Name: 지주막 하 출혈의 급성과 늦은 후유증의 연구에 대한 토끼 피 션트 모델 : 기술적 측면 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: 학습하세요 토끼를 이용한 지주막 하 출혈(SAH) 피 션트 모델 수립 방법을 통해 뇌혈관 질환의 급성기 뇌손상과 지연성 혈관경련 메커니즘을 탐구하세요. 이 기법은 ICP 조절이 가능한 검사자 독립적 모델로 임상 전 연구에 활용됩니다.

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저자는 보스턴, MA 초안을 교정하기위한 교정 및 원고를 편집하고 Paskus 예레미야, 보스턴 아동 병원, 대한, 로리 폰 Melchner, 베른 대학교 의과 대학 신경 외과학 교실, 베른, 스위스 감사합니다. 우리는 다니엘 메틀, DVM, 최대 뮐러, DVM, 다니엘 Zalokar 및 Olgica Beslac, 실험 외과 학회, 임상 연구학과, 베른 대학, 베른, 스위스 동물 보호, 마취 및 수술 지원의 숙련 된 관리를 주셔서 감사합니다. 우리는 생리 학적 매개 변수의 실시간 데이터 모니터링 및 사후 처리를 위해, 마이클 Lensch, 헤드 연구 간호사, 중환자 의학 교실, 베른 대학 병원 베른 대학, 베른, 스위스 감사합니다. 우리는 우수한 실험실 기술 및 수술 지원, 에딘 Nevzati, 칼 Muroi, 그리고 살로메 Erhardt 감사합니다. 이 작품은 인텐시브의 부서에 의해 지원되었다전자 케어 의학, 베른 대학 병원 베른, 베른, 스위스, 임상 연구학과, 베른, 베른, 스위스의 대학의 대학 및 Kantonsspital 아라우, 아라우, 스위스에서 연구 기금. 우리는 그림 1과 2에 대한 무단 전재 허가를, 엘스 비어 감사합니다.

