Name: 마우스 리브를 절제하는 수술 : 대규모 긴 뼈 수리에 대한 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: 배우세요 마우스 늑골 절제 수술을 통해 대규모 뼈 재생 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 기법은 정밀한 외과 도구 조작과 조직 분리 기술을 사용하여 생체 내 골격 수리 과정을 관찰할 수 있는 신뢰할 수 있는 동물 모델을 제공합니다.

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원고를 비판적으로 읽어주신 Mariaani 연구실 구성원들에게 감사드립니다. 우리의 자금 출처는 다음과 같습니다: Baxter Medical Scholar Research Fellowship(M.K.S.로), USC 학부 펠로우십 및 Provost, Dean Joan M. Schaeffer 및 Rose Hills Fellowships(M.K.S.로). 우리는 또한 Pasadena City College(T.T.T로)를 통해 CIRM BRIDGES 펠로우십을 인정합니다. James H. Zumberge Research and Innovation Fund, USC 재생 의학 이니셔티브 및 NIAMS NIH는 Award Number R21AR064462(F.V.M에).

참고 : 모든 절차가 남부 캘리포니아 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인 동물 프로토콜에 따라 있습니다. 수술 1. 준비 <ol><li> 필요한 수술 도구 및 소모품의 레이아웃 (1 항목 살균 - 재료 목록 18)과 해부 현미경 및 후드 또는 하강 기류 테이블에 광섬유 트랜스 조명을 정렬합니다. </li><li> 마취를 유도하기 위해 4 % 이소 플루 란과 유도 챔버 (3 개월 - - 30 G, 1 ~ 20) 성적으로 성숙한 마우스를 놓습니다. </li><li> 발 및 / 또는 꼬리 핀치 테스트 마취를 확인합니다. </li><li> 수술 중 안구 건조를 방지하기 위해 마우스의 눈에 연고를 적용합니다. </li><li> 현미경 단계로 마우스를 이동합니다. 유지 보수 호스의 코 콘에 마우스를 놓고 옆에 위치. 체온을 유지하는 데 도움 동물에 인접한 온난화 파우치를 제공합니다. 하지E :. 마우스의 위치는 개인 취향 및 / 또는 외과 의사의 손 방향에 따라 달라집니다, 왼쪽 또는 오른쪽 중 어느 쪽이 괜찮습니다. </li><li> 유지 보수를 위해 3 %, 그리고 속도를 호흡 시계 - 2 이소 플루 란을 조정합니다. </li><li> 25 G 바늘 수술 후 통증 부 프레 노르 핀 (0.05 ㎎ / ㎏) 피하 (다리의 측면 측면)를 주입한다. 다리는 정상 응답 인 트 수 있습니다. </li></ol> 2. 열기 절개 <ol><li> 촉진하여 원하는 리브를 감지하고, 면도기로 머리의 영역을 취소합니다. 참고 : 갈비뼈 1-7 폐에 근접하고 11-13 상당히 짧은 때문에 갈비 8-10 권장합니다. 갈비뼈를 계산하는 숫자 1과 가장 주동이의 리브와 함께 시작해야한다. </li><li> (3 배는 종종 동물 사용 프로토콜에 의해 권장) 포비돈 - 요오드 및 이소프로판올 (70 %) 보라고 번갈아 영역을 준비합니다. </li><li> 바로 위에, 피부를 통해 2cm 절개를 잘라 중간 크기의 미세 가위로 원하는 리브 평행. Incis기본 근육과 지방 레이어를 통해 전자. </li><li> 절개의 크기를 최소화하면서 수술 영역을 노출 트랙터에 3 층 (피부, 근육, 지방)을 놓습니다. </li></ol> 3. 