마우스 리브를 절제하는 수술 : 대규모 긴 뼈 수리에 대한 모델

이 절차의 목표는 골격 복원을 위한 모델로 갈비뼈의 뼈 부분에 대규모 절제술을 만드는 것입니다. 이것은 먼저 동물의 측면에있는 피부를 통해 절개를 만들고 열어 수행됩니다. 두 번째 단계는 제거할 갈비뼈를 노출

다음으로, 흉골의 일부를 주위의 결합 조직 수초 또는 골막과 함께 제거하거나 골막을 남겨 둡니다. 마지막 단계는 절개 부위를 봉합하고 동물이 회복할 수 있도록 하는 것입니다. 궁극적으로 뼈 복구를 위한 이 모델은 대규모 골격 복구 중에 발생하는 세포 및 분자 이벤트를 보여주는 데 사용할 수 있습니다.

포유류의 경우, 수술 도구를 조작하려면 정밀함이 필요하고 성공적인 수술을 위해서는 서로 다른 조직의 위치를 알아야 하기 때문에 이 방법을 시각적으로 시연하는 것이 중요합니다. 이 절차를 시연하는 사람은 Marissa Roar와 Nikita Tripper, 그리고 제 연구실의 대학원생입니다. 수술 부위와 필요한 멸균 도구 및 용품을 준비한 후 불소 4%가 함유된 유도 챔버에 튜어 마우스를 넣어 마취를 유도합니다.

마우스가 마취되면 마우스의 눈에 연고를 바르고 마취 깊이를 확인합니다. 발가락 꼬집기를 수행하면 발가락 꼬집기에 대한 반응이 없어야 합니다. s의 열 패드 위에 마우스를 놓거나 stag마취 유지 호스의 노즈 콘을 마우스의 코 위에 놓은 해부 현미경의 e.

마우스가 측면 위치에 있는지 확인합니다. 유지 보수를 위해 불소를 2-3%로 조정하고 호흡 속도를 관찰하십시오. 그런 다음 25게이지 바늘을 통해 부프레노르핀을 피하로 주사합니다.

수술 후 선제적인 통증의 경우 다리가 경련할 수 있으며 이는 정상적인 반응입니다. 먼저 1위로 계산되는 가장 높은 갈비뼈부터 촉진하여 원하는 갈비뼈를 선택합니다. 이 비디오에서는 10번 갈비뼈의 일부가 제거됩니다.

갈비뼈 부위를 면도한 후 포비돈 요오드로 세척한 후 이소프로판올을 3회 절제합니다.절제할 갈비뼈 위의 피부, 근육 및 지방층을 2cm 절개 한 후 3개 층을 모두 견인기에 삽입하여 절개 부위의 크기를 최소화하면서 수술 부위를 노출시킵니다. 그런 다음 5mm 메스를 사용하여 갈비뼈가 심하게 구부러지지 않은 초코 관절에 5mm 근접한 위치에서 갈비뼈 위의 늑간 근육을 절단합니다. 그런 다음 가는 끝 집게로 뼈에서 근육을 조심스럽게 분리합니다.

다음으로 동물의 골막을 유지하면서 절제술을 만들려면 갈비뼈의 길이를 따라 골막을 자릅니다. 그런 다음 가는 끝 집게를 사용하여 섬세한 골막을 밑에 있는 뼈에서 측면으로 매우 조심스럽게 분리합니다. 필요한 경우 현미경 또는 눈금자 유형 게이지에서 조롱으로 절제를 측정합니다.

그런 다음 미세한 마이크로 가위를 사용하여 뼈를 통해 단면을 만듭니다. 한쪽 끝에서 골막에서 뼈를 조심스럽게 들어 올리고 다른 쪽 끝을 즉시 자릅니다. 향후 분석을 위해 제거된 갈비뼈를 4%파라알데히드에 넣습니다.

