Name: 쥐 이소성 복부 심장 / 볼륨로드 구성에서 단일 폐 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 16 s
Description: 배우세요 쥐 이소성 복부 심장-폐 이식 기법을 통해 용적 부하가 가능한 심혈관 평가를 수행하는 방법을. 이 기술은 실시간 이식편 기능 평가와 면역학 연구에 활용됩니다.

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마크 제이 컨즈는 (의사 및 캐나다의 왕립 외과 대학을 통해 수여) UBC 임상 탐정 프로그램 및 UBC 4YF 박사 원정대의 지원을받습니다. 존 H. 보이드는 건강 연구 학술위한 국가 Sanitorium 협회와 마이클 스미스 재단이다. CIHR을 통해 자금. 저자는 설치 및 관류 장비의 유지 보수와 그들의 도움 박사 엠 알라 리처드 Wamboldt을 감사드립니다.

모든 동물은 보관과 전국 및 관리 및 실험 동물의 사용을위한 제도적 지침에 따라 마음에 든다고했다. 이 프로토콜에 대한 윤리 승인은 브리티시 컬럼비아의 동물 관리위원회의 대학에 의해 수여되었다. 300 사이 계량 남성, 흰쥐 - 450 g을이 프로토콜에 사용 하였다. 1. 기부자 운영 <ol><li> 3 방향 스톱 콕 장거리 정맥 내 (IV) 카테터 튜브에 연결된 원통형 플라스크에 심정지 (RT)의 약 100 mL의 유무. 중력에 의해 심정지 전달을 가능하게 약 80cm 수술 표면 위의 플라스크를 상승 스탠드를 사용합니다. </li><li> 적절하게 구조를 시각화하기 위해, 수술 돋보기 한 쌍 또는 해부 현미경 중 하나를 사용하십시오. 참고 : 우리는 현재 3.4 쌍안경 운영 현미경을 사용 - 21.3X 배율. </li><li> 마취 실에서 기증자를 놓고 4 마취 유도 - 5 %의 이소 플루 란을. </lI&gt; <li> 운영 플랫폼에 쥐를 전송하고 1 코 콘에 의해 마취 유지 - 2 % 이소 플루 란을. 건조를 방지하기 위해 동물의 눈에 수의사 연고를 적용합니다. 25 G 바늘과 미다 졸람 (2 ㎎ / ㎏) 내 복강을 관리합니다. </li><li> 수술 가위를 사용하여, 하악에 조류 늑골의 검상 돌기에서 기증자를 면도. (이후 IV 액세스) 왼쪽 사타구니의 작은 영역을 면도. 수술 표면에 제모 제를 적용, 약 5 분 정도 기다린 거즈 조각으로 머리를 제거합니다. </li><li> 포비돈 - 요오드 또는 chlorexidine 기반 솔루션과 수술 사이트를 (우리는 단지 클로르헥시딘 사용) 준비. 0.5 % 리도카인 피하 - 0.1와 절개 사이트를 침투. </li><li> 마취 깊이와 생체 신호의 모니터링을위한 무료 오른쪽 뒷다리를 떠나, 접착 테이프와 운영 플랫폼에 앞발과 왼쪽 뒷다리를 고정합니다. </li><li> 페달 핀치에 의해 적절한 마취 깊이를 확인한 후 사용 왼쪽 사타구니 주름에 절개를22 블레이드 메스. 무딘 절개하여 좌측 대퇴 정맥을 노출하고 다음과 같이 IV 액세스를 얻을 : <ol><li> 부드럽게 대퇴 정맥을 덮는 조직을 철회하고, 24 G 4과 정맥을 cannulate. 식염수 채워진 IV 튜브의 짧은 길이로 IV를 연결하고 접착 테이프로 장소에 튜브를 고정합니다. 참고 : 쥐에 대퇴 정맥 삽관에 대한 절차는 제스 퍼슨 및 동료 (14)에 의해 다른 곳에서 설명되어 있습니다. </li><li> IV의 정확한 위치를 확인하기 위해 혈액을 대기음 부드럽게 IV 튜브에 식염수로 채워진 10 ML의 주사기를 연결합니다. </li><li> IV 튜브를 통해 미분 획 헤파린 500 IU, 이후 3 튜브를 세척 - - (300)를 주입 식염수 5 ㎖. </li></ol></li><li> 다음 다음, 도너를 tracheotomize : <ol><li> 22 블레이드 메스를 사용하여 경정맥 노치과 하악골 사이의 부드러운 조직에서 중간 선 절개를합니다. 멧젠를 사용하여 중간 선에서 갑상선의 캡슐을 침투무딘 절개를 사용 바움 가위, 별도의 로브. </li><li> 무딘 절개를 사용하여 기관의 전방 표면을 노출 정중선에 목의 근육 스트랩을 분리한다. </li><li> 퉁명스럽게 기관 주위에 원주면을 해부 곡선 집게를 사용합니다. 4-0 실크 넥타이 기관을 둘러싸. </li><li> 홍채 가위를 사용하여, 갑상선 연골에 약 5mm 열등, 전방 기관에 횡 절개를합니다. 조심스럽게 기관 캐뉼라 (14 G IV)를 소개하고 4-0 실크 넥타이를 사용하여 제자리에 고정합니다. </li><li> 인공 호흡기에 기관 정맥을 연결합니다. 인공 호흡기 회로를 통해 산소와 이소 플루 란의 흐름을 리디렉션 및 속도와 무게 (13)에 의해 예측 호흡량에서 기증자를 환기 시키십시오. </li></ol></li><li> xipisternum 아래에 경정맥 노치의 절개를 연장 (22 블레이드 메스를 사용하여) 가슴의 중간 선에 절개를합니다. </li><li> 중간 선에 머물고, 뼈 커터를 사용하여 중간 흉골 절개를 수행합니다. 