리브를 절개 <ol><li> 5.0 mm 메스와 리브의 원하는 부분을 덮는 늑간 근육을 잘라. 리브와 같은 높은 곡선 아닌 경우이 같은 chondrocostal 관절 위치 5mm 근위 약이 절개입니다. 조심스럽게 좋은 팁 집게로 뼈에서 근육을 분리합니다. </li><li> 동물의 골막을 유지하면서 절제를 만들려면 5.0 mm 메스와 리브의 길이를 따라, 골막을 통해 잘라. 조심스럽게 좋은 팁 집게 옆으로 기본 뼈에서 골막을 분리합니다. 골막은 매우 섬세하고 젤라틴 일관성을 가지고 있으므로주의를 진행합니다. </li><li> 다음에 미세한 마이크로 가위 일단 뼈 통한 단면을 만든다. 필요한 경우와 절제를 측정현미경 또는 통치자 형 게이지 레티클. 그런 다음 조심스럽게 골막에서 뼈를 들어 올려 다른 쪽 끝을 잘라. 참고 :주의를 진행합니다. 이 흉막 막을 찢고 기흉 발생합니다 아래 리브를 절개하지 않고 잡아 당겨 같은 가장 섬세한 작업이다. 흉막 막이 찢어진 경우 흉강의 내부가 보이는 될 것 같은이 쉽게 알 수있을 것입니다. </li><li> 출혈을 멈추게하기 위해 5 초 - 출혈이 뼈를 절단의 결과로 발생하는 경우, 4 면봉을 잘라 끝에서 압력을 적용합니다. 참고 : 드문 경우에 출혈이 계속, 그것은 중지하고 동물 회복이 손상 될 상당한 혈액 손실을 안락사 할 필요가있다 (유체 교체없이, 안전하게 손실 될 수있는 최대 혈액량은 전체 혈액량의 10 % 7.7 -.) 200 μL 9 - 8 μL / g는 25g 마우스의 경우, 이것은 180에 해당합니다. </li><li> 즉시로 제거 리브를 배치향후 분석을 위해 4 % PFA. 주 : 뼈와 골막 모두 절제 행하는 것이라면, 골막 절개 박리 (단계 3.2)을 생략합니다. 골막은 매우 밀접하게 흉막 막에 부착되어 있기 때문에 눈물을 방지하기 위해 집게와 떨어져 흉막 막에서 리브를 괴롭 히고, 조심스럽게 진행합니다. </li></ol> 4. 절개 닫기 <ol><li> 9-0 봉합 (2 봉합은 일반적으로 충분하다)와 나머지 골막 슬리브의 맨 위에 늑간 근육을 봉합. 수술 위치에 대한 지표 역할을 직접 리브의 절단 끝 위의 봉합을 놓습니다. </li><li> 견인기를 제거합니다. (- 4 봉합 충분하다 3) 9-0 봉합과 상부의 근육과 지방을 봉합. 근육 및 / 또는 지방 특히 두꺼운 층 쥐에서 별도로 각 레이어를 봉합 (예를 들어, 근육 층의 봉합의 1 층과 지방층을위한 봉합의 1 층). </li><li> 닫기(- 5 봉합 충분하다 4) 7-0 봉합사로 피부. </li><li> 큰 집게와 함께 가장자리를 곤란, 봉합 접착제 절개를 고정합니다. </li><li> 천천히 처음 몇 분 동안 1 %로 조정하여 오프 이소 플루 란 마우스를 탈피하고 전원을 껐다 켜십시오. </li><li> 가열 램프 아래에 마우스를 놓고 의식이, 5 회복 될 때까지 남겨 - 10 분. 의식이 회복 된 후 치유 기간 동안, 마우스를 이동하고 일반적으로 ambulate과 고통의 흔적을 보여주지해야한다. </li></ol> 5. 복구 및 분석 <ol><li> 0.5 MG에서 경구 용 젤라틴 형태의 부 프레 노르 핀의 관리를 포함하여 수술 후 통증 관리를 제공 / 48 시간 동안 매 12 시간을 kg. 경구 투여는 흉부 지역에 통증이 발생할 수 있습니다 동물을 억제 할 필요가 없습니다. </li><li> 치료 기간 동안 음식과 물을 무료로 액세스 할 수있는 케이지에 마우스를 유지한다. 절개 부위가 건조 후, 여성 동물 남성 동안 공동 수용 할 수있다의 싸움을 방지하기 위해 절연되어 있어야합니다. </li><li> 치유 기간이 지나면 안락사에 대한 승인 절차를 따르십시오. 고정 및 분석을 위해 갈비뼈를 제거합니다. </li></ol>

