Name: 조직 학적 및 기능적 특성 : Methylnitrosourea (MNU)는 망막 변성과 재생 제브라 피쉬에서 유도 된 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: 배우세요 MNU로 성체 제브라피쉬 망막 퇴행 및 재생을 유도하는 방법을. OKR 측정과 조직학적 분석을 통해 기능적 및 형태학적 변화를 정량화하여 재생 생물학 연구에 활용합니다.

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훌륭한 기술 지원을 제공해 주신 Monika Kilchenmann, Federica Bisignani 및 Agathe Duda에게 감사드립니다.

모든 실험은 안과 및 비전 연구 협회의 비전 연구 및 안과 (ARVO)에서 동물의 사용에 대한 정책을 준수. 1 동물 <ol><li> 26.5 ° C의 온도 및 14/10 시간의 명 / 암주기를 15 물에 표준 조건 하에서 6~12개월 세 사이의 AB (오레곤) 균주의 야생형 제브라 피쉬 (다니오 rerio)를 유지한다. </li><li> 분할 한 동물 병원의 승인 후 동물 실험에 대한 관련 기관의 동물 관리 가이드 라인을 따르십시오. </li></ol> 2 MNU 처리 <ol><li> N 메틸 N의 -nitrosourea (MNU)의 150 ㎎ / ℓ 건조 물질을 함유 물을 준비합니다. 주의! MNU는 독성; 태아에 암, 유전 적 손상이나 상해가 발생할 수 있습니다. </li><li> 실온에서 60 분 동안 MNU를 함유하는 물에서 배양 지브라 피쉬. </li><li> 빨리와 제브라 피쉬를 씻어신선한 물과는 MNU 않고 새 수조에 물고기를 넣어. 실험을 위해 원하는만큼 표준 조건에서 물고기를 유지한다. </li></ol> 3 시력 측정 <ol><li> , optomotor 체제를 시작 메뉴에서 &#39;테스트&#39;를 선택하고 옵션을 설정 &quot;단순 계단&quot;, &quot;시력 (주파수)&quot;과 &quot;무작위 / 분리&quot;(16)이다. </li><li> optomotor 시스템 위 1m에 대해 500 ml의 물을 가득 주입 병을 설치합니다. </li><li> 시험 챔버에서 한 제브라 피쉬를 놓고 주입 병에 연결합니다. optomotor 시스템의 시험 챔버를 놓습니다. </li><li> 측정을 시작하고, 컴퓨터 화면에 실시간으로 안구의 움직임을 관찰한다. 따라서, 긍정적 인 응답이 ( &quot;예&quot;) 부정 응답 ( &quot;아니오&quot;) 반면, 올바른 방향으로 연속 안구 단속 운동으로 정의된다 역으로 관찰하는 사람과 유사한 임의 눈동자의 움직임을 나타냅니다진 격자. 제브라 피쉬 전시의 눈 경우 세 이상의 후속 optokinetic 응답 (OKR), &#39;예&#39;버튼을 누르면; 그렇지 않은 경우, Enter 키를 누르면 &#39;없음&#39;. </li><li> 메뉴의 &quot;결과&quot;에, optokinetic 자극의 공간 주파수의 임계 값을 결정하여 소프트웨어에 의해 계산 된 시력을 추출합니다. </li></ol> 4 조직학 <ol><li> 에틸 3 - 아미노 벤조 에이트 메탄 (200 ~ 300 ㎎ / ℓ)의 과다 복용으로 제브라 피쉬를 안락사와 눈을 명백히하다. </li><li> 등급 알코올 시리즈에서 샘플을 탈수 한 후 12 시간 동안 4 ° C에서 인산염 완충 생리 식염수에 4 % 파라 포름 알데히드 (PFA) (PBS)에 전체의 눈을 고정합니다. </li><li> 파라핀에 샘플을 포함, 시신경 유두 (시신경 유두)를 통해 5 μm의 섹션을 잘라 유리 슬라이드에 그들을 탑재합니다. </li><li> 4 분간 hemalum와 deparaffized 파라핀 섹션 얼룩과 0.2 % 염산 ACI이어서 증류수 슬라이드 두 번 찍어D와 0.8 % 암모니아. 적어도 10 분 (H &amp; E)에 대한 수돗물 hemalum 염색 현상 후 3 분 동안 에오신 섹션 얼룩. </li><li> 매질에 부착 탈수 슬라이드를 포함하고 광학 현미경 슬라이드를 관찰한다. </li></ol> (5) 면역 조직 화학 <ol><li> 터미널 deoxynucleotidyl 전이 된 dUTP 닉 엔드 라벨링 (TUNEL) <ol><li> 실온에서 15 분간 20 μg / ㎖ 프로 테이나 제 K와 탈 파라핀 섹션 부화. 트리스 절을 세 번 씻어 5 분마다 식염수 (TBS)을 버퍼. </li><li> 60 분 동안 37 ° C에서 가습 챔버 내에서 50 μL TUNEL 반응 액 (10 % 라벨링 용액 및 90 %의 효소 용액)와 섹션을 부화. 5 분마다 TBS로 3 회 세척 할 것. </li><li> DAPI를 포함하는 매체를 장착와 슬라이드 마운트 형광 현미경 슬라이드를 관찰한다. </li></ol></li><li> 증식 세포 핵 항원 (PCNA) 염색 <ol><li> 3 분 동안 항원 검색 버퍼 (트리스-EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) + 0.05 % 트윈 20, 산도 9.0)에서 탈 파라핀 섹션을 삶아 5 분마다 TBS로 3 회 씻는다. 100 μl를 1 시간 동안 실온에서 용액을 (TBS + 10 % 염소 정상 혈청 + 1 % 소 혈청 알부민, pH7.6)로 블로킹 막기. </li><li> 4 ° C에서 하룻밤 가습 챔버에서 200 희석 : 1 항 PCNA 차 항체와 얼룩. 5 분마다 TBS + 트윈 20으로 3 회 반복한다. </li><li> 실온에서 1 시간 동안 500 희석 : 1 차 항체와 함께 해당 검출 마무리. </li><li> DAPI를 포함하는 매체를 장착와 슬라이드 마운트 형광 현미경 슬라이드를 관찰한다. </li></ol></li></ol>