2.5 무​​게 3 개월 된 여성 뉴질랜드 토끼 - 3.5 kg이 절차를 사용 하였다. 이 연구는 실험 동물의 관리 및 사용을위한 건강 지침의 국립 연구소에 따라 스위스, 베른 (승인 번호 13분의 105)의 광저우의 동물 관리위원회의 승인을 수행 하였다. 모든 수술은 베른, 스위스 베른 대학 병원에서 임상 연구학과의 실험 외과 연구소에서 무균 조건 하에서 수행 하였다. 동물 용 마취는 수술 중 및 복구에 걸쳐 동물을 모니터링. 1 동물 준비, 위치 및 쇄골 하 동맥 삽관 <ol><li> 근육 마취제의 주입 토끼에서 전신 마취를 유도 (30 ㎎ / ㎏, Ketalar, 50 ㎎ / ㎖) 및 자일 라진 (kg 6 밀리그램 /; Xylapan 20 ㎎ / ㎖) 유해에 토끼의 반응을 확인하여 마취의 컨트롤 깊이 stimulat이온 (예를 들면, 발가락 핀치). 긍정적 인 반응의 경우에는 1.7를 참조하십시오. </li><li> 양안의 하부 뚜껑 풀다운 건조 더욱 자극을 막기 위해 연고 눈꺼풀에 소량의 적용. </li><li> , 20 Gbutterfly의 venflon (20 G 혈관 카테터)와 측면 귀 정맥 카테 테르를 꽂다 접착 테이프로 고정하고, 0.9 %의 염화나트륨을 포함하는 중력 가방 (500 ㎖ / 24 시간)와 케타민을 연결 (40 ㎎ / ㎏ / 시간) 연속 정맥 마취 / 자일 라진 (xylazine) (4 ㎎ / ㎏ / 시간). 추가 진통제마다 15 분 IV (펜타닐, 1 MCG / kg)을 관리합니다. 참고 : CPP 감소와 연관된 휘발성 가스 마취제, CBF 증가하고, 산소 뇌 대사율의 감소를 피 11 정맥 마취제가 뇌 공부를 할 때 맨 중요하다 CBF 및 뇌 혈관 수축, 12을 유지하여 neuroanesthesia 더 이상적인 특성을 제공한다. 혈관 경련. 또한, 비록 사망률의 증가 spontaneously 동물을 호흡, 더 나은 급성 SAH의 인간의 상황을 모방 할 수 있습니다. </li><li> 호 기말 이산화탄소를 할 수있는 마스크를 통해 - (2 L / 분 1) (ETCO 2) 모니터링 산소를 제공합니다. </li><li> 토끼의 복부 측면에있는 삼각형 배열에서 3 채널 심전도 (ECG) .Place 세 피하 전극을 설치합니다 특히, 두 팔다리에 분포 하복부에 두 개의 전극 (쇄골 하 동맥 삽관에 대한 멸균 면도 필드 거리) 오른쪽 midthoracic 영역에 하나의 전극을 배치합니다. </li><li> 호흡, ECG 신호에서 모니터링 심박수 (HR), 유해 자극에 반응에 따라 마취의 깊이에게 수술 중 매 15 분을 모니터링합니다. </li><li> 유해 자극 (발가락 핀치)에 긍정적 인 응답의 경우에, 케타민 러스 (6 밀리그램 / kg) IV 및 자일 라진 러스 (0.05 밀리그램 / kg) IV 및 / 또는 펜타닐과 추가적인 진통제의 볼 루스 (1 MC함으로써 마취 깊이를 적응g / kg) IV </li><li> 아래로 머리를 20 °를 기울 쇄골 하 동맥이 노출 될에 약간 옆으로 반대측으로 돌려, 몸 온난화 접시에 앙와위에서 토끼를 수정합니다. </li><li> 눈 연고를 적용하고 쇄골의 중간 셋째 주위에 오른쪽 가슴 근육 위에 머리를 면도로 수술 영역을 준비하고, frontal- parietal- 및 후두부 두개골, 목을 통해, 오른쪽 대퇴 동맥을 통해. </li><li> 살균 넓은 스펙트럼, 예를 들면., 포비돈 요오드로 3 분 동안 피부를 소독. </li><li> 멸균 시트와 토끼를 커버. 용기의 조작 및 지역 감염에 의한 동맥 혈관 경련을 방지하기 위해 국소 멸균 조건에서 모든 추가 절차를 수행하고 자주 염산 및 항생제 용액 (네오 마이신 황산염 5 ㎎ / ㎖) papaverin 4 %를 적용합니다. </li><li> 국소 마취제 (리도카인 1 % 최대 6 ㎎ / ㎏)과 가슴 근육을 침투. 흉골 피부 절개를하고 준비가슴 근육. 현미경을 사용하여, 쇄골 하 동맥을 해부 노출 끝 주위 근위 및 원위 합자 (4-0 polyfilament 봉합) 고정합니다. 카테터를 확보하고 말단 혈관을 결찰하는 장소에 인접 제어에 가까운 일 합자를 유지합니다. </li><li> 곡선 microscissor와 동맥을 절개하여 쇄골 하 동맥의 벽에 arteriotomy을 수행하고 작은 intravasal 3 방향 스톱 콕이 역행 쇄골 하 동맥을 cannulate. 동맥 비틀림 또는 동맥의 근위 부분의 굴곡을 방지하기위한 미끄러짐 또는 출혈을 방지하기 위해 원위 봉합사를 향해 이중 매듭 합자 의해 카테터를 고정. </li></ol> 2 혈압 및 동맥 혈액 가스 모니터링 <ol><li> 내가 3 방향 스톱 콕) intravasal 동맥혈 가스 캐 뉼러 (ABG) 분석, 산도, 파코 2, PAO 2, 수소 나트륨, 기본 초과하고, SO 2를 연결하고, ⅱ) 침략 동맥혈압력 측정 장치, 및 ⅲ) 션트 장치. </li><li> ABG 상태에 대한 혈액 샘플 (파코 2, PAO 2)를 수집하고 지속적으로 아날로그 - 표준 심혈관 및 호흡기 매개 변수 (혈압, HR, ECG, 호흡 및 기말 CO 2) 아날로그 출력 인터페이스를 통해 및 전송 데이터를 모니터링 디지털 컨버터 / 데이터 로거 및 저장. NOTE : 압력은 전후 각 세션 후에 심장 수준 제로화되고 시리즈가 시작되기 전에, 아날로그 / 디지털 변환기와 데이터 로깅 시스템의 압력 조정이 한번 수행 될 것이다. </li></ol> 3 기준 디지털 감산 혈관 조영술 <ol><li> 혈관 조영술을 교정하기 위해 모두 하악 각도를 통해 외부 크기 조정 장치 (작은 영역)을 놓습니다. 참고 :이 기준의 사후 측정의 정확한 비교를 할 수 있으며 혈관 직경을 따릅니다. </li><li> 역행 내에서 디지털 감산 혈관 조영술 (DSA)을 수행비 이온 Iopamidol rterial의 일시 주사를 통한 동맥 삽관 (0.6 ㎖ / kg, 2 초 동안 5 ㎖ / 초)와 후자의 폐색을 방지하기 위해 식염수 일시 주사 직후 뉼러를 플러시. </li><li> 5 ° 왼쪽 전방 경사 위치에서 빠른 연속 혈관 조영 촬영에 vertebrobasilar 시스템의 이미지 (14 초에서 7 이미지)를 얻습니다. </li><li> 국소 마취제 (리도카인 1 %, 최대 6 ㎎ / ㎏)와 오른쪽 대퇴 동맥 주위를 침투. 작은 사타구니의 피부 절개를합니다. 시각화 현미경을 사용하여, 대퇴 동맥을 해부 노출 끝 주위 근위 및 원위 합자 (4-0 polyfilament 봉합) 고정합니다. </li><li> arteriotomy 후, 5-F 칼집으로 대퇴 동맥을 cannulate. 