뼈를 절개한 결과 출혈이 발생하면 면봉으로 절단 부위를 4-5초 동안 눌러 출혈을 멈춥니다. 절개 부위를 봉합하기 위해 나머지 골막 소매 위쪽에 늑간 근육을 3회 또는 4개의 9 0회 불연속 봉합사로 봉합합니다. 갈비뼈의 절단된 끝 바로 위에 봉합사를 놓아 수술 위치를 나타내는 지표 역할을 합니다.

견인기를 제거한 다음 9개의 0 불연속 봉합사로 위에 놓인 근육과 지방을 봉합합니다. 특히 두꺼운 근육 또는 지방층을 가진 마우스에서 각 층을 개별적으로 봉합합니다. 4-5 7 0 봉합사로 피부를 봉합한 다음 조직 접착제로 절개 부위를 고정합니다.

큰 집게로 가장자리를 꼬집습니다. 몇 분 동안 농도를 1%로 조정하여 마우스의 불소를 천천히 떼어낸 다음 불소를 끕니다. 마우스를 열 램프 아래에 놓고 의식을 회복할 때까지 그대로 두십시오.

의식을 되찾은 후 치유 기간 동안 마우스는 정상적으로 움직이고 보행해야 하며 고통의 징후를 보이지 않아야 합니다. 절개 부위가 마르면 음식과 물을 자유롭게 이용할 수 있는 깨끗한 케이지에 쥐를 수용합니다. 암컷은 공동 수용 할 수 있지만 수컷은 싸움을 방지하고 48 시간 동안 12 시간마다 kg당 0.5 밀리그램의 경구 게닌 형태로 부프레 노르 핀을 투여하는 등 수술 후 통증 관리를 제공하기 위해 혼자 수용해야합니다.

경구 투여는 흉부에 통증을 유발할 수 있는 동물을 제지할 필요가 없습니다. 이 이미지는 수술 직후 채취한 4.5mm 갈비뼈 절제술을 보여줍니다. 뼛조각이 남지 않습니다.

샘플을 자린 레드로 염색하고 80% 글리세롤로 투명화했습니다. 화살촉은 절단 끝의 위치를 나타냅니다. 이것은 이전 이미지에서 골막이 부착되지 않은 흉곽에서 제거된 갈비뼈 부분입니다.

여기에 표시된 헤마틴(hemitin)과 어인(eoin)으로 염색된 조직학적 단면은 왼쪽의 노란색 화살촉으로 표시된 것처럼 뼈에 부착된 골막이 최소한이고 오른쪽의 골막이 없다는 것을 보여줍니다. 노란색 별표는 골수강을 나타냅니다. 이 이미지는 골막이 여전히 부착된 제거된 갈비뼈 부분을 보여주며, 이 조직학적 절편은 노란색 괄호로 표시된 것처럼 뼈 위에 있는 손상되지 않은 골막을 보여줍니다.

노란색 별표는 다시 골수강을 나타냅니다. 이 이미지는 마우스 내부의 온전한 골막과 함께 절제 후 2개월 치유 후 골격 준비를 보여주며, 해당 부위의 완전한 복구를 관찰할 수 있습니다. 방금 보여진 골격 준비의 이 조직학적 단면은 얇은 판골 벽과 골수 구멍의 회복을 보여줍니다.

이 이미지는 3개월간의 치유 후 골격 준비를 보여줍니다. 갈비뼈 부분과 주변 골막을 모두 제거한 후 패널 왼쪽에 표시된 절단 끝단에서 최소한의 수리만 있었습니다. 노란색 화살촉은 초코 조인트를 가리킵니다.

앞서 보여준 골격 준비의 이 조직학적 단면은 절제 부위를 채우고 있는 육아화, 조직 지방 및 근육 세포를 보여줍니다. 이 기술을 숙달하면 이 절차에 따라 적절하게 수행하면 1시간 이내에 수행할 수 있습니다. 갈비뼈의 연골 부분에 절제술을 하는 것과 같은 다른 방법을 수행하여 연골의 대규모 복원이 어떻게 이루어지는지와 같은 추가 질문에 답할 수 있습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 골격 복구를 연구하기 위해 갈비뼈의 뼈 부분에 절제술을 만드는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.I.