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이전에, 우리 그룹은 제브라 피쉬의 시스템 구에 설치류에서 시세포 변성의 MNU 모델을 전송하고있다. 계속되는 이벤트 설명 및 최대 30 일 동안 추적 관찰 하였다. 이 기간에 완전한 형태의 망막 변성 및 재생이 초기 치료 후 발생. 첫째, 조직 학적가 감소 된로드 셀 상응 일 8에서 최소에 일 3에서 계산 계시, TUNEL 염색 삼일 MNU 처리 후로드 광 수용체의 세포 사멸을 식별합니다. 재생은 증식 세포는이없이 증식 증가 INL 대조적이다 하루 5에서 최대 관찰 기간이 끝날 때까지 관찰 할 수 ONL에서 하루 5에서, 최대 하루 3에서 INL에서 시작 15 일 후 모양체 변연 영역 관찰하면 일부 PCNA 양성 세포는 미처리 망막에서 발견 된 망막의 유일한 위치이다. 이것은 지속적으로 망막 신경의 통해 서있는 영역을 나타냅니다HOUT 수명 14. 제브라 피쉬의 약리학 적 손상 광 수용체의 재생에 관여하는 세포 유형의 식별이 원고의 초점이 아니었다. 그러나, 이전의 간행물 프로세스 뮐러...