식염수 시스의 측면 포트를 세척. </li><li> 투시 하에서 시스를 통해 완두 동맥에 5-F 카테터를 전진. 로드맵을 만든 다음 토륨 가이드 와이어를 전진전자 vertebrobasilar 시스템. 단계 3.2에 설명 된대로 DSA에 대한 (0.6 ㎖ / kg, 2 초에서 5 ㎖ / 초) 비 이온 Iopamidol의 루스를 주입한다. </li></ol> 수 그린 위치로 4 회전 <ol><li> 기준 DSA 다음, 앙와위에서 발생하기 쉬운 위치로 토끼의 위치를​​ 변경. 조작 또는 동맥 카테터의 위치를​​ 재배치하지 않도록주의하십시오. </li><li> 머리를 아래를 지향, 30 ° 각도로 머리 홀더 머리를 놓습니다. </li></ol> 5 Cisterna 마그나 관통 <ol><li> 1 분마다 포비돈 요오드의 3 배와 머리와 목을 통해 피부를 소독, 멸균 시트와 수술 영역을 커버. </li><li> 사전 피부 절개 나 근육의 변위없이 transcutaneously cisterna 마그나에 22 G X 40mm 소아 척추 액세스 바늘을 삽입합니다. </li><li> 동물이 완전히 뼈 외부 후두 융기를 따라 아래로 바늘을 밀기 전에 발가락 - 핀치 응답의 부족을 보장함으로써 마취되어 있는지 확인갭이 검출 될 때까지; 더 바늘을 밀어하지 않습니다. </li><li> 몇 분 동안 20 ° 각도로 아래로 기울어 진 토끼의 머리와 뇌척수액의 자연 떨어지는 관찰하여 바늘의 정확한 위치를 확인합니다. </li></ol> 두개 내 압력 및 대뇌 혈액 흐름 모니터링의 6 설치 <ol><li> 중간 선 피부와 머리 덮개 절개 한 후, 작은 수술 견인기를 삽입합니다. </li><li> neuromonitoring 장치 경우의 배치 후각 망울 및 양자 정면 위에 세 라운드 절골술 (2 mm 직경) 외 두개골 도시 따른 두개골의 정면 부분에서 고속 microdrill를 사용하여 (도 1) (9), 즉, 확인 필요. 다음과 같이 버 구멍 배치를위한 좌표를 결정하기 위해 밀리미터 스케일자를 사용 : midpupillary 라인에 두개 내압 (ICP) 모니터링, midsagittal 줄에서 1~2밀리미터; 실질 내출혈 레이저 도플러 프로브4~5mm 전방 및 브레 그마에 횡 방향 (그림 1). </li><li> 경질을 시각화하고, 세심한 지혈을 수행의 압전 조치 덕분에 뼈 지혈을 위해 뼈 왁스를 사용하여 경질의 바이폴라 응고를 사용하여 로컬 지혈을 수행합니다. </li><li> 2mm의 깊이에 대한 권리 후각 망울로 실질 내출혈 두개 내압 (ICP) 모니터 팁을 배치하고 교정. </li><li> 외부 클램프 시스템을 사용하여 2 개의 레이저 도플러 flowmetry 미세 바늘 프로브를 배치하고, 좌우 정면 반구 모두 뇌척수액에 방해가되지 않도록 중앙선에서 심실 시스템, 즉 측 방향에서 대응하는 버어 구멍에 삽입. 2.5 mm의 깊이로 바늘 프로브를 놓습니다. </li><li> neuromonitoring 프로브를 배치 한 후에, 두개골 유체 기밀을 유지하기 위해 뼈 왁스의 두께 플러그 버어 모든 구멍을 밀봉. </li><li> 평균 동맥 혈압의 파라미터를 측정 기준선 (MAP), ICP 및 다중 매개 모니터와 네 채널 레이저 도플러 조직 혈류 모니터를 사용하여 뇌 혈류 (CBF). </li></ol> 7 션트 유도 <ol><li> 혈액 충전 압력 모니터링 튜브를 통해 이전에 catheterized 쇄골 하 동맥 cisterna 마그나에서 척추 액세스 바늘을 연결합니다. 혈압 측정을위한 혈액 샘플링 포트와 3 방향 스톱 콕을 사용한다. NOTE : SAH의 심각성은 혈액의 양에 의존하고, 대략 5,11 뇌 수확시 지주막 응고 extensiveness 의해 추정 될 수있다. </li><li> 지속적으로 SAH 후 최소 20 분까지 전 6 분에서 1 Hz의 샘플링 속도에서 MAP, HR, ECG, 호흡과 호 기말 이산화탄소를 모니터링 할 수 있습니다. </li><li> 동물이 완전히 쇄골 하 동맥과 cisterna 마그나 압력 gradie에 의해 SAH을 유도 사이의 병렬 연결을 열기 전에 발가락 핀치 응답의 부족을 보장함으로써 마취되어 있는지 확인NT. NOTE : (. 예 ICP의 원하는 수준으로) 제어 된 SAH는 어느 시점에서 션트를 폐쇄함으로써 성취 될 수있다. </li><li> 약 15 분의 기간 동안 정상 값을 기록한다. </li><li> ICP가 절정에 도달 한 후 ICP가 기준 값에 가까운 정상 상태로 돌아올 때까지 그 자리에 척추 액세스 바늘을 유지합니다. ICP 고원은 10 개 이상의 초 동안 유지 또는 ICP가 자발적으로 감소하면, 션트를 닫됩니다. </li><li> (연속 출혈 카테터 조작 높은 이환율과 사망률 및 감염 속도를 증가되기 때문에, 쇄골 카테터를 포함하여) 모든 카테터를 제거, 뼈 왁스와 버 구멍을 연결, CBF 미세 바늘 프로브 및 ICP 프로브를 제거와 엄격한 상처 관개를 수행 네오 마이신 황산염과 피부를 봉합. </li></ol> (8) 수술 후 관리 <ol><li> 절차는 약 2 시간 동안 지속된다. 자일 라진 및 케타민 인해, 애니의 회복 시간의 반감기에약 1 시간 - 리터는 매우 짧다. 동물은 복구 중에 가열 램프 아래에 보관됩니다. 추가 유체는 제공되지 않습니다. 초기 수술 후 회복 단계에서, 부 프레 노르 핀 0.02 밀리그램 / kg SC 24 시간마다 8 시간이 적용됩니다. </li><li> 다음 72 시간 동안 진통 효과에 대한 동물의 면도 목 지역에서 12.5 μg / 시간을 방출 경피 펜타닐 매트릭스 패치를 적용합니다. </li><li> 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오. </li><li> 완전히 회복 될 때까지 다른 동물의 회사에서 수술을했다 동물을 반환하지 않습니다. </li></ol> 3 일에 DCVS을 평가하기 위해 디지털 감산 혈관 조영술을 따라 9. <ol><li> 상술 한 바와 같이 3.6 단계 1.1를 수행합니다. </li><li> 나트륨 thiopenthal의 동맥 내 일시 주사 (40 ㎎ / ㎏)에 의해 동물을 안락사 (펜 토탈, Ospedalia AG, Hünenberg, 스위스). 경우 조직 학적 및 immunohist에서ochemistry 필요하다 100cm의 H 2 O의 관류 압력 RT에서 심장 내 관류 고정을 수행 </li></ol>

