Name: 토양 샘플링과 곤충 병원성 선충의 분리 (Steinernematidae, Heterorhabditidae) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: 학습하세요 토양 샘플링과 곤충 병원성 선충 분리 방법을. 수정된 화이트 트랩과 곤충 미끼 기법을 사용하여 Steinernematidae와 Heterorhabditidae를 효율적으로 분리하고 실험실 배양을 위한 기초를 마련합니다.

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이러한 여러 프로토콜의 개선에 기여한 샘 규 김, 캐서린 Plichta 빅토리아 미란다 - 톰슨 : 저자는 증권 연구소의 과거 회원을 감사드립니다. 우리는 국립 과학 재단 (National Science Foundation)의 지원을 인정 SP 주식에 (보조금 IOS-0840932 및 IOS-0724978).

1. 토양 시료 채취 <ol><li> 각 샘플링 사이트에 4 평방 미터 - 2의 최소 면적을 고려. </li><li> 적어도 15 cm의 깊이 (그림 4)에서 토양 샘플을 수집합니다. </li><li> 이 영역에 적어도 5 무작위 샘플을 채취. </li><li> 샘플 당 3 서브 샘플을 가져 가라. 이 연구의 목적에 따라 서브 샘플을 결합하거나 구분하지 않고 하나. </li><li> 비닐 봉투에 각각의 샘플을 놓습니다. 시료의 누출 (그림 4)을 방지하기 위해 이중 자루에 넣기를 고려합니다. </li><li> 방수 마커 라벨 샘플. 등 (지방 / 지역 / 사이트 이름 및 GPS 좌표 정보를 포함) 사이트의 정보, 날짜, 서식지, 관련 식물, 온도, 고도, 각 샘플링 사이트에서 다음과 같은 정보를 포함 참고 : 해당되는 경우, 곤충 또는 이후의 식별을위한 샘플 수집 다른 무척추 동물의 존재를 수집 및 / 또는 기록한다. 그들은 잠재적 인 타고난를 나타낼 수있다알 EPN 호스트. </li><li> 물로 잘 세척 및 / 또는 70 % 에탄올 0.5 % 표백제 솔루션을 소독하여 샘플 사이 청소 수집 도구. </li><li> 실험실로 운송시 - (15 ° C에서 8) 쿨러에 샘플을 보관하십시오. </li><li> 토양 조성, 조직, 습기, 전기 전도성 또는 다른 원하는 토양 매개 변수에 대한 정보를 얻기 위해 분석 토양 샘플의 일부를 가라. </li></ol> . 토양 샘플에서 2 선충 격리 : 곤충을 유혹 기술 <ol><li> 이물질을 제거합니다 (예., 바위, 등 나무 나 나무 껍질, 잎, 조각.) saprobic 미생물 오염을 방지하기 위해 샘플 수집. </li><li> 흙을 묻혀 선충의 이동을 용이하게하기 위해 물을 추가합니다. 참고 : 천천히 토양의 수분 레벨을 증가시키기 위해 스프레이 병을 사용합니다. </li><li> 뚜껑이있는 깨끗한 플라스틱 용기에 촉촉한 흙의 약 200-250 ㎖를 놓습니다. </li><li> 곤충 미끼 추가. 각 시료의 토양 표면 (그림 5)에 5 ~ 10 곤충을 고려하십시오. </li><li> 뚜껑이있는 용기를 덮고 거꾸로 컨테이너를 켭니다. </li><li> (- 25 ° C에서 보통 22) 어둠과 RT의 컨테이너를 유지합니다. </li><li> 3 일 죽은 벌레를 제거 - 매 2 컨테이너를 확인합니다. 참고 : 토양 샘플의 추가 탄압 각 컨테이너에 추가 건강한 곤충을 추가합니다. </li><li> 컨테이너에서 죽은 벌레를 제거합니다. 참고 : 어두운 자주색 시체에 붉​​은 벽돌이 heterorhabditids에 기생하는 반면 갈색 또는 황토 채색 함께 시신은 일반적으로 steine​​rnematids에 의해 기생됩니다. </li><li> 멸균 물에 시체를 씻어. </li><li> (아래 절차 참조) 선충 자손의 회복을위한 수정 된 화이트 함정에 시체를 놓습니다. </li></ol> . 감염된 시체에서 3 선충류 복구 : 수정 된 화이트 함정 <ol><li> 50 (60) mm의 DIAM의 상단을 놓으십시오. 큰 접시 (100mm) 내부 페트리 접시. </li><li> 하나의 죄를 설정작은 그릇 안에 GLE 원형 여과지 (와트 만 # 1). </li><li> 확실히 시체를 만드는 작은 접시의 필터 종이에 장소 사체는 오염을 방지하기 위해 서로 접촉하지 않습니다. </li><li> 캘리포니아와 외부 (큰) 페트리 접시를 채우십시오. 멸균 증류수 20 ㎖. 시체를 보유하고 접시에 물을 추가하지 마십시오. </li><li> 큰 페트리 접시와 뚜껑의 내용 (그림 6)을 포함한다. </li><li> 그에 따라 요리를 레이블. 선충류 이름 (종 / 분리), 감염 날짜 (날짜 감염이 설정된) 및 트랩 날짜 (이것은 트랩이 설정된 날짜입니다) : 다음과 같은 정보를 추가합니다. </li><li> 감염성 청소년 단계 (IJS)의 출현이 발생할 때까지 RT에서 트랩을 유지합니다. 선충 종 및 / 또는 고려 변형에 따라 25 일 -이 과정은 10 사이의 시간이 소요될 수 있습니다. </li><li> 트랩의 큰 접시를 제거하고 비커에 선충 물을 부어 IJS 수확 물. </li><li> 선충은 B의 바닥에 가만히 따르다 할 수 있도록 허용eaker. 이 과정은 몇 분 정도 걸릴 수 있습니다. </li><li> 확인 선충이 비커의 바닥에 남아하고, 조심스럽게 물을 부어. </li><li> 더 많은 물을 추가하고 선충은 가만히 따르다 할 수 있도록하여 선충을 씻어. 물이 깨끗해질 때까지 3 회 -이 단계 2를 반복 할 수 있습니다. </li><li> 조직 배양 플라스크 (250 ㎖)에 선충 현탁액을 놓습니다. 3000 선충 / ㎖ - 현탁액의 농도를 1,000 보관하십시오. </li><li> C. ° 20 - 추운 방에서 또는 인큐베이터에있는 선충 서스펜션 스토어 플라스크 (10) 사이 참고 : EPN의 수명은 변수로 주기적으로 저장 플라스크를 확인합니다. heterorhabditids 더 정기적 인 검진을 필요로 할 수있는 반면, 계대 배양의 필요없이 12 개월 - 보통 steine​​rnematids 6 저장할 수 있습니다. </li></ol>

