Name: 에 대한 쥐의 내시경 생체 발암 및 소장의 평가의 멀티 모달 이미징 상처 치유 및 염증 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: 학습하세요 쥐 내시경을 이용한 대장 종양, 점막 상처 치유 및 염증 평가 방법을. 이 기술은 실험적 장염과 대장암 연구에서 반복적인 점막 변화 평가와 실시간 질병 진행 모니터링을 가능하게 합니다.

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우리는 전문적인 기술 지원을 소냐 Dufentester 및 엘크 웨버 감사합니다. 우리는 의료 정보학 지원을위한 원고와 스테판 브루크너를 교정에 대한 Faekah Gohar 감사합니다. 이 작품은 그렇지-크로네 -는 Fresenius 재단 (2012_A94)에서 학제 보조금에 의해 지원되었다. D. Bettenworth 의학 학부, Westfälische Wilhelms-Universität 뮌스터에서 연구 친교에 의해 지원되었다. M. 브루크너는 도이치 Forschungsgemeinschaft (DFG SFB1009B8)의 &quot;Gerok&quot;회전 위치에 의해 지원되었다. 우리는 마우스 만화의 그림은 헤이 케 블룸 감사합니다.

모든 동물 실험은 독일어 동물 보호법에 따라 Landesamt 엘리제 투르, UMWELT 싶게 Verbraucherschutz (LANUV)에 의해 승인되었다. 1 재료 및 실험 설정 <ol><li> 동물 보호 <ol><li> 20~25g 무게 균주의 여성 또는 남성 마우스를 사용하여 지역 동물 보호 법규에 따라이를 수용. </li><li> 설치류에 대한 특별 차우와 마우스를 공급하고 알팔파없는 우를 적용​​ 적어도 3 일 endoluminal 자동 형광을 최소화하기 위해 시험을에서 형광 전에. </li><li> 멸균 마시는 임의 량의 물을 제공합니다. </li></ol></li><li> 급성 DSS 유발 성 대장염의 유도 <ol><li> 물을 멸균 100 mL에 DSS의 3g을 용해시켜 용액 : 덱스 트란 황산 나트륨 (36,000-50,000 다 DSS, 분자량) (/ V w) 3 %를 준비합니다. 마우스 수의에 전용 식수로이 솔루션을 제공하고 마우스 / 일 당 DSS-용액 5 ㎖를 계산합니다. 공급 계속DSS 수의 9없이 멸균 물 ROL 마우스. </li></ol></li><li> 대장 암의 유도 <ol><li> 돌연변이 azoxymethane (AOM) 용​​해 (암과 유전 적 손상을 일으킬 수 있음주의!) 멸균 식염수에 1 mg / ml의 최종 농도를 얻었다. 체중이 복강 1 ML의 주사기 (30 G) (10)를 사용하여 kg 당 10 mg을 AOM의 단일 용량을 적용합니다. </li><li> 21 3퍼센트 7 일 0에서 (w / v)의 DSS, 14 일의 반복주기, 일 28-35 하루 42-49로 (제어 마우스 제외) 도전 마우스는 염증 구동 대장 cancerogenesis을 유도한다. 이들 과제 (자세한 시간 일정에 대한 그림 4A 참조) 사이에 멸균 물 쥐를 넣습니다. 실험을하는 동안 멸균 물을 제어 쥐를 넣습니다. </li></ol></li><li> 형광 내시경 검사의 준비 (FE) <ol><li> 사용 플루 오레 Isothiocyanat (FITC) - 덱스 트란 (분자량 70,000 다; FITC : 포도당 = 1 : 250)에 대한 dete이형성증 관련된 혈관 패턴의 시각 개선에 의한 대장 선종의 ction의. </li><li> 정맥 5 분 형광 내시경 검사 전에 100 ㎕의 PBS에 희석 60 밀리그램 FITC - 복합 덱스 트란을 관리 할 수​​ 있습니다. </li></ol></li><li> 마취 <ol><li> (; 1.5-2 부피 %의 이소 플루 란 [2 - 클로로 2 - (다이 플루오 로메 톡시) -1,1,1 - 트라이 플루오로 - 에탄] 1.5 2 LO / 분보기) 이소 플루 란 마취를 위해 연속적인 공급을 제공한다. 단단히 마취를 제어하기 위해 안면 마스크와 특수 동물 용 마취 장비를 사용합니다. </li></ol></li><li> 관장의 준비 <ol><li> 유체 관장 2 ㎖ 주입 (내용 : 나트륨이 수소에게 (/ w 1.5 %를 V) 및 나트륨 / v)의 와트 (11 % 인산이 수소) 결장에 중요한 배설물 적재가 의심되는 경우보기를 모호하게 할 수있다. </li></ol></li></ol> 2 기술 장비 <ol><li> 개발 및 작은 동물 내시경의 사용 승인 된 동물 내시경 워크 스테이션을 사용합니다. 우와 연결카메라 유닛, 크세논 광원, 공기 펌프 및 백색광 내시경 용 종래의 PC 모니터에 rkstation. 그런 다음 카메라와 소형 단단한 망원경 (; 그림 5 1.9 mm 외경 10cm 길이)를 연결합니다. </li><li> 생검 겸자 또는 주입 관의 응용 프로그램에 대해 작동 채널 (그림 5D)와 내시경 칼을 사용합니다. 진단 대장 내시경 검사를위한 채널을 작동하지 않고 외피를 사용합니다. </li><li> 사용되는 트레이서를 여기시키기 위해 형광 내시경 광원의 설정을 구성 (예를 들면, FITC-덱스 트란에 대한 공역 내지 490). 또한, 망원경 카메라 (FITC-결합 된 덱스 트란에 대한 예를 들면, 525 nm의) 사이의 적절한 대역 통과 필터를 통합 할 수 있습니다. </li><li> 조직 검사를받을 수있는 내시경의 작업 채널을 통해 유연한 생검 겸자 (3 차르., 28cm)를 삽입합니다. </li><li> 국소, 점막 내암의 작업 채널을 통해 유연한 주입 관 (0.96 mm)를 소개하거나를 endoluminal진단 또는 치료제의 dministration. </li><li> 42 ° C의 온도로 가열 가능한 시험 테이블을 사용합니다. 