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없음. 저자는 사용된 약물, 재료 또는 장비에 대해 금전적 또는 상업적 이해관계가 없습니다. 이 작업에 대한 구체적인 자금은 받지 못했습니다. 저자는 제시된 연구의 설계 및 수행에 대해 전적으로 책임을 지며 이 연구에 사용된 재료 및 방법 또는 논문에 명시된 결과와 관련하여 이해 상충을 보고하지 않습니다. 그들은 윤리 기준의 준수를 확인합니다. 이 연구는 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 국립 보건원 지침과 스위스 베른 주 동물 관리 위원회(승인 #109/07 및 #107/09)의 승인을 받아 수행되었습니다.

션트 모델 급성 SAH 3,8,10 후에 인간에서 관찰되는 것과 유사한 병리 현상을 생성한다. 그것은 EBI는 악화 유지하고 심지어 DCVS 12 트리거 등이 모델 SAH를 다음 EBI와 DCVS 상호 작용을 포함하여 초기와 후기 DCVS 단계를 모두 조사에 도움이 될 수로 수 있음을 제안하고있다. 특히, 반복 생체 DCVS DSA (13)을 포함하여 모니터링 기술, 15 개 readibly 작은 실험 동물에 비해 토끼에 적용되는 컴퓨터 단층 촬영 혈관 조영술 (14) 및 경 두개 도플러. 시험관 독립적 자발적 SAH를 사용하는 것 이외에도, 모델은, 사용자가 다양한 심각성 정도 (또는 ICP 혈액의 양, 및 대뇌 재관류 압력 필연적 변화)에 대해 제어 할 수있다. 가장 중요한 것은, 급성 SAH 후 이벤트의 매우 일관된 재현하고, pathophysiologica...

