Name: 사용 전의 VIVO 챈들러 루프 장치 수정 된 고분자 혈액 도관의 생체 적합성을 평가하기 위해 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-20T16:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: 배우세요 재조합 CD47로 변형된 고분자의 생체적합성을 Chandler Loop 장치를 사용하여 평가하는 방법입니다. 이 기술은 혈액 관류를 모사하여 이식 의료기기의 이물 반응을 감소시키고 생체적합성을 향상시키는 데 활용됩니다.

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recCD47 1. 수정 고분자 표면 NOTE :. 프로토콜은도 1에 개략적으로 요약은도 1a는 티올 반응성 중합체 표면의 생성을 도시 한도 1b는 티올 반응성 recCD47의 생성을 도시한다.. <ol><li> 1 일 <ol><li> 멸균 수에 PDT-BzPh의 용액 (1 ㎎ / ㎖)과 탄산 수소 칼륨 (KHCO 3) (0.7 ㎎ / ㎖)을 준비한다. 4 ° C (빛으로부터 보호)에서 밤새 교반한다. </li></ol></li><li> 2 일 <ol><li> (회전 바퀴 주위에 맞게 충분히) 40cm 길이의 조각으로 고분자 튜브를 잘라. </li><li> 통이나 챈들러 루프 장치에 실온에서 90 분 동안 hexacylpyridinium의 0.1 % 수용액에 튜브를 만끽. 90 분 담근 후 멸균 수의 3 배와 튜브를 씻어. </li><li> (15 % 수성 칼륨 인산을 첨가하여 1 일부터 PDT-BzPh의 용액을 산성화 KH 2 </suB&gt; PO 4). 흐린 미셀 솔루션을 형성 PDT-BzPh의 ML 당 50 μL KH 2 PO 4를 추가합니다. </li><li> 진탕 또는 장치 상에 실온에서 40 분 동안 산성화 PDT-BzPh 용액 튜브를 담근다. </li><li> 한 번 : 묽은 초산 (1000 일)와 튜브를 씻어. </li><li> 60 분의 전체 지속 시간 동안 UV 조사에 튜브를 노출. 전체 면적을 조사하기 위해 15 분마다 차례 ¼ 튜브를 회전합니다. </li><li> 쉐이커 또는 장치에 실온에서 20 분 동안 20 ㎎ / ㎖의 탄산 칼륨의 수용액 (KHCO 3)에서 튜브를 담근다. </li><li> 멸균 수에 4 ° C에서 멸균의 3 배 및 저장소와 튜브를 씻어. </li></ol></li><li> 3 일 <ol><li> (: 흄 후드에서 수행주의) 200 ㎕의 디메틸 포름 아미드 (DMF)에 5 mg의 설포-SMCC을 녹인다. </li><li> recCD47 폴리 라이신 용액을 0.1 ㎎ / ㎖에 1 단계에서 제조 된 설포-SMCC 용액 50 μl를 추가하고, RO에서 60 분 동안 교반톰 온도. </li><li> 60 분 교반하는 동안, 가스 제거는 둘 베코 인산염 완충 생리 식염수 (DPBS)와 따로 멸균. </li><li> 정화 설포-SMCC는 제조업체의 지침에 따라 7K 분자량 컷 - 오프 스핀 탈염 컬럼을 사용하여 recCD47을 반응. 