이 마우스는 시험 기간 동안 저체온되는 것을 방지합니다. </li></ol> 동물의 3 마취 <ol><li> 작지만 누액 방지 상자에 마우스를 놓고 이소 플루 란을 관리 (100 % (v / v)로, 5 부피 % / 분 3 L). 마우스가 의식을 잃을 때까지 기다립니다. </li><li> 내시경 검사를위한 시험 테이블에 마우스를 전송합니다. 용량 100 %의 v / V, 1.5 부피 %, / 분 1.5 L와 얼굴에 마스크를 통해 이소 플루 란 흡입을 계속합니다. 항상 마취 동안 눈 건조를 방지하기 위해 눈 연고를 적용합니다. </li><li> 반사 신경을 확인하여 마취의 효과를 평가합니다. &#39;반사 주위에 회전을&#39;확인 : 충분히 마취 경우, 뒷면에 누워 마우스 돌아서는 안된다. 확인 &#39;발가락을 반사&#39;마취 부드러운 다리의 철회 (의 단계로 이어질 안 동물의 발가락 사이에서 곤란, 적절한 때수술 허용). </li></ol> 4 대장 내시경 검사 <ol><li> 시험 테이블에 해당 다시 / 마취 마우스 경향이 놓습니다. </li><li> 중요한 배설물로드가보기를 가릴 수 있다는 의심되는 경우 콜론으로 놨는데 캐 뉼러를 통해 관장 2 ㎖를 관리. 마우스가 관장을 투여 한 후 배변 때까지 기다립니다. 천공을 피하기 위해 매우 조심스럽게 내시경을 삽입합니다. </li><li> 그 중 하나는 에어 펌프에 연결되어있는 시스의 밸브를 모두 연다. 공기를 분배하기 위해 검지 손가락으로 다른 밸브를 밀봉합니다. 특히 조직 검사 또는 주사 가지 경우에, 천천히, 조심스럽게 공기와 콜론을 부풀려. </li><li> 구멍 (항문에서 4~5cm)를 피하기 위해 오른쪽 대장의 굴곡으로 만까지 내시경을 진행합니다. </li><li> 진단 대장 내시경 검사 <ol><li> 내시경을 다시 잡아 당기면서 염증이나 악성 변화의 점막을 검사합니다. 창자의 전체 둘레를 평가하기 위해 다시 천천히 잡아 당깁니다. 관내 연평균 평가필요에 따라 적절한 설립 채점 시스템을 사용 thologies. </li><li> 상처 영역의 반복적 인 시각화하는 동안 이미지 수집에 대해 동일 내시경의 위치를​​ 보장하기 위해, 쥐의 항문 점막 병변 사이의 거리를 확인합니다. 또한, 내시경 화상 획득 동안에 상처 영역 사이에 동일한 거리를 달성하기 위해 스페이서로서 생검 겸자의 끝을 사용한다. 상처의 크기가 3mm를 포함 내시경 시쓰의 크기와 관련된다. 참고 : 이전 시험의 사진 문서와 광학 비교하여 동일한 위치에 배치 내시경. 각에서 같은 각도와 거리에서 측정 병변은 내시경 검사를 따릅니다. </li></ol></li><li> 생검 절차 <ol><li> 이 연구자의 도움으로 조직 검사를 가져 가라. 핀셋의 선단이 제 조사자에 모니터에 표시 될 때까지 워킹 채널을 통해주의 깊게 생검 겸자를 소개한다. 신중하게 개폐 집게무효 천공. </li><li> 병리의 사이트에 집게를 이동합니다. </li></ol></li><li> 사출 절차 <ol><li> 이 연구자의 도움으로 주입 절차를 수행합니다. 완전히 제와 사전 채우기 유연한 주입 관 (0.96 mm)을 투여한다. 캐 뉼러 (30 G)이 두 번째 조사에 모니터에 표시 될 때까지 작업 채널을 통해 튜브를 밀어 넣습니다. 미세 주사기를 준비하고 조심스럽게 진단 또는 치료제의 요구 된 양을 관리 할 수​​ 있습니다. 사출 볼륨은 50 ㎕의 최대해야한다. </li><li> 15-30 도의 각도로 submocosa 바늘을 삽입한다. 점막의 방향으로 경사에 직면하고있다. 점막이 성공적으로 주입 후 특성 리프팅 기호를 보여줍니다. </li></ol></li><li> 형광 내시경 (FE) <ol><li> 정맥 전에 내시경 검사를 형광성 100 ㎕의 PBS에 희석 60 밀리그램 FITC - 복합 덱스 트란을 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 주입 사이의 최적의 시점을 확인당신의 형광 표지 된 추적 및 추적 약리학에 의존하는 이미지를 만드는 절차. 사용되는 추적의 여기 및 발광 파장에 따라 대역 통과 필터 시스템의 설정을 구성합니다. 점막 표면의 혈관 패턴을 평가하기 위해 즉시 형광 염료의 정맥 내 주사 한 후 (예를 들면, FITC) 비특이적 혈액량 추적기위한 형광 내시경 검사를 수행한다. </li><li> 배경 비율에 더 나은 목표를 제공하기 위해 타겟 추적자 또는 &#39;스마트 프로브&#39;가지 경우에 추적 신청 후 몇 시간 이미징 고려하십시오. </li><li> 결과의 카메라, 비디오 문서를 수행합니다. </li></ol></li></ol> (5) 후 대장 내시경 검사 <ol><li> 빈 새장에 마우스를 분리하고 쓰레기를 흡입에서 마우스를 보호하기 위해 종이 타월에 누워. 저체온증 않도록 redlight 램프 마우스 따뜻한. 마우스를 준수하고 충분한 회복 될 때까지 방치하지 않는다의식은 흉골 드러 누움을 유지합니다. 완전히 의식이되면, 다시 각각의 케이지에 마우스를 놓습니다. </li><li> 그리고 작지만 누액 방지 상자 실험 도시 마우스의 끝에하면 CO 2 (100 % (v / v) 100 부피 %, 3 L / 분) 투여. 마우스가 완료 의식을 잃고 호흡이 정지 될 때까지 기다립니다. 경부 골절에 의한 파견 마우스입니다. 복부 개복술을 수행하고 콜론 이식편. 길이 방향으로 결장을 열고 더 조직 학적 또는 분자 평가를 씻는다. </li></ol>