동맥류 성 지주막 하 출혈 (SAH)은 자주 영구적 인 신경 손상 또는 사망 한 선도, 신경 병리학 적 조건을 위협하는 가장 삶의 하나입니다. 과거의 연구는 SAH 2와 관련된 신경 학적 결손의 주요 원인으로 지연 뇌 혈관 연축 (DCVS)에 초점을 맞추고있다. 그러나, 혈관 경련의 치료 후 SAH 고통받는 환자의 일반적 나쁨 임상 결과는 SAH 3 초 후 뇌 손상 (EBI)의 효과를 포함하는 연구 초점이 팽창되었다. SAH 후 나쁨 임상 결과에 기여하고 EBI DCVS 모두의 중요성은 더 큰 이해 효과적인 치료 전략의 개발이 필수적이다. 지금까지, cisterna 마그나에 단일 및 이중자가 혈액 주입 DCVS 2-6의 연구를위한 SAH 유도를위한 표준 방법이었다. 일반적으로 이전의 연구에서 사용했지만,이 모델은 대부분 SAH와 관련된 신경 병리학 주요 변경 사항을 재생하지 못하는 EBI 7을 유도. 대조적으로, 혈관 천공 부분적 EBI (7)의 증상을 모방 중증 급성 병리 생리 학적 변화를 생성하는 것으로 알려져있다. 이 보고서는 SAH의 신규 한 토끼 모델이 기재된 방법으로, 표준 cisterna 마그나 모델 동맥 시스템을 연결하여 구성된다. 이에 SAH 유도 병리학 8-10의 더 정확한 특성화를 허용 EBI 및 DCVS 양쪽의 조사를 가능하게하기위한 설명 체외 션트를 통해 쇄골 하 동맥과 cisterna 마그나의. 혈류시켜 토끼의 생리학에 링크와 동맥혈 및 두개 내압 사이의 압력 구배에 의해 구동된다. 뇌내 압력 (ICP)는 이완기 혈압이 같고 션트 시스템에서 혈액이 응고 할 때 출혈이 멈 춥니 다. 호스트 &amp; #을 활용8217;의 생리 안정적으로 EBI와 DCVS 표현형 3,8-10 모두를 생산 SAH의 일관성 모델에지도 심사관에 의존 SAH 유도를 줄일 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>장비</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>작동 현미경</td><td>Zeiss, Jena, Germany</td><td></td><td>Zeiss, OPMI-MD 수술</td></tr><tr><td>현미경 수술 장비</td><td>B. Braun, Germany</td><td></td><td>Forceps medical no. 5; 용기 가위 8cm; 마이크로클립 4mm</td></tr><tr><td>호흡기</td><td>Hugo Sachs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>헤어 클리퍼</td><td>3M 수술용 클리퍼&nbsp;</td><td></td><td>스타터 키트 9667A</td></tr><tr><td>바디 웜 플레이트</td><td>FHC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>혈액 가스 분석기</td><td>복사계, 코펜하겐, 덴마크</td><td>ABL 725</td><td></td></tr><tr><td>심장 모니터링</td><td>Camino 다중 매개변수 모니터, Integra, Plainsboro, NJ, US</td><td>AP-05</td><td></td></tr><tr><td>소프트웨어 분석</td><td>BIOPAC Systems, Inc., Goleta, CA, USA</td><td></td><td>Biopac MP100 및 acqKnowledge 소프트웨어, 버전 3.8.1</td></tr><tr><td>소프트웨어 분석</td><td>ImagePro Discovery, MediaCybernetics, Silver Spring, MD, USA</td><td></td><td>Image-Pro Plus 버전&nbsp;</td></tr><tr><td>혈관 조영술 장치</td><td>DFP 2000 A-Toshiba</td><td>MIIXR0001EAA</td><td></td></tr><tr><td>ICP 모니터</td><td>Camino Laboratories, San Diego, CA, USA</td><td></td><td>ICP 모니터, 모델 110-4B</td></tr><tr><td>혈류 모니터</td><td>Oxford Optronix Ltd., Oxford, UK</td><td></td><td>CAL KIT 마이크로스피어 솔루션</td></tr><tr><td>레이저 도플러 유량 측정 미세 바늘 프로브</td><td>Oxford Optronix Ltd., Oxford, UK</td><td></td><td>MNP110XP, 직경 0.48 mm</td></tr><tr><td>압력 튜브</td><td>B. Braun, Germay</td><td></td><td>PE 1.0 mm &times; 2.0 mm</td></tr><tr><td>마취 모니터</td><td>GE Medical Systems, 스위스&nbsp;</td><td></td><td>Datex S5 모니터</td></tr><tr><td>재료</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>20 G 혈관 카테터</td><td>Smiths Medical</td><td></td><td>Jelco i.v. 카테터, REF 4057</td></tr><tr><td>5.5 F 3루멘 중앙 정맥 카테터&nbsp;</td><td>커넥터, Tagelswangen, 스위스</td><td></td><td>실리콘 카테터 STH-C040</td></tr><tr><td>22 G x 40 mm 바늘&nbsp;</td><td>Emergo Group Inc., 네덜란드</td><td></td><td></td></tr><tr><td>고속 마이크로드릴</td><td>Stryker, Solothurn, 스위스</td><td>5400-15&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>뼈 왁스</td><td>Ethicon, Johnson & Johnson, NJ, USA</td><td>ETHW31G</td><td></td></tr><tr><td>양극성 집게</td><td>Aesculap, Inc., PA, US</td><td>US349SP&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>케타민</td><td></td><td></td><td>모든 제네릭 제품</td></tr><tr><td>자일라진</td><td></td><td></td><td>모든 제네릭 제품</td></tr><tr><td>부프레노르핀</td><td></td><td></td><td>모든 제네릭 제품</td></tr><tr><td>펜타닐</td><td></td><td></td><td>모든 제네릭 제품</td></tr><tr><td>경피 펜타닐 매트릭스 패치&nbsp;</td><td></td><td></td><td>모든 일반 제품</td></tr><tr><td>리도카인 1%&nbsp;</td><td></td><td></td><td>모든 일반 제품</td></tr><tr><td>4% 파파베린 HCl&nbsp;</td><td></td><td></td><td>모든 일반 제품</td></tr><tr><td>Neomycin sulfate&nbsp;</td><td>Research Organics Inc., OH, USA</td><td></td><td>모든 제네릭 제품</td></tr><tr><td>Povidone-iodine&nbsp;</td><td></td><td></td><td>모든 일반 제품</td></tr><tr><td>0.9% 염화나트륨</td><td></td><td></td><td>모든 일반 제품</td></tr><tr><td>Iopamidol&nbsp;</td><td>Abott Laboratories, IL, USA</td><td></td><td>모든 제네릭 제품</td></tr><tr><td>3-0 흡수성 봉합</td>사 <td>Ethicon Inc., 미국</td><td>VCP824G</td><td></td></tr><tr><td>5-0 비흡수성 봉합</td>사 <td>Ethicon Inc., 미국</td><td>8618G</td><td></td></tr><tr><td>4-0 폴리필라멘트 봉합사</td><td>Ethicon Inc., 미국</td><td>VCP284G</td><td></td></tr></tbody></table>

지주막 하 출혈의 급성과 늦은 후유증의 연구에 대한 토끼 피 션트 모델 : 기술적 측면

The Rabbit Blood-shunt Model for the Study of Acute and Late Sequelae of Subarachnoid Hemorrhage: Technical Aspects

