근적외선 (NIR) 빛은 마우스 전정 감각 상피 세포에서 미토콘드리아 기능의 마커의 발현을 증가

다음 실험의 전반적인 목표는 근적외선이 쥐의 전정 감각 상피에 미치는 잠재적인 신경 보호 영향을 조사하는 것입니다. 이것은 다양한 발달 단계에서 생쥐에 근적외선을 단순하고 단기간의 경두개 적용에 의해 달성됩니다. 두 번째 단계로, 처리된 동물의 뼈 미로를 절개하여 전정 감각 상피를 격리합니다.

다음으로, 관심 항산화 유전자의 발현을 R-T-P-C-R로 측정하여 미토콘드리아 성능에 대한 치료의 영향을 평가합니다. 마지막으로, 밀도 측정은 마우스의 특정 항산화 유전자 발현에 대한 간단한 근적외선 처리의 효과를 평가하기 위해 수행됩니다. 이 근적외선 처리 기술의 주요 장점은 간단하고 비침습적이어서 치료 후 생리학적, 분자적, 행동 분석을 추가로 수행할 수 있다는 것입니다.

이 기술의 의미는 정상적인 노화 동안 말초 전정계의 잠재적인 신경 보호 또는 전정 질환 또는 결핍 후 균형 잡힌 성능의 개선으로 확장됩니다. 실험을 시작하기 2-3일 전에 각 마우스의 머리와 목 부위의 털을 가능한 한 가깝게 면도하여 치료 요법이 완료되기 전에 동물의 털이 다시 자라는 것을 방지합니다. 동물의 병원균이 없는 상태를 유지하려면 각 면도 사이에 70% 에탄올로 기구를 청소하십시오.

그런 다음 각 동물 인턴에 대한 치료 당일에 꼬리의 근위 끝에서 마우스를 잡고 근적외선 처리 된 동물의 스트레스를 최소화하기 위해 한 손바닥에서 휴식을 취하도록합니다. 각 동물에 대해 면도 부위에서 1-2cm 떨어진 곳에 670나노미터 LED 장치를 들고 90초 동안 장치를 켭니다. 가짜 그룹의 경우 동일한 방식으로 치료 절차를 반복하되 근적외선 차단 그룹의 경우 장치를 끈 상태에서 근적외선 치료 그룹과 동일한 방식으로 동물을 치료하되 장치는 알루미늄 호일로 덮은 상태로 치료합니다.

5일 연속 24시간 간격으로 각 그룹에 대한 치료를 반복한 후, 새로 준비한 글리세롤 기반 인공 뇌척수액 또는 A CSF를 얼음 슬러리가 형성될 때까지 섭씨 영하 80도의 냉동고에서 45분 동안 동결합니다. 다음. 각 마우스에 대해 둥근 숫자 22 면도날을 사용하여 두개골의 시상 피부를 따라 절개하고 두개골 천장 뇌와 기본 전정 기관을 가능한 한 시원하게 유지하고 조직에 얼음처럼 차가운 CSF를 정기적으로 적용합니다. 그런 다음 한 쌍의 표준 패턴 가위의 뾰족한 팔을 사용하여 Lambda의 두개골을 작게 절개하고 시상 봉합사를 따라 자릅니다.

그런 다음 얕은 URS의 한쪽 팔을 두정골 아래로 부드럽게 밀어 넣은 다음 뇌가 노출될 때까지 두정골을 측면으로, 후두골을 후방으로 고정하고 당깁니다. 그런 다음 작은 스테인리스 스틸 주걱을 사용하여 뇌를 전두골과 중두개골에서 들어 올립니다. 전정 달팽이관 신경을 노출시키려면 전정 유모 세포를 직접 신경 분포시키는 1차 구심성 축삭돌기에 불필요한 긴장

그런 다음 토토에서 뇌를 제거하고 달팽이관과 중간 두개골 포의 말초 전정 기관을 포함하는 뼈 미로를 관찰합니다. 이제 각 뼈 미로 옆에 두 개의 작은 절개를 만들고 전방 반고리관을 잡고 옆으로 당겨 전체 구조를 절제합니다. 그런 다음 즉시 절제된 미로를 얼음처럼 차가운 A CSF 용액이 들어 있는 해부 접시에 담그면서 발탄물질을 계속 관류합니다.

이 절차의 가장 까다로운 부분은 각 동물에 대해 생존 가능한 조직을 일정하게 확보하고, 주의 깊게 관찰하고, 조직을 구체적으로 조명하는 연습을 하는 것입니다. 그런 다음, 실체 현미경으로 달팽이관 옆의 미로를 잡고 집게를 사용하여 곧고 가는 집게를 사용하여 조직을 접시 바닥에 고정합니다. 전방 반고리관 울라 위의 뼈에 있는 작은 구멍을 긁습니다.

그런 다음 뼈 바로 아래에 손을 뻗어 ULA에서 바깥쪽으로 튕겨 구멍을 부드럽게 확대합니다. 난소와 전방 및 외측 흉포가 모두 노출될 때까지 이 방식으로 계속합니다. 그런 다음 가는 집게를 사용하여 난소를 부드럽게 들어 올리고 완전히 분리될 때까지 뼈 미로에서 풀레를 제거합니다.

마지막으로, 겸자 끝 사이의 전정 기관을 단단히 잡고 새로 준비된 용해물에 넣습니다. 나사 상단 마이크로 튜브에 버퍼를 넣고 버퍼의 집게를 부드럽게 소용돌이쳐 전정 기관을 분리합니다. 그런 다음 스테레오 현미경에서 겸자에 조직이 없는지 확인한 후 마이크로 세뇨관 뚜껑을 조이고 즉시 샘플을 액체 질소에 동결하여 어린 마우스와 나이 든 마우스 사이의 근적외선 처리의 영향을 비교합니다.

메신저, RNA를 상보적 DNA로 역전사한 후, 항산화 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 1 또는 SOD 1의 발현을 밀도 측정법으로 측정한 바와 같이 분석하고, 어린 가짜를 처리한 동물과 비교하여 근적외선 처리된 동물에서 베타 액틴 정규화 SOD 1의 발현이 2배 이상 증가하는 것을 관찰하였다. 나이가 많은 근적외선 처리 동물은 또한 나이가 많은 근적외선 차단 동물과 비교할 때 잔디 1의 2배 이상의 상향 조절을 보여주었습니다. 이 절차에 따라 행동, 분자 또는 생리학적 실험을 수행하여 근적외선이 전정 감각 상피에서 다른 유전자 또는 단백질 발현을 증가시키는가와 같은 추가 질문에 답할 수 있습니다.

아니면 근적외선이 처리된 마우스의 전반적인 균형 성능을 향상시킵니까?