<ol><li>Philip, S. J., Kumar, R. J., Menon, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+study+of+rib+regeneration+following+costectomy+in+adolescent+idiopathic+scoliosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Spine+J%22%5BJournal%5D)">Morphological study of rib regeneration following costectomy in adolescent idiopathic scoliosis.</a> Eur Spine J. 14 (8), 772-776 (2005).</li>
<li>Munro, I. R., Guyuron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Split-rib+cranioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Split-rib cranioplasty.</a> Ann Plast Surg. 7 (5), 341-346 (1981).</li>
<li>Taggard, D. A., Menezes, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+use+of+rib+grafts+for+cranioplasty+in+children.+Pediatric+neurosurgery%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Successful use of rib grafts for cranioplasty in children. Pediatric neurosurgery.</a> 34 (3), 149-155 (2001).</li>
<li>Head, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+Regeneration+fo+the+Ribs%3A+A+problem+in+thoracic+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Prevention of Regeneration fo the Ribs: A problem in thoracic surgery.</a> Archives of Surgery. 14 (6), 1215-1221 (1927).</li>
<li>Kawanabe, Y., Nagata, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+of+costal+cartilage+harvest+for+total+auricular+reconstruction%3A+part+I.+Avoidance+and+prevention+of+intraoperative+and+postoperative+complications+and+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+reconstructive+surgery%22%5BJournal%5D)">A new method of costal cartilage harvest for total auricular reconstruction: part I. Avoidance and prevention of intraoperative and postoperative complications and problems.</a> Plastic and reconstructive surgery. 117 (6), 2011-2018 (2006).</li>
<li>Cheung, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+externally+fixed+femoral+fracture+model+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+orthopaedic+research+%3A+official+publication+of+the+Orthopaedic+Research+Society%22%5BJournal%5D)">An externally fixed femoral fracture model for mice.</a> Journal of orthopaedic research : official publication of the Orthopaedic Research Society. 21 (4), 685-690 (2003).</li>
<li>Matthys, R., Perren, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+fixator+for+use+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Injury%22%5BJournal%5D)">Internal fixator for use in the mouse.</a> Injury. 40, Suppl 4. S103-S109 (2009).</li>
<li>Cooper, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+the+critical+size+in+calvarial+bone+defects%3A+revisiting+the+concept+of+a+critical-size+defect%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+reconstructive+surgery%22%5BJournal%5D)">Testing the critical size in calvarial bone defects: revisiting the concept of a critical-size defect.</a> Plastic and reconstructive surgery. 125 (6), 1685-1692 (2010).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ask+the+Vet%5BTitle%5D)+AND+%22JAX+NOTES%22%5BJournal%5D)">Ask the Vet.</a> JAX NOTES. 499, Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://jaxmice.jax.org/jaxnotes/archive/499c.html">http://jaxmice.jax.org/jaxnotes/archive/499c.html</a> (2005).</li>
<li>Flecknell, P. A., Roughan, J. V., Stewart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+oral+buprenorphine+%28%27buprenorphine+jello%27%29+for+postoperative+analgesia+in+rats--a+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+animals%22%5BJournal%5D)">Use of oral buprenorphine ('buprenorphine jello') for postoperative analgesia in rats--a clinical trial.</a> Laboratory animals. 33 (2), 169-174 (1999).</li>
<li>Rigueur, D., Lyons, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-mount+skeletal+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Whole-mount skeletal staining.</a> Methods in molecular biology. 1130, 113-121 (2014).</li>
<li>Evans, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+somitic+cells+to+the+avian+ribs%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Contribution of somitic cells to the avian ribs.</a> Developmental biology. 256 (1), 114-126 (2003).</li>
<li>Colnot, C., Thompson, Z., Miclau, T., Werb, Z., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+fracture+repair+in+the+absence+of+MMP9%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Altered fracture repair in the absence of MMP9.</a> Development. 130 (17), 4123-4133 (2003).</li>
<li>Lu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+basis+for+age-related+changes+in+fracture+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+orthopaedic+research+%3A+official+publication+of+the+Orthopaedic+Research+Society%22%5BJournal%5D)">Cellular basis for age-related changes in fracture repair.</a> Journal of orthopaedic research : official publication of the Orthopaedic Research Society. 23 (6), 1300-1307 (2005).</li>
<li>Zilberman, Y., Gafni, Y., Pelled, G., Gazit, Z., Gazit, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+imaging+in+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent imaging in bone.</a> Methods in molecular biology. 455, 261-272 (2008).</li>
<li>Pelled, G., Gazit, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+using+osteocalcin-luciferase%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+musculoskeletal%22%5BJournal%5D)">Imaging using osteocalcin-luciferase.</a> Journal of musculoskeletal. 4 (4), 362-363 (2004).</li>
<li>Elefteriou, F., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+mouse+models+for+bone+studies--strengths+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Genetic mouse models for bone studies--strengths and limitations.</a> Bone. 49 (6), 1242-1254 (2011).</li>
<li>Srour, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+large-scale+regeneration+of+rib+cartilage+in+a+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bone+Miner%22%5BJournal%5D)">Natural large-scale regeneration of rib cartilage in a mouse.</a> J. Bone Miner. , (2014).</li>
</ol>