초기 뇌 손상 및 지연 뇌 혈관 경련은 모두 지주막 하 출혈 (SAH) 후 불리한 결과에 기여한다. 두 조건을 시뮬레이션 재현 및 제어 동물 모델은 현재 드물다. 따라서, 새로운 모델은 SAH로 인한 인간의 병태 생리 학적 조건을 모방하기 위해 필요하다. 이 보고서는 뇌내 압력 (ICP)의 제어를 가능하게 토끼 피 션트 SAH 모델의 기술적 인 뉘앙스를 설명합니다. 체외 션트는 동맥 폐쇄 시스템 및 두개골에 시험관 독립적 SAH있게 막밑 공간 사이에 배치된다. 단계별 절차 명령들 및 필요한 장비를 기술뿐만 아니라, 기술적 고려 최소 사망률과 질병률과 모델을 생성한다. 이 강력한 간단하고 일관성있는 ICP-제어 SAH 토끼 모델의 성공적인 수술 작성에 필요한 중요한 세부 사항은 설명한다.

SAH의 토끼 피 션트 모델은이 보고서에서 설명하는 것은, 기저 피질 (그림 2A, B) 및 대뇌 혈관 (그림 2C)와 같은 초 24로 시간 부상 후 (B 그림 2A) 해마에서 EBI를 생산하고 특성을 나타낸다 혈액 분포 (그림 2D) 8. 또한,이 모델은 SAH 유도 (그림 3) 10 일 이후 세에 DCVS의 심한 정도가 적당한 트리거합니다. 급성 SAH시 호흡 정지 또는 심한 서맥 30 % 때문에 - 사망률은 20입니다. 거의 모든 토끼 일 1 ~ 신경 학적 결손의 점진적인 악화 보여 -. 3 10을 그 시점에서 동물은 마취하에 완전하다. 기술적 관점에서, 피 션트 모델 모두 시험관과 독립적으로 제어 가능한 SAH 유도 (도 4)을 허용한다. <p class="j...

토끼를 대상으로 한 실험적 두개내 압력 조절 혈액 션트 지주막하 출혈(SAH) 모델은 쇄골하 동맥 삽관 및 경피적 수조 마그나 천자라는 표준 절차를 결합하여 SAH 후 인간의 병태생리학적 상태를 밀접하게 모방할 수 있습니다. 단계별 지침을 제시하고 성공적인 실험적 SAH 생성을 위한 주요 수술 포인트에 대해 논의합니다.

Early brain injury and delayed cerebral vasospasm both contribute to unfavorable outcomes after subarachnoid hemorrhage (SAH). Reproducible and ...