최종 관류 (고품질 티올 반응성 recCD47)를 모아서 코트 DPBS와 관의 내부에 필요한 볼륨으로 희석한다. </li><li> 멸균과 일이에서 튜브를 씻어 DPBS 배는 탈기. </li><li> 이하 2 분간 탈기 DPBS 20 ㎎ / ㎖와 트리스 (2 - 카르복시 에틸) 포스 핀 히드로 클로라이드 (TCEP)의 용액으로 튜브의 표면 개질 반응. 멸균 탈기 DPBS 배와 튜브를 씻어. </li><li> 튜브에 설포-SMCC-반응 recCD47를 추가하고 통 또는 장치에 4 ° C에서 하룻밤 배양한다. </li></ol></li></ol> 수정 된 표면에 recCD47의 2 면역 정량 <ol><li> 수정 된 튜브를 씻어하는 3 일 기지에서 정량시간 DPBS 배. 저장 튜브는 4 ° C에서 DPBS에 정량을 사용하지. </li><li> 96 웰 플레이트의 우물에서 생검 펀치를 중복 튜브 샘플을 만들 수 및 배치 4mm 생검 펀치를 사용합니다. </li><li> 검출 항체로 처리하지 변성 샘플 튜브로 이루어지는 음성 대조군을 준비한다. 검출 항체 처리 변성 샘플 튜브로 이루어진 항체 제어를 준비한다. 검출 항체 처리 변성 튜브 시험 샘플을 준비한다. </li><li> 진탕 기에서 실온에서 60 분 동안 DPBS에서 0.4 % 소 혈청 알부민 (BSA)으로 차단 샘플. </li><li> 차단 대기음 BSA 트리스 완충 식염수 플러스 1 % 트윈 20 (TBST) 3 배, 통에 10 분 각 씻어 후. </li><li> 면역에 대한 제조업체의 권장 희석에 따라 0.4 %의 BSA에 항체의 희석 작업을 준비합니다. 인간 CD47 항체 B6H12-FITC 일을 희석 : (100) 0.4 %의 BSA에. </li><li> 적절한 우물에 항체 희석 200 μl를 추가합니다. Incuba0.4 %의 BSA 만과 테 부정적인 제어합니다. 쉐이커에 60 분 (빛으로부터 보호)을 실온에서 품어. </li><li> TBST 배, 10 분 쉐이커 각 씻어. 마지막 TBST 린스를 대기음 및 튜브 샘플 웰에 200 μL의 DPBS를 추가합니다. </li><li> 최종 관류 고품질 티올 반응성 재조합 CD47이다 모아서 코트 DPBS와 튜브의 내부에 필요한 양으로 희석한다. </li><li> FITC 여기 (485 나노 미터) 및 배출 (538 나노 미터) 설정을 사용하여 마이크로 플레이트 리더를 사용하여 FITC 신호 강도를 읽으십시오. </li><li> 계산 recCD47 자동 형광 및 비특이적 항체는 대조 샘플에서 바인딩 차지 표준 값을 기초로 중합체 표면에 결합. </li></ol> 3 챈들러 루프 장치 프로토콜 혈액 수집 프로토콜의 임상 시험 심사위원회 (IRB) 승인 및 동의서 서류 이전에 인간의 혈액 샘플 수집을 시작하기를 추구합니다. 정보를 얻rmed 인간의 혈액 기증자의 동의. 참고 : 장치를 묘사 한 그림이 그림 2에 나타나있다. <ol><li> 약 2 직경 바퀴의 때까지 증류수로 수조를 작성하는 침수된다. 10 % 표백제 솔루션을 만들기 위해 물을 욕조에 충분히 표백제를 추가합니다. 설정 물 37 ° C에 욕조와 온도가 평형을 할 수 있습니다. </li><li> 금속 (도 1b에 도시) 어댑터, 미 변성 및 변성 튜브 튜브를 수집하고,도 1c에 도시 된 바와 같이, 장치를 바퀴 주위에 조립한다. 