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상피 상처 치유는 계속적인 과정이라고 할 수 있습니다. 위장 점막 내의 표면 세포의 연속 생리 각질은 상피 세포 16의 빈번한 재생을 필요로 발생합니다. 따라서, 장애인 상처 치유 위장 궤양과 17 문 합부 누출 (18) 등 여러 가지 질병에 엄청난 영향을 미친다. 상피를 자극하는 분자 배경의 평가뿐만 아니라 잠재적 인 약물 후보는 불완전 19,20 체외에서의 세포 배양 시스템에서 수행 될 수있다. 따라서, 이러한 생검 겸자에 의해 정의 된 점막의 상처 세대 쥐의 대장 내시경 검사와 같은보다 정교한 실험 설정은 위장 상처 치유의 신뢰할 수있는 생체 내 평가를 활성화하고 장내 염증과 상처 치유 프로세스 간의 가능한 상호 작용을 평가하기 위해 필요하다. 또한, 주사​​ 바늘은 L에 대해 사용될 수있다진단 염료 또는 잠재적 약물 후보의 개 지역의 점막 내암을 관리. 이 작...

동물 모델은 크게 여러 장 병리에 대한 우리의 이해를 풍성하게했다. 실험실 마우스 (뮤스 musculus)는 인해 풍부한 유전자 및 게놈 정보를 생물 의학 연구에서 주요 동물 모델로 부상하고 유전자 녹아웃 균주에서 쉽게 사용할 수있다. 이해 질병 병인을 향상시키는 것 외에, 동물 모델은 또한 중요한 약물 후보뿐만 아니라 임상 진단이나 치료 개입을 테스트하기 위해 사용된다. 그러나, 인간의 질병을 흉내 낸 마우스 모델의 다양성에도 불구하고, 정기적으로 환자 치료에 사용되는 여러 진단 및 중재 적 옵션은 마우스 사용할 수 없습니다. 따라서, 감시 전략은 종종 간접 관찰에 한정되는 뮤린 질병 또는 치료 개입의 영향의 과정을 모니터링하거나 부검 분석 씀. 비 침습적 모니터링 마우스에 대한 질병 활동 지수와 같은 활력을 존재하지만, 한때체중 감소 또는 증가, 혈액, 소변 및 대변의 antification 다음은 간접 지표 간 약간의 차이에 의해 바이어스된다, 분석한다. 또한, 사후 부검은 반복 시점에서 종 관찰을 방지 분석합니다. 정교한 영상 기술은 최근 1,2 도입 된 마우스에서 질병 활동을 모니터링 할 수 있습니다. 이 영상 기술은 반복적 인 분석이 가능하지만, 그들은 단지 직접 점막의 시각화를 활성화 또는 생검 수집 또는 약물 후보의 국소​​ 및 점막 내암을 응용 프로그램으로 진단 또는 치료 개입을 허용하지 않는, 장에 설명하고 종종 부정확 한보기를 제공합니다. 최근 살아있는 마우스에 사용하기위한 고해상도의 내시경 시스템은 3,4 개발되었다. 처음 이러한 내시경 기술은 상처 치유 또는 장내 염증 제공 OBJ와 같은 endoluminal 대장 질환의 병리의 직접 시각화를 허용반복적 인 시점에서 동일 종의 동물 연구를 허용, 감정적, 실시간 상태. 이외에도 개별 마우스에서 반복 생검을 허용함으로써, 내시경 시스템은 또한 치료 적으로 관심 영역에 대한 물질의 직접적인 적용을 허용함으로써 구별 종양 또는 국소 염증에 영향을 미칠 수있다. 치료 및 제어 물질은 관심 영역에 직접 전달 될 수있다 더욱이,이 문제는 개인간 변동 제외한 동일한 마우스에서 수행 될 수있다. 이러한 시스템은 현재 이러한 대장염 심각도 (MEICS) 5-7의 뮤린 내시경 인덱스로 결장 염증, 상처 치유, 복강경 간 생검, 각종 점수 시스템을 사용하여 간 종양 8과 종양 발생의 동 소성 유도의 평가를 위해 사용되어왔다. 대장 벽의 비후, 혈관 패턴의 변화, 섬유소의 존재 mucos의 단위 : MEICS 염증을 평가하는 5 개의 매개 변수 구성알 표면 및 대변의 일관성. 이 프로토콜에서는 장내 상처 치유, 염증 및 결장암의 뮤린 모델에서 경질 내시경의 사용을 설명한다. 먼저, 상처 치유 및 염증의 대장 내시경 평가뿐만 아니라 대장염 활성 종 평가 및 뮤린 결장 cancerogenesis의 연구를 설명한다. 쥐 내시경의 사용 설명을 넘어, 우리는 조직 검사를 얻기 위해 내시경 장비의 사용에 대한 자세한 지침을 제공하고, 서로 다른 관심의 구성 요소 (예를 들어, 약물 후보 또는 종양 세포)의 국소 및 점막 내암 응용 프로그램입니다. 마지막으로, 우리는 대장 종양의 설정에서, 복잡한 분자 이미징 기술을 채용 뮤린 형광 내시경의 사용을 보여준다.

