단일 사용 공압 생물 반응기 시스템을 사용하여 포유 동물 세포의 배양

이 절차의 전반적인 목표는 많은 양의 포유류 세포를 성장시키는 것입니다. 이는 먼저 pH 및 용존 산소 또는 do 프로브를 보정한 다음 pH, do 프로브 및 온도 프로브 슬리브를 고압멸균하여 수행됩니다. 두 번째 단계는 프로브와 슬리브를 용기에 삽입하고 용기를 생물 반응기에 배치하고 배기 장치, 필터, 가스 라인 및 온도 프로브를 연결하는 것입니다.

다음 단계는 DO 및 pH 케이블을 연결하고 바이오리액터로 펌핑되는 배지 및 마이크로 캐리어를 무균 방식으로 연결하는 것입니다. 마지막 단계는 바이오리액터가 원하는 임펠러 속도, 온도 및 산소 포화도를 달성할 수 있도록 컨트롤러를 시작하는 것입니다. 궁극적으로, 접종 및 컴퓨터 모니터링 후, 배양액은 원하는 산물의 추출 및 정제를 위해 처리될 수 있습니다.

재사용 가능한 교반 탱크 바이오리액터와 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 에어 휠 바이오리액터가 사용하기 쉽고 미생물 오염 가능성을 최소화한다는 것입니다. 시작하자. 프로토콜을 시작하려면 hello 화면에 로그인합니다.

그런 다음 pH 센서를 검사하고 센서 팁에 전해질 용액이 채워져 있는지 확인합니다. pH 4 용액이 있는 비커 하나, pH 7 용액이 있는 다른 비커, 증류수가 담긴 세척 병을 구합니다. 그런 다음 pH 케이블을 pH 센서에 연결합니다.

hello 인터페이스의 actions(작업) 탭으로 이동하여 calibrate(보정)를 선택합니다. 그런 다음 PHA 탭과 2점 보정을 선택합니다. 교정 용액 온도 필드에 버퍼 온도를 입력합니다.

보정할 pH 4 용액에 센서를 놓고 0 필드에 값을 입력합니다. 그래프가 안정화되면 pH 센서를 증류수로 밀어 보정하고 헹굽니다. pH 7에 대한 보정을 반복하고 설정을 저장합니다.

span 필드에 버퍼 값을 입력하고 이식편이 안정화될 때까지 기다립니다. 용존 산소를 시작하거나 보정을 수행합니다. DO 센서가 몇 시간 동안 시스템에 연결되어 있고 calibrate 탭에서 극성이 지정되었는지 확인하고 DOA 및 2점 교정을 선택합니다.

DO 센서를 분리합니다. 0 탭에 0을 입력하고 그래프가 안정화될 때까지 기다립니다. calibrate one을 선택하기 전에 do 센서를 다시 연결하고 span 필드에 100을 입력합니다.

그래프가 안정화되면 2 보정을 클릭합니다. 그런 다음 설정을 저장하고 프로그램을 닫습니다. 보정 후 센서와 열 웰을 오토클레이브 파우치에 넣고 섭씨 30도 및 121PSI에서 15분 동안 오토클레이브합니다.

오토클레이브가 완료된 후 오토클레이브 파우치를 70% 이소프로필 알코올로 소독하고 파우치를 생물 안전 캐비닛 또는 BSC로 옮깁니다. 시약 용기를 소독하고 BSC에 도입합니다. 내부 포장을 제거하고 용기와 튜브에 손상이 있는지 검사합니다.

다음으로, 시약 용기의 전면 좌측 포트에 DO 센서를 설치하고 후면 좌측 포트에 열 웰을 설치합니다. 설치할 오른쪽 전면 포트에 pH 센서를 설치하십시오. 센서 캡을 열고 센서를 용기 상단의 포트에 가볍게 끼웁니다.

그런 다음 선박을 BSC 밖으로 옮깁니다. pH 및 DO 센서 케이블이 용기 슬리브 외부에 있고 슬리브 내부에 아무 것도 없는지 확인하십시오. 앞쪽을 향하도록 용기를 잡고 용기 발을 먼저 슬리브에 밀어 넣습니다.

용기의 바닥이 히터에 놓여 있는지 확인하십시오. 그런 다음 온도 센서를 용기 열에 조심스럽게 끼웁니다. 잘. 그런 다음 백에서 튜빙 세트를 제거합니다.

튜브의 색상 코드를 생물반응기 제어 장치의 해당 커넥터 및 펌프와 일치시킵니다. 매체 추가 및 샘플링 라인을 DO 센서와 열 뒤에 배선합니다. 튜브를 생물 반응기 왼쪽에 있는 색상으로 구분된 펌프에 잘 삽입합니다.