그 튜브가 제자리에 금속 어댑터 바퀴 snuggly 주위에 적합해야합니다. </li><li> 구연산이나 다른 항응고제의 2 ㎖로 채워져 유리 병에, IRB 승인 프로토콜을 사용하여 30 ml의 혈액 샘플을 확보하고, 시료가 수집 된 후 응고 방지하기 위해 반전으로 섞는다. </li><li> 튜브에 약간의 공기를 떠나, 금속 밸브와 주사기를 사용하여 각 튜브에 혈액의 약 10 ML을 추가합니다. 밸브 캡과 연구를 고정3 시간 동안 otate. </li><li> 10 % 표백제 용액으로 처리 폐기물 비커에 혈액을 배출 (또는 기관 정책 필요). </li><li> 부드럽게 혈액의 모든 흔적을 제거하는 DPBS와 튜브 내부를 씻어. 흐름을 통해 폐기물 비커를 수집합니다. 기관의 정책에 따라 혈액 폐기하십시오. </li><li> 장치 및 표면 10 % 표백제 용액을 사용하거나 기관 방침에 따라 접촉하는 혈액 소독. </li><li> 형광 현미경 또는 주사 전자 현미경을위한 프로세스 샘플 후술. </li></ol> 4 형광 현미경과 세포 계수 <ol><li> 4 % 파라 포름 알데히드 (PFA) 용액 (주의 : 흄 후드에서 수행)을 준비. </li><li> 4 ° C에서 하룻밤 4 % PFA 용액에 튜브를 품어. </li><li> 하룻밤 배양 후, 4 % PFA를 제거하고 DPBS 매우 부드럽게 영화를 씻어. </li><li> 염색에 대한 루멘 표면을 노출하는 섹션으로 튜브를 잘라. </li><li> 얼룩실온에서 30 분 동안 4 &#39;, 6-diamidino-2-페닐 인돌 (DAPI)로 미디어를 장착 몇 방울의 튜브 섹션 (광으로부터 보호). 염색 후, DAPI 배경 신호를 감소시키기 DPBS로 매우 조심스럽게 튜브를 헹군다. </li><li> DAPI 필터 및 디지털 카메라가 장착 된 형광 현미경을 사용하는 이미지 200X 배율 하에서 뷰 9 맹목적 선택된 분야에서 세포의 수를 계산한다. </li><li> 기록 셀은 시야 당 계산 및 결과의 통계적 유의성을 결정하기 위해 적절한 통계 분석을 수행합니다. </li></ol> (5) 주사 전자 현미경 <ol><li> 2 % 글루 타르 알데히드 용액 (주의 : 흄 후드에서 수행) 준비합니다. </li><li> 밤새 4 ° C에서 2 % 글루 타르 알데히드 용액 튜브를 품어. </li><li> 하룻밤 배양 후, 부드럽게 DPBS와 함께 호스의 3 배를 씻어. </li><li> 산화 오스뮴의 1 % 용액을 준비합니다 (주의 : 심각한 흡입 위험! ) 흄 후드에서 사용합니다. </li><li> 실온에서 15 분 동안 산화 오스뮴의 1 % 용액에서 배양 튜브. </li><li> 부드럽게 DPBS와 함께 호스의 3 배를 씻어. </li><li> 에탄올 농도의 시리즈 (25 %, 50 %, 75 %, 95 %, 100 % 에탄올)을 준비한다. </li><li> 에탄올 농도의 일련의 인큐베이션 튜브 탈수. 25 %, 50 %, 75 %, 20 분마다 95 % 에탄올에서 배양한다. 30 분 동안 100 % 에탄올에서 배양한다. </li><li> 초 임계 점은 모든 수분을 제거하고 45 분 동안 CO 2와 함께 호스를 건조. </li><li> 페이스트 또는 흑연 표본 스텁에 마운트 튜브 섹션. </li><li> 금 - 팔라듐의 12.5 nm의 코트 튜브 섹션. </li><li> 주사 전자 현미경으로 조사한다. </li></ol>

