Imaging Local Ca<sup>2+</sup> Signals in Cultured Mammalian Cells

Jeffrey T. Lock; Kyle L. Ellefsen; Bret Settle; Ian Parker; Ian F. Smith

doi:10.3791/52516

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Biology

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Imaging Local Ca²⁺ Signals in Cultured Mammalian Cells

이미징 로컬 CA 2 + 배양 된 포유 동물 세포에서 신호

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09:30 min

March 3, 2015

DOI: 10.3791/52516-v

Jeffrey T. Lock¹, Kyle L. Ellefsen¹, Bret Settle¹, Ian Parker^1,2, Ian F. Smith¹

¹Neurobiology and Behavior,University of California, Irvine, ²Physiology and Biophysics,University of California, Irvine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

여기에서는 Ca²⁺ 지표가 로드된 온전한 포유류 세포에서 형광 현미경을 사용하여 로컬 IP₃ 매개 Ca²⁺ 이벤트를 이미징하는 기술과 이러한 이벤트의 식별 및 분석을 자동화하는 알고리즘을 제시합니다.

이 절차의 전반적인 목표는 카메라 기반 이미징을 사용하여 온전한 포유류 세포에서 국소 IP 3 매개 칼슘 신호의 획득, 검출 및 분석을 입증하는 것입니다. 이것은 먼저 세포를 유리 바닥 덮개 접시에 배양하고 형광 칼슘 지시약의 세포막 투과성 형태로 주입함으로써 수행됩니다. CAL 5 20 및 케이지 IP 3.

두 번째 단계는 커버 유리를 도립 현미경의 스테이지에 배치하고 488나노미터의 빛으로 샘플을 비추어 칼슘에 민감한 형광 염료 Cal five 20을 여기시키는 것입니다. 다음으로, 국소 칼슘 신호는 세포를 짧은 자외선 펄스에 노출시킴으로써 유도됩니다. 이 사진은 IP 3를 갇힌 전구체로부터 해방시켜 이제 아세톨 트리인산염 수용체에 결합하고 소포체에서 칼슘 방출을 매개할 수 있습니다.

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