비전은 인간의 가장 중요한 감각과 손상은 높은 사회 경제적 영향을 미친다. 선진국에서는 망막 퇴행성 질환은 노인 1 중 시력 손실과 실명의 주요 원인이다. 대부분의 퇴행성 망막 질환의 원인은 부분적으로 만 이해하고 치료 적 솔루션은 잃어버린 시력을 회복하는 것은 매우 제한되어 있습니다. 색소 성 망막염이 N의 -nitrosourea (MNU) 망막 변성을 유도를 메틸 차 감광체 손실 2-3. N과 망막 퇴행성 질환의 전형적인 예이고 따라서 광범위 일차 시각 세포 사멸 4 질환을 모델링 설치류에서 사용된다. 그것은 알킬화제이며 일반적으로 노출 5-7 후 몇 개월을 나타 양성과 악성 종양으로 이어집니다. 또한, 단기간의 관찰 기간 내에 특정 시각 세포 사멸시킨다. 이로써, 망막 층 structu의 손실다시 상당한 망막 박화는 농도 의존적​​ 방식으로 관찰되었다. 망막 글 리아 세포는 활성화되었지만, 망막 색소 상피 세포 (RPE)의 변경이 발견되지 않음. 소포체 (ER) 스트레스와 관련된 세포 사멸은 망막 8 MNU 조치의 주요 통로가 될 것으로 보인다. 우리는 최근에 제브라 피쉬 구에서 광 수용체의 변성을 유도하는 화학 모델로 MNU를 도입했습니다. 다른 이유의 사이에, 제브라 피쉬 (다니오 rerio)가 있기 때문에 다른 척추 동물 (10)의 그것의 시각 시스템의 유사성 시각 연구에 중요 해지고있다. 외부 망막은 자외선, 짧은, 중간에 피크 감도, 가시 스펙트럼의 장파장 한로드 광 수용체의 유형 네 가지 콘 유형으로 분류 될 수있는 광 수용체를 포함하고 있습니다. 내부 핵 계층 (INL)에서, 바이폴라, 수평 및 무 축삭의 interneurons의 세포 기관은 아 같이 발견뮐러 글 리아 세포의 세포 소마 같은 리터. 외측 얼기 층 (OPL)에서 감광체와 내측 망막 사이의 연접은 렌즈에 가장 가까운 세포층 반면 시신경 및 시신경 요로로 이루어지는 긴 축삭을 형성 성분 신경절 세포 층 (GC)이다 형성된 . 신경절 세포 및 내부 핵 층에있는 세포 간의 연접은 내측 얼기 층 (IPL) (11)에 형성된다. RPE는 감각 신경 망막의 외측에있는 긴 혀끝의 미세 융모 (12) 감광체 외부 세그먼트를 둘러싼 다. 또한, 제브라 피쉬는 매우 회생 및 병변 뇌, 망막, 척수, 심장, 및 기타 조직 (13)를 다시 자라게 할 수 있습니다. 망막 손상이 발생하면, 뮐러 세포 것으로 생각된다 INL에서 세포 활성화 및 각종 망막 세포 유형으로 분화 할 수있는 잠재력을 가지고있다. 또한, 그들은 또한 ONL에있는로드 전구 세포를 생성한다. 또 이렇게새로운 세포로 성인 제브라 피쉬의 망막을 공급, 나아가이 섬모 한계 영역입니다. 이 소스는 연속적으로 성장하는 피쉬 아이 (14)에로드 감광체의 일정한 밀도를 달성하기 위해 필요하다. MNU 모델은 망막 조직에 대한 단순하고 재현성 퇴화 / 재생 방법으로 사용될 수있다. 때문에 제브라 피쉬의 생물학적 과정의 특정 유사성과 인간이 관여 세포 사멸 경로를 확인하기 위해 문을 열 수있는 잠재적 신경 보호 약물을 선별. 우리 그룹에서 이전의 연구를 바탕으로, 우리는 지금 망막 있도록 지연 및 실험실 동영상 구에 따라 기능적인 변화를 포함 필연적 재생이 MNU 유도 제브라 피쉬 모델의 방법을 설명한다.