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이 책에서보고 된 연구는 국가의 수상 번호 T32 HL007915 (JBS와 RJL)에서 수상 번호 R21 EB015612 (SJS) 및 국립 심장, 폐, 혈액 연구소에서 바이오 메디컬 이미징 및 생물의 국립 연구소에 의해 지원되었다 건강 연구소.

(그림 1에 요약) photoactivation의 화학에 대한 PDT-BzPh 첨부 및 후속 UV 조사 용이하게하기 위해 충분한 탄화수소가 거의 모든 고분자 표면의 수정을 허용 PDT-BzPh을 사진을 활성화. 반응성 티올 그룹과 고분자 표면을 기능화하는 것은 관심의 검증 가능한 분자의 범위의 후속 첨부 할 수 있습니다. 우리의 특정 연구에서 우리는 재조합 CD47 11 ~ 13을 선택했다. 우리는 이관 능성 가교 링커 SMCC 11-13와 단백질의 아민 기의 반응에 관여 사용 된 특정 공액 화학. 이렇게 티올 화 중합체 표면과 후속 반응에 티올 반응성 recCD47 제공. 최종 생성물은 중합체에 공유 결합 recCD47 모노 설파이드 결합이었다. CD47의 아미노산 중 아민 기가 반응에 사용되지 않았 음을 확인시켜 효능을 완화하는 데 도움고정화 CD47, 우리는 상기 단백질의 C-말단에 폴리 리신 태그를 삽입함으로써 수정 recCD47. 유사한 분자량이 다...

그러한 체외 순환 및 신장 투석과 같은 많은 임상 절차, 중합체 혈액 도관의 사용을 필요로하고 종종 시술 후 합병증 1과 연관된다. 혈액 관류 할 때,이 폴리머는 혈액 단백질 및 혈소판, 단핵구 / 대식 세포 접착의 흡착 결과, 이물 반응 (FBR)를 이끌어 낼, 그리고 할 시술 후 합병증에 기여 모두 염증성 사이토 카인의 방출 / 또는 장치 고장 2,3. 따라서, 이러한 문제를 해결하기위한 전략은 생체 재료 연구의 중요한 영역 및 지속적인 유지. 연구자들은 생리 활성 또는 생체 불활성 분자 4-6 혈액 접촉면을 수정하여이 문제를 해결하려고했습니다. 우리의 실험실에서 연구는 FBR을 완화하고 이들 물질의 효능을 증가시키기위한 전략으로 고분자 생체 재료에 재조합 CD47 (recCD47를) 추가에 초점을 맞추고있다. CD47는 재하 표현 transmembr입니다세포 7-10와 쇼를 표현하는시의 면역 회피의 알려진 역할 부여 &quot;자기&quot;상태 메탄 단백질은 고분자 표면에 11 ~ 13에 추가 할 때 생체 적합성을 부여에 약속드립니다. 신호 규제 단백질 알파 (SIRPα), CD47에 대한 동족 수용체 및 횡단 단백질의 가족을 함유 면역 수용체 티로신 기반의 억제 모티프 (ITIM)의 회원은 골수 기원 (14)의 세포에 표현된다. 우리는 이전에 CD47가 SIRPα 매개 세포 신호를 통해, 생체 외, 생체 ​​폴리 우레탄 (PU)와 폴리 염화 비닐 (PVC)에 대한 면역 반응을 하향 조정하고 생체 내 모델 11-13에 있음을 증명하고있다. 우리의 조사에 중앙 화학적으로 반응성 티올 그룹이 공유 다기능 고분자 (PDT-의 BZ와 튜브를 반응시켜 고분자 튜브에 추가되는 여기에 설명 된 비교적 새로운 photoactivati​​on 화학은있다2 - 피리 딜 디티 오 (PDT)로 이루어지는) 액, 광 반응성 페논 (BzPh) 및 카르복시 변성 폴리 알릴 11-13. 트리스 함께 공유 첨부 PDT기를 환원 (2 - 카르복시 에틸) 포스 핀 히드로 클로라이드 (TCEP)는 11 일 이후 일 수 티올 표면은 치료 잔기와 반응하여 산출한다. 본원 이전 상세한 12,13, 상기 C-말단 폴리 - 리신 12,13 꼬리의 첨가로 개질 recCD47는, Sulfosuccinimidyl - 4 - [N -maleimidomethyl] 시클로 헥산 카르 복실 레이트 1과 반응 (술포-SMCC) 1 시간 동안 튜브 (11) 사이 및 recCD47 우람 모노 설파이드 결합 형성을 허용 티올 반응성기를 생성한다. CD47의 표면 기능화 항염증제 용량은 원래 응고 혈전 (15)의 시험 관내 모델로서 1958 년에 설명 된 전체 인간 혈액과 챈들러 루프 장치를 이용하여, 전 비브 O, 시험 하였다. 장치에 의존밀폐 된 튜브 시스템은 부분적으로 공기 튜브 (15)를 통해 혈액을 순환하는 회전 모터 가득합니다. 이 실험 모델 수정 및 표면 개질시 혈액 노출의 효과뿐만 아니라, 혈액 세포의 생리학에 따라 그 표면 변형의 영향을 조사 할 수있는 기회를 제공한다. recCD47이 photoactivation 화학을 사용하여 중합체의 다양한 표면에 추가 될 수 있고, 그것의 항 염증 능력은 중합체 표면 (11, 12)를 통해 혈류를 흉내 임상 적으로 중요한 생체 모델을 이용하여 평가 될 수있다. 장치에서 인간의 혈액에 노출되었을 때 변성 중합체에 비해 recCD47 변성 임상 등급의 혈액 도관은 상당히 적은 혈소판과 염증 세포 부착을 보여준다. 본 변형 과정의 단계별 설명은 아래에 자세히 설명된다.

