마우스 신장 이식 : 동종 이식 거부의 모델

이 비디오는 신장 이식의 마우스 모델을 보여줍니다. 주요 조직 적합성 등급으로 알려진 여러 근친 균주를 활용함으로써 우리는 신장 동종이식의 거부 반응의 다양한 측면을 재현할 수 있습니다. 제시된 데이터는 이것이 어떻게 유용한 모델인지 보여줍니다 이러한 메커니즘에 대한 연구에서, 이 도식 만화는 이 모델의 주요 단계를 보여줍니다.

기증자 마우스에 대해 좌측 신장 절제술을 시행하고 멸균 면봉에 기증자 신장을 준비합니다. 배양 접시에서 수혜자 마우스는 기증자 신장을 이식하기 전에 오른쪽 신장 절제술을 받습니다. 이 절차는 멸균 오토클레이브 기구와 멸균 수술 영역 내에 배치된 소모품을 사용하여 수행됩니다.

여러 동물을 수술하는 경우 각 절차에 대해 새로운 멸균 기구 세트를 사용하거나 절차 사이에 기구를 멸균합니다. 비드 살균기를 사용하여 작업자는 멸균 가운, 마스크, 모자 및 장갑을 착용합니다. 한 명의 작업자가 신장 적출 시점까지 기증자를 준비시켜 이 절차를 수행할 수 있습니다.

그런 다음 수혜자는 신장을 제거하기 위해 기증자에게 돌아가기 전에 이식 준비를 합니다. 이것은 감기 허혈 시간을 줄입니다. 또는 두 명의 작업자가 기증자와 수혜자를 동시에 준비할 수 있습니다.

이를 통해 하루에 여러 동물을 수술할 수 있습니다. 여기 케타민과 염산염 및 마이네의 복강 내 주사로 마취된 8주 된 수컷 C 57 블랙 식스 마우스가 있습니다. 수술 부위는 묽은 요오드 용액을 사용하여 면도하고 소독했습니다.

마우스는 사지가 패드에 부착된 상태로 멸균되고 드레이프된 가열된 수술 패드에 놓였습니다. 눈 연고가 도포되었습니다. 개복술은 정중선 피부 절개로 수행됩니다.

그런 다음 조직 분리 가위를 사용하여 선형 Albert를 통해 복막강을 엽니다. 그런 다음 마우스를 드레이프하고 칼리브라 견인기를 절개 부위에 삽입합니다. 장은 수술 영역의 왼쪽이나 오른쪽으로 이동하여 왼쪽 신장과 요관을 노출시켜 기증자의 신장을 준비합니다.

이식을 위해 요관을 결찰하고 가능한 한 방광에 가깝게 분리합니다. 하부 생식선 정맥과 상부 부신 정맥은 결찰되어 있으며 신장 정맥 가까이로 나뉩니다. 대동맥은 신장 동맥보다 상하위와 하위가 결찰되어 있으며 위스콘신 대학의 차가운 용액을 대동맥에 주입하여 신장을 관류시킵니다.

요관은 후복막에서 쉽게 절개할 수 있으며 방광의 말단까지 추적할 수 있습니다. 7.0 봉합사로 방광에 최대한 가깝게 결찰한 다음 일반적으로 비우는 왼쪽 생식선을 신장 정맥으로 분리해야 합니다. 9.0 봉합사를 사용하여 이중 결찰하고 신장 정맥에 가까운 봉합사 사이를 나누어야 합니다.

이 클립에서 비슷한 방식으로 볼 수 있듯이, 왼쪽 부신 정맥은 신장 정맥으로 비워지며 결찰되고 분열되어야 합니다. 그런 다음 주변 림프 조직에서 기증자 대동맥을 해부하고 먼저 느슨한 하부 봉합사를 배치할 수 있도록 도래하는 데 주의를 기울여야 합니다. 그런 다음 신장 동맥에 대한 우수한 봉합사.

기증자 마우스가 준비되면 등쪽 형맥에 의해 5단위의 헤파린이 정맥 주사됩니다. 먼저, 하부 대동맥 봉합사를 단단히 묶은 다음 상부 결찰사를 묶습니다. 이것은 신장을 동맥 순환으로부터 격리시킵니다.

약 500마이크로리터의 차가운 대학 위스콘신 용액이 대동맥에 의해 투여됩니다. 성공적인 풍력은 기증자의 신장을 희게 하는 것으로 확인됩니다. 대동맥은 먼저 하등하게 분열된 다음 신장 동맥보다 상위로 분열됩니다.

다음으로, 신장 정맥은 대정맥과 접합부에서 나뉩니다. 그런 다음 기증자의 신장을 제거하고 차갑고 멸균된 거즈에 놓습니다. 배양 접시에서 대동맥은 신장 대동맥 바로 맞은편에 세로로 절개되어 있습니다.

문합을 위한 대동맥 패치를 만들려면 신장 동맥의 내강을 식별하고 여분의 극 동맥이 없는지 확인하십시오. 그런 다음 신장 정맥은 먼저 신장 정맥의 하부 정점에 10 O 폴리아미드 봉합사를 배치한 다음 유사하게 상정맥에 봉합사를 배치하여 준비합니다. 부신 정맥과 생식선 정맥을 분리한 결찰은 정맥의 방향을 잡는 데 유용한 표지자입니다.