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처음이 프로토콜을 학습 할 때, 어디에서 문제가 될 수있는 초기 절개를 찾을 수 결정. 그러나 안락사 마우스에 연습 외과 의사가 초기 절개를 배치하고 절제 할 원하는 리브 노출 위치를 배울 수 있습니다. 시체에서 작업도 또는 골막없이 리브 부분을 제거하는 데 필요한 미세 운동 능력을 향상시킨다. 또한,이 절차에 새로운 사람이 훌륭한 도구와 얇은 봉합을 조작하는 것은 어려운 할 수없는 경우도 있습니다. 오프 묶는 동안, 초과 봉합에 당기는 조직을 찢어 수 있습니다. 따라서, 시체에 일부 연습 봉합 도움이 될 수 있습니다. 외과 의사가 설치류와 수술에 새로운 마지막 경우, 그것은 다른 사람이 처음 몇 수술 중 감시 및 마취 조정을 지원하는 것이 유용 할 수있다. 이 프로토콜의 가장 중요한 단계는 흉막 스파 (기흉을 유발하지 않고 공기의 이상 수집을 뼈를 절제한다흉막 막 수술 닫 너무 얇은 때문에 어려운 CE)는 마우스에 치료하는. 리브 열등 근육과 정수리 늑막의 층은 매우 얇고 ...

골격 손상, 만성 관절염을 쇠약하게하고, 재건 수술과 관련된 심각한 문제는 경제 생산성, 가족 복지, 삶의 질에 영향을. 작은 휴식과 병변이 상당히 잘 치유 할 수 있지만, 인간의 구조와 기능을 복원 재건 절차에 의존해야하므로 큰 결함을 수리하고 할 수 없습니다. 재건은 동종 또는 heterogeneic 이식, morcellized 뼈 이식 비계, 또는 사지 연장술을 포함 할 수있다. 불행하게도,뿐만 아니라 이러한 치료하지만 수리 뼈의 원래 강도가 거의 달성하지 않습니다와 관련된들이 지속적인 병적 요인이있다. 따라서, 새로운 임상 적 접근 방법이 필요하다. 분절 결함을 치료하는 혁신적인 방법을 개발 일방향 대규모 수리 자연스럽게 발생하는 상황을 연구하는 것이다. 포유 동물이 일에 제한 간주하는 동안 양서류는 유명 골격 요소를 재생성 할 수 있습니다능력이다. 그러나, 20 세기 초반 이후, 인간의 리브의 재생의보고는 적다 인간 그렇게 1-4 한정되지 않을 수 있음을 제안 발표되었다. 현재 이러한 현상은 제일 턱, 얼굴 및 귀 재건 리브 재료를 사용하여 성형 외과 의사에 의해 공지되어 있지만, 5보다 폭넓게 이해되지 않는다. 더 자세하게 수리를 연구하기 위해, 우리는 마우스를 사용하여 외과 적 모델을 개발 하였다. 이러한 프로토콜을 사용하여, 연구자들은 관련된 선천적 요인을 파악하고 다른 위치에서 골격 치유를 촉진하기 위해이 정보를 사용할 수있다. 수리 골격을 연구 모델로서 리브를 사용하는 많은 장점이있다. (6,7 대퇴골의 절제에 비해) 우선, 주변 리브 천연 고정구를 제공한다. 이것은 내부 및 외고정의 이환율의 위험을 감소하고 수술을 단순화합니다. 가슴 워싱턴의 두 번째로, 얇은 근육 층쉽게 액세스 및 두개골 절제술 (8)의 편의에 대한 분석은 비교할 수 있도록 우수한 가시성을 제공 할 것이다. 셋째, intramembranous 골화, 연골 골화에 의한 리브 형태로 구성하고 중앙 골간의 양쪽 끝에있는 성장판의 확장을 통해 길이 성장 calvariae 대조적으로. 따라서, 리브의 수리는 사지 골격의 긴 뼈의 수리에 더 비교 될 수있다. 더욱이, 우리는 대퇴골에 비해, 리브의 골막가 두껍고보다 쉽게​​ 조작 할 수 있음을 발견 하였다. 따라서, 골막을 공부하거나 세포 치료, 약리 에이전트를 테스트 및 / 또는 조직 비계의 목적을 위해 뼈 수리를 분석하고자하는 연구자들은이 수술 모델이 유용 할 수 있습니다. 요약하면,이 리브 절제 모델은 일반적으로 사용하는 이러한 모델은 현재 존재하지 않기 때문에 포유 동물에서 자연 대규모 뼈 수리를 공부하는 내에서 컨텍스트를 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>중형 미세해부 가위(Vannas-T&uuml; bingen 스프링 가위 5mm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>Fine Micro-dissection scissors (Vannas Spring Scissors - 2mm Cutting Edge)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-04</td><td>곡선 팁이 유익합니다.</td></tr><tr><td>마이크로 메스 5.0mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>10315-12</td><td>기타 미세 메스로 대체할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>Dumont 55 forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>견인기&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>17004-05</td><td>조절성이 편리한</td></tr><tr><td>마이크로 니들 홀더</td><td>Fine Science Tools</td><td>12060-01</td><td></td></tr><tr><td>9.0 나일론 봉합사 (Ethilon), 테이퍼 포인트 베스트</td><td>Ethicon</td><td>2819G 또는 이와 유사한</td><td>테이퍼 포인트 가장 좋지만 역 절단도 좋습니다</td></tr><tr><td>7.0 prolene 봉합사 (Prolene)</td> <td>Ethicon</td><td>8700H 또는 이와 유사한</td><td>6-0도 사용할 수 있으며 바늘 포인트는 다를</td></tr> <tr><td>수 있습니다.큰 집게 (Adson 집게)</td> <td>Fine Science Tools</td><td>11006-12</td><td>다른 브랜드는 고급</td></tr><tr><td>윤활제 눈 연고 (Akwa Tears)</td><td>Akorn</td><td>17478-062-35</td><td></td></tr><tr><td>봉합 접착제 (GLUture 국소 조직 접착제)</td><td>Abbot</td><td>32046-01</td><td>은 우수한 작업 시간을 가지고 있습니다</td></tr><tr><td>면도기</td><td>Wahl</td><td>9918-6171 또는 유사한</td><td></td></tr><tr><td>클램프 램프</td><td>Zoo Med</td><td>LF-5</td><td></td></tr><tr><td>적외선 전구, 75W</td><td>Zoo Med</td><td>RS-75</td><td></td></tr><tr><td>RC2 설치류 마취 시스템</td><td>VetEquip&nbsp;</td><td>922100</td><td></td></tr><tr><td>IsoFlo (Isoflurane)</td><td>Abbot</td><td>05260-05</td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀 (Buprenex)</td><td>레킷 벤키저</td><td>12496-0757-1</td><td></td></tr><tr><td>베타딘</td><td>퍼듀 프레드릭</td><td>67618015017</td><td></td></tr><tr><td>맛을 낸 젤라틴, 라즈베리</td><td>젤로</td><td>B000E1FYL0</td><td>'지글러'의 일관성으로 단단하게 만들어졌습니다</td></tr></tbody></table>.