<table><tbody><tr><td>16% 파라포름알데히드(PFA)</td><td>Thermo Scientific</td><td>58906</td><td>주의! 흄 후드에 사용</td></tr><tr><td>25% 글루타르알데히드</td><td>VWR</td><td>AAA17876-AP&nbsp;</td><td>주의! 흄 후드에서 사용</td></tr><tr><td>2-pyridyldithio,benzophenone (PDT-BzPH)</td><td>실험실에서 합성</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민(BSA)</td><td>Sigma</td><td>A3059-100G</td><td></td></tr><tr><td>구연산염</td><td>Sigma</td><td>S5770-50ML</td><td></td></tr><tr><td>디지털 카메라</td><td>Leica</td><td>DC500</td><td>생산 중단</td></tr><tr><td>디메틸포름아미드(DMF)</td><td>Sigma</td><td>270547-100ML</td><td>주의! 흄 후드</td></tr><tr><td>Dulbecco에 사용 s 인산염 완충 식염수(DPBS)</td><td>Gibco/Life Technologies</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>형광 현미경</td><td>Nikon</td><td>TE300</td><td></td></tr><tr><td>빙하 아세트산</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38-212</td><td>주의! 흄 후드</td></tr><tr><td>Human CD47 (B6H12)에 사용 &ndash; FITC 항체</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>SC-12730</td><td></td></tr><tr><td>Osmium Tetroxide</td><td>Acros Organics</td><td>197450050</td><td>주의! 흄 후드에 사용</td></tr><tr><td>중탄산 칼륨 (KHCO3)</td><td>Sigma</td><td>237205-100G</td><td></td></tr><tr><td>인산 칼륨 모노베이직 (KH2PO4)Sigma</td><td></td> <td>P5655-100G</td><td></td></tr><tr><td>PVC 튜빙 (심혈관 시술 키트)</td><td>Terumo Cardiovascular Systems</td><td>60050</td><td>대부분의 임상용 튜빙은</td></tr><tr><td>작동합니다 주사 전자 현미경</td><td>JEOL</td><td>JSM-T330A</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨 (NaCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP358-212</td><td></td></tr><tr><td>마이크로플레이트 리더</td><td>분자 장치</td><td>Spectramax Gemini EM&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sulfo-SMCC</td><td>시그마</td><td>M6035-10MG</td><td>수분 민감성!</td></tr><tr><td>트리스(2-카르복시에틸) 포스핀(TCEP-HCl)</td><td>Thermo Scientific</td><td>20491</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Bio-Rad</td><td>170-6531</td><td></td></tr><tr><td>벡타쉴드(DAPI</td><td>Fisher Scientific</td><td>H-1200</td><td>포함) 감광성!</td></tr><tr><td>Zeba 스핀 탈염 컬럼 &ndash; 7 K MWCO</td><td>Thermo Scientific</td><td>89891</td><td></td></tr></tbody></table>

