단한 방법을 제공한다.

Malignant transformation of cells is typically associated with increased proliferation, loss of contact inhibition, acquisition of anchorage-independent ...

이 실험 절차의 전반적인 목표는 레트로바이러스를 사용하여 마우스 섬유아세포 세포주에서 초점 형성 분석(focus formation assay)을 수행함으로써 특정 유전자의 발암 가능성을 결정하는 것입니다. 이를 위해 먼저 관심 유전자의 서열을 레트로바이러스 벡터에 클로닝합니다. 두 번째 단계는 바이러스 벡터와 PLA e 패키징 세포를 사용하여 레트로바이러스 입자를 생성하는 것입니다.다음으로, 관심 유전자의 형질전환 능력을 평가하기 위해 레트로바이러스를 사용하여 NIH 3T3 마우스 섬유아세포를 감염시킵니다. 마지막 단계로 NIH 3T3 세포를 2~3주 동안 분열시킨 후, 크리스탈 바이올렛 염색을 통해 형성된 초점(foci)의 수를 정량화합니다. 궁극적으로, 초점 형성 분석은 관심 유전자의 과발현이 마우스 섬유아세포에서 밀도 독립적 성장을 유도하기에 충분한지를 보여주는 데 사용됩니다.이 방법은 유전자의 발암 잠재력 스크리닝과 같이 암 생물학 분야의 핵심적인 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 우선, 텍스트 프로토콜에 기술된 대로 바이러스 벡터를 제작하십시오. 그다음, 냉동된 plat E 세포를 37 °C 항온 수조에서 빠르게 해동한 후 15 mL 원추형 튜브로 옮겨 plat E 배양물을 확립하십시오.15 mL 원추형 튜브에 PLA E 배지 9 mL를 천천히 넣습니다. 튜브를 180 ×g에서 5분 동안 원심 분리한 후, 상층액을 제거합니다. 세포를 plat E 배지 10 mL로 재현탁하여 10 cm 배양 접시에 옮깁니다.그 후 세포가 80에서 90%Confluent가 될 때까지 37 °C, 5%CO2 배양기에서 배양합니다. 먼저 배지를 흡입하여 제거한 다음, PBS로 세포를 한 번 세척하고 0.05%tripsin EDTA 2 mL를 첨가하여 상온에서 1분 동안 배양한 후, 손가락으로 탭핑하여 세포를 분리함으로써 세포 분할을 수행합니다. 그런 다음 plat E 배지 10 mL를 첨가하고 세포 현탁액을 15 mL 튜브로 옮깁니다.이전과 동일하게 튜브를 원심분리하고 10 milliliters의 plat E 배지로 세포를 재부유합니다. 다음으로, 항생제가 포함되지 않은 plat E 배지를 사용하여 10 centimeter 배양 접시당 2 million 개의 세포를 분주하고 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날, 300 microliters의 optimum을 1.5 milliliter 마이크로 튜브로 옮깁니다.준비된 O

focus-formation-cell-based-assay-to-determine-oncogenic-potential

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

셀 (CFC) 분석을 형성 식민지는 조혈 progenitors은 세미 솔리드 매체 식민지를 형성하는에서 시험 관내 분석이다. 콜로니 형태, 세포 형태학 및 유동세포계측법의 조합은 다른 조혈 lineages 따라 분아 따위에 의해 번식하고 차별 progenitors의 능력을 평가하는 데 사용됩니다.

인간 조혈 세포 콜로니 형성 세포 (CFC) 어세이

관할 transmembrane 수용체를 신호 소설의 식별을위한 높은 콘텐츠를 심사 방법은 설명되어 있습니다. 이 방법은 대규모 자동화 의무가 있으며, 수에 대한...

표현 복제가 Grb2 신호 복합 단지를 공부하기 위해 높은 콘텐츠 이미징 워크 플로우

이 비디오는 유방암 종양 원성에 대한 PADI 효소 억제제와 BB-Cl-아미딘의 효과를 시험관내에서 테스트하기 위한 부드러운 한천 집락 형성 분석을 설명합니다. 이 분석은 또한 유전적 교란의 맥락에서 세포 형질전환 가능성의 정량적 평가를 가능하게 합니다.