이 절차의 전반적인 목표는 토끼에서 검사관의 독립적인 두개내압 또는 ICP 제어 혈액 션트, 급성 지주막하 출혈 또는 SAH 모델을 확립하는 것입니다. 이것은 먼저 쇄골하 동맥을 캐뉼러링함으로써 이루어집니다. 두 번째 단계에서는 디지털 감산 혈관 조영술을 수행한 다음 신경 모니터링 프로브와 척추 접근 바늘을 마지막 단계에서 배치합니다.척추 접근 바늘과 쇄골하 동맥은 션트에 연결되어 검사자, 독립적인 ICP 제어 급성 SAH를 유도하고, 궁극적으로 ICP 대뇌 혈류 또는 급성 SAH에 대한 동물의 CBF 및 심폐 반응을 모니터링할 수 있습니다. 이 방법은 조기 뇌 손상 및 지연된 뇌혈관 표본이 분만 결과 및 사망률에 어떻게 기여하는지와 같은 신경 혈관 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 동맥류성 수혈 후: 진정제를 투여한 토끼를 앞다리와 뒷다리를 모두 수술면에 고정한 상태에서 앙와위 자세로 눕히는 것으로 시작합니다.이와 같이 3채널 심전도를 설치하십시오. 토끼의 복부 쪽에 삼각형 형태로 3개의 피하 전극을 놓습니다. 다음으로, 쇄골의 중간 3 분의 1 주위의 오른쪽 그림 근육에 포비돈 요오드 또는 이와 유사한 것으로 피부를 소독하고 동물을 멸균 시트로 덮습니다.국소 마취제를 가슴 근육에 침투시킨 후 외측 파라무스 피부 절개를 해 가슴 근육을 노출시킵니다. 쇄골하 동맥이 시각화될 수 있을 때까지 둔기 절개를 통해 근육 섬유를 상하로 분할합니다. 그런 다음 현미경으로 두 개의 직선 마이크로 겸자를 사용하여 쇄골하 동맥을 절개한 다음 원위부로 접합하고 4개의 O 폴리필라멘트 봉합사와 구부러진 마이크로 겸자를 사용하여 노출된 근위 끝 주위에 합자를 배치합니다.다음으로, 구부러진 마이크로 시저를 사용하여 쇄골하 동맥의 벽을 절개하고 동맥 역행을 캐뉼레이션합니다. 그런 다음 근위 결찰 쪽으로 이중 매듭 결찰로 카테터를 고정하고, 추가로 동맥 근위부의 동맥 꼬임 또는 구부러짐을 방지하고 미끄러짐이나 다량의 출혈을 방지하기 위해 원위 결찰 쪽으로 이중 매듭 결자로 카테터를 고정합니다. 그런 다음 동맥혈 가스 분석 상태에 대한 혈액 샘플을 수집하고 표준 심혈관 및 호흡기 매개변수를 지속적으로 모니터링합니다.하악골 각도에 외부 크기 측정 장치를 배치하여 혈관 조영술을 보정하고 기준선 및 후속 혈관 직경의 사후 측정을 정확하게 비교할 수 있습니다. 그런 다음 캐뉼러 동맥을 통해 비이온 IOP IOL의 역행성 동맥 내 볼루스 주입을 수행하고 즉시 캐뉼라를 식염수로 세척하여 사다리의 폐색을 방지합니다. 기준선 디지털 감산 혈관 조영술 후 토끼를 엎드린 자세로 재배치하고 동맥 내 카테터를 조작하거나 재배치하지 않도록 주의하십시오.동맥 혈압 모니터링을 연결하고 심전도, 동맥 혈압, 말초 산소 포화도, 호기 이산화탄소 및 심부 온도를 포함한 표준 심혈관 및 호흡 매개변수를 지속적으로 모니터링하기 시작합니다. 아날로그 출력 인터페이스를 통해 데이터를 아날로그 디지털 컨버터 데이터 로거로 전송하고 저장합니다. 머리를 30도 각도로 홀더에 넣고 포비돈 요오드로 머리와 목의 피부를 각각 1분씩 3회 소독합니다.새로운 수술 부위를 멸균 시트로 덮은 후 정중선 피부를 절개합니다. 작은 수술용 견인기를 삽입하여 두개골 바깥쪽 랜드마크에 따라 3개의 둥근 절골술을 만들고 신경 모니터링 프로브를 보정합니다. 두개간 압력과 실질 레이저 도플러 혈류 신경 모니터링 팁을 배치하고 뼈 왁스로 버 구멍을 밀봉하여 두개골 유체를 단단히 유지하고 I-C-P-C-P-P 및 MAP의 안정적인 상태를 유지하기 위해 닫힌 두개골 상태를 허용합니다.다음으로, 22 게이지 40mm 소아 척추 접근 바늘을 수조 마그나에 경피적으로 삽입합니다. 그런 다음 틈이 발견될 때까지 뼈 외부 후두 돌기를 따라 바늘을 아래로 밉니다. 몇 분 동안 토끼의 머리를 20-30도 각도로 기울인 상태에서 뇌척수액이 자발적으로 떨어지는 것을 관찰하여 바늘의 올바른 위치를 확인합니다.이제 혈액으로 채워진 압력 모니터링 튜브를 사용하여 수조 마그나의 척추 접근 바늘을 이전에 카테터화된 쇄골하 동맥에 부착된 3방향 정지 콕에 연결합니다. 그런 다음 쇄골하 동맥과 CI 흉골 마그나 사이의 션트 연결을 열어 지주막하 출혈을 유도합니다. 션트를 연 후 두개내 압력이 이완기 혈압에 가까운 값으로 증가하기 시작합니다.이때 두개간 고원이 10초 이상 유지되거나 압력이 자발적으로 감소하는 경우 두개간 압력이 최고점에 도달한 후 션트를 닫고 압력이 기준선에 가까운 정상 상태로 돌아올 때까지 척추 접근 바늘을 제자리에 유지합니다. 마지막으로 뇌 혈류 미세 바늘과 두개내 압력 프로브를 제거합니다. 뼈 왁스로 버 구멍을 막은 다음 네오마이신 설페이트를 사용하여 엄격한 상처 세척을 수행하고 피부를 봉합합니다.먼저 버 구멍 위에 피부를 봉합합니다. 그런 다음 토끼를 누운 자세로 재배치하고 쇄골하 동맥 카테터를 제거한 후 가슴 근육과 피부를 봉합합니다. 이 보고서에 기술된 SAH의 광견병에 걸린 혈액 션트 모델은 손상 후 24시간 이내에 해마, 기저피질, 대뇌혈관구조에서 조기 뇌 손상을 일으켜 특징적인 혈액 분포를 유도합니다.또한, 이 모델은 3일째에 중등도에서 중증의 지연성 뇌혈관 경련을 유발합니다. SAH 유도 후, 동물이 완전 마취 상태에서 급성 SAH 시 호흡 정지 또는 중증 서맥으로 인해 절차의 사망률은 약 20%입니다. 기술적 관점에서 볼 때, 이 혈액 션트 모델은 검사자의 독립적이고 제어 가능한 SAH 유도를 모두 허용합니다.이 절차를 시도하는 동안 이 쇄골하 동맥을 단단히 고정하고, 멋진 차를 타고 동물의 위치를 변경하고, Cy Sternum 침술 동안 매우 부드럽고 인내심을 가져야 한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

분기점 인간의 대뇌 동맥류을 흉내낸 동맥 분기 동맥류의 microsurgical 생성을위한 최적화된 기술이 설명되어 있습니다. 정맥 주머니는 모두 공통 경동맥 동맥의 인위적으로 만들어진 사실이 분기로 봉합니다. 촉진 microsurgical 기법과 적극적인 수술 anticoagulation와 진통제는 최소화 병적 속도와 높은 동맥 명백 속도로 이어집니다.