<table><tbody><tr><td colspan="4">시약</td></tr><tr><td>알팔파 프리 다이어트</td><td>Harlan Laboritories, Madison, USA</td><td>2014</td><td></td></tr><tr><td>아족시 메탄 (AOM)</td> <td>Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Germany</td><td>A5486</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen eye ointment</td><td>Bayer, Leverkusen, Germany</td><td>80469764</td><td></td></tr><tr><td>Dextran sulphate sodium (DSS)</td> <td>TdB Consulatancy, 웁살라, 스웨덴</td><td>DB001</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Sigma-Aldrich, Deisenhofen, 독일</td><td>E 4382</td><td></td></tr><tr><td>에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)</td><td>Sigma-Aldrich, Deisenhofen, 독일</td><td>E 9884</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Tube 50 ml</td><td>BD Biosciences, Erembodegem, Belgium</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Florene 100 V/V</td><td>Abbott, Wiesbaden, Germany</td><td>B506</td><td></td></tr><tr><td>Haematoxylin</td><td>Sigma-Aldrich, Deisenhofen, 독일</td><td>HHS32-1L</td><td></td></tr><tr><td>이소펜탄 (2-메틸부탄)</td><td>Sigma-Aldrich, Deisenhofen, 독일</td><td>M32631-1L</td><td></td></tr><tr><td>메틸렌 블루</td><td>Merck, 다름슈타트, 독일</td><td>1159430025</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T. Tissue Tek compound&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Sakura, Zoeterwonde, 네덜란드</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Omnican F - canula</td><td>Braun, Melsungen, Germany</td><td>9161502</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline, PBS</td><td>Lonza, Verviers, Belgium</td><td>4629</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Chloride 0.9%</td><td>Braun, Melsungen, Germany</td><td>5/12211095/0411</td><td></td></tr><tr><td>Standard diet</td><td>Altromin, Lage, Germany</td><td>1320</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>Sakura, Leiden, 네덜란드</td><td>4566</td><td></td></tr><tr><td>Vitro &ndash; 클루드&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>R. Langenbrinck, 테닝겐, 독일</td><td>04-0002&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">장비</td></tr><tr><td>AIDA Control</td><td>Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany</td><td>20 096020</td><td></td></tr><tr><td>Bandpass filter</td><td>Semrock, Rochester, USA</td><td>HC 716/40</td><td></td></tr><tr><td>Bandpass filter</td><td>Semrock, Rochester, USA</td><td>HC 809/81</td><td></td></tr><tr><td>Biopsy Forceps, 3 Fr., 28 cm</td><td>Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany</td><td>61071ZJ</td><td></td></tr><tr><td>Dell Monitor</td><td>Dell, 프랑크푸르트 암 마인, 독일</td><td>U2412Mb</td><td></td></tr><tr><td>검사 칼집, 9 Fr.Karl</td> <td>Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany</td><td>61029D</td><td></td></tr><tr><td>검사 칼집, 9 Fr.Karl</td> <td>Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany</td><td>61029C</td><td></td></tr><tr><td>광섬유 광 케이블, 3.5mm</td><td>Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany</td><td>69495NL</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescein Blue 필터 시스템</td><td>Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany</td><td>20100032</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescein Barrier Filter</td><td>Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany</td><td>20100033</td><td></td></tr><tr><td>풋 스위치</td><td>Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany</td><td>20010430</td><td></td></tr><tr><td>HOPKINS Telescope, 1.9 mm, 길이 10 cm</td><td>Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany</td><td>1830231</td><td></td></tr><tr><td>SCB D-라이트 P&nbsp;</td><td>Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany</td><td>20 133720</td><td></td></tr><tr><td>SCB tricam SL II</td><td>Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany</td><td>20 2230 20</td><td></td></tr><tr><td>튜빙 세트 기기 VETPUMP II</td><td>Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany</td><td>69811</td><td></td></tr><tr><td>Tricam PDD PAL</td><td>Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany</td><td>20221037</td><td></td></tr><tr><td>UniVet Porta</td><td>Groppler Medizintechnik, Deggendorf, Germany</td><td>BKGM 0451</td><td></td></tr><tr><td>Vetpump 2</td><td>Karl Storz - Endoskope, 투틀링겐, 독일</td><td>69321620</td><td></td></tr></tbody></table>

에 대한 쥐의 내시경 생체 발암 및 소장의 평가의 멀티 모달 이미징 상처 치유 및 염증

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

마우스 모델은 널리 인간 질병의 발병 기전을 연구 및 전임상 진단 절차뿐만 아니라 치료 적 개입을 평가하는 데 사용됩니다. 그러나, 병리학 적 변화의 올바른 평가는 종종 조직 학적 분석을 필요로하고, 생체 외에서 수행 할 때, 동물의 사망을 필요로한다. 따라서 기존의 실험 설정에서, 내 개별 추적 검사는 거의 가능하다. 따라서, 살아있는 마우스에서 뮤린 내시경의 개발은 직접 위장 점막을 시각화와 같은 변경을 모니터링하는 절차를 반복 모두 처음 조사자 수있다. 생체 쥐 내시경 검사에 대한 수많은 응용 프로그램, 장 염증이나 상처 치유를 공부 반복 점막 생검 획득을 포함한, 존재하고,에 로컬 소형 주입 카테터를 사용하여 진단 또는 치료 에이전트를 관리 할 수 있습니다. 가장 최근에, 분자 영상은 확장했다 영상 진단 모특정 photoprobes를 구별하여 표적 분자의 검출을 허용하는 특정 dalities. 결론적으로, 쥐의 내시경 검사는 생체 영상 진단 실험을위한 새로운 첨단 기술로 떠오르고있다 상당히 다양한 분야에서 임상 연구에 영향을 미칠 수 있습니다.

장 상처 치유의 생체 모니터링에서 (;도 1a 1mm 같음) 루틴 내시경 동안 점막 상처 3 프랑스어의 직경 미니어처 생검 겸자에 의해 기계적으로 유도 하였다. 이어서, 상처 치유를 매일 내시경 검사에 의해 모니터링 및 예 이미지 편집 소프트웨어를 사용하여 잔류 상처 면적의 측정에 의해 정량 하였다, ImageJ에 (도 1b). 시간에 따른 개개의 상처 봉합 실제 상처 면적 / 초기 창상 면적의 몫으로 표현된다. 7 일째에 상처가 완전히 보통 (도 1C) 나았다 반면, 예를 들어, 상처 발생 후 3 일에, 상처 면적의 41 % ± 4.1 %가 회수되었다. 또한, 실험의 끝에, 상처는 생체 조직 학적 평가를 위해 절제 될 수있다. 헤 마톡 실린 및 에오신의 대표 이미지가 아르 묘사 (H &amp; E)는 다에 상처 침대 -stainedy...