자기 유지 권취으로 흉골의 가장자리 후퇴. 심낭 및 흉막 충치를 입력합니다. </li><li> 흉선을 수행합니다. 먼저 퉁명스럽게 중간 선에서 흉선을 분할하고 무딘과 날카로운 해부의 조합을 사용하여 주변의 구조에서 분리하는 가장 쉬운 방법입니다. 참고 : 흉선 멀리 우수한 흉골 가장자리에서 해부시 내흉 동맥의 기원은 부상의 원인이 될 수 있습니다. 출혈을 방지하기 위해, 지혈 클립이 지점에서 흉선을 분리하기 전에 적용될 수있다. </li><li> Metzenbaum 가위를 사용 및 / 또는 날카로운 로어, 하대 정맥 (IVC)에서 멀리 지방 근교 대정맥 해부. IVC는 하방 다이어프램에, 우량 CAVO - 심방 접합에서 지방과 결합 조직의 상대적 없는지 확인합니다. </li><li> 날카로운 로어, 원주없는 상대 정맥 (SVC)를 사용하고 4-0 실크 넥타이를 둘러싸. </li><li> 다음에, 해부주변 구조에서 무료로 대정맥을 떠났고, 근위 및 원위 4-0 실크 넥타이와 그것을 결찰. 왼쪽 쇄골 하 동맥을 노출 맥의 중간 부분을 절제. </li><li> 원주 무료 날카로운 로어를 사용하여 대동맥 궁 혈관. 무명 동맥 근위부와 원위부 수술 클립을 적용하고, 클립 사이를 나눕니다. 왼쪽 경동맥과 좌측 쇄골 하 동맥 않은 클립을 남겨주세요. </li><li> 다음, 24 G IV 카테터 SVC를 cannulate. 이전에 배치 4-0 실크 넥타이와 카테터를 고정합니다. </li><li> 편법,하지만 부드러운 이식 수확을 준비합니다. </li><li> 날카로운 가위를 사용하여, 횡격막 표면에 IVC 그냥 우수한 나눕니다. 근처의기도 구조가 손상되지 않도록 보장의 삽관 사이트에 SVC 우수한 나눈다. </li><li> 인공 호흡기의 전원을 끄고 기관 정맥을 분리합니다. 근위 기관을 가로로 쪼개다. </li><li> 집게로 횡단 기관을 잡고 마음을 제거폐 KO-블록. 심장 - 폐 이식이 제거 될 때이 날카로운 해부와 부드러운 견인을 필요로 할 것이다. 기본 식도에서 기관을 분리합니다. 그것의 긴 부분은 수확 후 그대로 유지되도록, 하행 대동맥 부상을 피한다. </li></ol> 심장 - 폐 이식 2. 준비 참고 : 프로 시저의이 부분을 완료하는 동안, 조수는받는 사람 쥐를 마취 이식 주입을 준비해야한다. <ol><li> 아래로 향하게 마음의 전방 표면과 수술 거즈에 심장 - 폐 이식을 놓습니다. 날카로운 해부를 사용하여 후방기도에 손상을 방지 남아있는 식도를 제거합니다. </li><li> 하행 흉부 대동맥을 찾아 16 G의 무딘 팁 캐뉼라를 삽입합니다. 4-0 실크 넥타이와 장소에 캐 뉼러를 고정합니다. </li><li> 대동맥 궁 혈관을 찾아 왼쪽 쇄골 하 동맥에 외과 용 클립을 적용합니다. 취소 잘린 왼쪽 경동맥을 남겨 서브에 대한필연 드 - 방송. </li><li> 16 G 대동맥 캐뉼라로 심정지 튜브를 접속함으로써 심정지의 제 투여를 관리. 경동맥은 일시적으로 심정지의 적절한 공급을 보장하기 위해 집게로 폐색해야합니다. 주 : 부착 대동맥 캐뉼라를 갖는 이점에 원하는대로 심정지 연속적 및 / 또는 간헐적으로 투여 될 수 있다는 점이다. 45 초 - 30 5 ml의 환약 15 분 - 간헐적 투여를 들어, 우리는 일반적으로 심정지마다 10을 제공합니다. </li><li> Metzenbaum 가위를 사용 및 / 또는 날카로운 로어, 멀리 대동맥에서 요정 대동맥의 지방을 해부하다. 대동맥은 삽관 사이트에 왼쪽 쇄골 하 동맥 (말초 아치)에서 지방과 결합 조직의 상대적으로 자유로운 지 확인합니다. </li><li> 다음, 날카로운 로어를 사용하여 왼쪽 mainstem 기관지를 노출하고 4-0 실크 넥타이와 근위을 결찰. 홍채 가위를 사용하여 합자 왼쪽 기관지의 말단을 가로로 쪼개다. 왼쪽 폐를 결찰에 의해 왼쪽 폐 절제술을 수행4-0 실크 넥타이와 동맥과 정맥. 합자에 말단 횡단면과 왼쪽 폐를 제거합니다. </li><li> 상기와 같이, 오른쪽 상단 및 중간 엽을 제외하고 다른 모든 폐 엽을 제거합니다. 명중 폐엽을 수행하는 과정에서 부상 IVC 피한다. </li><li> 대동맥 정맥에 심정지 튜브를 연결하고받는 사람이 준비되는 동안 지속적으로 심정지를 관리 할 수​​ 있습니다. 멸균 용기 (예를 들어, 비커)에 심장 - 폐 이식을 놓습니다. </li></ol> 3.받는 사람 운영 <ol><li> 상기 도너 조작에 따라 수신자 마취. 건조에서 동물의 눈을 보호하기 위해 수의사 연고를 사용합니다. 페달 핀치에 의해 자주 마취를 확인합니다. </li><li> 활력 징후 및 마취 깊이를 모니터 무료 오른쪽 앞다리를 떠나, 기증자 작업에 따라이 시간을 동물을 배치합니다. </li><li> 조류 늑골의 검상 돌기에서 음경에 복부를 면도. (이후 IV 액세스) 왼쪽 사타구니의 작은 영역을 면도. 