마우스 리브를 절제하는 수술 : 대규모 긴 뼈 수리에 대한 모델

A Surgical Procedure for Resecting the Mouse Rib: A Model for Large-Scale Long Bone Repair

이 프로토콜은 마우스 리브를 이용하여 대규모 뼈 수리에 대한 새로운 모델 연구원을 소개합니다. 주변 늑간근에서 원하는 리브 노출 흉추 원통 벽을 개방 기흉 유도없이 리브의 원하는 부분을 절개하고, 절개 폐쇄 수술에 대한 동물의 제조 : 절차는 다음과 같은 세부. 팔다리 뼈대의 뼈에 비해 매우 리브 접근 가능하다. 인접한 리브 자연 고정을 제공하기 때문에 또한, 더 내부 또는 외부 고정 장치는 필요하지 않습니다. 수술은 시판 공급 장치를 사용 배우기 간단하고, 동물에 의해 잘 용납입니다. 절차 또는 주변 골막을 제거하지 않고 수행 할 수 있기 때문에 보수 골막에의 기여가 평가 될 수있다. 2 개월 - 결과는 골막이 유지되는 경우, 강력한 수리 (1)에서 발생하는 것을 나타냅니다. 우리는 것이 프로토콜의 사용을 기대리브 수리에 대한 연구를 자극하고 결과는 몸 주위에 다른 위치에서 뼈 수리를 자극 할 수있는 새로운 방법의 개발을 촉진됩니다.

동물은 일반적으로 절개가 잘 치유,이 과정에서 신속하게 복구하고, 동물은 정상적인 동작을 나타낸다. 절차는 시판 공급 장치를 사용하고 실시 후, 1 시간에 따라 완성 될 수있다. 실험 데이터를 생성하는 절차를 사용하기 전에, 어떤 큰 뼈 조각이 절제 영역 내에 남아있을 수 있는지 확인 일 0 시점 절제술을 분석하는 것이 중요하다. 이것은 전형적으로 특별한 방사선 안전 승인을 필요로하더라도 적절한 절차를 평가하는 한 가지 방법은, 수술 후 X 선 또는 microCT 촬상 의해 동물을 평가하는 것이다. 대신, 또 다른 간단한 평가는도 1a에 도시 된 바와 같이 골격 염색 준비 수행함으로써 완성 될 수있다. 이것은을 EtOH에 고정, 흉곽를 수집 포함하고, 알리자린 레드 염색 표준 프로토콜 11을 사용. 그것은 그쪽 때문에 (부드러운 조직을 멀리 소화하는 데 사용) 수산화 칼륨을 생략하는 것이 유용 할 수 있습니다원한다면 여전히 표본 t 조직학 분석을 위해 나중에 사용될 수있다. 샘...

