본래 Vomeronasal 기관 및 액세서리 후각 망울의 생체 준비

마우스 액세서리 후각 전구 (AOB)는 감각 코딩의 맥락에서 공부하기 어렵다. 여기, 우리는 AOB 신경 마우스 페로몬과 kairomones의 정보 처리에 대한 연구를 촉진, 자신의 주변 입력에 기능적으로 연결되어있는 한 생체 준비를 생산하는 절개를 보여줍니다.

이 절차의 전반적인 목표는 기능적으로 연결된 마우스 ro 코 기관 또는 VNO, 부속 후각 전구 또는 OB의 생체 외 제제를 생산하는 것입니다. 이것은 먼저 쥐의 두개골을 거칠게 해부하여 주둥이와 후각구의 단일 반구를 분리함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 섬세한 VNO 축삭돌기와 OB가 조직 관류 챔버에서 2차 해부를 통해 노출됩니다. 마지막으로, 얇은 캐뉼라를 VNO에 삽입하여 냄새와 자극을 도입할 수 있습니다.

궁극적으로, 전기생리학적 기록은 VNO 자극 중 A OB 내의 신경 활동을 측정하는 데 사용할 수 있습니다. 체외 슬라이스 전기 생리학과 같은 기존 기술에 비해 이 기술을 활용하면 감각 기관과 다운스트림 신경 회로가 기능적으로 연결된 상태로 유지됩니다. 배우기 어려운 섬세한 해부 단계가 많고 이러한 단계 중 하나라도 오류가 발생하면 해부에 실패할 수 있기 때문에 이 방법을 시각적으로 시연하는 것이 중요합니다.1차 해부를 시작하려면 먼저 Addin 집게를 사용하여 마우스 두개골의 두정골과 전두골을 제거하고 후각구에 닿지 않도록 주의합니다.

다음으로, 메스를 사용하여 전두엽을 관상동으로 절단하고, 부비동에 2mm 코들링을 한 다음, 절단된 부분에 대한 뇌 코들을 제거합니다. 곧은 가위를 사용하여 부비동과 남아 있는 신경 조직을 남기고 복부 두개골의 노출된 코들 측면을 제거합니다. 두개골의 해부학적 오른쪽에 있는 접합궁과 안면 근육을 제거한 다음 복부 쪽을 위로 돌립니다.

입천장을 노출시키려면 즉시 메스 칼날 끝을 입천장과 평행한 팔레트 아래에 삽입한 다음 칼날을 앞니 쪽으로 움직입니다. 팔레트의 자유로워진 가장자리를 집게로 잡고 조금씩 당겨 입천장을 제거합니다. 그런 다음 두개골의 해부학적 왼쪽에서, 메스 칼날 끝부분만 어금니 근처의 빈 공간에 삽입하고, 손목을 돌려 구개공을 조금씩 펴줍니다.

어금니 근처의 작은 구멍에서 시작하여 메스 칼날 끝을 사용하여 구개 구멍에서 앞니를 통해 계속 자르고 해부학 적 왼쪽 VNO까지 여러 번의 점수 절단으로 상부를 시작합니다. 그런 다음 조직을 돌려 등쪽 두개골이 위를 향하도록 하고 조직의 복부 가장자리에 있는 준비물의 코들 가장자리에서 직선 면도날을 수직으로 정중선과 평행하게 배치하고 정중선의 바로 왼쪽에 있는 면도날의 절단면을 만지고 Raymond를 위해 왼쪽 구개를 따라 움직이는 칼날을 부드럽게 흔듭니다. 블레이드를 정중선 암석과 평행하게 유지합니다. 면도날은 조직의 앞쪽을 향해 압력을 가하면서 천천히 멈추고 cribriform plate의 저항을 뚫은 직후 멈춥니다.

장갑을 낀 손가락으로 유아 측면 근처의 노출된 반구를 잡고 측면과 앞으로 부드럽게 회전하여 조직을 분리합니다. 이제 얇은 플라스틱 판자에 50-100 마이크로 리터의 조직 접착제를 바르십시오. 집게로 조직을 잡고 종이 타월로 제제를 닦아 측면의 과도한 수분을 제거합니다.