적용수술 표면에 에이전트를 제모, 약 5 분 정도 기다린 거즈 조각으로 머리를 제거합니다. </li><li> 포비돈 - 요오드 또는 chlorexidine 기반 솔루션과 수술 사이트를 준비. 0.5 % 리도카인 피하 - 0.1와 절개 사이트를 침투. </li><li> Tracheotomize 위의 지시에 따라 수신자를 환기 시키십시오. 또한, 코 콘 마취하에받는 사람을 유지한다. </li><li> 전술 한 바와 같이 대퇴 정맥에 카테터를 소개한다. IV 튜브를 통해 미분 획 헤파린 500 IU, 이후 3 튜브를 세척 - - (300)를 주입 식염수 5 ㎖. </li><li> 음경에 조류 늑골의 검상 돌기에서 22 블레이드 메스로 중간 선 복부 절개를하여 개복술을 수행합니다. 자체 유지 견인기를 사용하여 복벽을 후퇴. 다음으로, 우량와 쥐의 왼쪽에 창자를 철회. 따뜻한 식염수를 적신 거즈를 감싸. </li><li> 크게 상부 재를 통해 해부하여 IVC 및 복부 대동맥을 노출TRO-복막 지방. </li><li> 곡선 용기 클램프가 가능하고 준비합니다. </li><li> 원주 근위 및 원위 하대 정맥과 대동맥를 해제하고 4-0 실크 넥타이로 둘러싸. 이 사이트 사이의 공간의 3 CM - 약 2가 있어야합니다. </li><li> 조심스럽게 하대 정맥과 대동맥 모두의 충분한 부분이 클램프의 턱 위에 노출되는 것을 보장, 곡선 용기 클램프를 적용합니다. </li><li> 식염수로 채워진 1 ML의 주사기에 연결된 25 G 바늘 IVC의 앞쪽 벽에 절개를합니다. 기증자 IVC 구멍의 길이에 맞게 포츠 가위로 절개를 확장 할 수 있습니다. </li><li> 컨테이너에서 심장 - 폐 이식을 제거하고는 심정지에서 분리합니다. 정맥 문합을 수행 할 최적의 위치에받는 사람의 복부에 이식을 놓습니다. 참고 : 심장 - 폐 이식이 궁극적으로 복부의 방향으로 정점을 가리키는, 약간 비스듬하게 지향한다 낮은 사분면을 떠났습니다. </li><li> 발 뒤꿈치를 고정발가락은 9-0 나일론 봉합사와 봉합의 끝납니다. 봉합의 긴 팔에 부착 된 바늘, 이후​​에 연결되는 봉합사의 짧은 끝을 떠나, 각 끝 부분에 안전한 매듭을 묶어. 심정지의 복용량을 관리합니다. </li><li> 패션을 실행에, 반대 짧은 봉합 팔에 봉합 라인과 넥타이의 완전한 절반. 심정지의 복용량을 관리합니다. </li><li> 봉합 라인의 나머지 절반을 완료하고 넥타이. 정맥 문합이 완료됩니다. 심정지의 복용량을 관리합니다 </li><li> 동양은 복부의의를 향한 마음의 정점을 가리키는 심장 - 폐 이식은 하복부를 떠났다. 정맥 문합이 꼬거나 비틀어되지 않았는지 확인합니다. </li><li> 긴장 - 무료 및 취소 꼬여 구성에서 IVC와 대동맥 문합을 모두 유지,받는 사람 대동맥에 도달해야합니다 기증자의 대동맥의 길이를 평가합니다. </li><li> 홍채 가위 (왼쪽 쇄골 하 동맥 원위부) 하행 대동맥을 나눈다. </li><li> incisio 확인N 식염수로 채워진 1 ML의 주사기에 연결된 25 G 바늘받는 사람 대동맥의 앞쪽 벽에. 도너 대동맥 오리피스의 길이와 일치하도록 포츠 가위로 절개 확장. </li><li> 9-0 나일론 봉합사를 이용하여 대동맥받는 사람에게 기증자의 대동맥의 발가락 (우수한 측면을) 앵커. 이어서, 대동맥의 중간 형태에 바늘을 통과 패션에서 실행 문합의 절반을 완성. </li><li> 대동맥 문합 뒤꿈치에서 봉합 라인 (스티치의 방향 전환)의 방향을 반대로하고, 패션에서 실행 문합의 좌우 절반을 완료. </li><li> 천천히 SVC의 IV 카테터를 제거하고 수술 클립 SVC를 결찰. </li><li> 드 공기 않은 잘린 왼쪽 경동맥의 위치에 의해 대동맥. 공기가 자유롭게 대피 할 수 있도록 수직 위치에서 열기 동맥을 잡으십시오. </li><li> 간단히 D 곡선 용기 클램프의 턱을 열고 (경동맥은 피 할 수 있도록전자 공기) 2 - 3 초. 선박 클램프를 다시 적용 할 수 있습니다. </li><li> 경동맥을 외과 용 클립을 적용합니다. 곡선 용기 클램프를 제거합니다. </li><li> 봉합 라인에서 출혈이 있는지 확인합니다. 존재하는 경우, 9-0 나일론 봉합사 (출혈의 정도에 따라 다름)의 길이와 수술 거즈 또는 수리와 부드러운 압축을 적용합니다. </li><li> 기증자 심장 분 이내에 치고 다시 시작해야합니다. </li><li> 받는 사람의 생체 신호, 마취의 깊이에주의하고 필요에 따라 볼륨 소생술을 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 중, 실험 엔드 포인트에 따라 동물의 복부를 닫고 마취에서 회복하자, 또는 심장 혈관 평가를 위해 동물을 준비합니다. 참고 : 이식 평가의 예는 부하에 따라 부하 독립적 인 혈역학의 생체 측정, 시험 관내 랑겐 돌프 함수의 측정 및 작업 심장 모드, (생존 수술) 심 초음파 나 MRI 조사에 포함. </li><li> 에서급성 터미널 실험의 끝, 동물 방혈에 의해 안락사된다. </li></ol>