메인 가스관과 마이크로 가스관을 연결합니다. 주 가스 라인 커넥터를 가스 배출구에 눌러 주 가스 라인을 설치하십시오. 그런 다음 마이크로 가스 라인 커넥터를 가스 배출구에 시계 방향으로 돌려 마이크로 가스 라인을 설치합니다.

필터 오븐 튜브를 설치하려면 필터 오븐을 열고 배기 필터 튜브를 uan에 고정합니다. 튜브가 두 개의 고리를 통해 필터로 들어가 오븐에서 나오는지 확인하십시오. 필터 오븐 바닥에 있는 고리를 통해 하단 라인을 배선하고 도어를 닫습니다.

그런 다음 케이블을 DO 및 pH 센서에 연결합니다. 설치가 완료된 후 사용하지 않는 미디엄 에디션 라인과 미디엄 보틀 백 소스 사이에 루어 피팅을 사용하여 멸균 연결을 형성합니다. Hello 인터페이스의 작업 탭으로 이동합니다.

제어 펌프를 클릭하고 미디어 펌프를 선택한 다음 슬라이더를 클릭하여 미디어 펌프를 켭니다. 그런 다음 1.5-3.0리터의 미디어를 추가하고 슬라이더를 클릭하여 펌프를 끕니다. 이제 이 시스템은 이전에 준비된 마이크로 캐리어를 반응기로 펌핑할 준비가 되었습니다.

덧셈줄을 사용하여 추가할 수 있습니다. 멸균 루어 잠금 장치를 사용하여 MICROCAR 병을 적절한 추가 라인에 부착합니다. 제어 펌프 화면에서 추가 펌프를 켭니다.

마이크로 캐리어를 추가한 후 슬라이더를 사용하여 펌프를 끄고 hello 인터페이스의 메인 화면으로 다시 이동하여 작업을 선택한 다음 고급을 선택합니다. 적절한 컨트롤러를 선택하여 설정을 편집합니다. 컨트롤러를 자동으로 설정하고 설정값을 입력합니다.

컨트롤러를 설정한 후 공기 펌프를 켭니다. 시약 용기 내부를 살펴보고 에어 휠이 회전하고 있는지 확인하십시오. DO 센서가 완전히 편광되어 있고 do 값이 안정화되었는지 확인합니다.

그런 다음 하나의 주황색 밴드로 식별되는 미사용 배지 추가 라인과 루어 피팅을 사용하여 셀 병 백 소스 사이의 멸균 연결인 do 센서 형태를 보정합니다. 그런 다음 튜브의 실리콘 부분을 미디어 펌프에 설치합니다. 튜빙 cl을 확인하십시오.amp 열려 있고 분기 튜빙 clamp 닫혀 있습니다.

제어 펌프 탭으로 이동한 다음 미디어 펌프를 켭니다. 셀을 추가하고 미디어 펌프를 끕니다. 접종 후 작업 탭으로 이동하여 샘플 채취를 선택합니다.

샘플링 튜브가 샘플링 펌프에 있는지 확인하고 s를 조작합니다.amp화면의 지시에 따라 링 스톱 콕. 세포 계수를 위해 샘플과 함께 주사기를 제거하고 다른 다운스트림 응용 분야에서 세포 계수를 수행합니다. 마지막으로, 세포가 1.2 곱하기 10의 원하는 밀도에 도달하여 밀리리터당 6개의 세포에 도달하면, 20밀리리터 주사기에 바이러스 접종물을 정화조로 첨가합니다.

주사기를 반응기의 예비 추가 포트에 연결합니다. 제어 펌프 화면을 사용하여 덧셈 펌프를 켜고 바이러스 접종물을 추가합니다. A 5 49 세포의 대다수는 2시간 이내에 마이크로 캐리어에 부착되었습니다.

12시간 후, 세포는 편평해지고 마이크로카 표면에서 퍼지는 징후를 보였습니다. 24시간까지 마이크로 캐리어는 세포의 균일한 분포를 보였습니다. 마이크로카 집락화는 여기에서 보여준 것처럼 빠르게 발생합니다.

54 9 세포에 의한 마이크로카 집락화의 비율은 24 시간까지 75 %입니다. 이 그래프는 아데노바이러스 감염 전후에 배양된 54 9 세포의 수를 보여줍니다. 세포는 48시간 후에도 밀리리터당 100만 개의 세포로 기하급수적으로 계속 성장합니다.

이 비디오를 시청한 후에는 세포 또는 단백질 생산을 위해 포유류 세포를 고밀도로 성장시키기 위해 에어휠 생물 반응기를 조립하고 작동하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 시청해 주셔서 감사드리며 실험에 행운을 빕니다.