사용 전의 vivo 챈들러 루프 장치 수정 된 고분자 혈액 도관의 생체 적합성을 평가하기 위해

The Use of the Ex Vivo Chandler Loop Apparatus to Assess the Biocompatibility of Modified Polymeric Blood Conduits

합성 체 표면에 도입 될 때 이물 반응이 일어난다. 이 시술 후 합병증으로 이어지는, 혈액 단백질의 흡착 및 혈소판의 후속 부착 및 활성화, 단핵구 / 대 식세포 접착 및 염증 세포의 신호 이벤트에 의해 특징입니다. 챈들러 루프 장치 연구자들은 혈액의 많은 양이 고분자 도관을 통해 관류 때 발생하는 분자 및 세포의 상호 작용을 연구 할 수있는 실험 시스템입니다. 이를 위해, 본 장치는 다양한 중합체 표면 변형 항염의 평가를 허용하는 생체 외 모델로 사용되고있다. 우리 연구실은 공유 재조합 CD47와 photoactivati​​on 화학을 통해 수정 된 혈액 도관, 고분자 표면에 생체 적합성을 부여 할 수 있습니다 것으로 나타났습니다. 고분자 표면에 CD47를 추가하는 것은 중합체 혈액 도관 효능을 촉진 할 수있는 효과적인 수단이 될 수있다. 그녀의EIN은 CD47 변성 및 제어 도관과 혈액의 상호 작용을 조사하는 임상 적으로 중요한 중합체 혈액 도관 및 생체 외 실험 모델로서 챈들러 루프의 사용 재조합 CD47을 추가하는 데 사용 photoactivation 화학 디테일 방법론이다.

SMCC를 사용하여 티올 - 반응성 recCD47 폴리 리신과 함께 PDT-BzPh 및 TCEP를 사용하여 티올 - 반응성 중합체 표면을 생성하는 것은 중합체 recCD47 표면에의 부착을 허용한다. 개질 방법은도 1에 개략적으로 요약된다. 본 변형 공정의 편의성이 단백질을 가정 할 아민 - 함유 리신과 같은 충분한 화학적 반응성기로 변성 될 수 있으며, 다양한 단백질 및 다양한 중합체 표면에인가 될 수 있다는 것이다 중합체 것이 충분히 가능한 탄화수소를 갖는다. 그것은 recCD47이 프로토콜을 이용하여 11-13 중합체 표면에 부가 될 수 있음을 이전에 입증되었다. 도 3a에 도시 된 바와 같이, 상당한 FITC 염색 DIC 촬상에 의해 나타낸 바와 같이 막에 특별히 지역화 CD47의 세포 외 영역 (IG), FITC로 접합 된 항체를 이용하여 볼 수있다 recCD47<st...

고분자 혈액 도관에 대한 혈액 노출은 임상 합병증과 관련된 이물질 반응을 시작합니다. 여기에서는 이러한 도관을 통한 혈액 관류를 모방하는 실험 도구인 Chandler Loop Apparatus에 대해 설명합니다. 재조합 CD47의 부속물은 이러한 도관에서 이물질 반응의 증거를 감소시킵니다.

사용 전의 VIVO 챈들러 루프 장치 수정 된 고분자 혈액 도관의 생체 적합성을 평가하기 위해

The foreign body reaction occurs when a synthetic surface is introduced to the body. It is characterized by adsorption of blood proteins and the ...