작은 동물 이미징 기술은 직렬 진단 시험 및 생체 내에서 치료 적 개입을 허용한다. 최근, 응용 프로그램의 범위가 크게 확대하고 현재 대장 종양 발생의 평가, 상처 치유 및 염증의 모니터링이 포함되어 있습니다. 이 프로토콜은 쥐 내시경 검사의 이러한 다양한 응용 가능성을 보여줍니다.

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

이 비디오에서는 뉴런 내시경 검사의 다양한 응용 프로그램이 첫 번째 응용 프로그램에서 제시됩니다. 내시경을 사용하여 대장염의 마우스 모델에서 질병 중증도를 점수화하는 방법은 두 번째 응용 프로그램에서 보여줍니다. 생체 내에서 점막 상처 치유를 모니터링하기 위한 내시경 검사의 사용은 마지막 응용 프로그램에서 시연될 것입니다.장 종양을 감지하기 위한 형광 내시경 검사의 사용과 점막 내 주입 제제를 사용하는 기술은 궁극적으로 장 상처 치유, 염증 및 암을 제시할 것입니다. 내시경 분석 결과를 바탕으로 무형성을 평가할 수 있습니다. 실험적 대장염의 조직학적 분석과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 이 기술을 사용하면 개별 추적 검사를 수행하고 점막 변화를 반복적으로 평가할 수 있다는 것입니다.따라서 이 방법은 대장염의 측두적 확립이 무엇인지와 같은 실험적 장 염증 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 의미는 종양성 병변을 기능적으로 특성화할 수 있는 가능성 때문에 대장암 치료로 확장됩니다. 이 방법은 대장암의 발병에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만 염증성 장 질환이나 전염성 대장염과 같은 다른 시스템에도 적용할 수 있습니다.일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 소규모 내시경 형광을 다루는 문제로 인해 어려움을 겪을 것입니다. 내시경 검사는 내시경 검사 중 형광 표지된 흔적을 통해 세포 구조를 특이적으로 표적으로 삼아 분자 이미징으로 광광 내시경 검사의 잠재력을 확장합니다. 실험 동물에서 대장암을 유발하려면 먼저 30 게이지 바늘이 장착된 1밀리리터 주사기를 사용하여 각 마우스에 옥시 메탄으로 돌연변이 유발 물질을 킬로그램당 10밀리그램을 복강간에 주입합니다.실험용 마우스 그룹에 0일차부터 7일차, 21일차부터 28일차, 42일차부터 49일차까지 부피당 3%중량, 덱스트란 황산나트륨 또는 DSS의 반복적인 주기로 도전하여 염증성 결장직장암을 유발합니다. Agenesis는 대장내시경 검사 당일 챌린지 사이에 마우스에게 오토클레이브 물을 공급합니다. 발가락 꼬집기로 진정제를 확인한 후, 단추가 달린 캐뉼라를 사용하여 실험 동물의 결장에 2ml의 액체 관장을 주입합니다.상당한 배설물이 의심되는 경우 쥐가 배변을 기다릴 때까지 기다리는 동안 백색광 내시경 검사를 위해 소형 동물 수의학 내시경 워크스테이션을 카메라 장치에 연결합니다. 주입할 트레이스를 자극하도록 광원의 설정을 구성한 다음 망원경과 카메라 사이에 적절한 대역 통과 필터를 통합합니다. 이제 마우스를 검사대 위에 놓고 내시경을 매우 조심스럽게 삽입합니다.천공을 방지하려면 피복의 두 밸브를 모두 엽니다. 하나의 밸브는 공기 펌프에 연결해야 합니다. 다른 하나는 공기를 제어하기 위해 집게 손가락으로 밀봉해야 합니다.그런 다음 천천히 조심스럽게 결장을 팽창시키고, 항문에서 약 4.5cm 떨어진 곳에 천공이 생기지 않도록 오른쪽 결장 굴곡근까지만 내시경을 전진시킵니다. 이제 내시경을 천천히 뒤로 당겨 점막에 염증성 또는 악성 변화가 있는지 검사하고 장의 전체 둘레를 평가합니다. 그런 다음 생검 샘플을 채취하려면 겸자 끝이 모니터에서 보일 때까지 작업 채널을 통해 생검 겸자를 조심스럽게 삽입합니다.