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

이 데모는 일반적으로 EPN과 공생 박테리아를 연구에 사용되는 다양한 기술을 설명하는 프레 젠 테이션의 첫 번째입니다. 이 기술은 실험실에서 EPN 문화의 성공적인 설립을위한 주요 단계를 대표하고 또한 연구를위한 모델 생물로 EPN을 채용 다른 생물 검정을위한 기초를 형성한다. EPN의 다양한 토양 조사는 자신의 풍요 로움과 유통이 계절, 서식지와 지리적 영역 (4), 5,9,15에 걸쳐 될 수있는 것으로 나타났습니다. 토양 질감, 수분 함량 및 온도뿐만 아니라 호스트 가능 같은 요인, 그 분포에 중요한 역할을 할 수 있습니다. 따라서 중요한 조사에 예비 자료가. 샘플이 촬영되면, 이들이 가능한 한 빨리 처리하는 것이 중요하다. 이것이 가능하지 않은 경우에는, 이들은 냉장실 또는 다른 적합한 온도 제어 장치에 기억되어야한다. 다른 온도가 될 수있다시료의 기원에 따라 곤충 탄압 용기를 저장하기위한 것으로 간주된다. 고려를 위해 일반적으로 쿨러의 온도 ...

많은 선충은 곤충과 관련된, 그리고 그들의 호스트 상호 작용으로부터 유리한 해로운 범위된다. 여기서, 우리는 또한 곤충 병원성 선충 (또는 EPN)로 알려진 곤충의 병원체이다 선충의 그룹에 초점을 맞 춥니 다. Steinernematidae 및 Heterorhabditidae 11,13 두 선충 가족이 선충이 그룹에 속한다. 그들의 병원성 효과는 통성 혐기성 장내 세균 (Xenorhabdus 박테리아 heterorhabditids와 연관 steinernematids 및 Photorhabdus 박테리아와 연관) 2과의 상호 작용에 의해 수여 사실이다. 박테리아는 토양에 살고있는 유일한 자유의 생활 선충 단계, (또한 영속 청소년, 감염성 청소년 또는 IJ라고도 함) 세 번째 단계 감염성 청소년에 의해 하나의 곤충 호스트에서 다른 벡터가된다. 일단 곤충 내부 선충 대규모 패혈증에 의한 곤충 호스트를 죽일 수있는 곤충의 체액에 박테리아를 놓습니다. 또한 박테리아곤충의 조직을 저하하고 성숙하고 번성 할 수 있도록, 선충 &#39;음식 소스가됩니다. 보통, 성인 선충의 하나 또는 두 세대는 곤충 사체 내에서 생산됩니다. 몇 박테리아 세포와 마지막으로 성인 세대 다시 연결합니다의 자손보다 이전의 영양 관계보다 방식을 전문으로하고, 그들이 기생하는 다른 곤충을 기다리고 것이다 토양에 곤충의 시체에서 이사로 자신의 창자에있는 세포를 육성 6,11,14 (그림 1). 그들은 농업 해충 3,4,5입니다 곤충의 다양한 기생 수있는 1927 년 자신의 발견 이후, EPN은 화학 농약에 가치있는 대안을 고려하고 있습니다. 그러나, 지난 20 년 동안,이 선충과 공생 박테리아는 호스트 미생물 자원 활용의 생물 생태와 진화의 양상을 연구 전성 모델 시스템으로 인식되고있다NS 14. 이 프레젠테이션의 목표는 방법과 가장 일반적으로 토양 샘플링 및 EPN의 분리를 위해 사용되는 기술을 보여주는 것입니다. 다양한 도구를 사용할 수 있으며 포함하여 토양 샘플을 수집하는 데 사용 할 수 있습니다 토양 corers, 흙손, 포스트 홀 굴착기, 오거, 샘플링 튜브, 손 삽, 다른 사람의 사이에서 (그림 2). 연구의 목적에 따라,이 샘플링 전략이 고려 될 수있다 : a) 성층, b) 무작위 추출 (도 3). 층화 샘플링은 보통 주어진 시간 동안 특정 또는 demarked 영역에서 집중적 인 연구의 일부로서 사용된다. 일반적으로, 횡단는 demarked하고 토양 샘플은 일정 기간 (그림 3A) 15 이상 횡단에 규정 된 간격으로 촬영하고 있습니다. 광범위한 영역에 초점을 때 무작위 표본 추출은 일반적으로 사용된다. 이 샘플링 전략 EPN F의 다양성을 연구를 위해 사용되어왔다광범위한 지역 또는 지역 (그림 3B) 12 롬. 요인의 숫자는 고도, 토양의 질감과 서식지 (예., 경작지, 삼림, 목초지, 공원, 해안 미, 수변 지역 등)의 다양한 범위를 포함하는 연구의 초점에 따라 고려 될 수있다. 우리는 원래 침구 및 Akhurst 1에 의해 설명과 토양 샘플에서 EPN를 복구하는 간단하고 선택적 대안을 나타냅니다 된 곤충을 유혹 기술을 보여줍니다. 이 선충 (IJ 스테이지) 곤충 숙주 유인 해 기생됨을 전제로 선택적 절차이다. 이 기술은 또한 다른 곤충, 균류 등의 병원균, 박테리아 및 8,10의 분리를 위해 고려 될 수있다. 우리는 또한 감염된 곤충 호스트 7,14에서 선충의 자손을 검색하는 데 사용되는 수정 된 화이트 트랩 기술을 보여줍니다. 이 충족 손쉽게입니다분해 곤충 사체 부스러기가 &#39;깨끗한&#39;선충 자손을 검색하는 이점을 제공 HOD. 마지막으로, 설명이 문서에 나와있는 기술은 임신 및 / 또는 우리의 실험실에서뿐만 아니라 여러 동료들과 공동으로 기술 된 실시하는에 해당합니다.