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여기에 설명 된 기술과 성공은 여러 가지 요인에 입각한다. 그 중 주요 균일 이식 냉각 완전한 심정지 체포, 총 허혈 시간을 최소화을 보장, 안전하고 최소한의 혈액 손실과 관련된 세심한 수술 기법을 채택, 모두 기증자와받는 사람 동물의 안정성을 보장하고, 적절하게 탈 방송 이식을 할 것이다. 위의 인정으로, 기술의 기술적 인 복잡성은 최고 제한 사항입니다. 우리는 여러 가지면에서 이전 HAHLT 기술을 전진했다. 도너와 수신자 동작에서 설명한 변형을 제어하고 효율적인 방식으로 필요한 수술 단계들을 수행하기위한 수단을 제공한다. 설명한 심근 보호 프로토콜 허혈 기간 동안 손상을 최소화하는 최적의 방법이다. 최종 결과는 형상이 최적화되어있는 HAHLT 그래프트이며, 부상이 최소화되었고, 극한 그래프트 기능 사전왔다가능한 최대한으로 봉사했다. 위에서 설명한 기술은 역동적이고 잠재적으로 거의 생리적 심실 로딩 조건 HAHLT 이식을...

이소성 복부 심장 이식(haht)의 첫 번째 설치류 모델은 1964년 Abbott와 동료들에 의해 설명되었습니다1. 이 기술과 후속 수정은 이식 이식 기능 및 면역학적 상태를 특성화하기 위해 널리 적용되었습니다. 설명된 대부분의 HAHT 기법은 부피가 적재되지 않은 심장을 포함합니다2,3. 체적 부하가 걸린 심실을 포함하는 HAHT의 모델이 설명되었지만, 하나 이상의 측면에서 제한되는 경우가 많습니다.
부피가 가해진 좌심실(LV)을 동반한 이소성 복부 심장-폐 이식(HAHLT)에 대해 이전에 설명했습니다. 첸(Chen)과 그의 동료4, 그리고 그 후 이브라힘(Ibrahim)과 동료5는 단일 대동맥-대동맥(기증자가 수혜자 복부 대동맥으로 상승) 문합을 동반한 HAHLT를 설명했다. 이 순환에서 심실에 가해지는 유일한 부피 부하(volume load)는 관상동맥 정맥 복귀(coronary venous return)입니다. Asfour와 동료들은 기증자 폐동맥(PA)을 기증자 좌심방(LA)에 문합하여 폐 회로를 제거하는 HAHT 기술에 대해 설명했습니다6. 이 순환에서 우심실(RV)로의 정맥 유입은 기증자 SVC를 통해 수혜자 IVC 문합으로 발생하고, 후속 좌심실 부하는 대동맥-대동맥 문합으로 분출됩니다. 심장 기능은 부분적으로 in vivo 및 in vitro에서 Langendorff 리그를 사용하여 평가되었습니다. Figueiredo와 동료들은 우리의7과 유사한 HAHLT 모델을 설명했지만 마우스에서 설명했습니다. RV로의 정맥 유입은 기증자 SVC를 통해 수혜자 IVC 문합으로 발생합니다. 그 후 혈액은 단일 폐 순환을 통과하고 LV 부하가 대동맥-대동맥 문합으로 분출됩니다. 그들의 연구에서 심장 기능은 자기 공명 영상(MRI)으로 평가되었습니다. Wen과 동료들은 LV가 수용자 대동맥을 통해 기증자 LA 문합8에 로드되는 독특한 HAHT 기술에 대해 설명했습니다. 따라서 LV는 전신 압력에서 충전됩니다. 심장 기능 및 LV 스트로크 볼륨이 모델에서 전방으로 분출되는지 여부는 평가되지 않았습니다.
위에서 언급한 많은 기술은 부분 좌심실 부하가 관상 동맥 복귀로만 표시되는 기술을 포함하여 비생리학적 LV 부하 조건을 포함합니다. 반면에, 많은 기술이 생리적 좌심실 부하에 접근합니다. Asfour와 동료들의 기술과 마찬가지로 이러한 기술의 대부분은 폐순환을 생략하고 기증자 LA 문합에 공여체 PA를 활용합니다6,9. Galinanes와 동료10에 의해 기술된 순환은 폐 순환과 오른쪽 심장을 생략하고 기증자 LA 문합에 직접 수혜자 cava를 사용합니다. Yokoyama와 동료들은 기증자 PA를 결찰하고 기증자 심장에 심방 간 통신을 생성하여(기증자 폐 및 우측 심장 순환 생략) 동일한 효과를 달성했습니다11. 마루야마(Maruyama)와 동료들12의 혈액순환은 왼쪽 PA 기증자와 수혜자 Ao 사이의 문합을 포함하는데, 이는 도관으로서 폐순환을 통한 좌심실 충전을 허용하지만 우측 심장을 효과적으로 배제한다.
생리학적 로딩에 가까운 조건이 충족되는 경우, 우리는 2가지 주요 측면에서 HAHLT 기술을 발전시킵니다. 첫째, 우리가 아는 한, 우리가 보고한 정확한 구성은 쥐에서 설명되지 않았습니다. 이식된 심폐 이식편의 생리학, 구조 및 면역학을 연구하고자 하는 연구자에게 가장 다재다능한 순환일 수 있습니다. 둘째, 이식 이식편의 기능을 in vivo에서 직접 특성화할 수 있는 방법을 설명합니다.이 응용 분야의 경우 압력-부피 전도도 카테터를 이식 이식편의 LV 정점에 직접 도입할 수 있으며, 이를 통해 완전한 심장 기능 특성화를 수행할 수 있습니다. 
여기에 설명된 기술은 이식 이식 기능에 대한 급성 및 만성 연구에 모두 적용할 수 있으며, 기능 평가는 생체 내 또는 체외에서 수행할 수 있습니다. 우리는 하중 조건이 생리학적으로 가까울 수 있는 모델을 제시하지만, 심실 하중의 정도는 정맥 후퇴를 이식편 쪽으로 또는 이식편에서 멀어지게 함으로써 급성 및 만성적으로 조작될 수 있습니다. Afterload 조건도 조작할 수 있습니다. 이 이식 구성에서 폐와 기도가 유지되기 때문에 연구자는 기증자의 폐를 급성으로 다시 환기시킬 수 있습니다. 독특하게도, 폐 재환기는 이식 관상 동맥을 관류하는 혈액의 구성을 변화시킵니다. 환기가 되지 않는 조건에서는 기증자 대동맥에서 배출된 혈액이 탈산소화되어 수용자 대동맥에서 산소가 공급된 혈액과 혼합됩니다. 환기가 잘 되는 상태에서는 배출된 혈액에 산소가 공급됩니다. 따라서, 이식 이식편의 기능은 환기가 되는 조건과 비환기가 되는 조건에서, 그리고 가변적으로 부하가 걸리는 조건에서도 비교할 수 있습니다.
아래 프로토콜은 이전에 설명한 HAHLT 기증자 및 수취인 조작에 대한 중요한 수정 사항을 설명합니다. 또한 허혈 기간(기증자 적출과 이식 이식 사이의 시간) 동안 이식 이식편을 보호하기 위한 최적의 기술에 대해 설명합니다. 이 기술의 장점에는 잠재적으로 정형외과 이식 이식편에 근접할 수 있는 생리학적 상태와 광범위한 조사 응용 분야가 포함됩니다. 중요한 제한 사항은 기술적 복잡성입니다. 적절한 멘토링과 연습을 통해 이 기술의 장점이 채택하는 데 따르는 어려움보다 더 클 것입니다.

