돼지 심장에 현지 카테터 주입 용 주사 및 약물로드 초분자 히드로 겔

이 절차의 전반적인 목표는 길고 유연한 카테터를 사용하여 경색된 돼지 심장에 약물이 적재된 초분자 하이드로겔을 침습적으로 최소화하는 것입니다. 이는 먼저 하이드로겔 제형을 준비하고, 나중에 원하는 약물을 준비함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계는 체외 환경에서 하이드로겔의 특성과 약물 방출 속도를 조사하는 것입니다.

그런 다음 심근경색 후 4주가 지나면 심내막 표면에서 가져온 데이터 포인트를 사용하여 돼지의 좌심실에 대한 전기기계 지도를 만듭니다. 그런 다음 소위 동면 심근은 약물이 적재된 하이드로겔을 국소 주사하는 것을 목표로 합니다. 이 편리한 제형 및 적용 절차는 심근 경색 등에 대한 새로운 치료법을 발견하는 것으로 이어질 수 있습니다.

관상동맥 내 삼출과 같은 기존 경피적 접근법에 비해 이 기술의 주요 장점은 첫째, 하이드로겔의 카테터 적용과 둘째, 카테터를 관심 영역으로 안내할 수 있는 치료 계획의 가능성입니다. 이 방법은 심근경색의 연구 및 치료에서 기계적으로 지지되는 물질 주입의 잠재적 이점 및 지속적인 국소 약물 전달의 효과와 같은 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 의미는 전기 기계 매핑을 통해 경색 부위를 식별할 수 있고 후속 하이드로겔의 유도 부위별 주입을 통해 국소 약물 전달이 가능하기 때문에 치료 및 심근 경색으로 확장됩니다.

일반적으로 개인은 이 기술이 안정성 매개변수를 모니터링하면서 카테터의 미묘한 움직임에 대한 실용적인 기술이 필요하기 때문에 이 방법이 어려움을 겪을 것이라는 것을 알고 있었습니다. 이 방법의 시각적 시연은 약물 부하 IDE 겔의 두 가지 제형으로 매우 중요합니다. 카테터를 통한 안티 주사는 경험 없이는 수행하기 어려운 까다로운 절차입니다: 준비 과정에서 10% 중량 기준 밀리리터의 하이드로겔을 공식화합니다.

나중에 pH 11.7에서 900마이크로리터의 PBS에 100mg의 하이드로겔을 용해시키는 것으로 시작합니다. 하이드로겔을 동물에 주입하기 위해 제조된 경우, 모든 단계는 장갑을 착용하고 수행해야 합니다. 그런 다음 하이드로겔을 섭씨 70도의 PBS에 한 시간 동안 저어줍니다.

용액이 냉각되면 pH를 확인합니다. 9시쯤 될 것입니다. 이 솔루션은 며칠 동안 유효합니다.

이제 관심있는 약물 또는 분자를 용액에 피펫으로 넣고 하이드로겔이 동물에 주입 될 경우를 대비하여 10 분 동안 저어줍니다. 용액을 한 시간 동안 UV 살균하여 준비를 완료합니다. 텍스트 프로토콜은 하이드로겔을 분석할 수 있는 방법을 검토합니다.

먼저, 누출을 방지하기 위해 바닥을 퍼퓸으로 덮어 24웰 플레이트용 플라스틱 교수형 세포 배양 삽입물을 준비합니다. 그런 다음 준비된 점성 용액 100 마이크로 리터를 인서트에 옮기고 즉시 1.4 마이크로 리터의 1 몰 염산을 첨가하십시오. pH는 중성 값으로 떨어지고 30분 안에 하이드로겔이 경화됩니다.

지금 파라 필름을 제거하고 우물 판으로 삽입물을 두고, PH 7.4에 PBS의 800 마이크로리터에, PBS로 빈 우물을 적재하고 증발을 감소시키기 위하여 paraform를 가진 판을 밀봉하십시오. 그런 다음 플레이트를 섭씨 37도에서 부드러운 교반으로 배양합니다. PBS를 주기적으로 새로 고치고 상향 하이드로겔 침식 및 약물 방출에 의해 방출된 화합물에 대해 제거된 PBS를 분석합니다.

절차를 시연하는 것은 그가 중재적 심장 전문의인 유리히의 Dr.Ton이 될 것입니다. 심근경색을 유발한 후 4주 후, 전기기계 매핑 절차를 계획하고 심혈관 조영실에서 시스템을 설정합니다. 먼저 마취된 돼지의 등에 외부 참조 패치를 부착한 다음 표준 프로토콜에 따라 대퇴 동맥을 통한 혈관 접근을 확보합니다.

LV 심내막 표면의 전기기계 맵을 구성하려면 초저 자기장 에너지원과 센서 팁 카테터를 사용하십시오. 다음으로, 파워 인젝터를 사용하여 25도 우측 전방 경사 및 40도 좌측 전방 경사면에서 복엽기 좌심실 혈관 조영술을 얻습니다. 이러한 보기를 사용하여 lv의 크기를 추정합니다.