<table><tbody><tr><td>Galleria mellonella</td><td>Timberline</td><td>http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG</td><td>곤충 미끼 기법용</td></tr><tr><td>여과지, 55mm 등급 1 셀룰로오스</td><td>Whatman/VWR</td><td>28450-048</td><td>감염 챔버 및 화이트 트랩 어셈블리</td></tr><tr><td>60 x 15mm 페트리 접시</td><td>VWR</td><td>25384-092</td><td>감염 챔버 및 화이트 트랩 어셈블리</td></tr><tr><td>100 x 15 mm 페트리 접시</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td>감염 챔버 및 화이트 트랩 어셈블리</td></tr><tr><td>ZIPloc 비닐 봉투</td><td>Ace Hardware 또는 현지 철물점</td><td></td><td>토양 샘플링</td></tr><tr><td>기계 피펫터 P1000, P200 ml</td><td>VWR</td><td>89130-562; 89130-566&nbsp;</td><td>감염 챔버 및 화이트 트랩 어셈블리</td></tr><tr><td>피펫 팁 1000ml, 200ml</td><td>VWR</td><td>16466-004; 53510</td><td>감염 챔버 및 화이트 트랩 어셈블리</td></tr><tr><td>표백제</td><td>에이스 하드웨어 또는 지역 철물점</td><td></td><td>토양 샘플링,</td></tr><tr><td>차아염소산나트륨</td><td>소독 에이스 하드웨어 또는 지역 철물점</td><td></td><td>토양 샘플링,</td></tr> 소독 <tr><td>70% 에틸 알로콜</td><td>AAPER</td><td>17212945</td><td>토양 샘플링, 소독</td></tr><tr><td>삽</td><td>에이스 하드웨어 또는 현지 철물점</td><td>N/A</td><td>토양 샘플링</td></tr><tr><td>튜브형 토양 샘플러</td><td>Accuproducts</td><td></td><td>토양 샘플링</td></tr><tr><td>토양 프로브, 긴 핸들</td><td>Nupla&nbsp;</td><td>PRB4T 69401 클래식</td><td>토양 샘플링</td></tr><tr><td>측정 테이프</td><td>Ace 하드웨어 또는 현지 철물점</td><td></td><td>토양 샘플링</td></tr><tr><td>플래그 테이프, 다양한 색상</td><td>Ace 하드웨어 또는 현지 철물점</td><td></td><td>토양 샘플링</td></tr><tr><td>조직 문화 플라스크</td><td>VWR</td><td>Falcon, 29185-304&nbsp;</td><td>화이트 트랩, EPN 컬렉션</td></tr><tr><td>세척 병, 폴리에틸렌, 넓은 입</td><td>VWR</td><td>16650-107</td><td>화이트 트랩, EPN 컬렉션</td></tr></tbody></table>

토양 샘플링과 곤충 병원성 선충의 분리 (steine​​rnematidae, heterorhabditidae)

Soil Sampling and Isolation of Entomopathogenic Nematodes (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

곤충 병원성 선충 (일명 EPN)은 곤충의 광범위한 기생 토양 서식하는 선충의기를 나타낸다. Steine​​rnematidae 및 Heterorhabditidae :이 선충이 두 가족에 속한다. 지금까지 70 개 이상의 종은 Steine​​rnematidae에 설명 된 약 20 종은 Heterorhabditidae에 있습니다. 선충은 장내 세균과 공생 협력 관계를 가지고 함께 그들은 곤충 종의 넓은 범위를 죽이는 강력한 살충 복잡한 역할을합니다. 여기서, 우리는 토양에서 EPN를 수집하기 위해 고려하는 가장 일반적인 기술에 초점을 맞 춥니 다. 이 프레젠테이션의 두 번째 부분은 곤충 유혹의 기술, 토양 샘플에서 EPN의 분리를위한 널리 사용되는 방식, 감염 곤충에서이 선충의 복구에 사용되는 수정 된 화이트 트랩 기술에 초점을 맞추고 있습니다. 이러한 방법과 기술은 EPN 숭배의 성공적인 설립을위한 핵심 단계입니다실험실에서 또한 URES 다른 생물 분야의 연구를위한 모델 생물로이 선충을 고려해 다른 생물 검정을위한 기초를 형성한다. 이 프리젠 테이션에 표시하는 기술은 SP 재고 실험실의 구성원뿐만 아니라 다양한 작가에 의해 설명 된 수행 및 / 또는 설계된에 해당합니다.