다음 실험의 전반적인 목표는 혈액 풍요의 챈들러 루프 모델을 사용하여 재조합 CD 47로 변형된 고분자의 생체 적합성을 평가하는 것입니다. 이는 먼저 재조합 CD 47로 중합체를 변형시킴으로써 달성됩니다. 두 번째 단계로 광 활성화 화학을 사용하여 변형된 폴리머를 챈들러 루프에서 인간의 혈액에 노출시켜 이식된 물질에 대한 혈액 관류를 모방합니다.다음으로, 부착된 세포를 고정하고 염색하여 생체 적합성의 척도로 부착된 세포의 수를 계산합니다. 결과는 재조합 CD 47이 중합체의 생체 적합성을 촉진하고 이물질 거부를 감소시킨다는 것을 보여주며, 이는 비변형 중합체에 비해 재조합 CD 47 변형 중합체에 부착하는 세포가 현저히 적다는 관찰에 근거합니다. 이 방법은 이식형 의료기기의 거부 반응을 방지하는 방법과 같은 생체 재료 분야의 주요 질문에 답할 수 있습니다.재조합 CD 47은 생체 적합성을 촉진하고 이물질 반응을 방지할 수 있는 가능성을 보여주기 때문에 이 기술의 의미는 이식형 장치 고장을 예방하는 것으로 확장됩니다.티올 반응성 고분자 표면과 티올 반응성 재조합 CD 47을 생성하기 위해 먼저 고분자 튜브를 40cm 길이의 조각으로 절단하며, 이는 90분 동안 헥사 씰 회음부의 0.1% 수용액에 튜브를 담글 수 있을 만큼 충분히 깁니다. 챈들러 루프 장치의 실온에서 90분 담근 후 15% 인산칼륨 모노 염기성을 첨가하여 이전에 준비된 alial ditol benzone phon 용액을 산성화한 후 멸균수로 튜브를 세 번 헹굽니다. 준비된 용액의 밀리리터당 인산칼륨 모노 염기성 50마이크로리터를 추가하여 흐린 미스셀러 용액을 형성합니다.장치의 실온에서 40분 동안 산성화된 용액에 튜브를 담그십시오. 그런 다음 묽은 아세트산으로 튜브를 헹굽니다. 그런 다음 튜브를 총 60분 동안 자외선 조사에 노출시킵니다.튜브를 1/4 회전하고 15분마다 돌려 UV 조사 후 전체 표면적을 조사합니다. 튜브를 밀리리터당 20밀리그램의 중탄산칼륨 용액에 장치의 실온에서 20분 동안 담그십시오. 멸균수로 튜브를 세 번 헹구고 섭씨 4도와 멸균수를 보관하십시오.다음날, 5mg의 설파 SMCC와 200마이크로리터의 설파 SMCC 용액을 0.1밀리리터당 0.1밀리그램의 재조합 CD 47 폴리리신 용액에 넣고 실온에서 60분 동안 교반하는 동안 DGA, 멸균 ECCO, 인산 완충액, 식염수 또는 DPBS를 60분 동안 교반하고 따로 보관합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

혈액 - 문의 autologous 세포 및 시험 biocompatibility과 biomaterials 것은 시딩의 티타늄에 대한 방법을 설명합니다. 이 방법은 돼지의 venae cavae에 주입 수술의 분 이내에 씨앗 내피 전구 세포와 티타늄 튜브를 사용합니다. 이 기술은 다른 많은 implantable 생명 의학 장치에 적용할 수 있습니다.

Autologous 내피 전구 세포 - 심는 기술 및 대형 동물 모델에서 순환기 장치에 대한 Biocompatibility 테스트

microvascular 크기의 채널 (&lt;30 μm의)와 microfluidic 장치의 전체 내부 3D 표면에 걸쳐 문화 내피 세포 단일층를하는 방법이 설명되어 있습니다.

Hematologic 질환의 Microvascular 상호 작용 유학을위한 Endothelialized Microfluidics

석판술으로 새겨져와 PDMS에서 가공 Microfluidic 흐름 여왕님 EC 장애와 염증과 관련된 기능적 결과를 알아내기 위해 적용됩니다. 대표 실험에서는 차등 전단 응력의 능력 시토킨 활성화 EC monolayers에 monocytic 세포 접착을 조절하기 위해이 입증되었습니다.