이 절차의 전반적인 목표는 쥐의 갈비뼈에서 뼈의 일부를 성공적으로 절제하는 것입니다. 이 절차는 대규모의 긴 뼈 복원을 연구하기 위한 모델로 개발되었습니다.

This protocol introduces researchers to a new model for large-scale bone repair utilizing the mouse rib. The procedure details the following: preparation ...

본 절차의 목적은 골격 재생 모델을 위해 갈비뼈의 골성 부위에 대규모 절제 부위를 만드는 것입니다. 이는 먼저 동물의 외측 피부에 절개창을 내고 여는 것으로 시작합니다. 두 번째 단계는 제거할 갈비뼈를 노출시키는 것입니다.다음으로, 주변의 결합 조직 초 또는 골막과 함께 늑골의 일부를 제거하거나, 또는 골막을 그대로 남겨둔 채 제거합니다. 마지막 단계는 절개 부위를 봉합하고 동물이 회복하도록 하는 것입니다. 궁극적으로, 이 골 재생 모델은 대규모 골격 수복 과정 중에 발생하는 세포 및 분자적 사건을 보여주는 데 사용될 수 있습니다.포유류의 경우, 수술 도구 조작에 정밀함이 요구되고 성공적인 수술을 위해서는 다양한 조직의 위치를 파악하는 것이 중요하므로 이 방법의 시각적 시연이 필수적입니다. 실험 절차 시연은 본 연구실의 대학원생인 Marissa Roar와 Nikita Tripper가 진행합니다. 수술 부위와 필요한 멸균 도구 및 소모품을 준비한 후, 4% isoflurane이 담긴 유도 챔버에 마우스를 넣어 마취를 유도합니다.마우스가 마취되면 마우스의 눈에 연고를 바르고 마취 깊이를 확인합니다. 발가락 꼬집기 테스트를 수행했을 때 발가락 꼬집기에 반응이 없어야 합니다. 마우스를 해부 현미경 스테이지 위의 히팅 패드 위나 그 근처에 두고, 마취 유지 호스의 노즈 콘을 마우스의 코 위에 배치합니다.마우스가 측면 자세를 유지하도록 합니다. 유지를 위해 이소플루란(isoflurane) 농도를 2~3%로 조정하고 호흡수를 관찰하십시오. 그런 다음 25게이지 바늘을 사용하여 부프레노르핀(buprenorphine)을 피하 주사합니다.수술 후 통증 예방을 위해 다리가 떨릴 수 있으며, 이는 정상적인 반응입니다. 먼저, 1번으로 간주되는 가장 앞쪽 갈비뼈부터 촉진하여 원하는 갈비뼈를 선택하십시오. 본 영상에서는 10번 갈비뼈의 일부를 제거합니다.늑골 위 부위를 면도한 후 포비돈 요오드로 세척하고, 이어서 이소프로판올로 3회 세척합니다. 적출할 늑골 위의 피부, 근육 및 지방층을 통해 2 cm 절개창을 만든 후, 절개 부위의 크기를 최소화하면서 수술 부위가 드러나도록 세 층의 조직을 리트랙터로 고정합니다. 그다음 5 mm 메스를 사용하여, 늑골의 곡률이 완만한 흉쇄관절(chocos joint)에서 근위측으로 5 mm 떨어진 지점의 늑간근을 절개합니다. 이어서 미세 팁 포셉을 사용하여 근육을 뼈에서 조심스럽게 분리합니다.다음으로 동물의 골막을 유지하면서 절제 부위를 만들기 위해, 갈비뼈 길이를 따라 골막을 절개합니다. 그런 다음 미세 팁 포셉을 사용하여 하부 뼈로부터 섬세한 골막을 외측으로 매우 조심스럽게 분리합니다. 필요한 경우, 현미경의 눈금이나 자 형태의 게이지를 사용하여 절제 범위를 측정합니다.그 다음, 정밀 미세 가위를 사용하여 뼈의 횡단면을 절개합니다. 한쪽 끝에서 뼈를 골막으로부터 조심스럽게 들어 올린 후, 즉시 반대쪽 끝을 절단합니다. 제거한 갈비뼈는 향후 분석을 위해 4%paraldehyde에 넣습니다.뼈를 절단한 결과로 출혈이 발생하면, 면봉으로 절단된 끝부분을 4~5초 동안 압박하여 지혈합니다. 