Name: 근적외선 (NIR) 빛은 마우스 전정 감각 상피 세포에서 미토콘드리아 기능의 마커의 발현을 증가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 56 s
Description: 배우세요 마우스 전정 감각 상피에서 근적외선 광이 미토콘드리아 기능을 개선하고 항산화 유전자 발현을 증가시키는 비침습적 방법을. 이 기술은 노화 관련 신경보호 연구에 활용됩니다.

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저자는 mRNA의 추출 및 PCR과의 도움 폴 박사 알면서하는 씨와 제네 비브 선생을 인정하고자 및 지원에 대한 가넷 패스포트와 로드니 윌리엄스 기념 재단.

윤리 진술 : 아래에 설명 된 모든 절차는 시드니 동물 윤리위원회의 대학에 의해 승인되었다. 1. 동물 주 : 1 8~9개월 된 마우스 (C57 / BL6)는 동물 자원 센터 (퍼스, 호주)에서 얻었다. 마우스는 시드니 대학의 보쉬 설치류 시설에 수용되었다. <ol><li> 물과식이에 액세스 할 수있는 12/12 시간 빛 / 어둠주기에 표준 마우스 케이지 하우스 마우스. </li><li> 근적외선에 각 연령 그룹에서 나누기 마​​우스 (NIR) 처리, 또는 가짜 비교를 위해 (제어) 그룹을 처리 하였다. </li></ol> 2. 근적외선 (NIR) 조사 및 위장 치료 <ol><li> 처리 체제의 완료 전에 모발의 빠른 재성장을 막기 위해 가능한 한 가깝게 전기 면도기와 마우스 두경부에 털을 면도. 마우스의 무균 상태를 유지하기 위해, 70 % 에탄올을 사용하여면도 동물과 별도의 케이지에서 동물 사이의 F10 수의학 살균제 사이에 악기를 청소합니다. 동물 오버 처리되지 않도록 치료의 시작 3 일전 -이 2 마십시오. </li><li> 꼬리의 근위 끝을 잡고 마우스를 제지 및 false 결과로 이어질 수있는 스트레스를 최소화하기 위해이 한 손 또는 벤치 탑의 손바닥에서 휴식을 취할 수 있습니다. </li><li> LED NIR (670 ㎚) (발광 다이오드) 1 장치 잡고 - 2 ㎝ 떨어져 노출 (음모) 지역에서을 90 초 (그림 1A)의 장치에 전환합니다. 참고 : 90 초 노출의 결과로서 온도 변화를 물 100ml에 0.2 ° C &lt;로서 측정 하였다. </li><li> 동물의 가짜 치료 그룹에 대해 2.3하지만 장치가 꺼져 (그림 1B)를 떠나 - 반복 2.2 단계를 반복합니다. </li><li> 동물의 근적외선 차단 치료 그룹의 2.3하지만 알루미늄 호일로 장치를 커버 - 반복 2.2 단계를 반복합니다. </li><li> approximat 매일 2.5 - 반복 2.2 단계5 일 연속 전자 24 시간 간격. </li><li> 다섯째 날 후 처리에 모두 귀에서 전정 감각 상피 (3의 cristae 1 utricular의 황반)을 추출 (아래 3 항 참조). </li></ol> 3. 조직 추출 (20) <ol><li> (26)의 NaHCO3, 11 포도당, 250 글리세롤, 2.5의 KCl, 1.2의 NaH 2 PO 4, 1.2의 MgCl 2, 2.5 염화칼슘 2 : (mm 단위)로 구성된 글리세롤 기반 인공 뇌척수액 (ACSF) 300 ml의를 준비합니다. CaCl2를 첨가하기 전에, 7.4의 pH를 확립 칼슘 침전 (흐림)를 피하기 위해 carbogen (95 % O 2 및 5 % CO 2)와 용액을 기체. 얼음 슬러리가 형성되도록 45 분 동안 -80 ℃ 냉동고에서 용액을 냉각. </li><li> 표시된 나사 상단 모세관의 RNA 분리 용해 버퍼를 준비하는 것은 (뚜껑 터지는를 중지 할 때 동결 및 액체 질소에 해동 사이의 튜브 압력 변화)에 따라제조업체 또는 일반적인 실험실 관행의 지시에. 알루미늄 듀어 플라스크에 액체 질소를 준비합니다. 참고 : 액체 질소를 처리 할 때 보호 복 및 보호 eyeware을 사용합니다. 