토양 시료 채취 EPN의 세 번째 단계 감염성 청소년은 토양에 (그림 1) 상주 이러한 선충 '라이프 사이클의 유일한 자유의 생활 단계입니다. 따라서, 토양 시료를 수집하는 것은이 선충 복구하는 매우 효율적인 방법이다. 4 샘플들이 이동해야하는 깊이를 나타내는 토양 프로파일을 보여준다. 샘플의 수분을 보존하는 것은 선충의 생존을위한 핵심 요소입니다. 결과적으로, 비닐 봉투에서 토양 샘플을 유지하고 실험실에 전송 (그림 4) 동안 차가운 온도를 유지하는 것이 중요합니다. 선충 복구 전염병 및 EPN 감염과 곤충의 큰 샘플 발견이없는 한 자연 속에서, 자연 EPN에 의해​​ 기생 곤충을 찾는 기회가, 3 % 미만이다. 따라서, 곤충과 토양 샘플의 유혹 편리 ...

곤충 병원성 선충은 곤충의 다양한 기생 토양에 서식하는 회충 있습니다. 각각의 토양 샘플 및 감염된 곤충 사체에서 선충의 복구를 위해 곤충 유혹하고 수정 된 화이트 트랩, 우리는 두 가지 기술을 사용하여 토양 선충의 분리에 사용되는 샘플링 방법을 보여줍니다.

토양 샘플링과 곤충 병원성 선충의 분리 (Steine​​rnematidae, Heterorhabditidae)

Entomopathogenic nematodes (a.k.a. EPN) represent a group of soil-inhabiting nematodes that parasitize a wide range of insects. These nematodes belong to ...