구멍이 나지 않도록 집게를 조심스럽게 열고 닫고 병리 부위로 옮깁니다. 약리제의 점막 내 적용을 위해 유연한 주사 튜브에 관심 물질을 완전히 채운 다음 캐뉼라가 모니터에 보일 때까지 작업 채널을 통해 튜브를 밀어 넣습니다. 그런 다음 미세한 주사기를 부착하고 점막 방향으로 베벨을 향한 15-30도 각도로 점막하 바늘을 삽입하고 최대 50 마이크로 리터의 치료제를 부드럽게 투여합니다.성공적인 주입 후 점막은 형광 내시경 검사를 수행하기 위해 특징적인 들림을 보이고 검사 전에 관심 제제를 정맥 주사합니다. 형광 표지된 추적자 주입과 이미징 절차 사이의 최적 시점을 확인하며, 이는 추적자 약리학에 따라 달라집니다. 그런 다음 형광 내시경으로 주입된 제제를 보려면 주입된 추적자의 여기 및 방출 파장에 따라 대역 통과 필터 시스템의 설정을 구성합니다.마지막으로, tracer를 적용한 후 조직을 이미지화하여 대장염 유도 후 판독된 타겟 대 배경 비율 판독값을 획득합니다. 마우스. 3일째부터 체중 감소를 보이며 체중 감소에 따라 7일째에 최대 19%의 체중 감소가 발생합니다. 대장염 중증도 점수의 뉴런 내시경 지수는 DSS가 시작된 후 7일째에 증가하여 결장 점막의 대규모 염증 손상을 나타내며 13일째에 개선됩니다.또한 DSS 시작 후 7일째에는 상피 박리, 점막 궤양 및 호중구 침윤 증가에 의해 반영된 바와 같이 DSS를 처리한 마우스에서 대조군에 비해 조직학적 손상이 유의하게 높았으며, 이 모든 것은 13일째에 유의하게 개선되었습니다. 정기 내시경 검사에서 얻은 이러한 대표적인 이미지에서, 점막 상처는 직경 1mm의 상처가 있는 소형 생검 겸자에 의해 기계적으로 유도되었습니다. 그런 다음 매일 내시경 검사를 통해 치유를 모니터링하고 이미지 편집 소프트웨어로 잔여 상처 부위를 측정하여 정량화했습니다.그런 다음 시간 경과에 따른 개별 상처 부위 폐쇄는 초기 상처 부위당 실제 상처 부위의 몫으로 표현되었습니다. 예를 들어, 상처가 발생한 지 3일째 되는 날에는 상처 부위의 41%가 회복된 반면, 7일째에는 상처가 완전히 치유되었습니다. 평소와 같이 실험이 끝나면 조직학적 평가를 위해 상처를 절제할 수 있으며, 옥시 메탄과 DSS 다발성 결장 종양의 3주기에 의한 종양 유도 후 약 80일 후인 0일과 5일째에 헤마틴 및 ESN 염색 상처 침대의 대표적인 이미지와 같은 X vivo를 절제할 수 있을 뿐만 아니라 과립 점막과 같은 만성 염증의 거시적 징후를 관찰할 수 있습니다.추적자를 적용하지 않고 뉴런 장의 내시경 형광 내시경 검사는 특정 신호를 감지하지 못하며 결장 조직 또는 대변 자가형광과의 상호 작용이 관찰되지 않습니다. 대조적으로, Fitz Dextran의 정맥 투여 직후에는 결장 점막에서 형광 색소를 관찰할 수 있으며 만성 염증 또는 악성 점막 부위의 증가된 혈관성을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 따라서, 형광 강도의 정량화는 영향을 받지 않은 결장 점막과 비교하여 악성 조직 내에서 형광 색소의 현저하게 증가된 흡수를 측정하는 데 사용할 수 있습니다.이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 5분에서 10분 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 단단한 내시경을 해양 결장을 통해 조심스럽게 진행해야 한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 비디오를 시청한 후에는 해양 대장내시경을 수행하는 동안 상피 상처 치유, 장 염증 및 암 무력증을 평가하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