그 가스 형태의 볼륨이 약의 액체 형태의 700 배이며, 질식의 원인이 될 수 있습니다 액체 질소는 환기가 잘되는 방에서 사용되어 있는지 확인합니다. </li><li> 깊이 복강 내 주사를 통해 케타민 (400 ㎎ / ㎏)와 쥐를 마취시키다. 뒷다리 반사가 완전히 마우스가 완전히 마취되어 있는지 표시로 가라 앉을 수 있습니다. </li><li> 날카로운 스테인레스 스틸 가위로 마우스를 목을 벨과 면도날을 사용하여 두개골의 시상 피부를 따라 절개를 (# 22 반올림). 이 시점에서과를 통해 3.5 단계 - 3.9, 조직을 통해 얼음처럼 차가운 ACSF의 일반 응용 프로그램에서 가능한 한 멋진 두개골 금고, 뇌 및 기본 전정 장치를 유지합니다. </li><li> 에 작은을 표준 패턴 가위의 뾰족한 팔을 사용하여리터 람다의 두개골 절개 및 시상 봉합을 따라 잘라. </li><li> 부드럽게 뇌를 끌어없이 뼈의 하부 표면에 가능한 한 가깝게 블레이드를 유지 정수리 뼈 아래에 얕은 rongeurs의 한 팔을 밀어 넣습니다. 안전하고 뇌가 노출 될 때까지 후방 측면 정수리 뼈와 후두골을 당깁니다. </li><li> 작은 스테인레스 스틸 주걱을 사용하고 vestibulocochlear 신경 (CN VIII)을 노출 멀리 전방 및 중간 두개골 포사에서 뇌를 들어 올립니다. 직접 전정 모발 세포에 분포 일차 구 심성 축색에 불필요한 장력 않도록 신경을 횡단면. </li><li> CN VIII의 절개 후 토토의 뇌를 제거합니다. </li><li> 달팽이관 중간 두개골 포사의 주변 전정 기관을 포함하는 뼈 미로를 관찰합니다. 각각의 뼈 미로 옆에 두 개의 작은 절개를 확인하고 앞쪽에 반원형 운하를 누른 후 잡아 당겨 전체 구조를 절제동맹. </li><li> 즉시 지속적으로 carbogen와 관류 동안 (3.1 단계에 설명 된대로) 얼음처럼 차가운 ACSF 솔루션을 포함하는 해부 접시에 절제된 미로를 체험. </li><li> 실체 현미경에서 달팽이관으로 미로를 누른 상태에서 집게로 접시의 바닥에 고정합니다. <ol><li> 전방 반원의 운하 (SSC) 팽대부 위의 뼈에 작은 구멍을 긁어 직선 미세 집게를 사용합니다. </li><li> 부드럽게 즉시 뼈 아래에 도달 바깥쪽으로 멀리 팽대부에서 쓸어 넘겨이 개방을 확대. 구멍에 집게를 밀어 아래 깨지기 쉬운 막성 미로를 손상하지 않도록 여기에주의하십시오. 난형 낭, 전방 및 측면 ampullae 모든 노출 될 때까지 이런 식으로 계속합니다. 가능하면 또한 후방 팽대부를 제거합니다. </li></ol></li><li> 미세 집게를 사용하여 부드럽게 난형 낭을 들어 올려가 완전히 분리 될 때까지 뼈 미로에서 멀리 ampullae. 가능하면 그들을 붙잡아관련 반원의 운하에 의해 감각 상피의 손상을 방지합니다. 어떤 경우에는, 반원형 멤브레인 덕트의 기단 부분은 뼈 ampullae를 해제 홍채 가위로 절단 할 필요가있다. </li><li> 안전하게 단계 3.2에서 이전에 제조 된 용해 버퍼에 포셉의 팁과 장소 사이의 전정 기관을 파악. 부드럽게 전정 기관이 집게에서 분리 한 보장하기 위해 버퍼에 주위에 집게를 소용돌이 친다. 이 실체 현미경 집게를 가져 와서 경우가 확인합니다. <ol><li> 미세 소관 뚜껑에 나사 즉시 액체 질소에 샘플을 동결. </li></ol></li></ol> 4. RNA 추출 및 RT-PCR <ol><li> 제조업체의 지침 또는 선호하는 실험실 프로토콜에 따라 메신저 RNA (mRNA의) 추출의 표준 방법을 따르십시오. 참고 : mRNA의 작은 수율을 분리 할 수​​ 있도록 캐리어의 RNA를 활용 한 상용 키트이 사용되었다프로토콜입니다. 낮은 용출 볼륨은 mRNA의 최종 농도를 증가시키기 위해 사용될 수있다. 참고 : 음 &quot;아니오 효소&quot;컨트롤 (NECs)와 &quot;아니오 DNA 템플릿&quot;컨트롤 (NTCS)도 관찰 효과의 유효성을 확인하기 위해 완료해야합니다. </li><li> 표적 유전자 21-23 보완 DNA (cDNA를) 증폭에 mRNA를 역전사의 표준 방법을 적용합니다. </li></ol>

