쥐의 각막 이식 : 고체 장기 이식의 가장 일반적인 형태를 연구하기위한 모델

다음 절차의 전반적인 목표는 급성 각막 동종이식 거부 반응에 대한 모델을 소개하는 것입니다. 이것은 먼저 기증자의 각막을 제거함으로써 이루어집니다. 절차의 다음 단계는 수혜자 이식 침대를 준비하고 기증자의 각막을 제자리에 봉합하는 것입니다.

그런 다음 이식편의 무결성을 테스트하고 누출이 없으면 눈꺼풀을 봉합합니다. 일주일 후, 동종이식편의 거부 반응을 측정하기 위해 각막 이식편의 불투명도를 평가합니다. 궁극적으로, 이 모델을 사용할 수 있으며, 고형 장기 이식의 동종이식 거부 반응과 관련된 가장 중요한 요인을 정의하기 위해 다양한 치료 전략을 테스트할 수 있습니다.

각막 이식은 미국에서 가장 흔합니다. 이 절차에 사용할 수 있는 여러 동물 모델이 있지만 마우스가 가장 일반적으로 사용됩니다. 이 모델은 각막 이식의 거부 및 수락을 모두 포함하는 요인을 정의하는 데 사용되었습니다.

기증자와 수혜자 마우스를 마취하고 발가락 꼬집기로 마취 상태를 확인한 후 수술을 받지 않은 눈에 순수 윤활 연고를 도포합니다. 그런 다음 목을 가로지르는 테이프 스트립을 사용하여 기증자 눈이 수평이 되도록 머리를 튼튼하고 움직일 수 있는 지지대에 고정합니다. 이제 끝이 메틸 블루로 염색된 2mm 직경의 타인을 사용하여 중앙 각막 이식 부위의 윤곽을 그립니다.

그런 다음 15도 안과용 나이프로 칼날이 각막을 관통하여 아래 수정체의 손상을 방지합니다. 점탄성 용액을 전방(anterior chamber)에 주입하여 챔버가 더 깊어지도록 합니다. 이제 베니스 가위로 기증자 이식편을 절제하고 이식편을 얼음 위의 HBSS 접시로 옮겨 마드레스를 얻기 위해 사용하고 1% tpic 보조제와 2.5% 에프린 염산염을 수혜자의 눈에 몇 방울 투여합니다.

그런 다음 앞에서 설명한 대로 1.5mm 타인을 사용하여 15도 점안용 칼날을 사용하여 이식 부위의 윤곽을 그리며 각막을 관통하고 점탄성 용액을 전방에 주입하여 심화시킵니다. 기증자 각막과 수정체 사이의 공간을 유지하기 위해 이는 기저 수정체와 기증자 내피의 손상 가능성을 줄입니다. 베니스 가위를 사용하여 수신자로부터 윤곽이 그려진 중앙 각막 버튼을 제거하고 버립니다.

각막 버튼을 제거하여 비워진 부위에 점탄성 매체를 추가하여 렌즈와의 직접 접촉으로 인한 손상으로부터 각막 내피 세포를 보호합니다. 이제 기증자 각막을 매우 미세한 팁 마이크로 집게를 사용하여 이식 침대 위에 놓습니다. 11.0 나일론 봉합사의 첫 번째 물기를 기증자 각막을 통해 기증자 쪽에 전체 두께의 약 90%까지 놓습니다.

그런 다음 같은 깊이의 수혜자 쪽으로 묶습니다. 중간 추기경 단속 봉합사를 사용하여 이식된 각막을 계속 고정합니다. 총 8-10개의 봉합사만 있으면 됩니다.

이제 식염수 주사로 전방을 개혁하고 씻으십시오. 또는 전방으로 공기를 주입하여 재형성합니다. 주입 후 셀룰로오스 스폰지를 사용하여 이식편의 무결성을 부드럽게 테스트하십시오.

마지막으로 눈을 평가합니다. 동공이 둥글고 전방이 정상으로 보이는지 확인합니다. 이식편이 양호해 보이면 항생제 연고를 바르고 선택적으로 수술 후 7.0 실크 봉합사로 눈꺼풀을 닫으십시오.

마우스가 완전히 깨어날 때까지 모니터링한 다음 이틀 동안 가정용 케이지에서 계속 관찰합니다. 수술 후 4일에서 7일 사이에 마취된 마우스에서 봉합사를 제거합니다. 봉합사를 제거한 후 며칠 동안 마우스를 관찰하십시오.

불투명도 척도를 사용하여 0에서 5 사이의 점수로 모든 각막을 평가합니다. 0은 불투명도가 없음을 나타냅니다. 1의 점수는 최소한의 표면적 불투명도에 해당합니다.

점수가 2점이면 눈에 띄는 밑에 있는 동공이 있는 경미하거나 더 깊은 불투명도를 나타냅니다. 그리고 홍채는 기질 불투명도가 있는 각막에 3점의 징후로, 동공 가장자리를 제외하고는 홍채를 자세히 볼 수 없습니다. 촘촘한 기질 불투명도가 있고 기저 구조를 볼 수 없는 경우 이식편에 4점을 부여합니다.

집중적인 기질 부종과 함께 완전한 불투명도가 있고 동공과 홍채가 모두 완전히 가려진 경우 이식편에 5점을 부여합니다. 텍스트 프로토콜은 또한 혈관 침투에 대한 0에서 8까지의 척도를 제안합니다. 이식 모델을 사용하여 다양한 조작을 수행할 수 있습니다.

예를 들어, 비장 세포는 공여자 마우스에서 전방으로 추가될 수 있습니다. 기증자를 안락사시킨 후, 비장을 제거하고 3ml 주사기 플런저를 사용하여 세포 여과기로 옮기고, 비장을 파괴한 다음, 비장 세포를 HBSS 10ml로 세척하고, 세척된 세포를 HBSS 10ml에 재현탁시킨 다음 혈세포 분석기로 세포를 계수합니다. 나중에 사용할 때까지 셀을 실온에 보관하십시오.

각막 이식을 수행하기 전에 해부 현미경을 사용하여 반대쪽 눈의 전방에 세포를 주입하고 33 게이지 바늘에서 5 마이크로리터의 HBSS에 100만 개의 비장 세포를 주입합니다. 이 모델은 기증자 각막 동종이식편에 의해 발현된 동종 항원에 대한 전신 동종 항원 T 세포 내성이 이식편 생존을 향상시킬 수 있는지 여부를 테스트하는 데 사용되었습니다. BC 마우스는 B 10 비장 세포를 전방으로 주입하여 C 57 black 10 allo 항원에 내성을 가졌습니다.

이것은 각막 동종이식 수용을 개선하지 않았습니다. 연구에 따르면 DTH 반응으로 측정된 동종 항원에 대한 항원 특이적 내성을 확립하는 것은 피부 또는 각막 동종이식의 결과에 영향을 미치지 않습니다. 유사한 연구에서는 BAB c 마우스에서 B 10 allo 항원에 대한 DTH 내성이 설정되었을 때 B 10 allo 항원의 일부 또는 전부를 살리는 피부 이식이 생존을 증가시키지 않았다는 것을 보여주었습니다.

따라서 항원 특이적 DTH가 확립된 C장은 각막 또는 피부 동종이식편으로부터 측정 가능한 이점을 얻지 못했습니다. 오늘의 실험에서 볼 수 있듯이 각막 이식은 기술적으로 어려운 절차입니다. 그러나 이것은 그래프의 성공 또는 실패를 결정하는 세포와 요인을 연구하는 데 가장 적합한 모델입니다.