신경 조직의 조직학적 염색

뇌 조직의 슬라이스, 또는 섹션은 뇌의 구조와 기능을 연구하기위한 풍부한 재료입니다. 그러나 치료되지 않은 뇌는 빈 캔버스와 같은 시각적으로 균일한 조직입니다. 염색은 기관의 세포, 구조 및 분자 성분을 명확하게 시각화하기 위해 뇌를 "페인팅"하는 방법입니다. 대부분의 얼룩은 일반적인 조직학적 방법을 공유하지만, 각 접근 방식은 고유한 형태학적 목표를 가지고 있습니다. 이 비디오는 뇌 적학의 일반적인 원리의 개요를 제공 할 것입니다, 몇 가지 일반적인 염색 기술을 보여, 신경 과학 실험실에서 이러한 방법의 몇 가지 응용 프로그램을 검토 오늘.

신경 학적 염색 절차가 수행되는 방법을 논의하기 전에, 이러한 기술의 목표를 검토 할 수 있습니다.

조직학적 얼룩은 일반적으로 대조를 제공하기 위해 사용되며, 이로 인해 얼룩이 없는 조직에서 구별할 수 없는 특징을 드러냅니다. 예를 들어, 신경 세포의 몸을 시각화 하기 위해, 또는 somata, 신 경계의 회색 문제를 구성, 여러 얼룩을 사용할 수 있습니다. Nissl 얼룩에 사용되는 염료는 핵산에 부착되어 소마타 보라색을 착색하고 뉴런 조직을 드러냅니다.

또는, 백색 물질을 보면, 당신은 미엘린 얼룩 수 있습니다 - 축축을 둘러싼 지방산 칼집 - 룩솔 패스트 블루와 같은 염료와 함께. 대안적으로, 면역히토케미칼 염색은 특정 세포 모형에서 찾아낸 분자 표적을 강조할 수 있습니다. 이 기술은 항원으로 알려져 있는 항체와 분자 표적 사이 특이성을 이용합니다. 효소 또는 형광 화합물에 융합된 항체의 사용은 연구원이 효소 반응 또는 형광을 사용하여 그들의 결합 사이트를 시각화하는 것을 허용합니다.

이제 섹션을 염색하는 아이디어에 도입되었으므로 뇌 조직 염색에 앞서 는 일반적인 조직학적 단계를 살펴보고 시각화를위한 최적의 조건을 보장할 수 있습니다.

조직 구조를 보존하기 위해 뇌는 먼저 침투됩니다 - 혈액이 뇌에서 배출되고 동물의 혈관이 화학 적 고정을 제공하는 데 사용된다는 것을 의미합니다. 해부 후, 뇌는 보존 과정을 완료하기 위해 고정에 완전히 몰입됩니다.

다음으로, 표본은 파라핀 왁스와 같은 뇌 조직과 유사한 기계적 특성을 가진 매체에 내장되어 있습니다. 내장 후, 뇌는 마이크로 토메로 알려진 악기를 사용하여 얇게 단면된다. 그런 다음 슬라이스를 슬라이드에 장착하고 건조할 수 있습니다.

대부분의 염료는 수성이기 때문에 염색이 시작되기 전에 조직을 변형시키고 수분을 보충해야합니다. 이를 위해 슬라이드는 자일렌으로 헹구어 점점 더 희석된 일련의 에탄올을 통해 점진적으로 수화하기 전에 왁스를 용해합니다. 이 과정은 적절한 개인 보호 장비를 착용하면서 연기 후드에서 수행해야합니다.

당신의 두뇌 조직을 준비 한, 당신은 지금 염색 절차를 시작할 준비가되었습니다.

차단이라고 하는 첫 번째 단계는 비특이적 항체 결합으로 인한 배경 얼룩을 줄입니다. 혈청에 단면도를 노출하는 것은 비 표적 사이트에 묶는 표지되지 않은 항체를 소개해서 이것을 달성합니다. 하룻밤 블록에 30 분 후, 조직은 특정 분자 목표에 결합 하는 1 차적인 항체와 잠복에 대 한 준비가.