<table><tbody><tr><td>아세트산</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>암모니아</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, 스위스</td><td>294993</td><td>0.80%</td></tr><tr><td>Bovine serum albumine (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>05470</td><td></td></tr><tr><td>Dako Pen</td><td>Dako, Glostrup, Danmark</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>DAPI 마운팅 배지</td><td>Vector Labs, Burlingame, CA, USA</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>45260</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>2860</td><td>100%, 96%, 70%</td></tr><tr><td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>ED</td><td></td></tr><tr><td>Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>E10521</td><td>트리카인</td></tr><tr><td>Eukitt</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>3989</td><td></td></tr><tr><td>염소 안티 토끼 Alexa 594</td><td>Life Technologies, Zug, Switzerland&nbsp;</td><td>A11012</td><td></td></tr><tr><td>염소 정상 혈청</td><td>Dako, Glostrup, Danmark</td><td>X0907</td><td></td></tr><tr><td>염산</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, 스위스</td><td>320331</td><td>0.20%</td></tr> <tr><td>현장 세포 사멸 검출 키트</td><td>Roche Applied Sciences, Rotkreuz, 스위스</td><td>11684795910</td><td>TUNEL Kit</td></tr><tr><td>Mayer의 헤말럼 솔루션</td><td>Merck, 다름슈타트, 독일</td><td>109249</td><td></td></tr><tr><td>메틸니트로소우레아(MNU)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>N4766</td><td>Toxic</td></tr><tr><td>OptoMotry</td><td>CerebralMechanics, Lethbridge, AB, Canada</td><td>n.a.</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드(PFA)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>P5368</td><td></td></tr><tr><td>단백질분해효소 K</td><td>Dako, Glostrup, Danmark</td><td>S3004</td><td></td></tr><tr><td>토끼 안티-PCNA&nbsp;</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, 미국</td><td>sc-33756</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus 유리 슬라이드</td><td>Gehard Menzel GmbH, Braunschweig, Germany</td><td>10149870</td><td></td></tr><tr><td>Tris buffered saline (TBS)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>P5912</td><td></td></tr><tr><td>Trizma base</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>534056</td><td></td></tr><tr><td>제브라피쉬(Danio rerio) AB(오레곤) 균주</td><td>프리부르 대학교 생물학과</td><td>n.a.</td><td>자체 어류 시설</td></tr></tbody></table>

조직 학적 및 기능적 특성 : methylnitrosourea (mnu)는 망막 변성과 재생 제브라 피쉬에서 유도 된

Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics

산업계에서 시력 손실의 대부분 감광체 손상 계정 얻어진 망막 퇴행성 질환, 예를 들면 색소 성 망막염,. 동물 모델은 질병을 연구하는 중요한 중요하다. 이 점에있어서의 N - 메틸 - N -nitrosourea (MNU)가 설치류에서 널리 사용되어왔다 감광체 특정 독소는 약리 망막 변성을 유도한다. 이전에, 우리는 제브라 피쉬의 MNU에 의한 망막 변성 모델, 시각 연구에서 또 다른 인기 모델 시스템을 설립했다. 포유 동물 매혹적인 차이는 성인 zebrafish의 망막 손상 후의 재생의 지속적인 신경이다. 우리는 성인 zebrafish의 시력 측정을 채용 한이 관찰을 정량화합니다. 이로써, optokinetic 휘어진 비 마취 물고기 기능적 변화를 수행하는 데 사용되었다. 이것은 면역 staini뿐만 아니라 조직 학적으로 보충 하였다세포 사멸에 대한 NG (TUNEL) 및 확산 (PCNA)의 개발 형태 학적 변화의 상관 관계를합니다. 요약하면, 광 수용체 세포 자멸 사흘 외부 핵 층 (ONL)에서 세포의 현저한 감소로 이어진다 MNU 치료 후 발생한다. 그 후, 내부 핵 층 (INL)와 ONL에서 세포의 증식이 관찰된다. 여기서, 우리는 완전한 조직 학적뿐만 아니라 또한 재생 기능 30 일의 시간을 걸쳐 발생하는 것을 알 수있다. 이제 우리는 정량화 및 비디오 형식으로 MNU를 사용하여 제브라 피쉬의 망막 있도록 지연 및 재생을 수행하는 방법을 설명한다.

시력 : 실험 장치 [공간 주파수 : 0.042 원 /도 (C ​​/ D); 대비 : 100 %; 드리프트 속도 : 20도 / 초 (D / SRC); 백라이트 휘도 : 152 CD / m 2] 본 연구는 성인 제브라 피쉬의 OKR 평가 수 있었다. 물론 절차를 용인 각 제브라 피쉬, 10 분 - VA 측정의 평균 지속 기간은 약 5였다. MNU 노출 전 시력은 0.577 ± 0.014 사이클 /도 (c / d를)이었다. 1가 150 ㎎ / ℓ MNU의 적용 후 시력 과정을 보여줍니다. 일 하나에서 시작, 측정, 시력의 현저한 감소를 보여 일 8에서 시작 일 3시 최소 값에 도달, 시력의 증가는 삼십일 MNU 노출 후 시력의 전체 복구를 보여주는 발생합니다. 통계적인 분석을 위해 본 페로 니의 다중 비교 시험 하였다 일방향 ANOVA 적용되었다. 이에 따라, 시력 betwe의 차이기준 및 측정 처리...