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</ol>

저자는 그들이 더 경쟁 재정적 이해가없는 선언합니다.

여기에 설명 된 대표 결과 근적외선 간략한 두개 납품 (오일을 90 초 / 일) 가성 처리 한 마우스와 비교했을 때 이전 마우스에서 항산화 제의 발현 수준을 인상하기에 충분한 것으로 나타났다. NIR에 의해 방출되는 열을 우리의 측정 장치가 &lt;0.2 ° C 초 90이었다 LED와 같은을 일으킬 가능성이 - 방출되는 열이 미토콘드리아 및 / 또는 신경 활성화의 소스를 나타낼 수 있지만, 쥐의 전정에 대한보고는 24 구 심성 변화는 여기에 설명. 보고서는 위의 강조 달리 또한, 여기서 사용되는 근적외선 치료 감각 상피 전정 심성 뉴런에 직접 적용되지 않았으며 등 또한 감열 채널 (예 TRPV4)에 영향을 미칠 가능성이있다. 마지막으로, 다른 뇌 영역에서 동일한 NIR 장치를 사용한 이전의 연구는 열이 관찰 된 차이 7,9의 소스가 아니라는 것을 제안했다. 이 resu 동안LTS 유전자 수준에서 노화 관련 산화 스트레스에...

밸런스 성능을 떨어지는 이후의 폭포는 일반적인, 자연 노화 하나의 불행하게도 종종 정의하는 기능을 제공합니다. 이 감소의 영향은 신체적, 사회적인, 그리고 크게 노인을위한 삶의 질을 줄일 수 있습니다. 응답에서, 물리적 치료와 재활 폭포에 연구의 초점이되어왔다하지만 반복 폭포의 유병률 일관된 감소와 연관되지 않았다. 동시에, 작업은 말초 또는 중추 전정 시스템 (균형을 유지할 책임이있는 시스템) 부족, 및 이러한 시스템을 대상으로 잠재적 인 치료 전략의 변경 및 한정 불균형의 근본 원인을 조사. 연령 관련 황반 변성 2-4, 알츠하이머 병 모델 5-8, 파킨슨 병 9-12 포함하여 연령 관련 퇴행성 신경 질환에 대한 최근 연구는시의 신경 보호 효과를 보여 주었다근적외선 (NIR) 빛의 mple 비 침습적 응용 프로그램입니다. 또한, 전정 시스템에서, NIR 시험관 13 전정 일차 구 심성 뉴런의 활성을 증가시키는 데 사용되어왔다. 근적외선의 메카니즘은 잘 이해되지 않지만, 근적외선을 사용하여 대부분의 연구는 근적외선 세포 대사를 촉진하는 미토콘드리아 복잡한 IV (사이토 크롬 c 산화 효소) 14-17을 자극한다고 제안했다. 전정 감각 상피에서 I 형 머리 세포의 표피 하 판은 미토콘드리아 (18)의 조밀과 같은 치료 근적외선 치료를위한 행동의 사이트를 나타낼 수있다. 여기서, transcranially의 간단한, 비 침습성 치료 체제는 세포 대사를 측정하는데 사용될 수있다 (그리고 암시 미토콘드리아 기능에 의해) 마우스 전정 감각 상피 설명 NIR을 적용했다. 또한 논의 전정 감각 상피 제제이며 근적외선 ubiquito의 발현을 증가 시킨다는 것을 나타낸다우리는 항산화 감각 상피 (슈퍼 옥사이드 디스 뮤 타제 1) - 이전에 와우 헤어 세포 생존 (19)에 대한 중요한 것으로 나타났다.