Soft Agar Colony Formation Assay: 암세포 증식에 대한 새로운 화합물의 효과를 테스트하는 방법

이 비디오는 폐암 세포가 무한정 증식하고 개별 군체를 형성하는 능력을 결정하는 데 도움이 되는 군집 형성 분석에 대해 설명합니다. 항암제가 군집 형성 세포에 미치는 영향은 결과 군체의 수 및/또는 크기의 변화를 분석하여 분석할 수 있습니다.

Colony Formation Assay: Colony Forming Lung Cancer Cells에 대한 항암제의 효능 평가

이 비디오는 항암 화합물 치료에 대한 반응으로 백혈병 세포에 의해 형성된 집락의 수를 식별하고 계산하는 데 도움이 되는 메틸 셀룰로오스 기반 집락 형성 단위 또는 CFU 분석에 대한 프로토콜에 대해 설명합니다.

메틸 셀룰로오스 기반 CFU 분석: 백혈병 세포의 집락 형성에 대한 항암 화합물의 효과를 확인하는 방법

세포 프로세스의 시스템 수준의 이해를 달성하는 것은 현대 세포 생물학의 목표입니다. 우리는 여기에서 다양한 세포 기능의 다중 루시 페라 제 기자에 대한 전략을 설명하는 엔드 포인트 게놈 규모의 RNAi 라이브러리를 사용하여 유전자 기능을 심문.

배양 세포에서 암과 연관된 신호 전달을 심문위한 멀티 플렉스 루시 페라 기반 스크리닝 플랫폼

soft 한천 집락 형성 분석은 in vitro에서 세포 앵커리지 독립적 성장을 확인하는 데 사용되는 방법입니다. 이 프로토콜의 목표는 형질전환된 세포의 종양형성 전위와 형질전환된 세포에 대한 단백질의 종양 억제 효과를 검출하기 위한 엄격한 방법을 설명하는 것입니다.

소프트 한천 콜로니 형성 분석

전임상 시험에서 인간 대상 시험으로 전환되는 새로운 약물 표적을 식별하는 것은 과학적인 우선 순위입니다. 이를 위해 여기에서는 유전자 고갈이 암 세포주 스페로이드에 미치는 영향을 조사하기 위한 기능적 유전체학 접근 방식을 설명하며, 이는 생체 내에서 인간 암을 보다 적절하게 모델링합니다.

기능 유전체학에게 검사를 활용하여 암 세포 회전 타원체 문화에 잠재적으로 소설 약 표적을 식별하는

여기, 우리는 생체 외에서 그리고 vivo에서 유전자 및 인간 답게 된 마우스 모델을 사용 하 여 백혈병에서 마약 대상으로 c Fos와 Dusp1의 유전과 화학 유효성 검사에 대 한 프로토콜을 설명 합니다. 이 메서드는 유전 유효성 검사 및 치료 개발에 대 한 모든 대상에 적용할 수 있습니다.

Oncogene 의존에 c Fos의 역할 및 Dusp1를 평가 하기 위한 방법

이 프로토콜은 마우스 횡문근 육종 1차 세포의 분리, 종양구 형성 및 치료, 및 종양구배양으로부터 시작되는 동종 이식이식에 대한 재현가능한 방법을 설명한다.

마우스 횡문근에서 분리 된 원발성 종양 세포에서 종양 구체 유도 및 치료

이 실험 프로토콜은 lncRNA 녹다운과 콜로니 형성 분석법을 결합하여 lncRNA가 골육종 세포 증식에 미치는 영향을 정량화하는 안정적이고 비용 효율적이며 효율적인 방법을 제공합니다.

LncRNA 노크다운 골육종 세포의 증식 능력을 검출하는 콜로니 형성 분석

배우세요 형성 초점 분석법을 통해 마우스 섬유아세포에서 유전자의 발암성을 평가하는 방법을. 레트로바이러스 감염과 수정자 바이올렛 염색을 활용하여 세포 변형을 정량화하고 암 연구에 활용할 수 있습니다.

형성 초점 : 세포 기반 분석은 유전자의 발암 성 가능성을 파악하기 위해

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