절개 부위를 닫으려면, 남은 골막 슬리브 윗부분의 늑간근을 3-0 또는 4-0 불연속 봉합사로 봉합합니다. 수술 위치의 표시가 되도록 봉합사를 갈비뼈 절단단 바로 위에 배치합니다.리트랙터를 제거한 후, 그 위의 근육과 지방층을 9-0 비연속 봉합사로 봉합합니다. 근육이나 지방층이 특히 두꺼운 마우스의 경우에는 각 층을 개별적으로 봉합하십시오. 4~5개의 7-0 봉합사로 피부를 닫고, 조직 접착제로 절개 부위를 고정합니다.큰 포셉으로 가장자리를 함께 집어줍니다. 이소플루레인 농도를 1%로 조절하여 몇 분간 서서히 낮춘 다음, 이소플루레인을 끕니다. 마우스를 가열 램프 아래에 두고 의식을 회복할 때까지 둡니다.마우스가 의식을 회복한 후 회복기 내내 정상적으로 움직이고 보행하며, 고통의 징후를 보이지 않는지 확인해야 합니다. 절개 부위가 건조해지면, 먹이와 물을 자유롭게 섭취할 수 있는 깨끗한 케이지에 마우스를 수용하십시오. 암컷은 합사할 수 있으나, 수컷은 싸움을 방지하기 위해 단독 수용해야 합니다. 또한 48시간 동안 12시간마다 kg당 0.5 mg의 buprenorphine을 구강 제제로 투여하는 것을 포함하여 수술 후 통증 관리를 실시하십시오.경구 투여는 흉부 부위에 통증을 유발할 수 있는 동물 보정이 필요하지 않습니다. 이 이미지는 수술 직후 수집된 4.5 millimeter 늑골 절제물을 보여줍니다. 뼈 파편이 남아 있지 않습니다.시료를 zarin red로 염색한 후 80% glycerol로 투명화하였습니다. 화살표는 절단된 끝부분의 위치를 나타냅니다. 이것은 이전 이미지의 흉곽에서 골막이 제거된 상태로 분리해낸 갈비뼈 부분입니다.여기 제시된 hematin 및 eoin 염색 조직 절편은 왼쪽의 노란색 화살표가 가리키는 바와 같이 뼈에 부착된 골막이 최소량이며, 오른쪽에는 골막이 없음을 보여줍니다. 노란색 별표는 골수강을 나타냅니다. 이 이미지는 골막이 여전히 부착된 상태로 제거된 갈비뼈 부분을 보여주며, 이 조직 절편은 노란색 대괄호로 표시된 것처럼 뼈를 덮고 있는 손상되지 않은 골막을 보여줍니다.노란색 별표는 다시 한번 골수강을 나타냅니다. 이 이미지는 마우스 내에서 골막을 온전하게 유지한 채 절제 후 2개월 동안 치유시킨 골격 표본을 보여주며, 해당 부위가 완전히 회복된 것을 관찰할 수 있습니다. 방금 보여드린 골격 표본의 조직 절편에서는 층판골 벽과 골수강이 복원되었음을 확인할 수 있습니다.이 이미지는 3개월의 치유 기간 후 골격 표본을 보여줍니다. 늑골 일부와 주변 골막을 제거한 후, 패널 왼쪽에 표시된 절단단에서는 최소한의 회복만 관찰되었습니다. 노란색 화살표는 흉쇄관절(chocos joint)을 가리킵니다.이전에 보여준 골격 표본의 이 조직 절편은 절제 부위를 채우고 있는 육아 조직, 지방 조직 및 근육 세포를 보여줍니다. 이 기술을 숙달하면 본 절차에 따라 적절히 수행했을 때 1시간 이내에 완료할 수 있습니다. 연골 부위의 갈비뼈에 절제 부위를 만드는 것과 같은 다른 방법들을 통해, 연골의 대규모 수복이 어떻게 일어나는가와 같은 추가적인 질문들에 대한 답을 얻을 수 있습니다.이 영상을 시청한 후에는 골격 재생을 연구하기 위해 갈비뼈의 뼈 부분에 절제 부위를 만드는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.I.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

뼈 복구 분야에서 전임상 연구의 제약 조건 중 하나는 치유 뼈 병변 내의 국소 기계적 환경에 대한 실험적 통제가 부족하다는 것입니다. 우리는 생체 내에서 고정기 강성을 변화시킬 수 있는 능력을 가진 뼈 복구를 위한 외부 고정기의 설계 및 사용을 보고합니다.