온칩 내피 염증성 Phenotyping

생리 흐름 조건에서 순환 세포의 케모카인 - 감독 넘쳐을 연구하는 소설 입체 흐름 챔버 장치

여기서는 조사자 마우스 순환계 유래 내피 부착 분자로 코팅 챔버를 연결하여 백혈구 보충 생체 역학을 평가할 수 있도록하는 프로토콜을 제시한다. 이 상대적인 생물학적 조건하에 백혈구 평가 가능 때문에이 방법은 상당한 이점을 제공한다.

의 흐름 조건에서 백혈구 - 내피 상호 작용을 평가 전의 VIVO Autoperfused 미세 흐름 (microflow) 상공 회의소의 분석

우리는 전체, 비 anticoagulated 혈액에서 응고의 분석과 연구를 허용 하는 체 외에서 모델 제시. 그리고 시스템에 anticoagulation 건강 한 내 피 세포의 자연 anticoagulation 효과에 따라 내 피 세포 활성화 응고 귀 착될 것 이다.

3D 세포 배양 및 비 anticoagulated 전 혈을 사용 하 여 내 피 세포의 항 응 혈 약 그리고 항 염증 제 속성에 대 한 평가

우리는 사내 디자인 된 생체 외에서 흐름 챔버 모델, 조직 이식에 세균성 부착의 조사 수 있는 설명 합니다.

연구 조직 이식에 세균성 부착을 병렬 플레이트 관류 시스템의 생체 외에서 모델

이 프로토콜은 레이저 컷 신경 혈관 임플란트를 사용하여 혈액 접촉 장치의 포괄적 인 혈전 성 평가를 설명합니다. 신선한, 헤파린화 인간의 혈액과 흐름 루프 모델은 혈류를 모방하기 위해 적용됩니다. 관류 후, 다양한 혈액학적 마커를 분석하고 시험된 장치의 혈적합성 평가를 위해 혈액 수집 직후 얻은 값과 비교한다.

인간의 혈류를 모방하는 흐름 루프 모델에서 혈액 접촉 임플란트의 혈적합성 테스트

여기에 제시된 시험관 내 혈역학 루프 모델에 대한 표준화된 프로토콜이 있습니다. 이 모델은 ISO(국제표준화기구) 표준 10993-4에 따라 관류 관 또는 혈관 스텐트의 혈중 호환성을 테스트할 수 있습니다.

혈관 의료 기기의 혈혈성 호환성 및 호스트 세포 활성화를 조사하는 시험관 헤모역학 루프 모델

이 프로토콜의 목표는 관형 전기 스캐폴드에서 인간 대식세포와 근섬유세포의 동적 공동 배양을 실행하여 재료 중심 조직 재생을 조사하는 것이며, 전단 응력과 순환 스트레칭의 분리를 가능하게 하는 생체 반응기를 사용하는 것입니다.

유량 및 스트레치 하에서 생체 재료의 염증 및 재생 능력을 평가하는 다중 큐 생물 반응기

이 프로토콜은 카테터 삽입 및 3D 혈관 조영술을 생존 절차로 사용하여 정맥 순응도 및 팽창성의 생체 내 정량화를 가능하게 하여 다양한 잠재적 응용 분야를 가능하게 합니다.

3D 혈관 조영술을 사용한 In vivo Ovine 모델에서 열대정맥 Cava 순응도 및 팽창성 정량화

배우세요 재조합 CD47로 변형된 고분자의 생체적합성을 Chandler Loop 장치를 사용하여 평가하는 방법입니다. 이 기술은 혈액 관류를 모사하여 이식 의료기기의 이물 반응을 감소시키고 생체적합성을 향상시키는 데 활용됩니다.

사용 전의 VIVO 챈들러 루프 장치 수정 된 고분자 혈액 도관의 생체 적합성을 평가하기 위해

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