이 시점에서, 기증자 신장 적출 후, 앞서 설명한 바와 같이 수용 마우스를 준비하고, 수용 마우스를 드레이프하고, 칼리브라 견인기를 삽입한다. 창자는 수술 부위의 오른쪽이나 왼쪽으로 치우쳐 식염수가 풍부하고 무균 같은 커튼으로 덮여 있습니다. 먼저 우측 신장 절제술을 시행하고, 신장 동맥과 정맥을 7개의 봉합사로 결찰한 다음, 요관을 분리하고 결찰한 후 분열 전에 결찰합니다.

마지막으로 신장 동맥과 정맥을 분리한 후 신장을 제거할 수 있습니다. 이로 인해 복막강 내에 이식 신장 수혜자인 대동맥과 대정맥을 위한 공간이 생겨나고 혈관 문합을 준비해야 합니다. 먼저, 대동맥과 대정맥에서 림프다발이 동원되고 후복막이 열립니다.

요추 혈관 주위에 봉합사를 배치할 수 있도록 요추 혈관을 왼쪽과 오른쪽으로 둔화하여 절개합니다. 그런 다음 혈관은 분할하지 않고 연속적으로 결찰될 수 있습니다. 이것은 혈관 문합을 수행할 때 허리 출혈을 예방합니다.

그런 다음 대동맥과 대정맥 사이와 주변 출현 조직으로부터 창을 만들기 위해 추가 해부를 수행합니다. 상부 및 하부 미세혈관 클램프의 위치를 식별하여 과도한 조직이 없고 문합할 준비가 되었는지 확인합니다. 이 시점에서, 헤파린은 앞서 보여준 바와 같이 정맥 주사로 투여될 수 있으며, 기증자의 신장은 수혜자의 복강에 위치한다.

정맥에 삽입된 봉합사가 얽히지 않도록 마우스 주의를 기울여야 합니다. 이 도식적인 만화는 기증자의 신장과 수혜자의 IVC 대동맥 및 방광이 기증자의 신장 2호를 이식하기 위해 오른쪽 신장 절제술을 받은 후 보여주는 것입니다. 외상성 클램프는 혈관 문합 부위 위와 아래의 IVC와 대동맥에 적용됩니다.

기증자의 신장, 신장 정맥 및 동맥은 각각 수혜자의 IVC와 대동맥으로 문합됩니다. 그 후, 비외상성 클램프를 제거하고 기증자 신장을 재관류합니다. 그런 다음 요관은 먼저 수혜자의 방광으로 문합됩니다.

하부 미세혈관 클램프는 대동맥과 대정맥을 모두 포함하는 적용됩니다. 그런 다음 우수한 클램프가 배치됩니다. Atomy는 30게이지 바늘과 식염수로 씻겨진 대정맥으로 만들어집니다.

ven otomy는 집게로 넓어집니다. 이전에 기증자 신정맥의 상정점에 배치된 봉합사는 그런 다음 정맥 절개술의 상정점에 있는 수혜자의 대정맥을 통과합니다. 그런 다음 봉합사를 묶고 pH 이관의 하점에 도달하면 신장 정맥의 후벽에서 대정맥 동굴까지 이어지는 봉합사 문합을 합니다.

이전에 신장 정맥에 배치된 두 번째 봉합사는 하대정맥을 통과하여 묶습니다. 그런 다음 첫 번째 봉합사와 함께 진행식 혈관 문합을 수행하여 전면 벽을 완성할 수 있습니다. 동반된 프로토콜에서는 혈관 문합법의 각 단계를 도식화하여 표현합니다.

부주의로 앞벽을 뒷벽으로 봉합하는 것을 피하고 비너스 문합사 봉합사에 실제 동맥 또는 대동맥 패치를 포함하는 것을 피하는 것이 매우 중요합니다. 그런 다음 겸자에 있는 대동맥의 작은 타원을 집어 들고 가위로 정확하게 절단하여 기증자 aor autotomy를 만들 수 있습니다. 그런 다음 10 oh 봉합사를 대동맥 패치의 상부에 배치합니다.

동맥 내피 표면을 최소한으로 다루도록 주의하십시오. 이것이 혈전증의 위험을 증가시키기 때문에, 봉합사는 A 자가절개술과 조수의 상정점을 통과합니다. 그런 다음 대동맥 패치는 수혜자의 대동맥에 흐르는 봉합사에서 문합되어 자체에 묶일 수 있습니다.

너무 세게 묶으면 스트링당 효과가 발생하여 유입을 위태롭게 할 수 있으므로 주의하세요. 하부 미세혈관 클램프가 먼저 제거되며, 원위 대동맥에서 신장 동맥으로의 역류로 인해 재관류가 발생하는 경우가 많습니다. 그런 다음 우수한 클램프가 제거됩니다.