조정 강성, 쥐 대퇴골 절골술 부위 별 뼈 결함 모델에 대한 외고정

동물 모델은 생물 의학 연구에서 심각한 뼈 손상을 모방하기 위해 자주 사용됩니다. 크기가 작기 때문에 생쥐에서 안정화된 뼈 병변을 확립하는 것은 대부분의 연구 그룹의 능력을 넘어섭니다. 여기에서는 마우스의 실험적 대퇴골 결함을 확인하고 분석하는 간단한 방법을 설명합니다.

마우스의 간단한 임계 크기의 대퇴 결함 모델

마우스 모델은 뼈 조직 공학에 매우 유용한 도구이지만, 긴 뼈 결함 모델은 드뭅니다. 이러한 필요성은 4개의 나사가 있는 잠금 플레이트와 전용 지그를 사용하여 이환율이 낮고 재현 가능한 대퇴골 임계 크기 결함을 수행하고 안정화하는 현재 프로토콜의 개발에 동기를 부여했습니다.

마우스의 분절 대퇴 임계 크기 결함 모델의 설립은 플레이트 고정술에 의해 안정화

Endochondral 뼈 치유 하는 동안 골절 굳은 살에 조직 개발의 평가 치료 과정을 모니터링 하는 데 필수적 이다. 여기, 우리는 자기 공명 영상 (MRI)의 사용을 보고-MRI 있도록 마우스 대 퇴 골에 대 한 호환 외부 fixator 쥐에서 뼈 재생 동안 검색.

Vivo에서 골절 뼈 쥐 마우스 대 퇴 골에 대 한 MRI-호환 Osteosynthesis 장치를 사용 하 여 치료 기간 동안 굳은 살 개발의 평가

이 프로토콜의 정형 외과 수술 후 neuroinflammation 및 행동 변화, 그리고 노화 중 조직 재생 연구 parabiosis와 결합 메커니즘을 연구 하는 데 사용 되었습니다 마우스 모델을 설명 합니다.

정형 외과 수술 후 인지 기능 장애 및 조직 재생 연구의 마우스 모델

이 프로토콜 분석 endochondral 뼈 쥐에서 치유 하는 데 사용할 수 있습니다 대 퇴 골 골절의 표준화 된 안정화를 위한 intramedullary 나사를 사용 하 여 최소 침 습 osteosynthesis 기술을 설명 합니다.

Endochondral 골절 표준화 된 Biomechanical 조건 하에서 쥐에서 치유를 분석 하는 최소 침 습 모델

우리는 주문 품 선택 항목을 사용 하 여 개발 마우스 tibial 산만 골 모델 제시. 분석 대상으로는 마우스를 사용 하 여 연구 발전에 유리 하다.

마우스 산만 골 모델

Murine 닫힌된 대 퇴 골절 모델 골절 치유를 공부 하는 강력한 플랫폼 이며 뼈 재생을 촉진 하는 새로운 치료 전략. 이 수술 프로토콜의 목표는 일방적인 폐쇄 대 퇴 골절 대 퇴 골을 안정화 하는 intramedullary 강철 막대를 사용 하 여 마우스에 생성.

마우스에 닫힌된 대 퇴 골절의 발생: 뼈 치유 연구 모델

이 프로토콜은 성인 마우스에서 골절을 수행하고 치유 과정을 모니터링하는 방법을 설명합니다.

안정화 핀을 가진 마우스 대퇴골의 횡단 골절

이 프로토콜은 골절 치유 연구를 위해 골수 내 와이어로 안정화된 마우스의 대퇴골에 골절 골절을 확립하기 위한 수술 절차를 설명합니다.

마우스에서 Diaphyseal 대퇴골 골절 모델 확립

이 프로토콜은 하악골 복구를 분석하기 위한 포괄적이고 효율적인 방법을 제시합니다. 생쥐 모델에서 비안정화 하악골 골절에 대한 재현 가능한 기술을 설명하여 조직 손상 및 뼈 손실을 최소화하면서 내연골 뼈 복구 과정을 분석할 수 있습니다.

Less-Invasive Technique for Non-stabilized Mandibular Fracture in Mouse Models

배우세요 마우스 늑골 절제 수술을 통해 대규모 뼈 재생 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 기법은 정밀한 외과 도구 조작과 조직 분리 기술을 사용하여 생체 내 골격 수리 과정을 관찰할 수 있는 신뢰할 수 있는 동물 모델을 제공합니다.

마우스 리브를 절제하는 수술 : 대규모 긴 뼈 수리에 대한 모델

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