항체는 일반적으로 세포막을 방해하고 항체가 세포질에 들어가는 것을 허용하는 세제를 포함하는 차단 용액에서 희석됩니다.

하룻밤 잠복 후, 과잉 1 차적인 항체는 완충제에 있는 간략한 세시에 의해 제거됩니다. 다음으로, 효소 또는 형광에 접합된 이차 항체는 1차 항체를 구체적으로 라벨에 부착하기 위해 도입된다. 몇 시간 후, 과잉 항체는 완충의 여러 변화와 함께 제거됩니다.

이제 대상에 레이블이 지정되었으므로 대상을 감지하는 방법에 대해 이야기해 보겠습니다. 효소-컨쥬게이드 보조의 경우, 이는 염색체 기판의 도입에 의해 달성된다. 기판이 효소와 상호 작용할 때, 색깔 변경이 생기므로 용어 "염색체". 원하는 염색이 이루어지면, 일반적으로 약 2분 후에, 반응은 물에 있는 단면도를 빨리 침지함으로써 중단됩니다.

항체 염색 후에, 두 번째 단계는 아직도 결과에 몇몇 신경 해부학 적인 맥락을 제공하기 위하여 요구될 수 있습니다. 예를 들어, Nissl 얼룩을 사용하여 조직 대비를 향상시키도록 선택할 수 있습니다. 이 절차는 핵산과 상호 작용하는 크레실 바이올렛과 같은 기본 염료에 의존합니다.

첫 번째 단계는 용해되지 않은 결정을 제거하기 위해 염료 용액을 필터링하는 것입니다. 슬라이드는 원하는 대비가 달성 될 때까지 얼룩에 배양됩니다. 그런 다음, 염색을 중지하기 위해 물의 여러 변화에 섹션을 씻어.

그런 다음 슬라이드는 일련의 알코올에 침지되어 과도한 얼룩을 제거하고 슬라이스를 탈수합니다. 탈수 후, 슬라이스는 알코올을 제거하는 자일렌으로 지워지고 조직의 것과 유사한 가벼운 회절 특성을 가지고 있기 때문에 이미징을 향상시킵니다.

나중에 분석을 위해 스테인드 섹션을 보존하려면 영구 장착 매체로 커버슬립을 덮고 밤새 건조시하십시오.

이제 염색의 절차와 목표를 설명하면 일부 응용 프로그램을 볼 수 있습니다.

먼저, 조직학적 염색은 일상적으로 개별 뉴런을 시각화하는 데 사용됩니다. 차례로, 가시화는 레이저 포획 마이크로 절과 같은 기술에 필요합니다, 연구원은 박막에서 성장 한 특정 세포를 격리하기 위해 레이저를 사용하는. 유전 물질은 염색되고 해부된 세포에서 추출될 수 있고, 연구원이 신경 특정 유전자 발현을 조사할 수 있게 합니다.

염색은 또한 개별 적인 뉴런의 형태학적 특징을 특성화하기 위하여 이용될 수 있습니다. 이 실험에서, 면역히토화학은 시냅스 형성 원더라이트를 시각화하기 위해 GFP를 발현하는 세포에서 수행된다. 염색은 일반 세포와 활성화된 세포 사이에서 비교되며, 수상월이 자극 활성화에 대한 응답으로 여러 가지 변화를 겪는다는 것을 알 수 있습니다.

마지막으로, IHC의 특이성 덕분에 개별 단백질의 발현을 사용하여 신경계에서 고유한 세포 집단의 위치와 정체성을 식별할 수 있습니다. 예를 들어, 제브린 2 항체를 가진 마우스 소뇌의 염색은 Purkinje 세포로 알려져 있는 특화된 뉴런의 위치를 제시합니다.

당신은 단지 뇌 조각의 대상 염색에 JoVE의 소개를 보았다. 이 비디오에서우리는 IHC 및 Nissl 염색에 대한 특정 절차 외에도 염색의 일반적인 방법과 목표를 시연했습니다.

시청해 주셔서 감사합니다!