이 절차의 목적은 장 병원성 선충의 토양 샘플링 및 분리에 일반적으로 사용되는 방법과 기술을 입증하는 것입니다. 이는 먼저 transect 접근 방식으로 토양 샘플을 수집하거나 무작위 샘플링 접근 방식으로 시연하여 수행됩니다. 다음으로, 토양 샘플은 곤충과 함께 감소하여 장 병원성 선충을 선택적으로 회수했습니다.마지막 단계는 변형된 흰색 트랩을 사용하여 감염된 곤충에서 선충을 수집하는 것입니다. 궁극적으로 이러한 기술은 실험실에서 장 병원성 선충 배양을 성공적으로 확립하기 위한 핵심 단계를 나타내며 다운스트림 생물학적 분석의 기초를 형성합니다. 토양 샘플링 기술의 장점은 현장에 가서 병원성 선충의 성숙 단계를 수집할 수 있다는 것입니다.나는 거의 만나지 않는 이 선충에 감염된 곤충을 샘플링하는 것보다는. 우리가 사용하는 무작위 표본 전략은 일반적으로 큰 지리적 지역 또는 지역에서 병원성 선충의 다양성을 평가하는 데 사용됩니다. 이 기술은 1975년 Accur의 베팅에 의해 처음 설명되었습니다.그것은 자유로운 생활 단계가 곤충 숙주에 끌려 기생한다는 전제에 기초한 선택적 절차입니다. 시연 절차는 Rue Orozco 대학원생과 내 실험실의 Ming Mingle 연구 기술자가 될 것입니다. 실험실. 샘플을 채취하는 장소의 면적은 최소 2제곱미터여야 하며, 가능하면 4제곱미터 이상이어야 합니다.각 토양 샘플에 대해 DM a C 샘플 영역 내에서 최소 3개의 더 작은 하위 샘플을 채취합니다. 하위 표본은 연구의 목적을 충족하는 경우 결합할 수 있습니다. 토양 샘플을 0에서 15cm 깊이로 수집합니다.각 샘플은 250g에서 1kg이어야 합니다. 토양 CORA 트로우, 손 삽 또는 이와 유사한 도구를 사용하고 선택한 각 샘플링 영역 내에서 최소 5개의 무작위 사이트에서 수집합니다. 각 샘플은 이중 포장되어야 하며 방수 마커로 표시되어야 합니다.라벨에는 부지, 위치, 고도, 날짜 및 부지의 관련 식생 및 온도와 함께 서식지 설명과 같은 환경 변수에 대한 정보가 포함되어야 합니다. 지역 곤충 및 기타 무척추 동물 종을 기록하십시오. 수집 장소 간 실험실에서 나중에 식별하기 위해 즉시 식별할 수 없는 수집 종을 수집하고, 수집 도구를 물로 철저히 세척한 다음 70% 에탄올 또는 0.5% 표백제를 사용하여 소독합니다.토양 샘플을 섭씨 8도에서 15도의 쿨러에 보관하여 운송합니다. CES는 샘플의 한 부분을 분리하여 토양의 구성, 질감, 전도성 등과 같은 토양의 전체적인 특성을 분석합니다. 각 토양 샘플에서 seic 미생물 오염으로 이어질 수 있는 파편을 제거합니다.그런 다음 토양에 물을 적셔 그 안에 있는 선충이 쉽게 이동할 수 있도록 합니다. 200-250g의 축축한 흙을 뚜껑이 있는 플라스틱 용기에 넣습니다. 그런 다음 곤충 미끼를 추가하십시오.5-10마리의 곤충으로 충분합니다. 