그런 다음 요관 문합은 21 게이지 바늘을 방광 안팎으로 통과시켜 수행됩니다. 그런 다음 겸자는 요로를 통해 다시 통과 한 다음 봉합사를 통해 요관을 끌어 당깁니다. 그런 다음 요관의 출현 조직은 요관을 제자리에 고정하기 위해 3개 지점에 9개의 폴리아미드로 방광의 출현 조직에 봉합됩니다.

그런 다음 요관을 절단하고 방광으로 플러시하며 종종 소변이 기증자의 신장에서 생성되는 것을 볼 수 있습니다. 또한 요관 당 혈관에서 출혈이 있습니다. 요관은 방광에 느슨하게 놓일 수 있으며 장을 교체한 후 결손이 닫힙니다.

복막을 봉합하고 금속 클립을 사용하여 피부를 닫습니다. 그런 다음 요오드를 수술 부위에 바르고 마취를 부분적으로 역전시켜 타파졸 염산염을 피하 주사합니다. 진통제는 부프레노르핀 염산염 주사로 투여됩니다.

수액은 1mil 데운 식염수를 피하 주사하여 투여합니다. 쥐는 의식이 회복되고 의식이 깨어 있고 스스로 글을 쓸 수 없을 때까지 주의 깊게 모니터링됩니다. 생쥐는 장기 실험을 위해 24시간 동안 29도로 유지된 가열된 상자를 회수할 수 있습니다.

지속적인 진통제를 투여하고 피부 클립을 제거합니다. 수술 후 7일. 다음은 수술 후 24시간이 지난 생쥐로, 완전히 움직일 수 있으며 피가 묻은 소변이 침구 조직에

이 모델에서 마비를 처리하기 위해 모니터링하는 것이 중요한데, 이는 혈관 합병증이 나타날 수 있음을 나타낼 수 있기 때문입니다. 다음은 이 모델과 다양한 마우스 균주를 사용하여 급성 이식 거부 반응을 모델링하기 위해 신장 이식 거부 반응의 발달을 연구하는 방법을 나타내는 데이터입니다. 돌연변이 마우스 균주 BM 12는 공여체로 사용됩니다.

이 돌연변이 BM 12 마우스는 BM 12 신장을 C 장 수용자에게 이식하는 단일 MHC 클래스 2 차이로 인해 부모 C 57 블랙 식스 균주와 다릅니다. 완전한 클래스 1 및 클래스 2 MHC 불일치로 인해 급성 거부 반응이 발생합니다. A C 57 black six 동종 이식편은 분리된 MHC 불일치로 인한 만성 거부 반응의 발달을 초래합니다: BM 12 ISO 이식편은 완전한 클래스 1 및 클래스 2 MHC 일치를 가지므로 거부 반응의 징후를 나타내지 않습니다.

신장 구조는 헤마틴과 어인으로 염색된 파라핀 내장 신장 절편에 대한 조직병리학에 의해 검사됩니다. 이 모델은 생존을 위해 이식에 의존하지 않기 때문에 천연 신장을 대조군으로 사용할 수 있습니다.ISO 이식 신장 이식 후 신장은 허혈 재관류 손상을 겪지만 BM 12 후 생검 동종이식 이식으로 4주가 지나면 세뇨관이 회복됩니다. 급성 거부 반응은 이중 별표가 있는 단일 별표 괴사 세뇨관과 C 57 검은색 6 마우스에 이식된 세뇨관 BM 12 신장으로 표시되는 확산성 단핵 세포 침투에서 명백합니다.

혈관 주위, 림프 침윤을 특징으로 하는 만성 동종이식 손상을 초래하며, 간질성 섬유증과 속이 빈 화살표로 표시되는 세뇨관 위축으로 표시됩니다. 고출력 필드당 세뇨관의 정량화는 기능적 네프론 질량을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. ISO 이식과 천연 신장 세뇨관 수에는 차이가 없었으며, 이식 후 4주 동안은 차이가 없었다.

급성 거부 반응은 세뇨관의 4주까지 현저한 손실을 초래합니다. 이에 비해 만성 거부 반응은 더 다양하지만 점진적인 감소를 보입니다. 피로 시리어스 레드(Piro, serious red)는 팬 콜라겐 염색제이며 파라핀 내장 신장 절편에 시술하여 간질성 섬유증을 정량화할 수 있습니다.

ISO 이식편 신장 이식은 천연 신장 BM 12 inter C 57에 비해 경미한 섬유증과 관련이 있습니다. 6번 블록은 12주에 섬유증을 유발합니다. 이식 후, 우리는 수술 기술을 입증하는 데 중점을 두고 신장 이식 모델을 설명했습니다.

이 모델은 재현 가능한 기능의 마우스 신장 이식 모델을 달성하기 위해 극복할 수 있는 상당한 학습 곡선과 관련이 있습니다. 설명된 균주 조합은 만성 신장 이식 손상의 주요 특징을 개발하며 간질성 섬유증 및 세뇨관 위축의 결과 병리학을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 또한 급성 거부 반응도 모델링할 수 있어 이 개체의 중요한 병태생리학적 메커니즘을 조사할 수 있습니다.

이 비디오는 시청자가 이 모델을 충실하게 복제하는 데 도움이 되는 주요 수술 포인트를 제공합니다.