여기에서 우리는 망막 있도록 지연 및 재생과 성인 제브라 피쉬에서 N 메틸 N의 -nitrosourea을 사용하여 시각 기능에 미치는 영향의 정량화를 보여줍니다. 시력의 손실 및 감소 감광체 번호는 내부 핵 층에 확산하여 관찰 하였다. 완전한 형태 학적 및 기능적 재생은 30 일 초기 치료 후 발생했습니다.

조직 학적 및 기능적 특성 : Methylnitrosourea (MNU)는 망막 변성과 재생 제브라 피쉬에서 유도 된

Retinal degenerative diseases, e.g. retinitis pigmentosa, with resulting photoreceptor damage account for the majority of vision loss in the industrial ...

이 절차의 전반적인 목표는 n 메틸 및 니트로 UEAA(Nitro UEAA)를 사용하여 성체 제브라피쉬의 망막 변성을 유도하고 그에 따른 재생을 유도하는 것입니다. 이것은 먼저 N, 메틸, N, 아질산 요소 또는 MNU를 함유한 물에서 야생형 제브라피시를 배양함으로써 달성됩니다. 다음으로, 시각 기능은 광동 반응 또는 OKR을 측정하고 다른 시점에서 시력을 계산하여 정량화합니다.치료 후, 제브라피쉬는 안락사시키고 눈을 핵화하여 h와 e 염색을 사용하여 망막 조직의 형태학적 변화를 관찰합니다. 마지막으로, 세포 사멸 및 증식에 대한 특정 염색을 통해 망막에서 세포 변화를 시각화합니다. 궁극적으로, 시력 측정과 형태학적 및 세포 변화의 정량화는 망막 D와 재생을 시각화하는 데 사용됩니다.이 약리학적 모델의 주요 장점은 사용이 빠르고 간단하며 성인 얼룩말 물고기에서 신뢰할 수 있는 국소 변성 및 재생을 유도한다는 것입니다.NM 메틸 n 니트로소 요소 또는 MNU 처리를 수행하려면 건조 MNU 리터당 150mg을 함유한 물을 준비하는 것으로 시작합니다. nm 메틸 및 아질로 요소는 독성이 있으며 암, 유전적 손상 또는 해를 유발할 수 있으므로 작업하는 동안 주의하여 진행하십시오. 태아는 AB 형 균주, 제브라 피시가 표준 조건에서 6-12 개월을 유지하는 동안 유지합니다.제브라피시를 MNU 물에 옮기고 실온에서 60분 동안 부화시킵니다. 그런 다음 MNU가 없는 새 어항으로 옮기기 전에 깨끗한 물을 사용하여 물고기를 빠르게 헹굽니다. 실험을 위해 원하는 만큼 물고기를 표준 조건에서 유지하십시오.운동 시스템을 시작하여 시력 측정을 준비합니다. 그런 다음 메뉴에서 테스트를 선택하고 옵션을 단순 계단으로 설정합니다. 모터 시스템 위 약 500미터에 500ml의 물을 채운 주입 병을 설치합니다.검사실에 제브라피시 한 마리를 놓고 주입 병에 연결합니다. 그런 다음 검사 챔버를 자동차 시스템에 배치합니다. 다음으로 측정을 시작하고 컴퓨터 화면에서 실시간으로 안구 움직임을 관찰합니다.긍정적 인 응답 또는 예는 올바른 방향으로 연속적인 초로 정의되는 반면, 부정적인 응답 또는 아니오는 정지 격자에서 관찰되는 것과 유사한 무작위 안구 움직임을 나타냅니다. 제브라피쉬의 눈이 세 개 이상의 후속 광운동 반응 또는 OKR을 보이면 예를 누르십시오. 그렇지 않은 경우 아니오를 누릅니다.메뉴의 결과에서 조직학적 분석을 수행하기 위해 시신경 운동 자극의 공간 주파수 임계값을 결정하여 소프트웨어에 의해 계산된 시력을 추출합니다. 