뚜껑을 닫고 용기를 뒤집어 어두운 곳에 두십시오. 2-3일에 한 번씩 실온에서 죽은 곤충을 제거하고 필요에 따라 건강한 곤충으로 교체하여 체중을 늘리십시오.곤충 사체가 갈색 또는 황토색이면 Stein과 Nema가 parit에 기생하고 있음을 암시합니다. 반면에 시체가 벽돌 빨간색에서 짙은 자주색이면 이종을 예상하십시오. 변형된 흰색 덫을 사용하여 곤충 미끼에 기생한 선충을 수집하십시오.먼저 50mm 또는 60mm 페트리 접시의 뚜껑을 100mm 접시의 바닥에 놓습니다. 그런 다음 원형 와트만 시트를 놓습니다. 작은 접시에 있는 첫 번째 여과지.곤충 사체를 살균 된 물로 헹구고 여과지에 옮깁니다. 서로 접촉하지 않도록 흩어져 있습니다. 더 큰 접시에만 약 20ml의 증류수를 채우고 더 큰 접시로 어셈블리를 덮습니다. 뚜껑.요리에 선충 이름, 곤충 미끼 날짜 및 날짜를 표시하십시오. 트랩이 설치되었습니다. 트랩을 실온에 유지하고 곤충 사체에서 나오는 감염성 어린 선충 또는 IJ를 모니터링합니다.이 작업은 10일에서 25일이 소요될 수 있으며 트랩이 보관되는 곳의 온도와 수분 수준에 따라 다릅니다. 트랩의 수위가 증발한 경우 IJ가 있는 접시에 다시 채워야 합니다. 선충이 들어있어야 하는 더 큰 접시에서 물을 수확합니다.선충을 몇 분 동안 가라앉힌 다음 천천히 물을 디캔팅합니다. 선충이 소량의 물에 남아 있으면 물을 다시 추가한 다음 조심스럽게 부어 몇 번 더 헹굽니다. 그런 다음 선충 개체군을 추정하기 위해 연속 희석을 수행합니다.250ml 배양 플라스크에서 선충의 농도를 밀리리터당 1개에서 3000개 사이로 조정합니다. 이 서스펜션은 섭씨 10도에서 20도 사이에 보관하십시오. 일반적으로 자연에서 장 병원성 선충에 기생하는 곤충을 찾을 가능성은 매우 낮습니다.따라서, G 흑색종 유충을 미끼로 사용하는 개략적인 프로토콜은 훨씬 더 효율적인 속도로 이러한 선충을 분리하는 데 사용되었습니다. 5일 후, 곤충은 감염되어 붉은 색을 띠었습니다. 변형된 흰색 덫은 선충의 흔적을 보여주었습니다.이 덫에서 15일이 지나자, 선충은 물에 모여서 깨끗한 모습을 보였고 곤충 조직도 없었습니다. 갈륨 멜라니아 유충을 사용한 단일 추출 주기는 토양 샘플에 있는 모든 오마 병원성 선충을 회수하는 데 충분하지 않을 수 있습니다. 따라서 이 작업을 여러 번 수행하는 것이 좋습니다.또한 사용자는 갤러리아보다 다른 곤충을 고려하는 것이 좋으며, 이는 회복 가능성도 높일 것입니다. 곤충과 토양 샘플에 대한 토론은 박테리아나 곰팡이와 같은 다른 곤충 병원체를 분리하기 위해서도 고려할 수 있는 기술입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Environment

환경

이 프레젠테이션의 목표는 생체 내에서와 곤충 병원성 선충의 양육을위한 체외 기술에 증명하는 것입니다. 체외 방법이 풍부한 한천 미디어를 활용하는 반면, 생체 내 방법, 곤충 호스트와이 선충의 양육을 고려하십시오.