<table><tbody><tr><td>Celsior Cardioplegic Soution</td><td>Genzyme</td><td></td><td>용액은 시술 내내 얼음에 보관됩니다. 우리는 약간의 수정을 가하여 자체 솔루션을 준비합니다.</td></tr><tr><td>설치류 인공호흡기</td><td>Harvard Apparatus</td><td>모델 683</td><td></td></tr><tr><td>바이탈 사인 모니터</td><td>Nonin</td><td>모델 9847V</td>는 <td>SpO2 및 심박수를 표시합니다.</td></tr><tr><td>IV 캐뉼라</td><td>Jelco</td><td>3063</td><td>24 - 26 G x 3/4" 캐뉼라.</td></tr><tr><td>IV 튜빙</td><td>CareFusion</td><td>MP9259-C</td><td>짧은 길이 커넥터 튜빙(18cm).</td></tr><tr><td>수술 클립</td><td>Teleflex Medical</td><td>001204</td><td>Horizon 티타늄 결찰 클립.</td></tr><tr><td>봉합사</td><td>Ethicon, Sharpoint</td><td>LA54G, AK-0107</td><td>3-0 실크 릴 및 9-0 프롤렌 봉합사(단일 암, DR5 바늘).</td></tr><tr><td>수술 기구</td><td>해당 없음</td><td>해당</td> 없음 <td>사용된 기구는 일반적이며 모든 수술 용품 회사에서 구입할 수 있습니다.</td></tr></tbody></table>