<table><tbody><tr><td>Quantum WARP 10</td><td>Quantum Devices</td><td>2070N030-A</td><td></td></tr><tr><td>스크류 탑 미세소관</td><td>품질 과학 플라스틱</td><td>520-GRD-Q</td><td></td></tr><tr><td>케타민</td><td>Parnell, 알렉산드리아 호주</td><td></td><td></td></tr><tr><td>표준 패턴 가위</td><td>FST</td><td>14001-12</td><td></td></tr><tr><td>탄소강 수술 블레이드 #22</td><td>Livingstone</td><td>SBLDCL 22</td><td></td></tr><tr><td>Friedman-Pearson rongeurs</td><td>FST</td><td>16221-14</td><td></td></tr><tr><td>실체 현미경</td><td>Leica Microsystems</td><td>A60S</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 SF 집게</td><td>FST</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>분리 II RNA 마이크로 키트</td><td>Bioline</td><td>BIO-52075</td><td></td></tr></tbody></table>

근적외선 (nir) 빛은 마우스 전정 감각 상피 세포에서 미토콘드리아 기능의 마커의 발현을 증가

Near Infrared (NIr) Light Increases Expression of a Marker of Mitochondrial Function in the Mouse Vestibular Sensory Epithelium

연령이 증가함에 따라 밸런스 기능에 감소를 감쇠위한 전략 밸런스 작업과 운동을 포함하여 물리 치료에 주로 초점을 맞추고 있습니다. 그러나 이러한 접근 방법은 균형 하락의 근본 원인을 해결하지 않습니다. 마우스를 사용하여, 전정 감각 상피 세포의 대사에 근적 외광의 영향 (NIR)을 평가 하였다. 수집 된 데이터는이 간단하고 안전 개입이 자연 노화의 해로운 영향으로부터이 취약한 세포를 보호 할 수 있음을 보여줍니다. 의 mRNA는 격리 된 주변 전정 감각 상피 (크리스타의 ampullaris 및 utricular의 황반)에서 추출 이후 cDNA 라이브러리로 전사했다. 이 라이브러리는 다음 유비쿼터스 항산화 제 (SOD-1)의 발현을 조사해서되었다. 항산화 유전자 발현 후 세포 대사를 정량화하는 데 사용되었다. 젊은에서 NIR의 두개 배달 (4 주) 이상 사용 - 5 D (8 9 개월) 마우스 및 간단한 치료 정권 (90 초 / 일AYS),이 작품은 전정 감각 상피 세포에서 미토콘드리아의 기능을 개선하기에 충분할 수있다 혼자 NIR을 제안한다. 전정 모발 세포 기능을 개선하기위한 치료의 사용 가능한 저렴한, 비 침습적 방법은 없기 때문에, 외부 근적외선의 애플리케이션은 전정 감각 상피 기계가 세포 대사에 노화의 영향을 상쇄 할 가능성 전략을 제공한다.

젊은에서 NIR 처리의 영향 (4 주) 이상 비교하기 - 쥐 (8 9 개월) 우리는 (N = 20) (N = 16) 젊은에서 항산화 슈퍼 옥사이드 디스 뮤 타제 1 (SOD-1)의 발현을 측정 이상 가짜 처리, NIR 처리, 또는 근적외선 차단했다 쥐.이 그림은 젊은 가짜 처리 된 동물에 비해 NIR 처리 어린 동물에서 2 개 이상의 배의 β - 굴지 정규화 SOD-1의 발현이 크게 증가를 보여줍니다 (P &lt;0.01) 및 젊은 근적외선 차단 동물 (P &lt;0.01). 이전 근적외선 처리 된 동물은 또한 이상 상향 조절이 배 SOD-1를 이전 근적외선 차단 된 동물 (p &lt;0.05)와 비교 하​​였다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52265/52265fig1highres.jpg" /> 1. NIR 치료 ...