생체 내에서와 곤충 병원성 선충의 체외 양육 (Steinernematidae 및 Heterorhabditidae)

여기서 우리는 토양 샘플에서 entomopathogenic 균류 (EPF)를 분리하고 선택하는 데 사용 된 식사 벌레 (Tenebrio molitor)-미끼 시스템을 기반으로 프로토콜을 제시합니다. 효과적인 코니디아 번호(ECN) 포뮬러는 현장에서 해충 미생물 조절을 위한 생리적 특성에 기초하여 높은 스트레스 내성 EPF를 선택하는 데 사용된다.

토양 샘플에서 내토모 병원성 곰팡이의 격리 및 선택 및 곤충 해충에 대한 곰팡이 독성의 평가

이 프로토콜은 필드의 천연 기판에서 살아있는 선충을 효율적으로 추출하는 방법을 간략하게 설명합니다.

베어만 퍼널에 의해 야생 선충의 신속한 격리

엔토모병원성 진균 콜로니는 테네브리오 미끼, 갤러리아 미끼 및 선택적 인공 배지, 즉 클로람페니콜, 티아벤다졸 및 시클로헥시미드(CTC 배지)로 보충된 효모 추출물이 풍부한 감자 덱스트로스 한천을 사용하여 열대 토양 샘플로부터 분리된다.

토양 샘플에서 엔토모병원성 곰팡이를 분리하는 방법의 비교

이 프로토콜은 자아 Caenorhabditis 선충류의 대규모 생태 조사를 수행하는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법의 주요 장점은 자연에서 수집 된 선충류와 관련된 생태 및 분자 데이터의 효율적인 조직 및 분석입니다.

Selfing caenorhabditis 선충류의 생태 조사를 수행하기위한 고도로 확장 가능한 접근법

Entomopathogenic 선충류는 박테리아와 공생하며 함께 선천적 인 면역 체계를 손상시켜 곤충을 성공적으로 감염시킵니다. 선충류 감염의 유전 적 기초에 대한 연구를 촉진하기 위해 엔토모 병원성 선충류를 유지하고 유 전적으로 조작하는 방법이 설명됩니다.

Entomopathogenic Nematodes 배양 및 유전자 조작

Caenorhabditis elegans 는 생물학의 주요 모델 종 중 하나이지만 거의 모든 연구는 자연적으로 관련된 미생물이없는 상태에서 수행됩니다. 여기에 설명 된 방법은 미래의 기능적 C. elegans 연구의 기초로서 관련 미생물의 다양성에 대한 이해를 향상시키는 데 도움이 될 것입니다.

모델 선충 Caenorhabditis elegans의 자연 미생물 총의 분리 및 특성화

우리는 농부들이 생물 살충제로서 곤충병원성 선충을 대량 번식하는 두 가지 방법을 제시합니다. 첫 번째 방법은 선충 배양 기질로 폴리아크릴아마이드 젤을 사용하고, 두 번째 방법은 폴리머 코팅된 면모를 배양 기질로 사용합니다. 두 방법 모두 곤충 시체 내에서 선충을 생 체 내에서 전파하는 데 의존합니다.

곤충병원성 선충의 재배자 기반 생체 내 전파

이 방법은 연속 13 C 균일 또는 차동 식물 조직 라벨 15 N 동위 원소 표지 챔버를 구축하고 운영하는 방법을 설명합니다. 신진 대사 및 Andropogon의 gerardii의 구조 라벨링 대표 결과에 대해 설명합니다.

연속의 설계 및 운영<sup&gt; 13</sup&gt; C 및<sup&gt; 15</sup통일 또는 차등을위한&gt; N 레이블 상공 회의소, 대사 및 구조, 식물 동위 원소 라벨링

필드 lysimetry 및 porewater 샘플링 연구원은 토양과 설립 식물에 적용되는 화학 물질의 운명을 평가할 수 있습니다. 이 프로토콜의 목적은 필요한 장비를 설치하고 통합 필드 lysimetry 및 porewater 샘플링 실험에서 화학적 분석을위한 샘플을 수집하는 방법을 설명하는 것입니다.

통합 필드 Lysimetry 및 Porewater 샘플링 토양에서 화학 이동성의 평가 및 설립 식물

학습하세요 토양 샘플링과 곤충 병원성 선충 분리 방법을. 수정된 화이트 트랩과 곤충 미끼 기법을 사용하여 Steinernematidae와 Heterorhabditidae를 효율적으로 분리하고 실험실 배양을 위한 기초를 마련합니다.

토양 샘플링과 곤충 병원성 선충의 분리 (Steine​​rnematidae, Heterorhabditidae)

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