텍스트 프로토콜에 따라 제브라피쉬를 안락사시키고 핵을 형성한 후, 눈은 PBS에서 포름알데히드 4%를 사용하여 온전한 눈을 12시간 동안 섭씨 4도에서 고정한 후 등급이 매겨진 알코올 시리즈를 사용하여 샘플을 탈수하고 파라핀에 샘플을 삽입한 다음 시신경두 또는 ONH를 통해 5마이크로미터 절편을 절단하고 유리 슬라이드에 장착합니다. 다음으로, Alam을 사용하여 탈탄소 섹션을 5분 동안 염색한 후 슬라이드를 증류수에 두 번 담근 다음 0.2% 염산과 0.8% 암모니아를 사용합니다.슬라이드를 최소 10분 동안 수돗물에 넣습니다. 에탄올 시리즈로 슬라이드를 세척하고 탈수한 후 3분 동안 섹션을 eosin으로 옮깁니다. 장착 매체를 사용하여 내장하고 광학 현미경을 사용하여 말단, 산소 뉴클레오티드 전이효소, DUPT Nick n 라벨링 또는 터널에 대한 샘플을 관찰합니다.밀리리터 프로나제 K당 20마이크로그램을 첨가하여 절편을 제거하고 실온에서 20분 동안 배양합니다. 트리스 완충 식염수를 사용하여 단면을 5분씩 3회 세척한 후 각 절편에 50마이크로리터의 터널 반응 혼합물을 첨가하고 섭씨 37도의 가습실에서 60분 동안 배양합니다. 샘플을 세척하고 각각 5분씩 3회 트리스한 후 dappy가 들어있는 장착 매체를 사용하여 형광 현미경 아래에 슬라이드를 장착하여 증식 세포 핵 항원 또는 PCNA 염색을 수행합니다.샘플을 항원 회수에 넣고 완충하고 3분 동안 끓인 후 TB S3에서 세척한 후 차단 버퍼를 사용하여 시간당 5분씩 번, 실온에서 1시간 동안 샘플을 배양합니다. 그런 다음 anti-PC NA를 1에서 200으로 희석합니다. 1차 항체는 TBS plus tween으로 샘플을 각각 5분씩 23회 세척한 후 하룻밤 동안 섭씨 4도의 가습 챔버에서 샘플을 배양합니다. 1-500 희석된 2차 항체를 사용하여 실온에서 1시간 동안 샘플을 배양합니다.dpi가 포함된 장착 매체로 슬라이드를 장착한 후 형광 현미경으로 관찰합니다. 이 그림은 MNU 리터당 150마이크로그램을 적용한 후 성인 제브라피쉬의 시력 과정을 보여줍니다. 첫째 날부터 측정 결과 시력이 현저히 감소하여 3일째에 최소값에 도달한 후 수치가 증가한 것으로 나타났습니다.8일째에 진행하여 제브라피시 눈 망막 변성에 대한 조직학적 분석을 통해 볼 수 있듯이 30일째에 완전히 회복되었으며, MNU 치료 후 30일 동안 3일째부터 ONL의 공동 형성을 동반한 INL의 중단과 8일째에 감각 망막의 다양한 층에서 양성 터널 염색을 통해 관찰된 막대 ONL의 최대 손실이 포함되었습니다. MNU 치료 후 망막 변성은 세포사멸(apoptosis)에 의해 유발되는 것으로 관찰되었으며, 대부분의 터널 양성 세포는 3일째에 ONL에서 발견되었습니다. 그러나 동시에 INL에서 죽어가는 세포도 관찰되었습니다.이 비디오를 시청한 후에는 m and u 처리를 사용하여 성인 제브라피쉬에서 망막 변성을 유도하는 방법과 OKR 측정 및 면역조직화학적 절차를 사용하여 기능적 및 형태학적 변화를 정량화하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

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연구

JoVE Journal

Biology

생물학

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성인 Zebrafish의 망막 재생 연구에있는 사용을위한 비발 한 가벼운 손상 패러다임

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