수술 후 장폐색 (POI)가 증가 병적 상태와 장시간 입원으로 이어지는 복부 수술의 합병증입니다. 예방 또는 치료 전략이 심화 연구를 부족하기 때문에하는 것은 필요합니다. 따라서 우리는 POI의 pathophysiology를 조사하고 잠재적 인 치료 옵션을 연구하기위한 표준화하고 실현 가능한 마우스 모델을 만들었습니다.

장 조작의 표준화 된 모델의 분석 : 쥐의 장 운동성 및 내장 벽의 염증의 기능 평가

지난 몇 년 동안, 새로운 세대의 내시경은 쥐 대장염과 대장 종양을 평가하기위한 중요한 진단 연구 보조로 등장했습니다. 우리는 생쥐의 염증과 대장 종양의 내시경 적 평가뿐만 아니라 대장염과 대장 종양의 내시경 심각도를 문서화하는 진수 식별자를 사용하는 새로운 채점 시스템에 여기에 대한 자세한 프로토콜을 제시한다.

검증 된 내시경 채점 시스템을 사용하여 대장염과 대장 종양의 위험을 평가하기 위해 마우스의 유연한 대장 내시경 검사

형질전환 리포터 마우스와 주사 가능한 형광 라벨을 사용함으로써, 장기 생체 내 회전 디스크 컨포칼 현미경 검사는 ApcMin/+ 대장암 모델에서 장 선종에 대한 골수성 세포 거동을 직접 시각화할 수 있습니다.

