실험 녹내장은 안구하는 미소 자석을 투여 한

이 절차의 목표는 안구의 전방에 상자성 미세구를 주입하여 쥐의 안압 상승을 유도하는 것입니다. 먼저 마취된 동물의 눈 주위에 자기 고리를 끼우고, 자기 미세구를 씻고, 용액에 다시 부유시킨 다음 주사기에 넣습니다. 다음으로, 자기 미세구를 눈의 전방으로 주입합니다.

복구하는 동안 마그네틱 링을 제거하십시오. 터널 염색 또는 시신경 염색과 같은 조직학적 분석에서 얻은 프로세스 데이터는 안압 증가로 인한 망막 신경절 세포의 사멸을 측정할 수 있습니다. 멸균된 8미크론 자기 마이크로스피어 비드를 reus에 의해 행크의 완충 식염수 1밀리리터에 3번 세척하고 5분 동안 10, 000배 G로 현탁 및 원심분리합니다.

그런 다음 reus는 0.5ml의 HBSS를 1ml당 30mg 용액에 현탁합니다. 이제 쥐의 눈에 사용하기 위해 보정된 리바운드 초음파계를 사용하여 깨어 있는 동물에서 5개의 기본 IOP 측정을 수행합니다. 마취 후 쥐는 등급이 지정되지 않은 반대쪽 눈에 안구 연고를 바르고 촉촉함을 유지합니다.

마취 중에는 0.5%프로판 염산염, 국소 마취제를 수술하는 눈에 바릅니다. 다음으로, 5%포비돈 요오드로 이 눈을 씻습니다. 5분 후, 포비돈 요오드를 제거하고 0.9% 멸균 식염수로 눈을 씻습니다.

마취 중에는 멸균 식염수를 정기적으로 바르고 눈을 촉촉하게 유지하십시오. 이제 눈 주위에 스테로이드 자석을 놓아 홍채 외상의 위험을 최소화하고 비드 손실을 최소화합니다. 바늘이 각막 표면에 접하는 방향을 가능한 한 홍채와 평행하게 향하게 합니다.

밀리리터당 30밀리그램의 25마이크로리터, 감마선 조사된 자기 마이크로스피어를 전방으로 주입합니다. 주사 후 1분 동안 바늘을 제자리에 두어 비드가 IOC 각막 각도에 정착하여 섬유주 메쉬의 수성 배출을 방해하도록 합니다. 비드가 처음 가라앉은 후 몇 초 후에 바늘의 각도를 약간 기울여 수성의 누출을 허용하고 안압의 일시적인 증가를 최소화합니다.

별도의 절차에서 바늘을 계속 사용하려면 PBS로 바늘을 세척하십시오. 그런 다음 70% 에탄올, 이 단계에서 증류수가 뒤따릅니다. 필요한 경우 자석을 제거하고 이를 사용하여 불완전한 적용 범위에 구슬을 끌어들입니다.

주사 후 10분 동안 자석을 눈 주위에 그대로 두십시오. 구슬이 홍채 각막 각도에 잘 정착하도록 합니다. ESOL 염산염 킬로그램당 0.25mg을 사용한 역마취.

진통제에는 0.5 프로판 염산염을 투여하고 감염을 예방하기 위해 클로람페니콜 연고를 국소적으로 투여합니다. 동물이 움직임을 회복할 때까지 열 매트에서 회복하도록 내버려 두십시오. 그런 다음 따뜻한 상자로 옮깁니다.

반대쪽 눈을 등급이 지정되지 않은 컨트롤로 사용합니다. 비드 투여 후 2-3일마다, 그리고 그 후 2-3일마다 IOP 측정을 반복하고, 안압이 반대쪽 제어 압력보다 5mm 수은 높이 상승하는 경우, 주입 후 1주일까지 압력이 기준선으로 돌아오는 안구 안구가 60mm를 초과하지 않는 경우 안구를 연구에 포함시키기 위한 기준을 정의합니다. 그러나 원하는 경우 높은 안압을 발생시키지 못하는 눈에 비드를 다시 주입할 수 있습니다.

절개된 눈과 시신경을 4%파라알데히드로 고정하고, 터널 염색에 의한 망막 신경 손상과 토인 블루에 의한 시신경 손상을 평가합니다. 얼룩. 이 실험에서 홍채 각막각에 자성 구슬을 주입하면 지속적으로 장기적이고 강력한 압력 상승을 유도했습니다. 또한, 압력의 증가는 실험 기간 동안 유지되었습니다.

비드 주입이 없는 대조군의 눈에 대한 실험의 전체 길이에 걸쳐 평균화된 평균 안압은 19.7 플러스 마이너스 0.3 밀리미터의 수은과 비드 주입 안구의 경우 40.5 플러스 마이너스 2.8 밀리미터의 수은이었습니다. 또한, 최대 안압은 수은 22.8 플러스 마이너스 0.3 밀리미터에서 49.9 플러스 마이너스 2.3 밀리미터로 증가하여 안압 상승이 망막 신경절 세포의 사멸로 이어지는지 여부를 확인했습니다. 터널 염색은 망막에 대해 수행되었으며 조직학은 망막의 횡시신경 절편에 수행되었습니다.

안압이 높은 비드 주입 눈에서 터널 염색이 증가하는 것을 관찰했습니다. 자가사멸핵의 수는 압력 없이 자석 구슬을 주입한 눈에서 예상대로 반대쪽 대조군 고혈압 망막에서 약 15배 증가했으며, 터널 양성 세포의 수는 우인 주입 대조군의 수와 크게 다르지 않았습니다. 녹내장 모델에서 시신경 병리학에 대한 추가 조사는 이러한 세포 과정의 퇴화를 나타내는 많은 축삭돌기에 오딘 블루(odine blue)가 축적된 것을 보여주었습니다.