쥐 이소성 복부 심장 / 볼륨로드 구성에서 단일 폐 이식

Rat Heterotopic Abdominal Heart/Single-lung Transplantation in a Volume-loaded Configuration

여기에서는 쥐의 이종성 복부 심장-폐 이식(HAHLT)을 위한 새로운 기술에 대해 설명합니다. 이식 이식편의 구성에는 수혜자 IVC에 대한 기증자 하대정맥(IVC)의 문합 및 수혜자 복부 Ao에 대한 기증자 상행 대동맥(Ao)의 문합이 포함됩니다. 오른쪽 상부 및 중간 폐엽은 보존되어 있으며 오른쪽 심장에서 왼쪽 심장으로 혈류를 공급하는 도관 역할을 합니다.
이 기술을 사용하면 몇 가지 이점이 있으며 광범위한 응용 프로그램에 적합합니다. 이식편은 dyamic volume-loading을 허용하는 구성으로 이식되기 때문에 심장 기능을 in vivo에서 직접 평가할 수 있습니다. 압력-부피 컨덕턴스 카테터를 사용하면 하중 의존 및 하중 독립적인 혈역학적 매개변수의 특성화를 수행할 수 있습니다. 이식편은 수혜자의 하부 간 IVC에 클램프를 적용하여 로드된 구성으로 변환될 수 있습니다. 우리는 기증자와 수혜자 수술 모두를 위한 수정된 수술 기술과 이상적인 심근 보호 전략을 설명합니다. 실험 목적에 따라 이 모델은 이식편 기능, 면역학적 상태 및 다양한 심실 부하 상태에 대한 급성 및 만성 연구 모두에 사용하도록 조정될 수 있습니다. 이식된 폐로 가는 전도기도가 보존되어 급성 폐 재환기가 가능합니다. 이것은 이식편에 관상 동맥 관류를 제공하는 혼합 정맥 및 동맥 혈액의 영향에 대한 분석을 용이하게 합니다.
이 모델의 한계는 기술적 복잡성입니다. 새로운 작업자에게는 상당한 학습 곡선이 있으며, 이상적으로는 이 기술에 대한 멘토링을 받아야 합니다. 수술 훈련 배경은 이 모델을 적용하고자 하는 사람들에게 유리합니다. 복잡성에도 불구하고 우리는 모델을 명확하고 쉽게 적용할 수 있는 형식으로 제시하는 것을 목표로 합니다. 이 모델이 정소성 이식과 생리학적으로 유사하고 연구 응용 분야가 광범위하기 때문에 이 기술을 배우는 데 투자한 노력은 가치가 있을 것입니다.