집게를 사용하여 오른쪽 반구의 측면 가장자리를 접착제에 부드럽게 놓습니다. 그런 다음 직경 3-5mm, 깊이 2mm의 진공 그리스를 2차 해부 챔버 중앙에 떨어뜨리고 조직 반대편에 있는 판자 면을 그리스에 단단히 대고 놓습니다. 즉시 절제실에 냉장 박리액, 인공 뇌척수액 또는 A CSF를 채우고 챔버를 미세 절개 영역으로 옮깁니다.

그런 다음 산소가 함유된 표준 A CSF로 챔버를 풍부하게 만들기 시작하여 후각구가 새로 산소가 공급된 유체의 흐름에 직접 들어가도록 판자의 방향을 잡습니다. 2차 박리: 미세한 집게를 사용하여 눈에 보이는 반대쪽 후각구나 피질 조직을 제거하는 것으로 시작합니다. 제제에서 후각구의 등쪽 내측 표면을 따라 흰색 경막을 찾은 다음 두 쌍의 미세한 집게를 사용하여 가장 흰 부분을 잡고 집게를 당겨 경막을 찢습니다.

다음으로, 천천히 그리고 조심스럽게, 밑에 있는 후각구를 손상시키지 않고 미세한 집게로 전두엽 피질을 벗겨냅니다. 전두엽 피질이 분리되면 사구체층이 손상되지 않도록 주의하면서 복부 및 산부인과 뒤쪽 조직을 절단하여 제거합니다. 그런 다음 중격 연골과 VNO 날개 사이의 미세한 겸자의 단일 지점을 실행하고, 양쪽 VN의 등쪽 가장자리를 따라 달리는 얇은 뼈 조직 조각인 VNO 날개 Os.To 반대쪽 VNO를 조심스럽게 제거하고 VNO를 완전히 제거한 후 미세한 집게를 사용하여 중격 연골의 복부 코들 가장자리를 절단합니다. 여기서 그것은 중격 뼈의 복부 가장자리를 따라 달리는 흰색 혈관으로 좁아집니다.

가는 집게를 함께 집어 반 뭉툭한 점을 만들고 집게 집게를 절단 측면 방향으로 삽입합니다. 그런 다음 연골을 중격 조직에서 천천히 들어 올려 아래에 있는 중격 조직을 방해하지 않고 진행하십시오. 집게로 뼈를 잡고 요람 리폼 플레이트 근처에서 갈라질 때까지 뼈를 앞뒤로 부드럽게 움직입니다.

이제 폴리아미드 캐뉼러를 고속 관류 장치에 부착하고 폴리아미드 캐뉼라를 통해 분당 0.1-0.3밀리리터의 링거 용액 흐름을 시작합니다. 인라인 소체 유량계로 유량을 측정합니다. 마지막으로 캐뉼라를 VNO 입구와 평행하게 배치합니다.

캐뉼라가 제자리에 있을 때 출구 압력으로 인해 VNO가 팽창하여 혈관이 배출되는 것을 관찰하십시오. 그런 다음 즉시 캐뉼라를 VNO에 삽입하고 캐뉼라의 각도를 일정하게 유지하여 VNO 개구부와 평행하게 유지되도록 하고 생리적 기능 평가를 시작합니다. 준비 전반에 걸쳐 변동성의 큰 원인은 실험 동물의 두개골과 뼈의 밀도와 부서지기 쉽습니다.

중격 조직이 반대쪽 반구, 특히 주둥이의 등뼈에 부착된 지점 근처에 붙어 있는 것은 드문 일이 아닙니다. 다른 일반적인 박리 오류는 2차 미세 절개 중에 발생하며, 이 동안 RO 코 신경의 축삭돌기가 VNO 근처 또는 OB 근처의 중격 조직에서 손상될 수 있습니다. 이러한 사건 및 유사한 사건은 RO 코 감각 뉴런과 A OB 렌더링 사이에 불완전한 연결을 초래할 것입니다. 절차를 성공적으로 완료하면 제제를 사용할 수 없습니다.

기능적 연결성은 냄새 물질을 사용한 VNO 자극에 대한 반응으로 신경 활동에 대한 단일 장치 전기 생리학적 기록과 같은 생리학적 분석을 사용하여 확인할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 침착함을 유지하고 짧은 휴식을 취하는 것이 중요합니다. 피로해지면 이 기술의 성능에 작은 오류가 발생하면 이러한 섬세한 신경 구조가 손상될 수 있습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 전기생리학 또는 이미징 연구를 위해 초기 액세서리 공장 시스템의 체외 해부를 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.