골수 세포 역학의 실시간 영상 APC 최소 / + 소장 종양 디스크 공 초점 현미경을 회전시켜

우리는 단단한 내시경을 사용하여 마우스의 결장 병리학 치료를 위한 치료제의 효능을 종단적으로 모니터링하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 살아있는 마우스에서 개별 종양의 치료 반응을 특성화하고 잠재적인 질병 재발을 모니터링하는 데 쉽게 사용할 수 있습니다.

라이브 마우스의 직렬 내시경 이미징을 사용하여 소장 병변에 대한 새로운 치료제의 효능의 비 침습적 평가

헤모글로빈 농도, 멜라닌 농도 및 산소 포화도를 포함한 조직 생리학적 매개변수와 표재성 조직 이미지 데이터를 함께 등록할 수 있는 다중 모드 마이크로 내시경의 조립 및 사용에 대해 설명합니다. 이 기술은 조직 구조 및 관류를 평가하는 데 유용할 수 있으며 연구자의 개별 요구에 맞게 최적화할 수 있습니다.

멀티 모달 이미징 및 비 침습적에 대한 분광학 섬유 다발 Microendoscopy 플랫폼,<em&gt; 생체</em&gt; 조직 분석

특정 대상 프로브 질병 (예를 들어, 염증, 감염, 및 tumorigenesis)의 다양 한 종류의 단백질 표정 등의 분자 메커니즘을 분석 하기 위한 혁신적인 도구를 나타냅니다. 이 연구에서 우리는 murine 모델 f 4/80 전용 형광 중재 단층 촬영을 사용 하 여 대 장 염의 장 대 식 세포 침투의 양적 차원 단층 평가 설명 합니다.

검색 및 대 식 세포 관련 Murine 창 자 염증의 정량화에 대 한 단층 형광 중재

여기에서, 우리는 화학요법 유도한 점막염의 모형을 사용하여 소장 상해 및 보상 과증식의 중요한 종점 그리고 증식 마커를 설치하는 프로토콜을 제시합니다. 우리는 세포 주기 특정 마커를 사용하여 작은 장 무게, 토굴 깊이 및 융모 높이를 엔드포인트로 사용하여 증식 세포의 검출을 입증합니다.

화학요법 유도점막염의 마우스 모형을 사용하여 작은 장 상해 그리고 적응을 평가하기 위하여 중요한 종점 및 증식 마커

우리는 거꾸로 회전 디스크 공초점 현미경 검사법에 의해 뮤린 소장의 내장 영상을 사용하여 GFP 표지된 γδ IELs를 구상하는 방법을 기술합니다. 이 기술은 최대 4 시간 동안 점막 내의 살아있는 세포의 추적을 가능하게하고 장 내 면역 상피 상호 작용의 다양한 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

뮤린 소장에서 상피 내 림프구의 활력 영상

인트라비티 현미경 검사를 활용하여, 여기에 제시된 방법은 살아있는 동물에서 장 상피 세포 흘림의 실시간 시각화를 가능하게 합니다. 따라서, 마취마우스의 국소 염색장 점막(acriflavine 및 rhodamineB-dextran)은 공초점 현미경검사를 이용하여 단일 세포 해상도까지 심화된다.

장 내 투과성 및 상피 세포 흘리기 성능을 평가하기 위한 인트라바이탈 현미경 기반 접근법

여기에서, 우리는 마우스에 있는 대장 내시경 유도핀치 생검을 유도하고 실시간으로 상처 폐쇄를 추적하는 절차에 대한 상세한 설명을 제공합니다. 또한, 상처 침대의 조직학적, 면역 조직 화학 및 분자 분석을 위한 조직의 제조를 위한 방법이 제공됩니다.

마우스에서 대장 내 시경 유도 핀치 생검을 수행하고 후속 조직 변화를 평가

여기에서는 레이저로 인한 상처 시 장의 이미지를 얻는 방법을 제시합니다. 마우스 장을 다광자 레이저에 노출시킴으로써, 단일 또는 다중 crypt(들)의 손실이 국소적으로 유도된다. 수개월에 걸쳐 손상된 부위를 반복적으로 이미징하여 장 회복의 실시간 역학을 캡처합니다.

장 리모델링을 연구하기 위한 레이저 절제 및 생체 내 현미경 검사

학습하세요 쥐 내시경을 이용한 대장 종양, 점막 상처 치유 및 염증 평가 방법을. 이 기술은 실험적 장염과 대장암 연구에서 반복적인 점막 변화 평가와 실시간 질병 진행 모니터링을 가능하게 합니다.

에 대한 쥐의 내시경 생체 발암 및 소장의 평가의 멀티 모달 이미징 상처 치유 및 염증

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