위에서 설명한 HAHLT 기술은 고도의 기술과 세부 사항입니다. 표에 세심한주의를 필요로 한 하이라이트 실패 절차 대 성공과 관련된 중요한 요소의 일부, 그리고 기술적 인 문제를 해결하기위한 가이드로 사용할 수 있습니다. 받는 사람 대동맥이 클램핑 해제 한 후, 이식 관상 동맥은 산소가 혈액으로 채우기 위해 볼 수 있어야합니다. 따라서, 심근는 핑크와 잘 관류가 될 것이다. 기술적으로 성공적인 실험에서 심장 이식 재관류 직후 이길 시작합니다. 기능 회복을 허용하기 위해 30 분 - 그래프트는 적어도 20의 기간 (IVC 수신자는 클램프로) 무부하 상태로 남아있을 것이다. 그 후, 그래프트의 하중 조건은 실험 목적에 맞게 변경 될 수있다. 원하는 그래프트 기능 (및 성공적인 결과)의 정량적 인 측정이 사용될 수있다. 프로토콜에서 언급 한 바와 같이, 생체 내 </em&gt; 시험 관내 ...

우리는 쥐의 이종성 복부 심장-폐 이식(HAHLT)에 대한 새로운 기술을 설명합니다. 이식 구성은 부분적으로 로드된 이식편 순환을 초래하여 직접적인 기능 평가를 가능하게 합니다. 이 모델은 이식된 이식편의 기능 및 면역학적 상태에 대한 급성 또는 만성 연구에 사용될 수 있습니다.

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft ...

이 절차의 전반적인 목적은 용적 부하(volume loading)가 가능한 구성으로 심장과 단일 폐 이식편을 이종성 외측(heterotopically)으로 이식하는 것입니다. 이는 먼저 공여자 심폐 이식편을 적출함으로써 수행됩니다. 그 다음 수혜자를 준비하고 공여자 조직을 이식합니다.마지막으로, 공여 이식 조직의 공기를 제거하고 다시 재관류합니다. 최종적으로, 압력-부피 전도도 카테터를 사용하여 이식편의 기능을 실시간으로 평가할 수 있습니다. 이질적 복부 심장 이식과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 폐 이식편의 추가를 통해 천연 회로를 통한 순행성 혈류가 가능해져, 심폐 이식편의 동적인 부피 부하 및 이식 후 심혈관 평가가 용이하다는 점입니다.하대정맥(inferior vena cava, IVC)을 준비하거나 이후의 문합을 수행하려면, 공여 동물의 대정맥-심방 접합부에서 시작하여 횡격막 방향으로 하향하며 대정맥 주변 지방을 박리하십시오. 다음으로, 예리한 가위로 원형으로 절개하여 상대정맥(superior vena cava, SVC)을 유리시킨 후 4-0 실크사로 묶으십시오. 좌측 대정맥을 주변 구조물로부터 분리하여 박리한 다음, 근위부와 원위부를 결찰하십시오.그 다음 대정맥의 중간 부분을 절제하여 좌쇄골하동맥을 원주형으로 노출시키고, 무명동맥과 좌총경동맥을 박리한 후 무명동맥의 근위부와 원위부에 클립을 적용합니다. 그런 다음 26게이지 정맥 카테터를 사용하여 클립 사이의 동맥 구간을 절단하고, 상대정맥을 캐뉼레이션한 후 기존의 4-0 실크 타이로 고정합니다. 이어서 심폐 이식편을 적출하기 위해, 기관에 손상을 주지 않도록 주의하며 횡격막 바로 위쪽의 하대정맥과 캐뉼레이션 부위 위쪽의 상대정맥을 절단합니다.그 다음 기관의 근위부를 절단합니다. 핀셋으로 이를 잡고, 가벼운 견인과 예리한 박리를 통해 기관을 아래쪽의 식도와 분리합니다. 심장과 폐 조직을 덩어리째 제거합니다.그 다음 심장의 전면을 아래로 향하게 놓습니다. 끝이 뭉툭한 16 gauge 캐뉼라로 하행 대동맥에 삽입관을 설치하고, 날카로운 바늘을 사용하여 5~10 mL의 심정지액을 조직에 주입합니다. 다음으로 좌측 주기관지를 노출시킨 후, 4-0 silk tie로 결찰하고 결찰 부위 원위부에서 기관지를 절단합니다.그 다음 폐의 우상엽과 중엽을 제외한 나머지 부분을 모두 제거하고, 공여 조직을 이식할 때까지 이식편을 적절한 용기에 보관합