미토콘드리아 기능 장애는 세포 노화의 특징이다. 이 논문은 노화 마우스 전정 감각 상피의 미토콘드리아 기능을 개선하기 위해 비 침습적 근적외선 (NIR) 치료를 사용합니다.

근적외선 (NIR) 빛은 마우스 전정 감각 상피 세포에서 미토콘드리아 기능의 마커의 발현을 증가

Strategies for attenuating decline in balance function with increasing age are predominantly focused on physical therapies including balance tasks and ...

다음 실험의 전반적인 목적은 근적외선 광선이 마우스의 전정 감각 상피에 미치는 잠재적인 신경 보호 효과를 조사하는 것입니다. 이는 다양한 발달 단계의 마우스에게 근적외선 광선을 두개골을 통해 단기간 간단하게 조사함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계로, 처리된 동물의 골미로를 적출하여 전정 감각 상피를 분리합니다.다음으로, 처리가 미토콘드리아 성능에 미치는 영향을 평가하기 위해 R-T-P-C-R로 관심 항산화 유전자의 발현을 측정합니다. 마지막으로, 마우스의 특정 항산화 유전자 발현에 짧은 근적외선 광처리가 미치는 영향을 평가하기 위해 밀도 측정을 수행합니다. 이 근적외선 처리 기술의 주요 장점은 간단하고 비침습적이라는 점이며, 이를 통해 처리 후 추가적인 하위 생리학적, 분자적 및 행동 분석이 가능합니다.이 기술의 함의는 정상적인 노화 과정 중 말초 전정 기관의 잠재적 신경 보호 또는 전정 질환이나 결손 이후의 균형 성능 개선으로 확장될 수 있습니다. 실험 시작 2~3일 전에, 치료 과정이 완료되기 전 동물의 털이 다시 자라는 것을 방지하기 위해 각 마우스의 머리와 목 부위 털을 가능한 한 짧게 깎아줍니다. 동물의 무균 상태를 유지하기 위해, 제모 시마다 기구를 70% ethanol로 세척하십시오.그 후 각 동물 실험군의 처치 당일에, 근적외선 처치 동물의 스트레스를 최소화하기 위해 꼬리 근위부를 잡아 한 손 바닥 위에서 안정을 취하게 합니다. 각 동물에 대하여 670 nanometer LED 장치를 제모된 부위에서 1~2 cm 떨어진 곳에 유지하고, 장치를 90초 동안 켭니다. 가짜 처치(sham)군의 경우 동일한 처치 절차를 반복하되 장치를 끈 상태로 진행하며, 근적외선 차단군의 경우 근적외선 처치군과 동일한 방식으로 처치하되 장치를 알루미늄 호일로 덮어 진행합니다.각 그룹에 대해 24시간 간격으로 5일 연속 처리를 반복한 후, 새로 제조한 글리세롤 기반 인공 뇌척수액(A CSF)을 -80 °C 냉동고에서 얼음 슬러리가 형성될 때까지 45분 동안 냉동시킵니다. 다음으로, 각 마우스의 두개골 정중선 피부를 따라 22번 라운드 면도날로 절개하며, 조직 위에 얼음처럼 차가운 A CSF를 주기적으로 도포하여 뇌궁과 그 아래의 전정 기관을 가능한 한 차갑게 유지합니다. 그런 다음 표준 가위의 뾰족한 끝을 사용하여 람다(Lambda) 부위의 두개골에 작은 절개를 넣고 시상 봉합선을 따라 절개합니다.그 다음, 얕은 URS

near-infrared-nir-light-increases-expression-marker-mitochondrial

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연구

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생물학

파킨슨 병을 일으키는 유전자에 변이를 가지고 환자의 섬유 아세포가 쉽게 접근 할 수를...

파킨슨 병 분야에서 Mitochondrial Phenotypes을 모니터링하기위한 기본 인간 섬유 아세포의 사용

출처: Zhang, L., et al. 근적외선(NIr) 광은 마우스 전정 감각 상피에서 미토콘드리아 기능 마커의 발현을 증가시킵니다. J. Vis. 경험. (2015년)이 비디오는 면도한 쥐 두피에 NIr 빛을 적용하여 전정 뉴런을 활성화하고 슈퍼옥사이드 디스뮤타제-1(SOD-1) 생성을 자극하여 신경 기능을 지원하는 과정을 보여줍니다. 이 절차는 신경 보호 전략으로서의 NIr 요법을 강조합니다.