이제 동물에게 헤파린 1kg당 75단위를 줍니다. 그런 다음 형광투시 유도에 따라 8번 프랑스어 매핑 카테터를 하행 대동맥궁, 대동맥궁 및 대동맥 판막을 통해 좌심실로 전진시킵니다. 카테터는 D 또는 F 곡선을 가질 수 있습니다.

그런 다음 카테터 끝을 좌심실 정점으로 향하게 합니다. 첫 번째 데이터를 수집하려면 유출로, 측면 및 후방 지점에 대한 데이터를 계속 수집하여 심실의 경계를 정의하는 3D 실루엣을 형성합니다. 다음으로, 매핑 카테터를 심내막 위로 순차적으로 드래그합니다.

팁이 심내막과 접촉하는 동안 팁의 위치를 파악합니다. 궁극적으로 모든 심내막 분절에서 데이터를 수집합니다. 그런 다음 데이터를 사용하여 매핑 카테터를 제거합니다.

대상 영역을 정의합니다. 전기 활동이 정상에 가깝고 기계적 움직임이 손상된 곳입니다. 심근 내 주사를 위한 소위 동면 심근

27게이지 바늘과 8번 프렌치 카테터의 코어 루멘으로 구성된 주사 카테터를 사용하여 특정 양을 전달할 계획을 세웁니다. 로터스 주사기에 약 1ml의 하이드로겔 용액을 넣고 주사기 펌프에 넣어 심근 벽이 바늘에 구멍을 뚫지 않도록합니다. 조정은 최근 심초음파 검사에서 측정된 심실의 최소 벽 두께에 따라 수행됩니다.

바늘 확장을 0도 및 90도로 조정합니다. 그런 다음 시스템의 데드 스페이스를 하이드로겔 용액으로 채웁니다. 다음으로, 주사 카테터 팁을 대동맥 판막을 가로질러 목표 부위에 삽입하여 첫 번째 주사 기준을 충족합니다.

그것은 카테터와 LV 벽의 직각입니다. 둘째, EMM 시스템에서 계산한 루프 안정성이 우수해야 합니다. 셋째, 대상 영역의 기본 전압은 6.9mV 이상이어야 합니다.

이러한 기준이 충족되면 바늘을 심근으로 전진시킵니다. 이제 네 번째 기준을 확인하십시오. 좌심실의 조기 심실 수축이 있어야 합니다.

모든 기준이 충족되면 0.1 - 0.3 밀리리터의 하이드로겔을 일정한 비율로 주입합니다. 하이드로겔이 약물 전달 시스템으로 기능할 수 있도록 가능한 한 확산 위치에 있는 6-10개의 다른 위치에서 주입을 반복합니다. 침식은 작은 약물인 피르페니돈과 형광 단백질의 방출이 서서히 일어나야 하며, 루비 2를 연구했다.

체외에서 작은 약물은 하루 이내에 방출되는 반면 M 루비 2와 같은 큰 분자는 일주일 이내에 방출됩니다. 약물 주입을 위한 표적 영역을 찾기 위한 거대 분자의 명백한 폭발 방출은 없었습니다. 실시간 3D 심근 매핑을 사용하여 좌심실을 재구성했습니다.

등급이 매겨진 색상 스케일에서 전압 전위로 지속적으로 표시되며, 그 후 선택한 임계값으로 조정됩니다. 국소 선형 단축 또는 LLS 기능은 수축기 및 말단 이완기에서 샘플 사이트와 인접 지점 사이의 평균 거리 변화를 구하여 지역 벽 움직임을 정량화합니다. 그런 다음 이러한 값은 각 세그먼트에 대해 계산되어 극좌표 지도에 표시됩니다.

경색 부위는 기계적 민감도가 손상되었거나 LLS 값이 4% 미만인 것이 특징이며 6밀리볼트 미만의 비정상적이거나 낮은 단극 전위가 특징입니다. 일단 마스터하면 이 기술을 1시간 30분에서 2시간 내에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 수행하는 동안. 적절하게 계획하고 이 절차를 따르는 경험 많은 사람들로 구성된 팀을 보유하는 것이 중요합니다. 최적의 하이드로겔 제형, 원하는 약물 방출률, 다양한 종류의 약물의 효과와 같은 추가 질문에 답하기 위해 치료법의 변형을 구현할 수 있습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 약물이 적재된 초분자 하이드로겔을 제조하는 방법과 전기기계적 매핑 및 심근간 주사 절차를 신중하게 계획하고 실행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 돼지와 같은 실험실 동물과 함께 작업하려면 실험위원회의 승인이 필요하며 지역 복지 규정에 따라 수행되어야한다는 것을 잊지 마십시오.