토끼 모델에서 Microsurgical 정맥 주머니 아티 - 분기점의 동맥류 : 기술적인 관점

Aneurysmal subarachnoid 출혈 (SAH)은 때 동맥 파열 subarachnoid 공간에 발생합니다 출혈이 있습니다. subarachnoid의 출혈이 몇 년 전 예전처럼 될 수 계속 한 후이 행사의 병적 상태와 사망률이 개선 치료 방법으로 인해 감소, vasospasm의 위험에 왔지만. 뇌성 vasospasm의 시작 이벤트를 식별하기 위해 포괄적이고 재현 동물 모델을 확립의 중요성은 배리의 1979 년 실험 vasospasm 모델 쥐의 첫 번째 사용하기 때문에 연구의...

실험 Subarachnoid의 출혈 후 뇌 지연 Vasospasm을 평가하기 위해 낮은 사망 쥐 모델

이 비디오는 지주막하 출혈 쥐 모델을 설정하는 절차를 보여줍니다. 마취된 쥐에게는 두개내압과 뇌혈류를 측정하기 위해 프로브를 이식합니다. 표적 부위가 확인되고 바늘이 chiasmatic 전 위치에 삽입됩니다. 그런 다음 자가 혈액을 지주막하 공간으로 주입하여 두개내 압력을 높이고 뇌 혈류를 감소시켜 모델을 확립합니다.

자가 혈액 주입에 의해 유도된 지주막하 출혈 쥐 모델 구축

윌리스 천공의 관내 서클 지주막 하 출혈의 표준화 된 마우스 모델을 설명한다. 선박 천공 및 지주막 하 출혈은 두개 내 압력 모니터링에 의해 모니터링된다. 또 각종 중요한 파라미터는 기록 및 생리적 조건을 유지하도록 제어된다.

지주막 하 출혈의 생쥐 모델

두개내 동맥류 치료를 위한 혈관 내 장치를 개발하고 테스트하는 것은 여전히 매우 중요합니다. 오늘날 사용되는 대부분의 동맥류 모델은 동맥 퇴화 벽의 중요한 특성이나 진정한 분기의 혈역학을 놓치고 있습니다. 따라서 우리는 토끼에서 새로운 동맥 파우치 분기 모델을 설계하는 것을 목표로했습니다.

토끼의 동맥 파우치 미세 외과 분기 동맥류 모델

우리는 이 프로토콜에서 시스테나 마그나에 자가 전혈을 이중 으로 주입하여 표준화된 지주막 출혈(SAH) 마우스 모델을 기술하였다. 이중 주사 절차의 높은 수준의 표준화는 사망률에 관한 상대적 안전과 SAH의 중간-급성 모델을 나타낸다.

수브라크누드 출혈의 모델로 시스테나 마그나에 혈액을 이중 직접 주입

지주막하 출혈은 계속해서 사람의 사망률과 이환율에 대한 높은 부담을 안고 있습니다. 상태와 병태생리학에 대한 추가 연구를 용이하게 하기 위해 pre-chiasmatic, 단일 주입 모델이 제시됩니다.

쥐 모델에서 실험적 지주막하 출혈을 유도하기 위한 자가 혈액의 Pre-chiasmatic, 단일 주사

여기서 우리는 정확한 출혈 부위를 보장하고 다른 관련 두개내 병리를 배제하기 위해 수술 후 24 시간 동안 자기 공명 영상 (MRI)과 결합 된 혈관 내 필라멘트 천공에 의해 유도 된 표준화 된 SAH 마우스 모델을 제시합니다.

자기 공명 영상(MRI)과 결합된 Subarachnoid 출혈에 대한 혈관 내 천공 모델

지속적인 동맥 혈압 기록을 통해 다양한 혈역학 적 매개 변수의 영향을 조사 할 수 있습니다. 이 보고서는 뇌졸중 병태생리학, 다양한 혈역학적 요인의 영향 및 새로운 치료 접근법의 평가를 결정하기 위해 허혈성 뇌졸중의 대규모 동물 모델에서 지속적인 동맥 혈압 모니터링의 적용을 보여줍니다.

허혈성 뇌졸중의 토끼 모델에서 혈압의 실시간 모니터링 및 조절

우리는 PTSD 환자의 특징 neuroendocrine 기능의 영구적 인 변경 및 지연, 장기, 과장된 공포 반응을 보여 후 외상 후 스트레스 장애 (PTSD)의 쥐 모델을 설명합니다. 동물 모델과 여기에 설명 된 방법은 기계론의이지만 주변 흰색 혈액 세포의 생체과 함께, 환자로 측정 할 수없는 뇌 핵에 생체, 수를 상호 연관 유용합니다.

PTSD의, 신경 Hematologic, 그리고 행동 상관 관계를 누설하는 행위에 대해서는 동물 모델에서 생체

학습하세요 토끼를 이용한 지주막 하 출혈(SAH) 피 션트 모델 수립 방법을 통해 뇌혈관 질환의 급성기 뇌손상과 지연성 혈관경련 메커니즘을 탐구하세요. 이 기법은 ICP 조절이 가능한 검사자 독립적 모델로 임상 전 연구에 활용됩니다.

지주막 하 출혈의 급성과 늦은 후유증의 연구에 대한 토끼 피 션트 모델 : 기술적 측면

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