rat-heterotopic-abdominal-heartsingle-lung-transplantation-volume

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마우스 heterotopic 심장 이식 모델은 거부하고 면역 반응의 메커니즘을 연구를위한 중요한 방법으로 많은 수사관에 의해 입증되었습니다. 그러나, 관련 기술은 여전히​​ 도전하고 있습니다. 표준 기술을 수정하여 우리는 1000 개 이상의 이식 성공을 있었다.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

보조 간 이식은 실패 간 재생 될 때까지, 급성 간부전에 임시 지원을 제공합니다. 포털 정맥 arterialization (PVA)와 이소성 보조 간 이식 (HALT)는 충분한 간 기능을 렌더링합니다. 우리는 이식의 형태와 기능에 대한 포털 정맥 arterialization의 영향을 조사하기 위해, 쥐에서 유사한 기술을 개발했다.

이소성 보조 쥐 간 이식 급성 간 장애에 포털 정맥 Arterialization를 유량 조절

원고는 마우스에 이소성 심장 이식을 수행하는 데 필요한 단계를 설명합니다.

쥐 이소성 심장 이식 기술

우리는 쥐에 있는 이종 성 복부 심혼 이식의 모형을 기술합니다, 현재 전략의 수정을 암시하는, 이는 단순화한 외과 접근으로 이끌어 내는. 추가적으로, 우리는 쥐에 있는 추가 이식 면역학 분석을 허용하는 중요한 심장 근육 세포의 귀 주입에 의하여 새로운 거부 모델을 기술합니다.

쥐에 있는 이종 심혼 및 심장 근육 세포 이식을 위한 면역학 모형

이성애 복부 마우스 심장 이식 모델에서 혈액 회로 재건을 위한 새로운 기술이 입증된다.

복부 마우스 심혼 이식 모형에 있는 혈액 회로 재건

이 프로토콜은 ESLP 연구와 함께 사용하도록 설계된 기형외과 좌측 폐 동종 이식의 어린 돼지 모델을 설명합니다. 마취 및 수술 기술뿐만 아니라 중요한 단계 및 문제 해결에 중점을 둡니다.

ESLP를 위한 어린 돼지 모델에서의 좌측 폐 정형외과적 이식

우리는 돼지 이종성 심장 이식 모델에서 전체 심장 동종이식편에 치료제를 전달하기 위한 규범발열 ex vivo sanguinous perfusion system을 활용하기 위한 프로토콜을 제시한다.

심장 동종이식편에 치료제를 전달하기 위한 돼지 이질성 심장 이식 프로토콜

이 연구는 초보자가 배우고 수행할 수 있는 쥐의 재현 가능한 이종 복부 심장 이식 기술을 보여줍니다. 또한, 쥐의 새로운 대동맥 역류 모델은 이종 복부 심장 이식을 수행하고 수확 후 가이드와이어를 사용하여 기증자의 대동맥 판막을 손상시킴으로써 생성됩니다.

쥐의 수정된 이종 복부 심장 이식 및 새로운 대동맥 역류 모델

이 프로토콜은 기증자 후방 심방 피판의 회전을 통해 폐 이식 중 기증자 심방 커프 전벽 결손을 효과적으로 재건하는 새로운 방법을 설명합니다.

폐 이식에서 좌심방 커프 재건을 위한 기증자 후방 심방 피판 회전(Donor Posterior Atrial Flap Rotation for Left Atrial Cuff Reconstruction in Lung Transplantation)

이 프로토콜은 쥐의 정소성 좌측 폐 이식을 위한 개선된 기술을 설명하며, 수술의 어려움을 줄이고 생존율을 개선하는 데 중점을 둡니다.

쥐의 정소성 좌측 폐 이식

배우세요 쥐 이소성 복부 심장-폐 이식 기법을 통해 용적 부하가 가능한 심혈관 평가를 수행하는 방법을. 이 기술은 실시간 이식편 기능 평가와 면역학 연구에 활용됩니다.

쥐 이소성 복부 심장 / 볼륨로드 구성에서 단일 폐 이식

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