근적외선을 사용한 마우스 모델에서 감각 신경 신호 조절

이 동영상은 순진 마우스 시각 투사의 조영 증강 자기 공명 영상과 급성 시신경 압박 손상 및 만성 시신경 변성과 관련된 시신경 변성의 반복 및 종 생체 내 연구에, 임상 3 T 스캐너를 사용하는 방법을 보여줍니다 녹아웃 마우스 (P50 KO).

마우스의 조영 증강 MRI에 의한 시신경 섬유 무결성의 생체 내 이미징

Non-coherent Xenon light는 협대역 간섭 및 중성 밀도 필터를 통과하여 다양한 파장과 강도의 빛을 배양된 세포에 전달했습니다. 이 프로토콜은 적색/근적외선 요법이 in vitro 반응성 종의 생산에 미치는 영향을 평가하는 데 사용되었으며, 테스트된 매개변수를 사용하여 효과가 관찰되지 않았습니다.

파장과 산화 스트레스에 레드 / 근적외선 치료의 강렬의 범위의 효과의 평가를위한 방법 체외

Photobiomodulation 치료 다양 한 신경학 상과 정신 장애의 처리를 위한 혁신적인 비 침 투 적인 양식 적임 이며 건강 한 두뇌 기능을 향상 시킬 수 있다. 이 프로토콜은 다른 실험실 설치류에 있는 사용을 위해 적응 시킬 수 있다 transcranial 빛 배달 여 쥐에서 뇌 photobiomodulation를 수행 하는 단계별 가이드를 포함 합니다.

마우스에 Transcranial Photobiomodulation 치료에 대 한 프로토콜

여기서, 우리는 뇌 영역에서 단백질을 분석 하기 위해 면역 조직 화학 및 고해상도 스캔과 함께 근 적외선 염료를 사용 하는 프로토콜을 제시 합니다.

근 적외선 형광 및 고 분해능 주사를 사용 하 여 설치류 뇌의 단백질 발현 측정

본 프로토콜은 NIR-II 광학 이미징 장치를 사용한 마우스의 상세한 실시간 NIR-II 형광 이미징 동작을 설명합니다.

혈관 및 종양 이미징을 위한 밝은 NIR-II 형광 프로브

이 절차는 murine 골수에서 조혈 세포 기본 문화를 확립하고 진 Pulser MXCell의 electroporation 시스템을 사용 transfection하여 다음 방법을 설명합니다.

Electroporation에 대한 Murine 골수에서 조혈 세포 차 문화의 준비

여기 우리는 특히 어린이 두뇌 개발을 공부에 적외선 분광학 (fNIRS),인지 신경 과학에 사용되는 소설 비침습 두뇌 이미징 시스템, 주변 기능을위한 데이터 수집 및 데이터 분석 방법을 설명합니다. 이 방법은 데이터 수집 및 데이터 해석과 과학적 발견에 필수적인 분석의 보편적인 기준을 제공합니다.

가까운 적외선 분광학과 함께 아기, 어린이 및 성인의인지 기능을 탐색

이 절차를 빠르게 쉽게 마우스 배아 섬유아 세포 (MEFs) 또는 기타 기본 세포에 가장 적합한 electroporation 조건을 식별하는 유전자 Pulser MXcell의 electroporation 시스템을 사용하는 방법을 보여줍니다. 문제 해결을위한 고려 사항도 관련 비디오 설명합니다.

고효율 기본 셀을 Transfect하는 진 Pulser Electroporation MXcell의 시스템을 사용하여

배우세요 마우스 전정 감각 상피에서 근적외선 광이 미토콘드리아 기능을 개선하고 항산화 유전자 발현을 증가시키는 비침습적 방법을. 이 기술은 노화 관련 신경보호 연구에 활용됩니다.

근적외선 (NIR) 빛은 마우스 전정 감각 상피 세포에서 미토콘드리아 기능의 마커의 발현을 증가

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